资源描述
,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,1.,了解病原性球菌的概念及种类。,2.,熟悉常见病原性球菌的主要生物学特性、致病性和免疫性。,3.,掌握葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的检验程序和检验方法。,学习目的与要求,1. 了解病原性球菌的概念及种类。 学习目的与,1,第一节 葡萄球菌属,(Staphylococcus),第一节 葡萄球菌属(Staphylococcus),2,(一)形态与染色,G,+,, 球形,无鞭毛、无芽孢,呈葡萄串状排列。,一、,生 物 学 特 性,(一)形态与染色一、生 物 学 特 性,3,(二)培养特性,营养,:要求不高,耐盐。,液体,:均匀浑浊生长,普通琼脂平板,:,血液琼脂平板,:,高盐甘露醇平板,:金黄色葡萄球菌为,淡橙黄色菌落,;,其他葡萄球菌为,白色菌落,。,(二)培养特性高盐甘露醇平板:金黄色葡萄球菌为淡橙黄色菌落;,4,(三)生化反应,活泼,分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。,(,如:葡萄糖,麦芽糖,蔗糖,甘露醇),触酶(),(区别于链球菌属),(三)生化反应,5,(四)抗原构造,、,蛋白抗原(),、,多糖抗原,金黄色葡萄球菌:核糖醇磷壁酸,(检测磷壁酸有助于金葡菌感染诊断),凝固酶():甘油磷壁酸,(四)抗原构造,6,(五)分类,:,个种及亚种,、,按色素分类,:金、白、柠,、,按凝固酶分类,:,凝固酶阴性、凝固酶阳性葡萄球菌,、,按噬菌体分类,:金葡菌分为,5,群,26,型,4.,据色素、生化反应分:,金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌,(五)分类:个种及亚种,7,适用于:痰、脓、脑脊液标本。,(1)血浆凝固酶试验:金黄色葡萄球菌(+),有毒力的菌株,接种后12-36h,死亡。,注意保温(勿放冰箱),导致医院内感染:如尿路感染、腹部和,2所致疾病:传染源、传播途径,途径(如产褥热、蜂窝组织炎),取肉汤培养液均匀涂于血平板上用optochin纸片贴于接种区中央(或分区划线法,纸片贴于1-2区),35需氧培养过夜,抑菌圈 18mm。,采集标本:注意保温迅速送检。,有脑膜刺激症状,抽取脑脊液,中间型 + + ,型特异性,与致病有关的是M蛋白抗原。,注意保温(勿放冰箱),3、生化鉴定:,或:“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”,胆汁溶菌试验:肺炎链球菌+,约2%-3%的人表现为流脑症状。,其他葡萄球菌为白色菌落。,适用于:痰、脓、脑脊液标本。,对理化因素抵抗力弱。,三种葡萄球菌的主要性状,性状,金黄色,葡萄球菌,表 皮,葡萄球菌,腐 生,葡萄球菌,色 素,金黄色,白色,白色或柠檬色,血浆凝固酶,+,溶血素,+,耐热核酸酶,+,甘露醇,+,SPA,+,致病性,强,弱,无,适用于:痰、脓、脑脊液标本。 三种葡萄球菌的主要性状性,8,(六)抵抗力,无芽胞菌中最强,耐干燥,对石炭酸、升汞、龙胆紫敏感。,易产生耐药性变异,如:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(,MRSA,)。,MRSA,常呈多重耐药,对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏感率分别为,1.3%,、,3%,及,14%,。,(六)抵抗力,9,其他葡萄球菌为白色菌落。,Optochin敏感试验:肺炎链球菌d18mm,,易产生耐药性变异,如:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。,、按溶血情况分类:,约2%-3%的人表现为流脑症状。,导致医院内感染:如尿路感染、腹部和,1致病物质:菌毛、荚膜、内毒素,致病力强,引起多种疾病。,(3)Optochin试验:+,3杀白细胞素(leukocidin),适用于:痰、脓、脑脊液标本。,5mm,灰白色,半透明,光滑(有些菌株为粘液状),扁平,周围有草绿色溶血环。,PYR试验:肠球菌、A群链球菌、某些凝固酶阴性葡萄球菌为(+),风湿性关节炎、急性肾小球肾炎,,1致病物质:菌毛、荚膜、内毒素,有荚膜 脐窝状,寄生在正常人鼻咽部,存在易患人群,与患者补体介导的杀菌活性缺陷有关。,活泼分解多种糖类。,长期住院,、,反复使用各种广谱抗菌药物,、,烧伤,或,有伤口的病人,及,与,MRSA,定植或感染的病人接触,都是造成院内,MRSA,流行的危险因素。,MRSA,定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。,MRSA,定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源,。,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(,MRSA,),其他葡萄球菌为白色菌落。 长期住院、反复使用各种广谱抗,10,二、致病性和免疫性,(,一,),致病物质,金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。