病原性球菌与检验实用ppt课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,1.,了解病原性球菌的概念及种类。,2.,熟悉常见病原性球菌的主要生物学特性、致病性和免疫性。,3.,掌握葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的检验程序和检验方法。,学习目的与要求,1. 了解病原性球菌的概念及种类。 学习目的与,1,第一节 葡萄球菌属,(Staphylococcus),第一节 葡萄球菌属(Staphylococcus),2,（一）形态与染色,G,+,， 球形，无鞭毛、无芽孢，呈葡萄串状排列。,一、,生 物 学 特 性,（一）形态与染色一、生 物 学 特 性,3,（二）培养特性,营养,：要求不高，耐盐。,液体,：均匀浑浊生长,普通琼脂平板,：,血液琼脂平板,：,高盐甘露醇平板,：金黄色葡萄球菌为,淡橙黄色菌落,；,其他葡萄球菌为,白色菌落,。,（二）培养特性高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡橙黄色菌落；,4,（三）生化反应,活泼,分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。,(,如：葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，甘露醇）,触酶（）,（区别于链球菌属）,（三）生化反应,5,（四）抗原构造,、,蛋白抗原（）,、,多糖抗原,金黄色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸,（检测磷壁酸有助于金葡菌感染诊断）,凝固酶（）：甘油磷壁酸,（四）抗原构造,6,（五）分类,:,个种及亚种,、,按色素分类,：金、白、柠,、,按凝固酶分类,：,凝固酶阴性、凝固酶阳性葡萄球菌,、,按噬菌体分类,：金葡菌分为,5,群,26,型,4.,据色素、生化反应分：,金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌,（五）分类:个种及亚种,7,适用于：痰、脓、脑脊液标本。,（1）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（+）,有毒力的菌株，接种后12-36h，死亡。,注意保温（勿放冰箱）,导致医院内感染：如尿路感染、腹部和,2所致疾病：传染源、传播途径,途径（如产褥热、蜂窝组织炎）,取肉汤培养液均匀涂于血平板上用optochin纸片贴于接种区中央（或分区划线法，纸片贴于1-2区），35需氧培养过夜，抑菌圈 18mm。,采集标本：注意保温迅速送检。,有脑膜刺激症状，抽取脑脊液,中间型 + + ,型特异性，与致病有关的是M蛋白抗原。,注意保温（勿放冰箱）,3、生化鉴定：,或：“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”,胆汁溶菌试验：肺炎链球菌+,约2%-3%的人表现为流脑症状。,其他葡萄球菌为白色菌落。,适用于：痰、脓、脑脊液标本。,对理化因素抵抗力弱。,三种葡萄球菌的主要性状,性状,金黄色,葡萄球菌,表 皮,葡萄球菌,腐 生,葡萄球菌,色 素,金黄色,白色,白色或柠檬色,血浆凝固酶,+,溶血素,+,耐热核酸酶,+,甘露醇,+,SPA,+,致病性,强,弱,无,适用于：痰、脓、脑脊液标本。 三种葡萄球菌的主要性状性,8,（六）抵抗力,无芽胞菌中最强，耐干燥，对石炭酸、升汞、龙胆紫敏感。,易产生耐药性变异，如：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（,MRSA,）。,MRSA,常呈多重耐药，对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏感率分别为,1.3%,、,3%,及,14%,。,（六）抵抗力,9,其他葡萄球菌为白色菌落。,Optochin敏感试验：肺炎链球菌d18mm，,易产生耐药性变异，如：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。,、按溶血情况分类：,约2%-3%的人表现为流脑症状。,导致医院内感染：如尿路感染、腹部和,1致病物质：菌毛、荚膜、内毒素,致病力强，引起多种疾病。,（3）Optochin试验：+,3杀白细胞素（leukocidin）,适用于：痰、脓、脑脊液标本。,5mm，灰白色，半透明，光滑（有些菌株为粘液状），扁平，周围有草绿色溶血环。,PYR试验：肠球菌、A群链球菌、某些凝固酶阴性葡萄球菌为（+）,风湿性关节炎、急性肾小球肾炎，,1致病物质：菌毛、荚膜、内毒素,有荚膜 脐窝状,寄生在正常人鼻咽部，存在易患人群，与患者补体介导的杀菌活性缺陷有关。,活泼分解多种糖类。,长期住院,、,反复使用各种广谱抗菌药物,、,烧伤,或,有伤口的病人,及,与,MRSA,定植或感染的病人接触,都是造成院内,MRSA,流行的危险因素。,MRSA,定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。,MRSA,定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源,。,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（,MRSA,）,其他葡萄球菌为白色菌落。 