中药制剂分析概论文稿课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,中药制剂分析概论,中药制剂分析概论,1,一、定义,1,、中药：以中医药学理论体系的术语表述其性能、功效和使用规律，并且只有按中医药学理论指导其临床应用的传统药物。,一 概述,一、定义一 概述,2,2,、中药制剂：,以中药为原料，按中医药学理论基础配伍、组方，以一定制备工艺和方法制成一定剂型的药物制剂。,注意：中药制剂必须是以中医药基础理论和用药原则为指导制成的单方或复方制剂。,2、中药制剂：,3,3,、中药及其制剂分析：,以中医药理论为指导，运用现代分析理论和方法研究中药及其制剂质量的一门应用学科。,3、中药及其制剂分析：,4,二、中药及其制剂分析的意义和任务,1,、意义：中药发展的“瓶颈”问题之一，中国药学事业发展的希望和突破口。,二、中药及其制剂分析的意义和任务,5,2,、任务：,运用现代分析手段和方法（包括物理学、化学、生物学、和微生物学等），对中药制剂的各个环节进行质量分析。,保证中药及其制剂的临床使用中的安全性和有效性。,2、任务：,6,三、发展历史,战国时期，中医学第一部经典著作,“,黄帝内经,”,，为中医药学奠定了理论基础；,汉代张仲景所著,“,伤寒论,”“,金匮要略,”,，丰富和发展了中医辨证论治的治疗体系，收载了许多有名的方剂，,晋代葛洪所著,“,肘后备急方,”,最早提出成药剂概念。,明代李时珍，著成,“,本草纲目,”,，全书收载药物,1892,种，方剂,13000,余首，剂型近,40,种,。,三、发展历史,7,1.,中药市场混乱,同物异名 同名异物,（,30,多种，鳞毛蕨科、蹄盖蕨科、,紫萁科、乌毛蕨科）,贯众,四、,中药及其制剂分析的,特点,1.中药市场混乱同物异名 同名异物（30多种，鳞毛蕨科、,8,2.,中药材质量的不稳定性,生长环境、采收季节及部位差异,麻黄 东北西北（,-,）麻黄碱含量,（,+,）麻黄碱含量,GAP,中药材生产质量管理规范,2.中药材质量的不稳定性生长环境、采收季节及部位差异麻黄,9,不同部位人参皂苷的含量,重量比,(%),总皂苷含量,(%),周皮,6.9 2.60,韧皮,46.6 3.04,木质部,46.5 0.31,不同部位人参皂苷的含量 重量比(%)总皂苷含量,10,3.,五倍子 鞣质（,70%,）,槐米 芦丁（,20%,）,长春花 长春新碱（百万分之一）,美登木 美登木碱（千万分之一）,各种有效成分在中药中含量,相差悬殊,3.五倍子 鞣质（70%）各种有效成分在中药中含量,11,4.,中药药效的发挥是多种成分,协同作用的结果，因此应从整体,上来控制中药的质量。,成分复杂，而且大多数中药的有效成分尚不十分清楚。,4.中药药效的发挥是多种成分成分复杂，而且大,12,鞣质 地榆（止血）,其他（无药效）,有效 无效,5.,同一成分在不同药材中的药理作用不同,鞣质 地榆（止血）有效 无效5.同一成分在不同药材,13,6.,制剂工艺不同，有效成分的量也不同,6.制剂工艺不同，有效成分的量也不同,14,例,三黄泻心汤干浸膏,有效成分与浓缩干燥方法的关系,(%),常压 减压 逆浸透,成分 浓缩 浓缩 喷雾,大黄酸葡萄糖苷,41.1 51.6 96.8,小檗碱,34.5 37.5 94.5,黄连碱,6.3 12.0 93.7,黄岑苷,77.4 77.6 98.5,例 三黄泻心汤干浸膏有效成分与浓缩干燥方法的关系(%),15,丸、散、片、锭、合、酒、酊、,膏、露、茶、栓、颗粒、糖浆等,7.,剂型繁多，辅料干扰大,丸、散、片、锭、合、酒、酊、7.剂型繁多，辅料干扰大,16,针对不同的剂型，采用相应的方法进行分离纯化后测定,蜡丸 蜂蜡,蜜丸 蜂蜜,糊剂 糯米粉、黄米粉,曲剂 发酵,胶剂 豆油、黄酒、冰糖,针对不同的剂型，采用相应的方法进行分离纯化后测,17,1,、新的科学技术得到广泛的应用：,DNA,遗传标记技术、人工神经网络、模糊数学法等等。,2,、分离能力强、灵敏度高、稳定性好的现代化仪器的应用：高效液相色谱、气相色谱、高效毛细管电泳等。,3,、新的质量评价方法的出现：中药指纹图谱等。,五、中药及其制剂分析的发展趋势,1、新的科学技术得到广泛的应用：DNA遗传标记技术、人工,18,六 中药制剂分析的一般程序,取样,鉴别,含量测定,检查,提取,纯化,报告,六 中药制剂分析的一般程序取样鉴别含量测定检查提取纯化报告,19,一、取样：,分析样品首先是取样，取样必须具有科学性、真实性和代表性。,基本原则：均匀合理，所取样品具有代表性。,一、取样：,20,供试品溶液的制备,二、,中药及其制剂成分复杂，大多需经提取分离后制成较纯净的供试品溶液，才可进行分析测定。