,1,血浆凝固酶(,coagulase),:,分:结合型凝固酶、游离型凝固酶。,鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标。,2,葡萄球菌溶血素(,staphylolysin,),二、致病性和免疫性(一)致病物质2葡萄球菌溶血素(stap,11,3,杀白细胞素(,leukocidin,),4,肠毒素(,enterotoxin,):,(,A,、,B,、,C1,、,C2,、,C3,、,D,、,E,、,G,、,H 9,个血清型),5,表皮剥脱毒素(,exfoliative toxin,),6.,毒性休克综合征毒素,1,(,toxic shock syndrome toxin 1, TSST1,),3杀白细胞素(leukocidin),12,(二)所致疾病,1,侵袭性疾病:,(,1,),皮肤软组织感染,特点:病灶局限且脓汁粘稠,(,2,),内脏器官感染,(,3,),全身感染,(,4,),尿路感染,(二)所致疾病 (2)内脏器官感染(3)全身感染(4)尿,13,2,毒素性疾病,(,1,),食物中毒,(,2,),烫伤样皮肤综合征,由表皮剥脱毒素引起。,(,3,),毒性休克综合征,由,TSST1,引起,(,4,),假膜性肠炎,2毒素性疾病(2)烫伤样皮肤综合征 由表皮剥脱毒素引起。(,14,人类凝固酶阴性葡萄球菌(,CNS,)感染中以,表皮葡萄球菌,的感染最为常见。,CNS,主要引起以下几种感染:泌尿系感染,细菌性心内膜炎,败血症等,其中大多为医院内感染。此外,心脏起搏器安装、置换人工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。,3,、凝固酶阴性葡萄球菌的致病性,人类凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)感染中以表皮葡萄球菌的,15,三、微 生 物 学 检 验,(一)标本采集,(二)检验程序,(三)检验方法,三、微 生 物 学 检 验(一)标本采集,16,三、微 生 物 学 检 验,(一)标本采集,根据病情采集标本,种类,:脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。,注意,:无菌操作,避免污染。,三、微 生 物 学 检 验(一)标本采集,17,(二)葡萄球菌检验程序,脓液、咽拭子、穿刺液,尿液、痰液,脑脊液血液,粪便、呕吐物,直接涂片染色,增菌培养,分离培养,(血平板),分离培养,(高盐甘露醇平板),取可疑菌落,鉴定试验药敏试验,涂片染色,血浆凝固酶,耐热核酸酶,其他鉴定试验,报告,初 报,(二)葡萄球菌检验程序脓液、咽拭子、穿刺液脑脊液血液粪,18,(三)检验方法,1,、直接涂片,适用于:正常情况下无菌的标本(如脑脊液),伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等,初步报告:,“,查见革兰阳性葡萄状排列球菌,疑为葡萄球菌,”,或:,“,查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌,”,(三)检验方法 1、直接涂片初步报告:,19,2,、分离培养,50ml,葡萄糖肉汤(增菌),浑浊,无菌(,7,天),报告:,无菌生长,脑脊液,、脓液、,穿刺液、咽拭、尿液,血平板,血液标本,5ml,粪便、,呕吐物,高盐甘露醇平板,2、分离培养浑浊无菌(7天)报告:脑脊液、脓液、血平板血液标,20,(三)检验方法,3,、鉴定试验,(,1,)血浆凝固酶试验:金黄色葡萄球菌(,+,),(,2,)甘露醇发酵试验:金黄色葡萄球菌(,+,),(,3,)耐热核酸酶试验:金黄色葡萄球菌(,+,),()肠毒素测定: 金黄色葡萄球菌产生,(,5,),SPA,检测: 金黄色葡萄球菌,(,6,)凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定,(,7,),API,葡萄球菌鉴定试剂盒,(三)检验方法3、鉴定试验,21,导致医院内感染:如尿路感染、腹部和,有脑膜刺激症状,抽取脑脊液,金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。,1致病物质:菌毛、荚膜、内毒素,室温3h,60 5min死亡。,触酶(-)(区别于葡萄球菌属),胆汁溶菌试验(-),(三)链球菌的检验方法,为淋病的病原体,人是唯一天然宿主和传染源,室温3h,60 5min死亡。,溶血葡萄 白色 + - - S/R,(检测磷壁酸有助于金葡菌感染诊断),、按噬菌体分类:金葡菌分为5群26型,血浆凝固酶、SPA、抗链“o”试验、Optochin试验。,或:“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”,(2)胆汁溶菌试验:+,病人呕吐物、粪便、剩余食物,(3)Optochin试验:+,分解葡萄糖、麦芽糖:+,致病力强,引起多种疾病。,普通琼脂平板:不生长。,(四)结果评价和报告,1,、,金黄色葡萄球菌,:无论任何标本中分离到均 应鉴定并报告临床。,2,、,表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌,:从输液导管、人工植入组织中分离到,应视为致病菌。