长期住院、反复使用各种广谱抗,10,二、致病性和免疫性,(,一,),致病物质,金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。,1,血浆凝固酶（,coagulase),：,分：结合型凝固酶、游离型凝固酶。,鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标。,2,葡萄球菌溶血素（,staphylolysin,）,二、致病性和免疫性(一)致病物质2葡萄球菌溶血素（stap,11,3,杀白细胞素（,leukocidin,）,4,肠毒素（,enterotoxin,）：,（,A,、,B,、,C1,、,C2,、,C3,、,D,、,E,、,G,、,H 9,个血清型）,5,表皮剥脱毒素（,exfoliative toxin,）,6.,毒性休克综合征毒素,1,（,toxic shock syndrome toxin 1, TSST1,）,3杀白细胞素（leukocidin）,12,（二）所致疾病,1,侵袭性疾病：,（,1,）,皮肤软组织感染,特点：病灶局限且脓汁粘稠,（,2,）,内脏器官感染,（,3,）,全身感染,（,4,）,尿路感染,（二）所致疾病 （2）内脏器官感染（3）全身感染（4）尿,13,2,毒素性疾病,（,1,）,食物中毒,（,2,）,烫伤样皮肤综合征,由表皮剥脱毒素引起。,（,3,）,毒性休克综合征,由,TSST1,引起,（,4,）,假膜性肠炎,2毒素性疾病（2）烫伤样皮肤综合征 由表皮剥脱毒素引起。（,14,人类凝固酶阴性葡萄球菌（,CNS,）感染中以,表皮葡萄球菌,的感染最为常见。,CNS,主要引起以下几种感染：泌尿系感染，细菌性心内膜炎，败血症等，其中大多为医院内感染。此外，心脏起搏器安装、置换人工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。,3,、凝固酶阴性葡萄球菌的致病性,人类凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的,15,三、微 生 物 学 检 验,（一）标本采集,（二）检验程序,（三）检验方法,三、微 生 物 学 检 验（一）标本采集,16,三、微 生 物 学 检 验,（一）标本采集,根据病情采集标本,种类,：脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。,注意,：无菌操作，避免污染。,三、微 生 物 学 检 验（一）标本采集,17,（二）葡萄球菌检验程序,脓液、咽拭子、穿刺液,尿液、痰液,脑脊液血液,粪便、呕吐物,直接涂片染色,增菌培养,分离培养,（血平板）,分离培养,（高盐甘露醇平板）,取可疑菌落,鉴定试验药敏试验,涂片染色,血浆凝固酶,耐热核酸酶,其他鉴定试验,报告,初 报,（二）葡萄球菌检验程序脓液、咽拭子、穿刺液脑脊液血液粪,18,（三）检验方法,1,、直接涂片,适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液）,伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等,初步报告：,“,查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌,”,或：,“,查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌,”,（三）检验方法 1、直接涂片初步报告：,19,2,、分离培养,50ml,葡萄糖肉汤（增菌）,浑浊,无菌（,7,天）,报告：,无菌生长,脑脊液,、脓液、,穿刺液、咽拭、尿液,血平板,血液标本,5ml,粪便、,呕吐物,高盐甘露醇平板,2、分离培养浑浊无菌（7天）报告：脑脊液、脓液、血平板血液标,20,（三）检验方法,3,、鉴定试验,（,1,）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（,+,）,（,2,）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（,+,）,（,3,）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（,+,）,（）肠毒素测定： 金黄色葡萄球菌产生,（,5,）,SPA,检测： 金黄色葡萄球菌,（,6,）凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定,（,7,）,API,葡萄球菌鉴定试剂盒,（三）检验方法3、鉴定试验,21,导致医院内感染：如尿路感染、腹部和,有脑膜刺激症状，抽取脑脊液,金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。,1致病物质：菌毛、荚膜、内毒素,室温3h，60 5min死亡。,触酶（-）（区别于葡萄球菌属）,胆汁溶菌试验（-）,（三）链球菌的检验方法,为淋病的病原体，人是唯一天然宿主和传染源,室温3h，60 5min死亡。,溶血葡萄 白色 + - - S/R,（检测磷壁酸有助于金葡菌感染诊断）,、按噬菌体分类：金葡菌分为5群26型,血浆凝固酶、SPA、抗链“o”试验、Optochin试验。,或：“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”,（2）胆汁溶菌试验：+,病人呕吐物、粪便、剩余食物,（3）Optochin试验：+,分解葡萄糖、麦芽糖：+,致病力强，引起多种疾病。