,目的：,1,、排除杂质的干扰,2,、保护仪器,原则：最大限度的保留被测成分，除去干扰物质，将被测成分浓缩至分析方法最小检测所需浓度。,（一）提取,（二）纯化,供试品溶液的制备二、中药及其,21,（一）,提取方法,1,、,萃取法,利用溶质在两种互不相溶的溶剂中溶解度的不同，使物质从一种溶剂转移到另一种溶剂中，将测定组分提取出来的方法,（一）提取方法1、萃取法 利用溶质在两种互不相,22,正丁醇,用于皂苷类,醋酸乙酯,用于黄酮类,氯仿,用于生物碱类,乙醚、石油醚,用于挥发油,（,1,）萃取溶剂的选择,正丁醇 用于皂苷类醋酸乙酯 用于黄酮类氯仿,23,（,2,）水相,pH,的选择,酸性成分,比其,pKa,低,12,个,pH,单位,碱性成分,比其,pKa,高,12,个,pH,单位,（2）水相pH的选择酸性成分碱性成分,24,（,3,）仪器和提取次数,（,4,）酒剂和酊剂,先挥去乙醇,（,5,）防止和消除乳化,分液漏斗,鉴别,1,次,含量测定,3 4,次,（3）仪器和提取次数（4）酒剂和酊剂先挥去乙醇（5）防止,25,2,、,冷浸法,样品置溶剂里，室温下浸泡一段时间的提取方法,适宜易溶出的组分,适宜遇热不稳定的药物,费时（,8 24,小时）,特点,适用范围,适宜植物性粉末,不宜动物性粉末,2、冷浸法 样品置溶剂里，室温下浸泡一段时间的,26,亲脂性,亲水性,石油醚,苯,氯仿,乙醚,乙酸乙酯,丙酮,乙醇,甲醇,水,亲脂性,27,3,、,回流提取法,样品置有机溶剂中加热回流的提取方法,加快溶出速度，省时,适宜受热稳定的药物,适宜较难溶出的组分,特点,仪器,普通回流装置,通过更换溶剂，使提取更完全,3、回流提取法 样品置有机溶剂中加热回流的提,28,中药制剂分析概论文稿课件,29,4,、,连续回流提取法,样品置有机溶剂中加热，蒸发,的溶剂经冷凝流回样品管的提取方,法,节省溶剂，提高提取效率,适宜受热稳定的药物,费时,特点,仪器,索氏提取器,4、连续回流提取法 样品置有机溶剂中加热，蒸发,30,中药制剂分析概论文稿课件,31,5,、,水蒸气蒸馏法,适用于具挥发性的可随水蒸气蒸出的组分的测定,麻黄碱、槟榔碱、丹皮酚、挥发油,5、水蒸气蒸馏法 适用于具挥发性的可随水蒸气蒸,32,6,、,超声提取法,超声波振荡器（超声波清洗器）,简便 省时 提取率高,利用超声波的助溶作用进行提取,原理,超声波在液体中以疏密相间的形式,向物体辐射，出现“空化”现象（气泡的形成、产生及破裂现象），形成超过,1000,个大气压的冲击力,6、超声提取法 超声波振荡器（超声波清洗器）,33,（二）,纯化方法,1,、,萃取法,利用药物与杂质溶解性能的不同进行分离,例,生物碱盐,氨水,H,2,O,（二）纯化方法1、萃取法 利用药物与杂质溶解,34,2,、色谱法：,常用的样品纯净方法，包括：柱色谱、薄层色谱法、纸色谱法。,2、色谱法：,35,柱色谱法,（,1,）保留测定组分在柱上，洗去杂,质，再用适当溶剂洗下组分,（,2,）保留杂质于柱上,常用固定相,硅胶,氧化铝,大孔吸附树脂,柱色谱法（1）保留测定组分在柱上，洗去杂（2）保留杂质于柱上,36,例如：人参皂苷类成分用大孔树脂净化，先用水洗去糖类等水溶性杂质，再用,70%,的乙醇洗脱皂苷类成分,人参皂苷提取物,大孔树脂,例如：人参皂苷类成分用大孔树脂净化，先用水洗去糖类等水溶性杂,37,3,、沉淀法：基于某些试剂与被测成分或成分生成沉淀，保留溶液或分离沉淀得到净化的方法。,沉淀剂,提取溶液,3、沉淀法：基于某些试剂与被测成分或成分生成沉淀，保留溶液或,38,三、鉴别：,中药及其制剂的定性鉴别是利用各单味药材的形态、组织学特征及所含化学成分的结构特性、化学反应、光谱特性、色谱特性及某些物理化学常数来鉴别中药及其制剂的真伪及存在与否的分析方法。,三、鉴别：,39,四、检查：,（一）制剂通则检查（不同剂型）,（二）一般杂质检查（水分、灰分等）,（三）特殊杂质检查,（四）微生物限度检查,四、检查：,40,五、含量测定：,是控制中药及其制剂内在质量的重要方法，测定对象应该是起主要作用的有效成分或毒性成分，以保证临床用药的有效性和安全性。,五、含量测定：,41,六、原始记录和检验报告,（一）原始记录：真实、完整、清晰、具体,（二）检验报告：固定格式,六、原始记录和检验报告,42,二、中药及其制剂的鉴别,二、中药及其制剂的鉴别,43,常用的方法：,1,、来源（原植物、原动物和矿物）鉴定,2,、性状鉴定,3,、显微鉴定,4,、理化鉴定,常用的方法：,44,（一）来源鉴定,来源鉴定就是应用植（动）物的分类学知识，对中药的来源进行鉴定，确定其正确的学名；应用矿物学的基本知识，确定矿物中药的来源，以保证在应用中品种准确无误。