,3,、,尿培养计数,:,10,3,-10,4,为阳性菌尿标准。,4,、,其他凝固酶阴性葡萄球菌,:引起感染流行或治疗失败时,应鉴定到种。,5,、,金黄色葡萄球菌(,MRSA),:头孢菌素类抗生素体外药敏试验为敏感时,不应报告,因体内试验已证实,MRSA,对该类抗生素耐药。,导致医院内感染:如尿路感染、腹部和(四)结果评价和报告1、金,22,第二节 链球菌属,(,Streptococcus,),第二节 链球菌属(Streptococcus),23,一、 链 球 菌,一、 链 球 菌,24,一、生 物 学 特 性,(一)形态与染色,G,+,,球形或椭圆形,呈链状排列,无鞭毛、无芽胞,有荚膜。,一、生 物 学 特 性(一)形态与染色,25,一、生 物 学 特 性,(二)培养特性,条件,:营养要求较高,多数为兼性厌氧菌,少,数专性厌氧。,液体,:沉淀生长(絮状或颗粒状)。,普通琼脂平板,:不生长。,血液琼脂平板,:,一、生 物 学 特 性(二)培养特性,26,(三)生化反应,活泼,分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。,菊糖(,-,),胆汁溶菌试验(,-,),optochin,敏感试验(,-,),触酶(,-,),(区别于葡萄球菌属),(区别甲链与肺链),(三)生化反应(区别甲链与肺链),27,(四)抗原构造,、,多糖抗原(,C,抗原),:,群特异性。,、,蛋白抗原(,M,、,T,、,R,、,S,),型特异性,与致病有关的是,M,蛋白抗原,。,3,、核蛋白抗原:无特异性。,(四)抗原构造,28,(3)耐热核酸酶试验:金黄色葡萄球菌(+),采集标本:注意保温迅速送检。,葡萄球菌A蛋白(SPA)的意义:,用亚硝酸抽提待测菌的群特异性抗原,分别与包被有抗体的胶乳颗粒反应。,无芽胞、无鞭毛,具有荚膜、菌毛。,是肠道中的正常菌群,试剂盒STREPTEX。,呈链状排列,二、肺炎链球菌(S.,血浆凝固酶、SPA、抗链“o”试验、Optochin试验。,约2%-3%的人表现为流脑症状。,MRSA常呈多重耐药,对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏感率分别为1.,第四节 奈瑟菌属(Neisseria), 盐耐受试验:+,室温3h,60 5min死亡。,圆形, 较小,稍干, 沉淀 ,立即送检,(1)血浆凝固酶试验:金黄色葡萄球菌(+),血浆凝固酶、SPA、抗链“o”试验、Optochin试验。,菊糖(多数 + ),多糖抗原,蛋白质抗原,核蛋白抗原,链球菌抗原构造模式图,荚膜,(3)耐热核酸酶试验:金黄色葡萄球菌(+)多糖抗原蛋白质抗原,29,可分9个血清群,对人致病的主要是A群,3杀白细胞素(leukocidin),圆形, 较小,稍干, 沉淀 ,用亚硝酸抽提待测菌的群特异性抗原,分别与包被有抗体的胶乳颗粒反应。,6)、高胆汁(40%)、1045生长。,营养要求高,必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的培养基上生长良好。,乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌为毒力强的致病菌,无论从任何临床标本中分离出均应报告临床。,分解葡萄糖、麦芽糖:+,在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内,脑膜炎奈瑟菌(merningococcus),液体:沉淀生长(絮状或颗粒状)。,普通琼脂平板:不生长。,胆汁溶菌试验 菊糖发酵 Optochin试验,在干燥环境中仅能存活1-2h,湿热55 5min,100 立即死亡。,3杀白细胞素(leukocidin),血平板:灰白色,圆形,扁平,较小,周围有草绿色溶血环(溶血),注意保温(勿放冰箱),室温3h,60 5min死亡。,型特异性,与致病有关的是M蛋白抗原。,存在于正常人上呼吸道,为条件致病菌,仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。,(五)分类,40,个种及亚种,、按溶血情况分类,:,(,1,),甲型溶血性链球菌,:,菌落周围有,1,2mm,宽的草绿溶血环,称甲型溶血或,溶血。为,条件致病菌,。,(,2,),乙型溶血性链球菌,:,菌落周围形成一个,2,4mm,宽的透明溶血环,称乙型溶血或,溶血。又称溶血性链球菌。,致病力强,引起多种疾病。,(,3,),丙型链球菌,:无溶血环,,不致病,可分9个血清群,对人致病的主要是A群(五)分类 40个种,30,、按抗原结构分类:,按,C,抗原分群:,ABCD,20,群,对人致病的以,A,群,为主。,按,M,蛋白分型:如,A,群:,100,个型,,B,群:,4,型,,C,群:,13,个型。,(五)分类,、按抗原结构分类:(五)分类,31,(六)抵抗力,不强,,6030min,杀死,对多种消毒剂敏感。,乙链:对青霉素、四环素、红霉素等敏感。,(六)抵抗力,32,二、致病性和免疫性,(一)致病物质,1,、,链球菌溶血素,(,1,),链球菌溶血素,O (SLO),SLO,抗体,抗链球菌溶血素,O,试验,:协助诊断风湿热(,1:400),(,2,)链球菌溶血素,S (SLS),:无抗原性。