,普通琼脂平板：不生长。,（四）结果评价和报告,1,、,金黄色葡萄球菌,：无论任何标本中分离到均 应鉴定并报告临床。,2,、,表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌,：从输液导管、人工植入组织中分离到，应视为致病菌。,3,、,尿培养计数,：,10,3,-10,4,为阳性菌尿标准。,4,、,其他凝固酶阴性葡萄球菌,：引起感染流行或治疗失败时，应鉴定到种。,5,、,金黄色葡萄球菌（,MRSA),：头孢菌素类抗生素体外药敏试验为敏感时，不应报告，因体内试验已证实,MRSA,对该类抗生素耐药。,导致医院内感染：如尿路感染、腹部和（四）结果评价和报告1、金,22,第二节 链球菌属,(,Streptococcus,),第二节 链球菌属(Streptococcus),23,一、 链 球 菌,一、 链 球 菌,24,一、生 物 学 特 性,（一）形态与染色,G,+,，球形或椭圆形，呈链状排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。,一、生 物 学 特 性（一）形态与染色,25,一、生 物 学 特 性,（二）培养特性,条件,：营养要求较高，多数为兼性厌氧菌，少,数专性厌氧。,液体,：沉淀生长（絮状或颗粒状）。,普通琼脂平板,：不生长。,血液琼脂平板,：,一、生 物 学 特 性（二）培养特性,26,（三）生化反应,活泼,分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。,菊糖（,-,）,胆汁溶菌试验（,-,）,optochin,敏感试验（,-,）,触酶（,-,）,（区别于葡萄球菌属）,（区别甲链与肺链）,（三）生化反应（区别甲链与肺链）,27,（四）抗原构造,、,多糖抗原（,C,抗原）,：,群特异性。,、,蛋白抗原（,M,、,T,、,R,、,S,）,型特异性，与致病有关的是,M,蛋白抗原,。,3,、核蛋白抗原：无特异性。,（四）抗原构造,28,（3）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（+）,采集标本：注意保温迅速送检。,葡萄球菌A蛋白（SPA）的意义：,用亚硝酸抽提待测菌的群特异性抗原，分别与包被有抗体的胶乳颗粒反应。,无芽胞、无鞭毛，具有荚膜、菌毛。,是肠道中的正常菌群,试剂盒STREPTEX。,呈链状排列,二、肺炎链球菌(S.,血浆凝固酶、SPA、抗链“o”试验、Optochin试验。,约2%-3%的人表现为流脑症状。,MRSA常呈多重耐药，对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏感率分别为1.,第四节 奈瑟菌属(Neisseria), 盐耐受试验：+,室温3h，60 5min死亡。,圆形， 较小，稍干， 沉淀 ,立即送检,（1）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（+）,血浆凝固酶、SPA、抗链“o”试验、Optochin试验。,菊糖（多数 + ）,多糖抗原,蛋白质抗原,核蛋白抗原,链球菌抗原构造模式图,荚膜,（3）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（+）多糖抗原蛋白质抗原,29,可分9个血清群，对人致病的主要是A群,3杀白细胞素（leukocidin）,圆形， 较小，稍干， 沉淀 ,用亚硝酸抽提待测菌的群特异性抗原，分别与包被有抗体的胶乳颗粒反应。,6）、高胆汁（40%）、1045生长。,营养要求高，必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的培养基上生长良好。,乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌为毒力强的致病菌，无论从任何临床标本中分离出均应报告临床。,分解葡萄糖、麦芽糖：+,在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内,脑膜炎奈瑟菌(merningococcus),液体：沉淀生长（絮状或颗粒状）。,普通琼脂平板：不生长。,胆汁溶菌试验 菊糖发酵 Optochin试验,在干燥环境中仅能存活1-2h，湿热55 5min,100 立即死亡。,3杀白细胞素（leukocidin）,血平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（溶血）,注意保温（勿放冰箱）,室温3h，60 5min死亡。,型特异性，与致病有关的是M蛋白抗原。,存在于正常人上呼吸道，为条件致病菌，仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。,（五）分类,40,个种及亚种,、按溶血情况分类,：,（,1,）,甲型溶血性链球菌,：,菌落周围有,1,2mm,宽的草绿溶血环，称甲型溶血或,溶血。为,条件致病菌,。,（,2,）,乙型溶血性链球菌,：,菌落周围形成一个,2,4mm,宽的透明溶血环，称乙型溶血或,溶血。又称溶血性链球菌。,致病力强，引起多种疾病。,（,3,）,丙型链球菌,：无溶血环，,不致病,可分9个血清群，对人致病的主要是A群（五）分类 40个种,30,、按抗原结构分类：,按,C,抗原分群：,ABCD,20,群，对人致病的以,A,群,为主。