,（一）来源鉴定,45,特点：,1,、中药鉴定工作的基础，也是中药生产和利用的依据。,2,、主要适用于带花、果实、枝叶（或皮毛、骨骼）、昆虫和多数全草类等中药材的鉴定。,3,、本方法需要有牢固的植物形态学和分类学知识。（经验性）,特点：,46,（二）性状鉴别,1,、内容：,颜色、形态、形状、气、味等（制剂）。,2,、各种剂型的性状描述,丸剂、散剂、滴丸剂等,例如：牛黄解毒片“本品为素片或包衣片，素片或除去包衣的片心显棕黄色；有冰片香气，味微苦、辛。,（二）性状鉴别,47,中药制剂分析概论文稿课件,48,中国药典（,2010,年版）,生晒山参：主根与根茎等长或较短，呈人字形、菱形、或圆柱形，长,2,10cm.,表面灰黄色,具纵纹,上端有紧密而深陷的环状横纹,支根多为,2,条,清晰不乱,有明显的疣状突起,习称,“,珍珠疙瘩,”,.,中国药典（2010年版）,49,（三）显微鉴别,中药的显微鉴别是利用显微镜来观察中药中的组织碎片、细胞或内含物等特征，对中药及其制剂进行鉴别。,（三）显微鉴别,50,1,、鉴别对象：（药材、含生药粉制剂,）,例如：丸剂、片剂、胶囊剂、散剂,2,、鉴别原则,（,1,）应选有专属性的特征进行鉴别,（,2,）根据制剂工艺选择相应药物特征进行,鉴别 例如：牛黄解毒片 大黄特征,3,、特点：,快速，简便，覆盖面大，需要经验。,1、鉴别对象：（药材、含生药粉制剂）例如：丸剂、片剂、胶囊剂,51,4,、制片方法：,水合氯醛、甘油醋酸、水等,载玻片,盖玻片,药物粉末,4、制片方法：水合氯醛、甘油醋酸、水等载玻片盖玻片药物粉末,52,1,、水牛角浓缩粉,2,、麝香,3,、珍珠,4,、朱砂,5,、雄黄,6,、黄连,7,、栀子,8,、郁金,9,、黄芩,安宫牛黄丸,1、水牛角浓缩粉2、麝香3、珍珠4、朱砂5、雄黄6、黄连7、,53,中药制剂分析概论文稿课件,54,中药制剂分析概论文稿课件,55,理化鉴别,（四）,理化鉴别就是利用药材及其制剂中存在的某种成分的化学性质和物理性质，通过物理的、化学的、或物理化学的方法来鉴定药物的真伪和纯度以及内在质量的方法。,它经常配合来源鉴定，性状鉴定或显微鉴定综合解决中药鉴定问题。,56,采用方法：,1,、一般化学反应,2,、升华法,3,、光谱法,4,、色谱法,（薄层色谱法最为常用）,采用方法：,57,（一）,化学反应法,抗干扰能力差,显色、荧光,例,二妙丸中苍术的鉴别,苍术酮,苍术炔,原理：,（一）化学反应法抗干扰能力差显色、荧光例 二妙丸,58,（二）升华法：,升华法,鉴别中药及其制剂中某些具有升华性质的化学成分（游离香豆素、蒽醌类及其它）。例：大黄游离蒽醌、冰片、牡丹酚、咖啡碱等,中国药典（,2010,年版）：,牛黄解毒片：取本品,1,片，研细，进行微量升华，所得白色升华物（冰片），加新制,1%,香草醛的浓硫酸液,1-2,滴，液滴边缘显玫瑰红色,（二）升华法：升华法 鉴别中药及其制剂中某些具,59,（三）,光谱法,1,、荧光法,（紫外光、日光下产生荧光的性质）,黄连：金黄色,大黄：深棕色,秦皮：天蓝色,2,、紫外,-,可见分光光度法,（成分复杂、专属性差、应用较少）,3,、红外分光光度法,（此方面的应用只是处于研究阶段）,（三）光谱法1、荧光法（紫外光、日光下产生荧光的性质）,60,（四）,色谱法,TLC,法,应用最多,（,R,f,、颜色、荧光）,GC,法,适用于含挥发性成分,的药物,HPLC,法,常与含量测定同时进行,（四）色谱法TLC法应用最多GC法适用于含挥发性成分,61,薄层色谱法：,将适宜的,吸附剂或载体,涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。,在鉴定时，可取样品及对照品（化学成分单体、粗提物或标准药材）按同样的方法，在相同条件下进行薄层展开和显色，比较二者所得层析图谱是否相同。,薄层色谱法：,62,（,1,）、吸附剂,薄层板的选择,硅胶,G,板（可加,0.3%-0.5%CMC-Na,）,多用,氧化铝板,常用于生物碱类药物,聚酰胺板,常用于黄酮类及酚类药物,纤维素板,常用于氨基酸类药物,（1）、吸附剂薄层板的选择,63,（,2,）、操作方法：,1,、薄层板的制备：,1,份吸附剂（硅胶,G,）,+3,份水,糊状物 涂布器 涂布（均匀）晾干，,110,C,活化,30,分钟,2,、样品液与对照品（对照药材）液的制备,3,、点样、展开,4,、检测：斑点显色方法,A,本身有色,B,紫外灯观察荧光,C,喷显色剂,（2）、操作方法：,64,点样毛 细管,样品,对照品或对照药材,1-1.5cm,点样方法：,1.5-2cm,点样毛 细管样品1-1.5cm点样方法：1,65,展开方法：,7-9 cm,展开方法：7-9 cm,66,（,3,）对照物的选择：,对照品对照法：用已知中药及其制剂的某一有效成分或特征性成分对照品制成对照液，与样品在同一条件下层析，比较在相同位置上有无同一颜色（或荧光）的斑点。