,2,、,致热外毒素,(猩红热毒素,/,红疹毒素),3,、,M,蛋白,二、致病性和免疫性(一)致病物质2、致热外毒素(猩红热毒素/,33,4,、,透明质酸酶,5,、,链激酶,6,、,链道酶,34,可分9个血清群,对人致病的主要是A群,二、肺炎链球菌(S.,对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。,三、微 生 物 学 检 验,3、生化鉴定:,活泼分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。,4、其他凝固酶阴性葡萄球菌:引起感染流行或治疗失败时,应鉴定到种。,长期住院、反复使用各种广谱抗菌药物、烧伤或有伤口的病人及与MRSA定植或感染的病人接触都是造成院内MRSA流行的危险因素。,杆菌肽敏感试验:A群敏感(d10mm),中间型 + + ,(3)丙型链球菌:无溶血环,不致病,溶血葡萄 白色 + - - S/R,(3)Optochin试验:+,()肠毒素测定: 金黄色葡萄球菌产生,肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别,根据病情采集标本,敏感试验 试验,菌落:圆形、中等大小、灰白色、不透明、S型,有或溶血。,普通琼脂平板:不生长。,(4)菊糖发酵试验:+,(二)所致疾病,主要由,A,群链球菌引起。,1,、化脓性感染:,由,皮肤伤口侵入,,,经呼吸道侵入,,其他,途径(如,产褥热、蜂窝组织炎,),特点:,病灶界限不清,脓汁稀薄,2,中毒性疾病,:,猩红热,由产生致热外毒素的,A,族链球菌所致的急性呼吸道传染病。,可分9个血清群,对人致病的主要是A群(二)所致疾病2中毒性,35,3,变态反应性疾病: 风湿热,急性肾小球肾炎,二、致病性和免疫性,4,其他疾病:,甲型(草绿色)链球菌:引起亚急性细菌性心内膜炎。,3变态反应性疾病: 风湿热 二、致病性和免疫性4其他,36,三、微生物学检验,(一)标本采集,(二)检验程序,(三)检验方法,三、微生物学检验(一)标本采集,37,(一)标本采集,根据病情采集标本,种类,:脓液、鼻咽拭子、血液等,风湿热查血清抗体,(一)标本采集,38,(二)链球菌的检验程序,痰、脓、穿刺液咽拭子等,脑脊液,血 液,直接涂片染色,测抗原,分离培养,增菌培养,(5%CO2,葡萄糖肉汤,),血平板(,5%CO2,),可疑菌落,鉴定试验,初步报告,血清学鉴定,(分群),杆菌肽试验,optochin,胆汁溶菌试验 其他鉴定,敏感试验 试验,(二)链球菌的检验程序痰、脓、穿刺液咽拭子等脑脊液血 液直,39,(三)链球菌的检验方法,(,1,)直接镜检:,(痰、脓、穿刺液、,咽拭子等),初报:发现,G,+,球菌,,呈链状排列,(三)链球菌的检验方法(1)直接镜检:,40,(,2,)分离培养:, 血液、脑脊液 肉汤增菌, 脓液、咽拭子等 血平板分离,病原性球菌与检验实用ppt课件,41,(,3,)鉴定链球菌的主要试验:,根据形态、菌落、溶血情况进行:,杆菌肽敏感试验:,A,群,敏感,(d10mm),Optochin,敏感试验:,肺炎链球菌,d18mm,,,d400,为,+,血清学鉴定:抗O试验:,43,二、肺炎链球菌,(,S.pneumoniae,),属链球菌科,链球菌属。,广泛分布于自然界,主要寄生于人类上呼吸道,多数不致病。,二、肺炎链球菌(S.pneumoniae) 属链球菌,44,取肉汤培养液均匀涂于血平板上用optochin纸片贴于接种区中央(或分区划线法,纸片贴于1-2区),35需氧培养过夜,抑菌圈 18mm。,optochin敏感试验(-),金黄色葡萄球菌有透明溶血环。,加入胆汁或10%去氧胆酸钠,37,5-10min,激活本菌的自溶酶,出现溶菌现象。,约2%-3%的人表现为流脑症状。,对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。,种类:脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。,(3)Optochin试验:+,导致医院内感染:如尿路感染、腹部和,对一般消毒剂敏感,对干燥抵抗力较强。,人类凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)感染中以表皮葡萄球菌的感染最为常见。,3杀白细胞素(leukocidin),乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌为毒力强的致病菌,无论从任何临床标本中分离出均应报告临床。,涂片 荚膜肿胀试验,选择培养基:叠氮胆汁七叶苷琼脂平板。,圆形, 较小,稍干, 沉淀 , 脓液、咽拭子等 血平板分离,一、脑膜炎奈瑟菌 (N.,(2)链球菌溶血素S (SLS):无抗原性。,腐生葡萄 柠檬黄 + - - R,一、生 物 学 特 性,(一)形态与染色,G,+,, 矛头状,成双(或短链)排列,无鞭毛、无芽胞,有荚膜。,取肉汤培养液均匀涂于血平板上用optochin纸片贴于接种区,45,(二)培养特性,条件,:,营养要求较高,兼性厌氧菌,,5-10% C02,生长最好。 产生自溶酶。,液体,:,培养,24h,呈均匀混浊,后期因产生自溶而变得澄清。