,按,M,蛋白分型：如,A,群：,100,个型，,B,群：,4,型，,C,群：,13,个型。,（五）分类,、按抗原结构分类：（五）分类,31,（六）抵抗力,不强，,6030min,杀死，对多种消毒剂敏感。,乙链：对青霉素、四环素、红霉素等敏感。,（六）抵抗力,32,二、致病性和免疫性,（一）致病物质,1,、,链球菌溶血素,（,1,）,链球菌溶血素,O (SLO),SLO,抗体,抗链球菌溶血素,O,试验,：协助诊断风湿热（,1:400),（,2,）链球菌溶血素,S (SLS),：无抗原性。,2,、,致热外毒素,（猩红热毒素,/,红疹毒素）,3,、,M,蛋白,二、致病性和免疫性（一）致病物质2、致热外毒素（猩红热毒素/,33,4,、,透明质酸酶,5,、,链激酶,6,、,链道酶,34,可分9个血清群，对人致病的主要是A群,二、肺炎链球菌(S.,对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。,三、微 生 物 学 检 验,3、生化鉴定：,活泼分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。,4、其他凝固酶阴性葡萄球菌：引起感染流行或治疗失败时，应鉴定到种。,长期住院、反复使用各种广谱抗菌药物、烧伤或有伤口的病人及与MRSA定植或感染的病人接触都是造成院内MRSA流行的危险因素。,杆菌肽敏感试验：A群敏感(d10mm),中间型 + + ,（3）丙型链球菌：无溶血环，不致病,溶血葡萄 白色 + - - S/R,（3）Optochin试验：+,（）肠毒素测定： 金黄色葡萄球菌产生,肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别,根据病情采集标本,敏感试验 试验,菌落：圆形、中等大小、灰白色、不透明、S型，有或溶血。,普通琼脂平板：不生长。,（4）菊糖发酵试验：+,（二）所致疾病,主要由,A,群链球菌引起。,1,、化脓性感染：,由,皮肤伤口侵入,，,经呼吸道侵入,，其他,途径（如,产褥热、蜂窝组织炎,）,特点：,病灶界限不清,脓汁稀薄,2,中毒性疾病,：,猩红热,由产生致热外毒素的,A,族链球菌所致的急性呼吸道传染病。,可分9个血清群，对人致病的主要是A群（二）所致疾病2中毒性,35,3,变态反应性疾病： 风湿热,急性肾小球肾炎,二、致病性和免疫性,4,其他疾病：,甲型（草绿色）链球菌：引起亚急性细菌性心内膜炎。,3变态反应性疾病： 风湿热 二、致病性和免疫性4其他,36,三、微生物学检验,（一）标本采集,（二）检验程序,（三）检验方法,三、微生物学检验（一）标本采集,37,（一）标本采集,根据病情采集标本,种类,：脓液、鼻咽拭子、血液等,风湿热查血清抗体,（一）标本采集,38,（二）链球菌的检验程序,痰、脓、穿刺液咽拭子等,脑脊液,血 液,直接涂片染色,测抗原,分离培养,增菌培养,(5%CO2,葡萄糖肉汤,),血平板（,5%CO2,）,可疑菌落,鉴定试验,初步报告,血清学鉴定,（分群）,杆菌肽试验,optochin,胆汁溶菌试验 其他鉴定,敏感试验 试验,（二）链球菌的检验程序痰、脓、穿刺液咽拭子等脑脊液血 液直,39,（三）链球菌的检验方法,（,1,）直接镜检：,（痰、脓、穿刺液、,咽拭子等）,初报：发现,G,+,球菌，,呈链状排列,（三）链球菌的检验方法（1）直接镜检：,40,（,2,）分离培养：, 血液、脑脊液 肉汤增菌, 脓液、咽拭子等 血平板分离,病原性球菌与检验实用ppt课件,41,（,3,）鉴定链球菌的主要试验：,根据形态、菌落、溶血情况进行：,杆菌肽敏感试验：,A,群,敏感,(d10mm),Optochin,敏感试验：,肺炎链球菌,d18mm,，,d400,为,+,血清学鉴定：抗O试验：,43,二、肺炎链球菌,(,S.pneumoniae,),属链球菌科，链球菌属。,广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，多数不致病。,二、肺炎链球菌(S.pneumoniae) 属链球菌,44,取肉汤培养液均匀涂于血平板上用optochin纸片贴于接种区中央（或分区划线法，纸片贴于1-2区），35需氧培养过夜，抑菌圈 18mm。,optochin敏感试验（-）,金黄色葡萄球菌有透明溶血环。,加入胆汁或10%去氧胆酸钠，37，5-10min，激活本菌的自溶酶，出现溶菌现象。,约2%-3%的人表现为流脑症状。,对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。,种类：脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。,（3）Optochin试验：+,导致医院内感染：如尿路感染、腹部和,对一般消毒剂敏感，对干燥抵抗力较强。,人类凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最为常见。,3杀白细胞素（leukocidin）,乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌为毒力强的致病菌，无论从任何临床标本中分离出均应报告临床。,涂片 荚膜肿胀试验,选择培养基：叠氮胆汁七叶苷琼脂平板。,圆形， 较小，稍干， 沉淀 , 脓液、咽拭子等 血平板分离,一、脑膜炎奈瑟菌 (N.,（2）链球菌溶血素S (SLS)：无抗原性。