,对照品,例如：,延胡索 延胡索乙素（镇痛）,黄连 小檗碱（抗菌消炎）,（3）对照物的选择：对照品例如：延胡索 延胡索乙素（镇痛）,67,定义：,中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标定该中药材或中药制剂特性的共有峰的图谱,（四）中药鉴别新技术中药指 纹图谱,定义：（四）中药鉴别新技术中药指,68,2.,色谱指纹图谱的基本属性,整体性 将指纹图谱作为一个整体来分析和比较它的综合特征以达到鉴别的目的。,模糊性 强调分析、比较指纹图谱的相似性，而不是完全相同。,是一种综合的、量化的色谱鉴别手段。,2.色谱指纹图谱的基本属性 整体性 将指纹图谱作,69,3.,指纹图谱的应用,3.指纹图谱的应用,70,I,III,II,诃 子,小诃子,大诃子,绒毛诃子,IIIIII诃 子小诃子大诃子绒毛诃子,71,雅莲,云莲,味莲,雅莲,云莲,雅莲云莲味莲雅莲云莲,72,不同产地高良姜的气相指纹图谱,不同产地高良姜的气相指纹图谱,73,三、中药及其制剂的杂质检查,1,、制剂通则检查,2,、一般杂质检查,3,、特殊杂质检查,4,、微生物检查,三、中药及其制剂的杂质检查 1、制剂通则检查,74,杂质检查,水分,总灰分和酸不溶性灰分,重金属,砷盐,残留农药,主要项目,杂质检查水分主要项目,75,杂质来源及检查意义,水分,结块、霉变或有效成分水解,灰分,控制药物本身及泥土、沙石,等无机杂质,砷盐,剧毒，常由除草剂、杀虫剂,或化肥引入,重金属,环境污染和使用农药引入,残留农药,有毒,杂质来源及检查意义水分 结块、霉变或有效成分水解灰分,76,1,、烘干法（不含或少含挥发性成分）,2,、甲苯法（含挥发性成分）,3,、减压干燥法（含挥发性成分贵重药）,4,、,GC,法（中国药典,2000,年版）,（一）,水分测定法,1、烘干法（不含或少含挥发性成分）（一）水分测定法,77,注意事项：,1,、测定用的样品，一般先破碎成直径不超过,3mm,颗粒或碎片。,2,、甲苯法中，甲苯事先需用水饱和以后再用。,样品、甲苯,水分测定管,注意事项：样品、甲苯水分测定管,78,（二）,总灰分和酸不溶性灰分的测定,中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，则其细胞组织及其内含物成为灰烬而残留，由此所得灰分为,“,生理灰分,”,-,总灰分,中药经高温炽灼后得到的总灰分加盐酸处理，得到不溶于盐酸的灰分,酸不溶性灰分（更能反映泥土砂石的杂质的量）,（二）总灰分和酸不溶性灰分的测定 中药经粉碎后加热，,79,总灰分的测定,酸不溶性灰分的测定,总灰分的测定酸不溶性灰分的测定,80,WHO,规定植物药,铅,10ppm,镉,0.3ppm,干法破坏,湿法破坏,硫代乙酰胺法,（三）,重金属的测定,实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质,WHO规定植物药铅10ppm镉0.3ppm干法破坏湿法破,81,（四）,残留农药的测定（,GC,法）,1,、,有机磷农药,2,、,有机氯农药,3,、,拟除虫菊酯类,（四）残留农药的测定（GC法）1、有机磷农药2、有机氯农药3,82,四、中药及其制剂的含量测定,四、中药及其制剂的含量测定,83,中国药典中药制剂含量测定所占比例,版本,%,1977 1.48,1985 5.31,1990 8.73,1995 12.81,2000 62.09,（,HPLC 36%TLCS 24%GC 3%),中国药典中药制剂含量测定所占比例,84,测定项目的选定原则,1,首选君药及贵重药、剧毒药建立,含量测定方法,2,其次考虑臣药及其他味药,3,有效成分明确的，可选有效成分,4,成分类别清楚的，可测某一类总,成分的含量,测定项目的选定原则1 首选君药及贵重药、剧毒药建立,85,5,检测成分应归属某单一药味,6,检测成分应与中医用药的功能主,治相近,7,确无法含量测定的，可测定浸出,物含量,化学分析法,色谱法,常用定量方法,分光光度法,5 检测成分应归属某单一药味化学分析法色谱法常用定量方,86,（一）,化学分析法,重量分析法（挥发法、萃取法、沉淀法）容量分析法（生物碱、有机酸类成分）,特点,A,、准确度、精密度高,B,、抗干扰能力差,例,总生物碱的测定,（一）化学分析法重量分析法（挥发法、萃取法、沉淀法）,87,（二）,分光光度法,UV,法 比色法,特点,A,、灵敏度高,B,、简便、快速,C,、精密度稍低,D,、干扰多,（二）分光光度法UV法 比色法特点 A、灵敏度,88,比色法含量测定方法的计算（利用比尔,-,朗伯原理）,取水杨酸钠对照品用适量溶剂配成,10g/ml,的对照液。