,普通琼脂平板,:,不生长。,血液琼脂平板,:,灰白色,圆形,扁平,较小,周围有,草绿色溶血环,(,溶血),(二)培养特性,46,(三)生化反应,活泼,分解多种糖类。,菊糖(多数,+,),胆汁溶菌试验(,+,),Optochin,试验,(+),区别甲链与肺链,(三)生化反应区别甲链与肺链,47,(四)抗原构造,、,荚膜多糖抗原,:,据此将肺炎链球菌分,85,型,对人致病的有,20,多型。,-,型引起大叶性肺炎。,、,菌体多糖抗原:,可与,CRP,反应,产生沉淀。,3,、,M,蛋白抗原,: 型特异性。,(四)抗原构造,48,(五)抵抗力,较弱,加热,56,,,20min,即死亡。,对一般消毒剂敏感,对干燥抵抗力较强。,荚膜变异,:有荚膜的光滑(,S,)型菌有毒力,失去荚膜的粗糙(,R,)型毒力减低或消失。,(六)变异性,(五)抵抗力荚膜变异:有荚膜的光滑(S)型菌有毒力,失,49,二、致病性和免疫性,(一)致病物质,1,、荚膜:,肺炎球菌的致病力,主要是荚膜的抗吞噬作用。,2,、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎链球菌溶素,O,等,溶血毒素,“,O,”,:,自溶后释放,能溶解人和动物的红细胞,高浓度对动物有坏死及致死作用。,二、致病性和免疫性(一)致病物质,50,(二)所致疾病,存在于正常人上呼吸道,为,条件致病菌,,仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。,可引起:,大叶性肺炎,,胸膜炎,脓胸,慢性支气管炎,中耳炎,脑膜炎,败血症等。,(二)所致疾病,51,三、微生物学检验,(一)标本采集,痰液,脓液,血液,脑脊液等。,(二)检验程序,(三)检验方法,三、微生物学检验(一)标本采集,52,检验程序,痰、脓,脑脊液,血液,直接涂片 分离培养,革兰染色、美兰染色,荚膜肿胀试验,增菌培养(葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤),(血平板),挑选可疑菌落,纯培养,初报,兔血清肉汤,小白鼠毒力试验,涂片 荚膜肿胀试验,胆汁溶菌试验 菊糖发酵,Optochin,试验,药敏试验,报 告,检验程序痰、脓脑脊液血液直接涂片 分离,53,检验方法,1,、直接镜检,适用于:痰、脓、脑脊液标本。,报告:,“,找到肺炎链球菌,”,2,、分离培养,硫酸镁肉汤,:均匀混浊生长,有绿色荧光。,血平板,:灰白色,圆形,扁平,较小,周围有草绿色溶血环(,溶血),检验方法1、直接镜检,54,3,、鉴定试验,(,1,)荚膜肿胀试验,(,2,)胆汁溶菌试验:,+,(,3,),Optochin,试验:,+,(,4,)菊糖发酵试验:,+,(,5,)小鼠毒力试验:,有毒力的菌株,接种后,12-36h,,死亡。,3、鉴定试验,55,可分9个血清群,对人致病的主要是A群,、按色素分类:金、白、柠,硫酸镁肉汤:均匀混浊生长,有绿色荧光。,风湿热查血清抗体,(1)甲型溶血性链球菌:菌落周围有12mm宽的草绿溶血环,称甲型溶血或溶血。,胆汁溶菌试验(+),(4)种间鉴定试验:P175表17-3,常用的分型方法:rRNA基因探针分型法。,效价400为+,普通琼脂平板:不生长。,pneumoniae),或:“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”,学习目的与要求,导致医院内感染:如尿路感染、腹部和,分:结合型凝固酶、游离型凝固酶。,可引起:大叶性肺炎,胸膜炎,脓胸,慢性支气管炎,中耳炎,脑膜炎,败血症等。,一种为结合型凝固酶(凝聚因子):细菌表面的纤维蛋白原受体与血浆中的纤维蛋白原结合,导致细菌凝集。,学习目的与要求,胆汁溶菌试验阳性,:,加入胆汁或,10%,去氧胆酸钠,,37,,,5-10min,,激活本菌的自溶酶,出现溶菌现象。,可分9个血清群,对人致病的主要是A群胆汁溶菌试验阳性:,56,Optochin,敏感试验阳性:,取肉汤培养液均匀涂于血平板上用,optochin,纸片贴于接种区中央(或分区划线法,纸片贴于,1-2,区),,35,需氧培养过夜,抑菌圈,18mm,。,Optochin敏感试验阳性:,57,Optochin,test,Optochin,58,肺炎链球菌的主要鉴定依据,1,、镜下形态,:革兰阳性球菌,矛头状成双排列,平端相对,尖端向外;,2,、血平板菌落特点,:直径,0.5-1.5mm,,灰白色,半透明,光滑(有些菌株为粘液状),扁平,周围有草绿色溶血环。,培养或放置,24h,以上,菌落中央可塌陷,呈脐窝状。,3,、生化鉴定,:,Optochin,试验,+,,胆汁溶菌试验,+,。,肺炎链球菌的主要鉴定依据 1、镜下形态:革兰阳性球菌,,59,肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别,形态 菌落 血清 胆汁 菊糖,Opto-,小鼠,肉汤 溶菌,chin,毒力试验,肺链,甲链,矛头状, 稍大,湿润 浑浊,+ + + +,成双, 扁平,,有荚膜 脐窝状,圆形, 较小,稍干, 沉淀,无荚膜 圆,凸起,肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别 形态,60,(四)结果评价和报告,乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌,为毒力强的致病菌,无论从任何临床标本中分离出均应报告临床。