,腐生葡萄 柠檬黄 + - - R,一、生 物 学 特 性,（一）形态与染色,G,+,， 矛头状，成双（或短链）排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。,取肉汤培养液均匀涂于血平板上用optochin纸片贴于接种区,45,（二）培养特性,条件,：,营养要求较高，兼性厌氧菌，,5-10% C02,生长最好。 产生自溶酶。,液体,：,培养,24h,呈均匀混浊，后期因产生自溶而变得澄清。,普通琼脂平板,：,不生长。,血液琼脂平板,：,灰白色，圆形，扁平，较小，周围有,草绿色溶血环,（,溶血）,（二）培养特性,46,（三）生化反应,活泼,分解多种糖类。,菊糖（多数,+,）,胆汁溶菌试验（,+,）,Optochin,试验,(+),区别甲链与肺链,（三）生化反应区别甲链与肺链,47,（四）抗原构造,、,荚膜多糖抗原,：,据此将肺炎链球菌分,85,型，对人致病的有,20,多型。,-,型引起大叶性肺炎。,、,菌体多糖抗原：,可与,CRP,反应，产生沉淀。,3,、,M,蛋白抗原,： 型特异性。,（四）抗原构造,48,（五）抵抗力,较弱，加热,56,，,20min,即死亡。,对一般消毒剂敏感，对干燥抵抗力较强。,荚膜变异,：有荚膜的光滑（,S,）型菌有毒力，失去荚膜的粗糙（,R,）型毒力减低或消失。,（六）变异性,（五）抵抗力荚膜变异：有荚膜的光滑（S）型菌有毒力，失,49,二、致病性和免疫性,（一）致病物质,1,、荚膜：,肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用。,2,、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎链球菌溶素,O,等,溶血毒素,“,O,”,：,自溶后释放，能溶解人和动物的红细胞，高浓度对动物有坏死及致死作用。,二、致病性和免疫性（一）致病物质,50,（二）所致疾病,存在于正常人上呼吸道，为,条件致病菌,，仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。,可引起：,大叶性肺炎,，胸膜炎，脓胸，慢性支气管炎，中耳炎，脑膜炎，败血症等。,（二）所致疾病,51,三、微生物学检验,（一）标本采集,痰液，脓液，血液，脑脊液等。,（二）检验程序,（三）检验方法,三、微生物学检验（一）标本采集,52,检验程序,痰、脓,脑脊液,血液,直接涂片 分离培养,革兰染色、美兰染色,荚膜肿胀试验,增菌培养（葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤）,（血平板）,挑选可疑菌落,纯培养,初报,兔血清肉汤,小白鼠毒力试验,涂片 荚膜肿胀试验,胆汁溶菌试验 菊糖发酵,Optochin,试验,药敏试验,报 告,检验程序痰、脓脑脊液血液直接涂片 分离,53,检验方法,1,、直接镜检,适用于：痰、脓、脑脊液标本。,报告：,“,找到肺炎链球菌,”,2,、分离培养,硫酸镁肉汤,：均匀混浊生长，有绿色荧光。,血平板,：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（,溶血）,检验方法1、直接镜检,54,3,、鉴定试验,（,1,）荚膜肿胀试验,（,2,）胆汁溶菌试验：,+,（,3,）,Optochin,试验：,+,（,4,）菊糖发酵试验：,+,（,5,）小鼠毒力试验：,有毒力的菌株，接种后,12-36h,，死亡。,3、鉴定试验,55,可分9个血清群，对人致病的主要是A群,、按色素分类：金、白、柠,硫酸镁肉汤：均匀混浊生长，有绿色荧光。,风湿热查血清抗体,（1）甲型溶血性链球菌：菌落周围有12mm宽的草绿溶血环，称甲型溶血或溶血。,胆汁溶菌试验（+）,（4）种间鉴定试验：P175表17-3,常用的分型方法：rRNA基因探针分型法。,效价400为+,普通琼脂平板：不生长。,pneumoniae),或：“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”,学习目的与要求,导致医院内感染：如尿路感染、腹部和,分：结合型凝固酶、游离型凝固酶。,可引起：大叶性肺炎，胸膜炎，脓胸，慢性支气管炎，中耳炎，脑膜炎，败血症等。,一种为结合型凝固酶（凝聚因子）：细菌表面的纤维蛋白原受体与血浆中的纤维蛋白原结合，导致细菌凝集。,学习目的与要求,胆汁溶菌试验阳性,：,加入胆汁或,10%,去氧胆酸钠，,37,，,5-10min,，激活本菌的自溶酶，出现溶菌现象。,可分9个血清群，对人致病的主要是A群胆汁溶菌试验阳性：,56,Optochin,敏感试验阳性：,取肉汤培养液均匀涂于血平板上用,optochin,纸片贴于接种区中央（或分区划线法，纸片贴于,1-2,区），,35,需氧培养过夜，抑菌圈,18mm,。,Optochin敏感试验阳性：,57,Optochin,test,Optochin,58,肺炎链球菌的主要鉴定依据,1,、镜下形态,：革兰阳性球菌，矛头状成双排列，平端相对，尖端向外；,2,、血平板菌落特点,：直径,0.5-1.5mm,，灰白色，半透明，光滑（有些菌株为粘液状），扁平，周围有草绿色溶血环。,培养或放置,24h,以上，菌落中央可塌陷，呈脐窝状。,3,、生化鉴定,：,Optochin,试验,+,，胆汁溶菌试验,+,。