另取水杨酸钠,60mg,，用适当溶剂配成,100ml,供试品溶液。在,320nm,波长处测定吸收度，对照液为,0.510,，供试液为,0.483,，计算该药百分含量？,89,芦丁,黄芩苷,小檗碱,丹皮酚,芦丁黄芩苷小檗碱 丹皮酚,90,（三）,TLCS,法,测定薄层板上斑点对单色光的吸,收或反射的强度而进行定量的方法,特点,A,、分离效果好,B,、适用于无法用,UV,、,HPLC,法测定的组分,C,、准确度、精密度低于,HPLC,（三）TLCS法 测定薄层板上斑点对单色光的吸,91,1,、,选择测定条件,（,1,）薄层色谱条件,分离好 不拖尾,（,2,）检测方法,吸收测定法,荧光测定法,反射法,透射法,（,3,）扫描方式,单波长,双波长,线性扫描法,锯齿扫描法,外标法,内标法,1、选择测定条件（1）薄层色谱条件分离好 不拖尾（2,92,（,1,）薄层板 均匀、平整,2,、,注意事项,（,2,）点样量 准确,（,4,）显色剂 均匀、适当,（,5,）保护斑点 用相同大小洁净玻璃,盖住薄层板，并用透明胶纸封住边缘，,以起固定和隔绝空气作用,（,3,）斑点 应完全分离，不拖尾,（1）薄层板 均匀、平整2、注意事项（2）点,93,（四）,HPLC,法,在中药及其制剂分析中，,HPLC,法已经广泛应用于药物中有效成分或生理活性物质的含量测定，是最常用的定量分析方法,（四）HPLC法 在中药及其制剂分析中，HPLC法已经,94,中药制剂分析概论文稿课件,95,一、实验条件的选择：,1,、色谱柱的选择：,C18,反相柱（,ODS,柱）、,C8,反相柱、正相分配色谱柱,(,氨基柱等）。,2,、流动相的选择：反相键合相为例,（,1,）部分含水溶剂：以水为基础溶剂，再加入一定量可与水互溶的有机极性调节剂（如甲醇、乙腈等）。甲醇,-,水、乙腈,-,水系统。适用于中等极性、弱极性的药物。,（,2,）缓冲溶液：适用于可溶于水并具可解离特性的药物（弱酸、弱碱、蛋白质、肽类等）。常用缓冲液：磷酸盐、醋酸盐等。,（,3,）非水溶剂：用于非极性物质,。,一、实验条件的选择：,96,3,、洗脱方式：,（,1,）等度洗脱：在同一分析周期内流动相的组成保持恒定。适用于组分数较少、性质差别不大的样品。,（,2,）梯度洗脱：在同一分析周期内程序控制流动相的组成（溶剂极性、,pH,值等）,适用于组分数多、性质差别大的复杂混合物样品。,3、洗脱方式：,97,4,、检测器：,（,1,）紫外检测器（,UV,）：应用最普遍,。,灵敏度高、噪音低、线性范围宽等优点。只能用于检测有紫外吸收的药物。,可变波长型、二极管阵列检测器（色谱、紫外光谱图）,（,2,）蒸发光散射检测器（,ELSD,）：通用型检测器。,主要用于糖类、生物碱类、三萜类、甾提类等挥发性低的物质。灵敏度稍低，流动相中不能含缓冲盐。,（,3,）示差折光检测器（,RID,）：通用型，利用组分与流动相折射率之差进行检测。（用于糖类物质）,4、检测器：,98,二、,HPLC,常用色谱法：,键合相色谱法：化学键合相为固定相的色谱法，由液,-,液分配色谱发展而来，分离机制以分配作用为主。,（,1,）反相键合相色谱：非极性键合相，根据键合基团的不同：,18,烷基键合相（,ODS,或,C,18,）应用最广,常用流动相：甲醇,-,水系统,（,2,）正相键合相色谱：极性键合相。,氰基（,-CN,）：双键异构体或双键不等的环状化合物,氨基（,-NH,2,）：糖类专用色谱柱,常用流动相：正己烷加适量极性调整剂。,二、HPLC常用色谱法：,99,五、中药制剂中各类化学成分分析,五、中药制剂中各类化学成分分析,100,生物碱类药物的分析,一、生物碱（,Alkaloids,）,生物碱是生物体内含氮有机化合物的总称（氨基酸、蛋白质和,B,族维生素除外）,生物碱类药物的分析 一、生物碱（Alkaloids）,101,典型药物的结构,典型药物的结构,102,中药制剂分析概论文稿课件,103,中药制剂分析概论文稿课件,104,中药制剂分析概论文稿课件,105,二、生物碱类的理化性质,（一）物理性质,：,1.,形态,为结晶固体，少为粉末；有熔点。少数常温下,液体（多不含氧，若含多成多酯键,）,2.,颜色,多为无色或白色，少数有色（共轭结构、助色团存在）。,3.,挥发性、升华性,多无，少数具有。例：麻黄碱：挥发性；咖啡因：升华性,4.,旋光性,多为左旋光性。多数左旋体呈显著生理活性,二、生物碱类的理化性质（一）物理性质：1.