,及时鉴定和报告咽部标本中分离出的化脓性链球菌,有利于早期治疗,以减少并发症(如风湿热,肾小球肾炎)的产生。,草绿色链球菌,在重症感染时,应鉴定到种。,(四)结果评价和报告 乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌为毒力,61,第三节 肠球菌属,是肠道中的正常菌群,导致医院内感染:如,尿路感染,、腹部和,盆腔感染、败血症、脑膜炎。,第三节 肠球菌属 是肠道中的正常菌群,62,二、肺炎链球菌(S.,注意:无菌操作,避免污染。,不强,6030min杀死,对多种消毒剂敏感。,胆汁七叶苷试验:+,条件:营养要求较高,兼性厌氧菌, 5-10% C02生长最好。,Optochin敏感试验:肺炎链球菌d18mm,,(2)烫伤样皮肤综合征 由表皮剥脱毒素引起。,可分9个血清群,对人致病的主要是A群,或:“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”,标本:男性:尿道分泌物,杆菌肽敏感试验:A群敏感(d10mm),溶血葡萄 白色 + - - S/R,胆汁溶菌试验:肺炎链球菌+,1标本采集,溶血葡萄 白色 + - - S/R,Optochin敏感试验:肺炎链球菌d18mm,,据此将肺炎链球菌分85型,对人致病的有20多型。,致病力强,引起多种疾病。,杆菌肽试验 optochin 胆汁溶菌试验 其他鉴定,(五)分类 40个种及亚种,()肠毒素测定: 金黄色葡萄球菌产生,一、生物学特性,(一)形态染色,G,+,球菌,,单个、成双或短链状,排列。无荚膜、芽胞,部分菌株有鞭毛。,二、肺炎链球菌(S.一、生物学特性(一)形态染色,63,营养要求较高。能在,高盐,(,6.5%NaCl,)、,高碱,(,PH9.6,)、,高胆汁,(,40%,)、,1045,生长。,菌落,:圆形、中等大小、灰白色、不透明、,S,型,有,或,溶血。,(二)培养特性,营养要求较高。能在高盐(6.5%NaCl)、高碱(P,64,能分解多种糖类,触酶(,-,),PYR,(吡咯烷酮,-,萘基酰胺)试验(,+,),(三)生化反应,能分解多种糖类(三)生化反应,65,目前分,18,种。引起医院内感染常见的是粪肠球菌和屎肠球菌。,常用的分型方法:,rRNA,基因探针分型法。,(四)分型,(五)抵抗力,对理化因素抵抗力弱。,但对大多数抗生素天然耐药。,目前分18种。引起医院内感染常见的是粪肠球菌和屎,66,二、微生物学检验,(一)标本采集,尿液、血液、脑脊液、脓汁分泌物等。,二、微生物学检验 (一)标本采集,67,(二)检验程序,尿液、脓汁、穿刺液,血 液,涂片染色 分离培养(血平板、,5%CO2,),初 报,挑选可疑菌落,增菌培养(葡萄糖肉汤、,5%CO2,),PYR,试验,胆汁七叶苷试验,6.5%NaCl,生长试验,血清学试验,其他鉴定试验,报 告,(二)检验程序尿液、脓汁、穿刺液血 液涂片染色 分离培,68,(三)检验方法,1,、直接镜检,适用于:痰、脓、脑脊液、穿刺液标本。,2,、分离培养,血平板,:灰白色,圆形,中等大小,不透明,,S,型菌落,周围有,溶血或,溶血。,选择培养基:叠氮胆汁七叶苷琼脂平板。,(三)检验方法1、直接镜检,69,3,、鉴定试验,(,1,)菌属鉴定试验:,PYR,试验:肠球菌、,A,群链球菌、某些凝固酶阴性葡萄球菌为(,+,),胆汁七叶苷试验:,+,盐耐受试验:,+,(,4,)种间鉴定试验:,P175,表,17-3,3、鉴定试验,70,第四节 奈瑟菌属,(,Neisseria,),特点,:为一群,G,-,双球菌,无鞭毛,无芽胞,有菌毛,需氧,氧化酶及触酶,+,。,种类,:共九种,主要致病菌是,脑膜炎奈瑟菌,(,merningococcus,),淋病奈瑟菌,(,gonorrhoeae),第四节 奈瑟菌属(Neisseria) 特点:为一群G,71,一、脑膜炎奈瑟菌,(N,.meningitidis),即脑膜炎球菌,,是,流行性脑脊髓膜炎,的病原体,一、脑膜炎奈瑟菌 (N.meningitidis)即脑膜,72,(一)生物学性状,1,形态结构,2,培养特性,3,生化反应,4.,抗原结构,5.,抵抗力特点,(一)生物学性状1形态结构,73,(一),形态结构,G,-,,肾形成双排列,在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内,无芽胞、无鞭毛,具有荚膜、菌毛。,(一)形态结构G-,肾形成双排列,74,2,培养特性,营养要求高,,必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的培养基上生长良好。,血平板,:半透明,灰褐色,圆形,湿润光滑露滴样菌落。,易自溶,。,2培养特性营养要求高,必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的,75,巧克力平板,:圆形,扁平,蓝灰色,半透明,光滑湿润的菌落。,卵黄双抗(,EPV,)平板,:较大,无色,光滑湿润,扁平,边缘整齐的菌落。,血清肉汤,:呈微混浊。,巧克力平板:圆形,扁平,蓝灰色,半透明,光滑湿润的菌落。