,肺炎链球菌的主要鉴定依据 1、镜下形态：革兰阳性球菌，,59,肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别,形态 菌落 血清 胆汁 菊糖,Opto-,小鼠,肉汤 溶菌,chin,毒力试验,肺链,甲链,矛头状， 稍大，湿润 浑浊,+ + + +,成双， 扁平，,有荚膜 脐窝状,圆形， 较小，稍干， 沉淀,无荚膜 圆，凸起,肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别 形态,60,（四）结果评价和报告,乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌,为毒力强的致病菌，无论从任何临床标本中分离出均应报告临床。,及时鉴定和报告咽部标本中分离出的化脓性链球菌，有利于早期治疗，以减少并发症（如风湿热，肾小球肾炎）的产生。,草绿色链球菌,在重症感染时，应鉴定到种。,（四）结果评价和报告 乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌为毒力,61,第三节 肠球菌属,是肠道中的正常菌群,导致医院内感染：如,尿路感染,、腹部和,盆腔感染、败血症、脑膜炎。,第三节 肠球菌属 是肠道中的正常菌群,62,二、肺炎链球菌(S.,注意：无菌操作，避免污染。,不强，6030min杀死，对多种消毒剂敏感。,胆汁七叶苷试验：+,条件：营养要求较高，兼性厌氧菌， 5-10% C02生长最好。,Optochin敏感试验：肺炎链球菌d18mm，,（2）烫伤样皮肤综合征 由表皮剥脱毒素引起。,可分9个血清群，对人致病的主要是A群,或：“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”,标本：男性：尿道分泌物,杆菌肽敏感试验：A群敏感(d10mm),溶血葡萄 白色 + - - S/R,胆汁溶菌试验：肺炎链球菌+,1标本采集,溶血葡萄 白色 + - - S/R,Optochin敏感试验：肺炎链球菌d18mm，,据此将肺炎链球菌分85型，对人致病的有20多型。,致病力强，引起多种疾病。,杆菌肽试验 optochin 胆汁溶菌试验 其他鉴定,（五）分类 40个种及亚种,（）肠毒素测定： 金黄色葡萄球菌产生,一、生物学特性,（一）形态染色,G,+,球菌，,单个、成双或短链状,排列。无荚膜、芽胞，部分菌株有鞭毛。,二、肺炎链球菌(S.一、生物学特性（一）形态染色,63,营养要求较高。能在,高盐,（,6.5%NaCl,）、,高碱,（,PH9.6,）、,高胆汁,（,40%,）、,1045,生长。,菌落,：圆形、中等大小、灰白色、不透明、,S,型，有,或,溶血。,（二）培养特性,营养要求较高。能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（P,64,能分解多种糖类,触酶（,-,）,PYR,（吡咯烷酮,-,萘基酰胺）试验（,+,）,（三）生化反应,能分解多种糖类（三）生化反应,65,目前分,18,种。引起医院内感染常见的是粪肠球菌和屎肠球菌。,常用的分型方法：,rRNA,基因探针分型法。,（四）分型,（五）抵抗力,对理化因素抵抗力弱。,但对大多数抗生素天然耐药。,目前分18种。引起医院内感染常见的是粪肠球菌和屎,66,二、微生物学检验,（一）标本采集,尿液、血液、脑脊液、脓汁分泌物等。,二、微生物学检验 （一）标本采集,67,（二）检验程序,尿液、脓汁、穿刺液,血 液,涂片染色 分离培养（血平板、,5%CO2,）,初 报,挑选可疑菌落,增菌培养（葡萄糖肉汤、,5%CO2,）,PYR,试验,胆汁七叶苷试验,6.5%NaCl,生长试验,血清学试验,其他鉴定试验,报 告,（二）检验程序尿液、脓汁、穿刺液血 液涂片染色 分离培,68,（三）检验方法,1,、直接镜检,适用于：痰、脓、脑脊液、穿刺液标本。,2,、分离培养,血平板,：灰白色，圆形，中等大小，不透明，,S,型菌落，周围有,溶血或,溶血。,选择培养基：叠氮胆汁七叶苷琼脂平板。,（三）检验方法1、直接镜检,69,3,、鉴定试验,（,1,）菌属鉴定试验：,PYR,试验：肠球菌、,A,群链球菌、某些凝固酶阴性葡萄球菌为（,+,）,胆汁七叶苷试验：,+,盐耐受试验：,+,（,4,）种间鉴定试验：,P175,表,17-3,3、鉴定试验,70,第四节 奈瑟菌属,(,Neisseria,),特点,：为一群,G,-,双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛，需氧，氧化酶及触酶,+,。,种类,：共九种，主要致病菌是,脑膜炎奈瑟菌,(,merningococcus,),淋病奈瑟菌,(,gonorrhoeae),第四节 奈瑟菌属(Neisseria) 特点：为一群G,71,一、脑膜炎奈瑟菌,(N,.meningitidis),即脑膜炎球菌，,是,流行性脑脊髓膜炎,的病原体,一、脑膜炎奈瑟菌 (N.meningitidis)即脑膜,72,（一）生物学性状,1,形态结构,2,培养特性,3,生化反应,4.,抗原结构,5.,抵抗力特点,（一）生物学性状1形态结构,73,（一）,形态结构,G,-,，肾形成双排列,在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内,无芽胞、无鞭毛，具有荚膜、菌毛。,（一）形态结构G-，肾形成双排列,74,2,培养特性,营养要求高,，必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的培养基上生长良好。,血平板,：半透明，灰褐色，圆形，湿润光滑露滴样菌落。,易自溶,。