形态为结晶,106,6.,溶解度,(1),游离碱,*,酸、碱均为,1%,。,类别 极性 溶解性,H,2,O CHCl,3,H,+,OH,-,非酚性 较弱 脂溶性,+,季铵碱 强 水溶性,+,+,氮氧化物 半极性 中等水溶,+,+,氯仿、乙醚、乙醇、丙酮、苯等,6.溶解度*酸、碱均为1%。类别,107,(2),成盐,Alk,多易溶于水，不溶或难溶有机溶剂。,含氧酸盐的水溶性往往较大。,与大分子有机酸所形成的盐水溶性差,与小分子有机酸或无机酸成盐水溶性较好。,(2)成盐Alk,108,（二）化学性质：,1,、碱性,（二）化学性质：,109,2,、沉淀反应：,常用的生物碱沉淀试剂为：,1.,重金属盐类，如,K,2,HgI,4,、,KBiI,4,、,I,2,KI,、二氯化汞等；,2.,大分子酸类，如磷钼酸、硅钨酸等。,用途：,鉴别,试管、,TLC,或,PPC,显色剂；,提取分离,检查是否提取完全。,2、沉淀反应：常用的生物碱沉淀试剂为：,110,3,、显色反应,（一）双缩脲反应,侧链具有氨基醇结构,3、显色反应（一）双缩脲反应,111,（二）,Vitali,反应,托烷生物碱,（二）Vitali反应 托烷生物碱,112,三、生物碱类的定性鉴别,（一）一般理化鉴别：主要应用沉淀反应的化学性质。,沉淀试剂：,K,2,HgI,4,、,KBiI,4,、,I,2,KI,条 件：酸性条水溶液,注 意：蛋白质、多肽和鞣质干扰。,例：马钱子散中生物碱成分的鉴别,主要组成：马钱子、地龙,鉴别：取马钱子散,1,克，加浓氨试液数滴及氯仿,10,毫升，浸泡数小时，滤过，蒸干，残渣加,1,毫升稀盐酸溶解，加碘化铋钾,1-2,滴，生成黄棕色沉淀。,三、生物碱类的定性鉴别,113,（二）、色谱鉴别：,1,、薄层色谱法,2,、纸色谱法,3,、高效液相色谱法,（二）、色谱鉴别：,114,常用吸附剂,：,（,1,）氧化铝,（,2,）硅胶,硅胶为吸附剂：弱游离生物碱能顺利迁移，强生物碱形成盐类吸附太牢，造成严重拖尾或,R,f,值小。,解决方法：在展开剂中加少量的碱性试剂，如氨、二乙胺、有机脂烃胺类,显色方法：常用显色剂,-,改良碘化铋钾试剂相应斑点显橘红色。,常用吸附剂：（1）氧化铝 （2）硅胶,115,四、含量测定,（一）总生物碱的含量测定,1,、化学分析法,2,、分光光度法,（二）单体生物碱的含量测定,高效液相色谱法,四、含量测定,116,生物碱的提取与纯化：,（一）原理与方法,生物碱的提取与纯化：（一）原理与方法,117,1.,碱化,2.,有机溶剂提取,1.碱化2.有机溶剂提取,118,容量分析测定,：,（,1,）,直接滴定法,用于碱性较强的生物碱,容量分析测定：（1）直接滴定法,119,（,2,）剩余滴定法,用于碱性较弱的生物碱,（2）剩余滴定法,120,1.,碱化试剂,最常用氨水,2.,提取溶剂,（,1,）提取溶剂选择的原则,（,2,）常用的提取溶剂 最常用氯仿,（二）测定条件的选择,1.碱化试剂 最常用氨水（二）测定条件的选择,121,（,3,）提取溶剂的用量及提取次数,通常应提取,4,次，第一次用量至少应为水液体积的一半，以后几次应各为第一次的一半,（3）提取溶剂的用量及提取次数,122,3.,提取终点的确定,用合适的沉淀反应确定,4.,指示剂的选择：溴酚蓝、甲基红酚酞等,5.,乳化的预防和消除,3.提取终点的确定 用合适的沉淀反应确定4.,123,仪器简单、试剂常用，但操作繁琐、费时、精密度差、准确度差，主要用于制剂分析,（三）特点,仪器简单、试剂常用，但操作繁琐、费时、精密度,124,2,、分光光度法：（单波长光度法）,（,1,）直接测定法：,不经过化学反应，利用生物碱物质自身的光吸收直接进行比色测定的方法。（一般用于药味较少、干扰不大的中药制剂中总生物碱的含量测定）。,例：中国药典（,2010,版）中左金丸的生物碱含量测定,取本品约,1g,，精密称定，置索氏提取器，盐酸,-,甲醇（,1:100,）适量，,加热回流提取至提取液无色，提取液移至,50ml,量瓶中，用盐酸,-,甲醇适量稀释至刻度，摇匀，照柱色谱法，精密量取,5ml,，上,AL,2,O,3,柱,乙醇,25ml,洗脱，收集洗液置,50ml,量瓶中，乙醇稀释至刻度，精密吸取,2ml,置,50ml,量瓶中，加,0.05mol/L,硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。,UV345nm,测定,A,。本品含总生物碱按盐酸小檗碱计不得少于,1.7%,。,2、分光光度法：（单波长光度法）,125,（,2,）离子对萃取比色法：,（用于中药制剂中微量生物碱类成分的含量测定）,原理：在一定的,pH,介质中，有机碱与一些酸性染料或磺酸类、酸类的阴离子，定量的结合成为有色离子对（配合物），此离子对可定量地溶于某些有机溶剂，然后在一定波长下测定有机溶剂的或经碱化后释放出的染料的吸收度，按分光光度法计算有机碱的含量。