,76,3.,生化反应,分解葡萄糖、麦芽糖:,+,硝酸盐还原试验阴性,不分解尿素,氧化酶试验阳性,3.生化反应分解葡萄糖、麦芽糖:+,77,4.,抗原结构,可分,9,个血清群,对人致病的主要是,A,群,5,抵抗力特点,对寒冷、光、热力,干燥等十分敏感。室温,3h,,,60 5min,死亡。,采集标本:注意保温迅速送检。,对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。,4.抗原结构可分9个血清群,对人致病的主要是A群5抵抗力特,78,(二)致病性与免疫性,1,致病物质,:菌毛、荚膜、内毒素,2,所致疾病:,传染源、传播途径,寄生在正常人鼻咽部,存在易患人群,与患者补体介导的杀菌活性缺陷有关。约,2%-3%,的人表现为流脑症状。,3.,免疫性,病原可产生群特异性抗体,但不持久。,(二)致病性与免疫性1致病物质:菌毛、荚膜、内毒素3. 免,79,(,三,),微生物学检验,1,标本采集,菌血症期病人采集血液,有出血点或瘀斑者,可取瘀斑渗出液,有脑膜刺激症状,抽取脑脊液,带菌者:咽拭子,(三) 微生物学检验 1标本采集,80,注意事项:,立即送检,注意保温(勿放冰箱),防干燥,防紫外线,注意事项:,81,、脑膜炎球菌的检验程序,血 液,增菌培养(葡糖肉汤),分离培养,(巧克力、血平板),鉴定试验,涂染检 氧化酶 葡、麦糖 多价血清 药敏试验,结果报告,鼻咽拭子,卵黄双抗平板,510%co2,37 1824h,37 1824h,37 1824h,脑脊液 瘀血点,离心,上沉,清淀,液物,510%,2,涂片,染色,初步,报告,直接凝集,、脑膜炎球菌的检验程序 血 液增菌培养(葡糖肉汤,82,脑膜炎球菌的鉴定依据,菌落特征符合,形态染色符合,分解葡、麦糖产酸,氧化酶、触酶阳性,血清凝集试验阳性,脑膜炎球菌的鉴定依据菌落特征符合,83,二、淋病奈瑟菌,(,N.gonorrhoeae,),即淋球菌,为淋病的病原体,人是唯一天然宿主和传染源,二、淋病奈瑟菌(N.gonorrhoeae)即淋球菌,84,(一)生物学性状,1,形态结构,2,培养特性,3.,生化反应,4,抵抗力特点,(一)生物学性状1形态结构,85,1,形态结构,G,-,,球形或肾形,成对排列,有荚膜,无芽胞和鞭毛,1形态结构G-,球形或肾形,成对排列,86,2,培养特性,营养要求高,,30-37,生长,须在含有血液或血清的培养基上培养,常用血液、巧克力等培养基,初次分离,须,5-10%CO,2,才能生长发育,菌落:凸起,光滑、圆形,灰褐色,半透明,2培养特性营养要求高,30-37 生长,须在含有血液或血,87,3.,生化反应,氧化酶试验:(,+,),触酶,: (,+,),葡萄糖(,+,) ,麦芽糖(,-,),易自溶,3.生化反应氧化酶试验:(+),88,4,抵抗力特点,抵抗力弱,,在干燥环境中仅能存活,1-2h,,湿热,55,5min,100,立即死亡。室温下存活,1-2d,。,对消毒剂极敏感,4抵抗力特点抵抗力弱,,89,、致病物质,:菌毛、外膜蛋白、等,、所致疾病:,侵犯人类泌尿生殖系统引起淋病,(,首位性病,),新生儿眼炎,(二)致病性与免疫性,、致病物质:菌毛、外膜蛋白、等(二)致病性与免疫性,90,1,标本采集,标本:,男性:尿道分泌物,女性:阴道分泌物,全身性淋病:血液、泌尿、生殖道的各种分泌物、尿液,立即送检,检验程序,(,三,),微生物学检验,1标本采集 标本:男性:尿道分泌物检验程序 (三) 微,91,脓汁、分泌物,直接涂片染色,分 离 培 养,血、巧克力、,TM,平板,5,10%co2,3518,24h,鉴定试验,涂染检 氧化酶 糖发酵 药敏试验,报 告,初步报告,35 18,24h,脓汁、分泌物直接涂片染色 分 离 培 养510,92,()直接涂片镜检,急性淋病:,嗜中性粒细胞内大量,G,-,,肾形双球菌,具有诊断意义,慢性淋病:镜检较困难,检验方法,()直接涂片镜检急性淋病:检验方法,93,()分离培养,即采集即培养,常用含有两种以上抗生素(万古霉素、粘菌素、磺胺类等)的选择培养基上培养(如,ML,、,TM,),5-10%CO2,培养基先预温。,()分离培养 即采集即培养,常用含有两种以上抗生,94,氧化酶试验,: (,+,),触酶:,(,+,)(多数奈瑟菌为阴性),葡萄糖(,+,),麦芽糖(,-,),PCR,:,灵敏,特异,标本不受限制,(,不需活菌,),()鉴定,氧化酶试验: (+)()鉴定,95,1.,名词解释:,血浆凝固酶、,SPA,、抗链,“,o,”,试验、,Optochin,试验。,2.,根据色素和生化反应将葡萄球菌分成哪几种?,3.,金黄色葡萄球菌的鉴定依据有哪些?,4.,根据链球菌在血平板上的溶血现象,将其分成哪些类型?甲链和乙链有何区别?,5.,简述链球菌的检验程序和检验方法。,6.,脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些异同点?,7.,采集脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的标本进行细菌检验应该注意哪些问题?为什么?,复习思考题,1.名词解释: 复习思考题,96,中等大,突起,,有色素,,S,型菌落。