,2培养特性营养要求高，必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的,75,巧克力平板,：圆形，扁平，蓝灰色，半透明，光滑湿润的菌落。,卵黄双抗（,EPV,）平板,：较大，无色，光滑湿润，扁平，边缘整齐的菌落。,血清肉汤,：呈微混浊。,巧克力平板：圆形，扁平，蓝灰色，半透明，光滑湿润的菌落。,76,3.,生化反应,分解葡萄糖、麦芽糖：,+,硝酸盐还原试验阴性，不分解尿素,氧化酶试验阳性,3.生化反应分解葡萄糖、麦芽糖：+,77,4.,抗原结构,可分,9,个血清群，对人致病的主要是,A,群,5,抵抗力特点,对寒冷、光、热力，干燥等十分敏感。室温,3h,，,60 5min,死亡。,采集标本：注意保温迅速送检。,对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。,4.抗原结构可分9个血清群，对人致病的主要是A群5抵抗力特,78,（二）致病性与免疫性,1,致病物质,：菌毛、荚膜、内毒素,2,所致疾病：,传染源、传播途径,寄生在正常人鼻咽部，存在易患人群，与患者补体介导的杀菌活性缺陷有关。约,2%-3%,的人表现为流脑症状。,3.,免疫性,病原可产生群特异性抗体，但不持久。,（二）致病性与免疫性1致病物质：菌毛、荚膜、内毒素3. 免,79,(,三,),微生物学检验,1,标本采集,菌血症期病人采集血液,有出血点或瘀斑者，可取瘀斑渗出液,有脑膜刺激症状，抽取脑脊液,带菌者：咽拭子,(三) 微生物学检验 1标本采集,80,注意事项：,立即送检,注意保温（勿放冰箱）,防干燥,防紫外线,注意事项：,81,、脑膜炎球菌的检验程序,血 液,增菌培养（葡糖肉汤）,分离培养,（巧克力、血平板）,鉴定试验,涂染检 氧化酶 葡、麦糖 多价血清 药敏试验,结果报告,鼻咽拭子,卵黄双抗平板,510%co2,37 1824h,37 1824h,37 1824h,脑脊液 瘀血点,离心,上沉,清淀,液物,510%,2,涂片,染色,初步,报告,直接凝集,、脑膜炎球菌的检验程序 血 液增菌培养（葡糖肉汤,82,脑膜炎球菌的鉴定依据,菌落特征符合,形态染色符合,分解葡、麦糖产酸,氧化酶、触酶阳性,血清凝集试验阳性,脑膜炎球菌的鉴定依据菌落特征符合,83,二、淋病奈瑟菌,（,N.gonorrhoeae,）,即淋球菌,为淋病的病原体，人是唯一天然宿主和传染源,二、淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）即淋球菌,84,（一）生物学性状,1,形态结构,2,培养特性,3.,生化反应,4,抵抗力特点,（一）生物学性状1形态结构,85,1,形态结构,G,-,，球形或肾形，成对排列,有荚膜，无芽胞和鞭毛,1形态结构G-，球形或肾形，成对排列,86,2,培养特性,营养要求高，,30-37,生长，须在含有血液或血清的培养基上培养，常用血液、巧克力等培养基,初次分离，须,5-10%CO,2,才能生长发育,菌落：凸起，光滑、圆形，灰褐色，半透明,2培养特性营养要求高，30-37 生长，须在含有血液或血,87,3.,生化反应,氧化酶试验：（,+,）,触酶,： （,+,）,葡萄糖（,+,） ，麦芽糖（,-,）,易自溶,3.生化反应氧化酶试验：（+）,88,4,抵抗力特点,抵抗力弱，,在干燥环境中仅能存活,1-2h,，湿热,55,5min,100,立即死亡。室温下存活,1-2d,。,对消毒剂极敏感,4抵抗力特点抵抗力弱，,89,、致病物质,：菌毛、外膜蛋白、等,、所致疾病：,侵犯人类泌尿生殖系统引起淋病,(,首位性病,),新生儿眼炎,（二）致病性与免疫性,、致病物质：菌毛、外膜蛋白、等（二）致病性与免疫性,90,1,标本采集,标本：,男性：尿道分泌物,女性：阴道分泌物,全身性淋病：血液、泌尿、生殖道的各种分泌物、尿液,立即送检,检验程序,(,三,),微生物学检验,1标本采集 标本：男性：尿道分泌物检验程序 (三) 微,91,脓汁、分泌物,直接涂片染色,分 离 培 养,血、巧克力、,TM,平板,5,10%co2,3518,24h,鉴定试验,涂染检 氧化酶 糖发酵 药敏试验,报 告,初步报告,35 18,24h,脓汁、分泌物直接涂片染色 分 离 培 养510,92,（）直接涂片镜检,急性淋病：,嗜中性粒细胞内大量,G,-,，肾形双球菌,具有诊断意义,慢性淋病：镜检较困难,检验方法,（）直接涂片镜检急性淋病：检验方法,93,（）分离培养,即采集即培养，常用含有两种以上抗生素（万古霉素、粘菌素、磺胺类等）的选择培养基上培养（如,ML,、,TM,）,5-10%CO2,培养基先预温。,（）分离培养 即采集即培养，常用含有两种以上抗生,94,氧化酶试验,： （,+,）,触酶：,（,+,）（多数奈瑟菌为阴性）,葡萄糖（,+,），麦芽糖（,-,）,PCR,：,灵敏，特异，标本不受限制,(,不需活菌,),（）鉴定,氧化酶试验： （+）（）鉴定,95,1.,名词解释：,血浆凝固酶、,SPA,、抗链,“,o,”,试验、,Optochin,试验。,2.,根据色素和生化反应将葡萄球菌分成哪几种？,3.,金黄色葡萄球菌的鉴定依据有哪些？,4.,根据链球菌在血平板上的溶血现象，将其分成哪些类型？甲链和乙链有何区别？,5.,简述链球菌的检验程序和检验方法。,6.,脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些异同点？,7.,采集脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的标本进行细菌检验应该注意哪些问题？为什么？