,（2）离子对萃取比色法：（用于中药制剂中微量生物碱类成分的,126,6,、各类中药制剂分析,6、各类中药制剂分析,127,中药制剂的分类,中国药典（,2000,年版）一部（二十六种）,丸剂 胶剂 膏药 颗粒剂 滴眼剂,散剂 合剂 露剂 糖浆剂 软膏剂,片剂 酒剂 茶剂 滴丸剂 注射剂,锭剂 酊剂 搽剂 胶囊剂 滴鼻剂,栓剂 巴布膏剂 橡胶膏剂,气雾剂喷雾剂 煎膏剂（膏滋）,流浸膏剂与浸膏剂,中药制剂的分类中国药典（2000年版）一部（二十六种）丸剂,128,（一）,液体制剂,用药材提取物制备的液体制剂,合剂、糖浆剂、酒剂、茶剂、酊剂,滴鼻剂、滴眼剂、露剂、搽剂等,（无植物组织与细胞，故无显微鉴别）,（一）液体制剂用药材提取物制备的液体制剂合剂、糖浆剂、酒剂、,129,1,、,合剂与口服液,（单剂量合剂也可称为“口服液”）,pH,装量,相对密度,微生物限度,一般检查项目,合剂系指药材用水或其他溶剂，采用适宜方法提取，经浓缩制成的内服液体制剂,1、合剂与口服液（单剂量合剂也可称为“口服液”）pH,130,2,、,酒剂与酊剂,酒剂,酊剂,含乙醇量（,GC,）,甲醇量检查（,GC,）,总固体,装量,微生物限度,一般检查项目,药材用蒸馏酒提取制成的澄清液,体制剂,药物用规定浓度的乙醇提取或溶,解而制成的澄清液体制剂,2、酒剂与酊剂酒剂酊剂含乙醇量（GC）一般检查项目药材用蒸馏,131,（二）,半固体制剂,软膏,装量,微生物限度,检查项目,常用基质 油脂性、水溶性,乳剂型（乳膏剂）,药物、药材细粉、药材提取,物与适量基质混合制成的半,固体外用制剂,（二）半固体制剂软膏装量检查项目常用基质 油脂性、水溶,132,药材提取液的浓缩液,（三）,半流体制剂,煎膏剂,(,膏滋,),流浸膏剂与浸膏剂（半流体或固体）,（无植物组织与细胞，故无显微鉴别）,药材提取液的浓缩液（三）半流体制剂煎膏剂(膏滋)（无植物组,133,药材用水煎煮、去渣浓缩后，加炼,蜜或糖制成的半流体制剂,1,、,煎膏剂,(,膏滋,),相对密度,不溶物,装量,微生物限度,检查项目,应无焦臭、异味，无糖结晶析出,药材用水煎煮、去渣浓缩后，加炼1、煎膏剂(膏滋)相对密度检,134,2,、,流浸膏剂与浸膏剂（半,/,固）,药材用适宜的溶剂提取，蒸去部分,或全部溶剂，调整浓度至规定标准,而制成的制剂,装量,微生物限度,检查项目,1ml,流 浸膏,1g,原药材,1g,浸膏,2 5g,原药材,2、流浸膏剂与浸膏剂（半/固）药材用适宜的溶剂提取，蒸去部分,135,（四）,固体制剂,药材提取物、药材粉末加赋形剂、制备而成,丸剂、胶剂、颗粒剂、散剂、片剂、,胶囊剂、锭剂、胶剂、茶剂、栓剂,（有植物组织与细胞，可做显微鉴别）,（四）固体制剂 药材提取物、药材粉末加赋形剂、,136,1,、,丸剂,指药材细粉或药材提取物加适宜的,黏合剂或其他辅料制成球形或类球形制,剂，分为蜜丸、水丸、水蜜丸、糊丸、,浓缩丸、蜡丸、微丸等,检查项目,水分、重量差异,(,按丸或重量,),装量差异,(,按一次剂量分装的,),溶散时限、微生物限度,1、丸剂 指药材细粉或药材提取物加适宜的检,137,水分规定,大蜜丸、小蜜丸、浓缩蜜丸 ,15.0%,水蜜丸、浓缩水蜜丸 ,12.0%,水丸、糊丸、浓缩水丸 ,9.0%,装量差异,高,低,溶散时限,6,丸，照崩解时限检查法,水分规定大蜜丸、小蜜丸、浓缩蜜丸 15.0%装量差异高溶,138,2,、,散剂,一种或多种药材混合制成的粉,末状制剂，分内服和外用散剂,检查项目,均匀度,水分,装量差异,微生物限度,2、散剂 一种或多种药材混合制成的粉 检,139,均匀度,取供试品适量置光滑纸上，平铺,约,5cm,2,，将其表面压平，在亮处,观察，应呈现均匀的色泽，无花,纹、色斑,水分,9.0%,均匀度取供试品适量置光滑纸上，平铺水分9.0%,140,粒度,1,号筛,4,号筛,8,%(,左右轻轻往返,3,分钟,),溶化性,装量差异,单剂量包装 同丸剂,多剂量包装 最低装量检查法,(,附录,C),平均装量标示装量,每个装量限量,%,粒度 1号筛8%(左右轻轻往返3分钟)溶化性装量差异单,141,3,、,颗粒剂,药材提取物与适宜辅料或药材细,粉制成的颗粒状制剂，分为可溶性颗,粒剂、混悬性颗粒剂、泡腾性颗粒剂,检查项目,粒度,水分,溶化性,装量差异,微生物限度,3、颗粒剂 药材提取物与适宜辅料或药材细 检查项目粒度,142,4,、,片剂,药材提取物加药材细粉或药材细,粉与适宜辅料混匀压制而成的园片状,或异形片状的制剂，分为浸膏片、半,浸膏片和全粉片,检查项目,重量差异,崩解时限,微生物限度,原粉片,30,浸膏片,1h,薄膜衣片,1h,4、片剂 药材提取物加药材细粉或药材细检查,143,5,、,胶囊剂,硬胶囊剂,软胶囊剂,肠溶胶囊剂,检查项目,水分,装量差异,崩解时限,微生物限度,5、胶囊剂硬胶囊剂 检查项目水分,144,分析实例,万氏牛黄清心丸,处方,牛黄,10g,朱砂60,g,黄连200,g,黄芩120,g,栀子120,g,郁金80,g,分析实例万氏牛黄清心丸处方,145,分析实例,万氏牛黄清心丸,制法以上六味，除牛黄外，朱砂水飞或粉碎成极细粉；其余黄连等四味粉碎成细粉；将牛黄研细，与上述粉末配研，过筛，混匀。