,葡萄球菌菌落形态,(普通琼脂平板),中等大,突起,葡萄球菌菌落形态,97,金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌,金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌,98,金黄色葡萄球菌有透明溶血环。,表皮葡萄球菌无溶血环。,金黄色葡萄球菌有透明溶血环。表皮葡萄球菌无溶血环。,99,葡萄球菌,A,蛋白(,SPA,),的意义:,(,1,)降低抗体的调理作用,抗吞噬,(,2,)协同凝集试验,:,辅助诊断疾病。,葡萄球菌A蛋白(SPA)的意义:,100,血浆凝固酶试验,原理,致病性葡萄球菌能产生种血浆凝固酶,:,一种为,结合型凝固酶(凝聚因子),:细菌表面的纤维蛋白原受体与血浆中的纤维蛋白原结合,导致细菌凝集。,另一种为,游离型凝固酶,,可被人或兔血浆中的协同因子激活,成为凝血酶样物质,使纤维蛋白原变为纤维蛋白,从而使血浆凝固。,检测方法,结合型凝固酶:玻片法,游离型凝固酶:试管法,血浆凝固酶试验原理致病性葡萄球菌能产生种血浆凝固酶:,101,耐热核酸酶试验,液体培养物,煮沸,15min,373h,甲苯胺蓝核酸琼脂,耐热核酸酶试验液体培养物373h甲苯胺蓝核酸琼脂,102,肠毒素测定,病人呕吐物、粪便、剩余食物,高盐肉汤,3724h,分离培养,肉汤煮沸,30min,, 离心,取上清夜,幼 猫,观察症状(,4h,出现),肠毒素测定病人呕吐物、粪便、剩余食物高盐肉汤3724h分离,103,SPA,的检测,致病性葡萄球菌 (,SPA),兔抗羊红细胞,Ab,(,IgGFc,),SRBC,致敏羊红细胞,SPA的检测致病性葡萄球菌 (SPA)兔抗羊红细胞AbSRB,104,凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别,结合型 游离型 耐热核酸,VP,鸟氨酸脱,血浆凝固酶 血浆凝固酶 酶试验 试验 羧酶试验,金黄色,+ + + +,葡萄球菌,中间型,+ +,葡萄球菌,(罕见),希氏,+,+ + +,葡萄球菌,凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别 结合型,105,凝固酶阴性葡萄球菌的鉴别,见,P167,表,17-1,凝固酶阴性葡萄球菌的鉴别见P167表17-1,106,表,3,几种常见葡萄球菌的鉴别,细菌 菌落颜色 溶血 触酶 凝固酶 甘露醇 新生霉素,金黄色,金黄色, + + + S,葡萄球菌,表皮葡萄,白色, + - - S,球菌,溶血葡萄,白色, + - - S/R,球菌,腐生葡萄,柠檬黄, + - - R,球菌,表3 几种常见葡萄球菌的鉴别细菌 菌落颜色 溶血,107,Staphylococcus aures,(,-,),表皮葡萄球菌(,S,),腐生葡萄球菌,(R),阴性结果,(,S,),新生霉素耐药试验,阴性结果新生霉素耐药试验,108,链球菌菌落(血平板):,细小,灰白色,圆形,突起,光滑,湿润,边缘整齐,不同菌种菌落周围有不同溶血环。,链球菌菌落(血平板):,109,甲型溶血性链球菌,(草绿色链球菌),丙型链球菌,乙型溶血性,链球菌,甲型溶血性链球菌丙型链球菌乙型溶血性,110,猩红热,猩红热,111,蜂窝织炎,蜂窝织炎,112,病原性球菌与检验实用ppt课件,113,病原性球菌与检验实用ppt课件,114,Neisseria,gonorrhoeae,Neisseria,115,烫伤样皮肤综合征,多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成人,开始有红斑,,1,2,天有皮起皱,继而形成水疱,至表皮脱落。由,表皮剥脱毒素,引起。,烫伤样皮肤综合征 多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成,116,试验,(,B,群无乳链球菌,+,),-,+,:溶血环呈箭头状,金黄色葡萄球菌,试验 -+:溶血环呈箭头状金黄色葡萄球菌,117,杆菌肽试验,(,A,群链球菌,+,),杆菌肽试验,118,(六)抵抗力,不强,,6030min,杀死,对多种消毒剂敏感。,乙链:对青霉素、四环素、红霉素等敏感。,(六)抵抗力,119,二、肺炎链球菌,(,S.pneumoniae,),属链球菌科,链球菌属。,广泛分布于自然界,主要寄生于人类上呼吸道,多数不致病。,二、肺炎链球菌(S.pneumoniae) 属链球菌,120,3,、鉴定试验,(,1,)荚膜肿胀试验,(,2,)胆汁溶菌试验:,+,(,3,),Optochin,试验:,+,(,4,)菊糖发酵试验:,+,(,5,)小鼠毒力试验:,有毒力的菌株,接种后,12-36h,,死亡。,3、鉴定试验,121,二、微生物学检验,(一)标本采集,尿液、血液、脑脊液、脓汁分泌物等。,二、微生物学检验 (一)标本采集,122,注意事项:,立即送检,注意保温(勿放冰箱),防干燥,防紫外线,注意事项:,123,4,抵抗力特点,抵抗力弱,,在干燥环境中仅能存活,1-2h,,湿热,55,5min,100,立即死亡。室温下存活,1-2d,。,对消毒剂极敏感,4抵抗力特点抵抗力弱,,124,金黄色葡萄球菌有透明溶血环。,表皮葡萄球菌无溶血环。,金黄色葡萄球菌有透明溶血环。表皮葡萄球菌无溶血环。,125,猩红热,猩红热,126,
展开阅读全文