,复习思考题,1.名词解释： 复习思考题,96,中等大，突起，,有色素，,S,型菌落。,葡萄球菌菌落形态,（普通琼脂平板）,中等大，突起，葡萄球菌菌落形态,97,金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌,金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌,98,金黄色葡萄球菌有透明溶血环。,表皮葡萄球菌无溶血环。,金黄色葡萄球菌有透明溶血环。表皮葡萄球菌无溶血环。,99,葡萄球菌,A,蛋白（,SPA,）,的意义：,（,1,）降低抗体的调理作用，抗吞噬,（,2,）协同凝集试验,:,辅助诊断疾病。,葡萄球菌A蛋白（SPA）的意义：,100,血浆凝固酶试验,原理,致病性葡萄球菌能产生种血浆凝固酶,：,一种为,结合型凝固酶（凝聚因子）,：细菌表面的纤维蛋白原受体与血浆中的纤维蛋白原结合，导致细菌凝集。,另一种为,游离型凝固酶,，可被人或兔血浆中的协同因子激活，成为凝血酶样物质，使纤维蛋白原变为纤维蛋白，从而使血浆凝固。,检测方法,结合型凝固酶：玻片法,游离型凝固酶：试管法,血浆凝固酶试验原理致病性葡萄球菌能产生种血浆凝固酶：,101,耐热核酸酶试验,液体培养物,煮沸,15min,373h,甲苯胺蓝核酸琼脂,耐热核酸酶试验液体培养物373h甲苯胺蓝核酸琼脂,102,肠毒素测定,病人呕吐物、粪便、剩余食物,高盐肉汤,3724h,分离培养,肉汤煮沸,30min,， 离心，取上清夜,幼 猫,观察症状（,4h,出现）,肠毒素测定病人呕吐物、粪便、剩余食物高盐肉汤3724h分离,103,SPA,的检测,致病性葡萄球菌 （,SPA),兔抗羊红细胞,Ab,（,IgGFc,）,SRBC,致敏羊红细胞,SPA的检测致病性葡萄球菌 （SPA)兔抗羊红细胞AbSRB,104,凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别,结合型 游离型 耐热核酸,VP,鸟氨酸脱,血浆凝固酶 血浆凝固酶 酶试验 试验 羧酶试验,金黄色,+ + + +,葡萄球菌,中间型,+ +,葡萄球菌,（罕见）,希氏,+,+ + +,葡萄球菌,凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别 结合型,105,凝固酶阴性葡萄球菌的鉴别,见,P167,表,17-1,凝固酶阴性葡萄球菌的鉴别见P167表17-1,106,表,3,几种常见葡萄球菌的鉴别,细菌 菌落颜色 溶血 触酶 凝固酶 甘露醇 新生霉素,金黄色,金黄色, + + + S,葡萄球菌,表皮葡萄,白色, + - - S,球菌,溶血葡萄,白色, + - - S/R,球菌,腐生葡萄,柠檬黄, + - - R,球菌,表3 几种常见葡萄球菌的鉴别细菌 菌落颜色 溶血,107,Staphylococcus aures,（,-,）,表皮葡萄球菌（,S,）,腐生葡萄球菌,(R),阴性结果,（,S,）,新生霉素耐药试验,阴性结果新生霉素耐药试验,108,链球菌菌落（血平板）：,细小，灰白色，圆形，突起，光滑，湿润，边缘整齐，不同菌种菌落周围有不同溶血环。,链球菌菌落（血平板）：,109,甲型溶血性链球菌,（草绿色链球菌）,丙型链球菌,乙型溶血性,链球菌,甲型溶血性链球菌丙型链球菌乙型溶血性,110,猩红热,猩红热,111,蜂窝织炎,蜂窝织炎,112,病原性球菌与检验实用ppt课件,113,病原性球菌与检验实用ppt课件,114,Neisseria,gonorrhoeae,Neisseria,115,烫伤样皮肤综合征,多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成人，开始有红斑，,1,2,天有皮起皱，继而形成水疱，至表皮脱落。由,表皮剥脱毒素,引起。,烫伤样皮肤综合征 多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成,116,试验,（,B,群无乳链球菌,+,）,-,+,：溶血环呈箭头状,金黄色葡萄球菌,试验 -+：溶血环呈箭头状金黄色葡萄球菌,117,杆菌肽试验,（,A,群链球菌,+,）,杆菌肽试验,118,（六）抵抗力,不强，,6030min,杀死，对多种消毒剂敏感。,乙链：对青霉素、四环素、红霉素等敏感。,（六）抵抗力,119,二、肺炎链球菌,(,S.pneumoniae,),属链球菌科，链球菌属。,广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，多数不致病。,二、肺炎链球菌(S.pneumoniae) 属链球菌,120,3,、鉴定试验,（,1,）荚膜肿胀试验,（,2,）胆汁溶菌试验：,+,（,3,）,Optochin,试验：,+,（,4,）菊糖发酵试验：,+,（,5,）小鼠毒力试验：,有毒力的菌株，接种后,12-36h,，死亡。,3、鉴定试验,121,二、微生物学检验,（一）标本采集,尿液、血液、脑脊液、脓汁分泌物等。,二、微生物学检验 （一）标本采集,122,注意事项：,立即送检,注意保温（勿放冰箱）,防干燥,防紫外线,注意事项：,123,4,抵抗力特点,抵抗力弱，,在干燥环境中仅能存活,1-2h,，湿热,55,5min,100,立即死亡。室温下存活,1-2d,。,对消毒剂极敏感,4抵抗力特点抵抗力弱，,124,金黄色葡萄球菌有透明溶血环。,表皮葡萄球菌无溶血环。,金黄色葡萄球菌有透明溶血环。表皮葡萄球菌无溶血环。,125,猩红热,猩红热,126,