每100,g,粉末加炼蜜100-200,g,制成大蜜丸，即得。,分析实例万氏牛黄清心丸制法以上六味，除牛黄外，朱砂水飞,146,性状本品为红棕色至棕褐色的大蜜丸；气特异，味甜、微涩、苦。,功能主治,清热解毒，镇惊安神。用于热邪内闭，烦躁不安，神昏谵语，小儿高热惊厥。,性状本品为红棕色至棕褐色的大蜜丸；气特异，味甜、微涩、苦,147,方药分析,本方来源于明,.,痘疹世医,心法 ，本方为清心开窍剂，主治热邪内陷心包所致窍闭神昏症。,方中牛黄，清心解毒，豁痰开窍为君药；黄连、黄芩、栀子清热泻火，为臣药；朱砂清心，重镇安神，郁金行气开窍共为佐使药，合用以奏透邪泻热，开窍安神之效。,方药分析 本方来源于明.痘疹世医心法 ，本方为清,148,方药分析,牛黄,清热解毒药，主含胆酸类成分。,黄连,清热燥湿药，主要为小檗碱。,黄芩,清热燥湿药，主要为黄酮类。,栀子,清热泻火药，主含栀子甙。,朱砂,安神药，主含硫化汞（,HgS,）。,郁金,活血去瘀药，主含挥发油。,方药分析,149,鉴别,显微鉴别,郁金,糊化淀粉团块几乎无色。,栀子,种皮石细胞。,黄芩,纤维淡黄色，梭形，厚壁，孔沟细。,黄连,纤维鲜黄色，壁稍厚，纹孔明显。,朱砂,不规则块状物或颗粒状物，暗红棕色、鲜红色或棕黄色。,鉴别 显微鉴别,150,郁金,糊化淀粉团块,栀子,种皮石细胞,黄芩,纤维,黄连,纤维,朱砂,不规则块状物或颗粒状物，暗红棕色、鲜红色或棕黄色,郁金糊化淀粉团块,151,化学鉴别,1.,朱砂的鉴别,取本品,3g,，,加水适量，研匀，反复洗去悬浮物，可得少量朱红色沉淀，取出，加入盐酸1,ml,及铜片少量，加热煮沸，铜片由黄色变为银白色。,HgS+2HCl+Cu,CuCl,2,+Hg+H,2,S,NOTES,：,在酸性条件下，朱砂与铜片发生置换反应析出金属汞，在铜片表面形成银白色汞齐。,化学鉴别1.朱砂的鉴别,152,2.,人工牛黄的鉴别,取本品，剪碎，加硅藻土,0.6g,，研匀，加氯仿,10ml,、,冰醋酸0.5,ml,，,加热回流30,min,放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2,ml,使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。,胆酸和猪去氧胆酸加乙醇制成1,ml,含1,mg,的混合溶液，作为对照品溶液。,2.人工牛黄的鉴别,153,TLC,法,CMC-Na,，硅胶,G,展开剂,醋酸乙酯,-,正己烷,-,醋酸,-,甲醇,（,32:6:1:1,）,显色剂,10%,磷钼酸乙醇液，,110,0,C,10min,TLC法 CMC-Na，硅胶G,154,人工牛黄,供试品,牛黄空白,猪去氧胆酸,胆酸,人工牛黄供试品牛黄空白猪去氧胆酸胆酸,155,3.,黄芩的鉴别,供试品溶液的制备：取本品,3g,，剪碎，加硅藻土,0.5g,，研匀，加甲醇,20ml,，,加热回流,1hr,放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。,对照品溶液的制备：黄芩甙对照品加甲醇制成每1,ml,含1,mg,的溶液，作为对照品溶液。,3.黄芩的鉴别,156,TLC,法,CMC-Na,，硅胶,G,（,4%,醋酸钠）,展开剂 醋酸乙酯,-,丁酮,-,甲酸,-,水,（,5:3:1:1,）,显色剂,2%,三氯化铁乙醇液,TLC法 CMC-Na，硅胶G,157,黄芩甙,供试品,黄芩空白,黄芩甙供试品黄芩空白,158,4.,栀子的鉴别,供试品溶液的制备：取本品,3g,，加乙醚,15ml,，,研磨，弃去乙醚。残渣挥干乙醚，加醋酸,乙酯,30ml,，,加热回流,1hr,放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇,3ml,溶解，滤过，,滤液作为供试品溶液。,对照品溶液的制备：栀子甙对照品加甲醇制成每1,ml,含1,mg,的溶液，作为对照品溶液。,4.栀子的鉴别,159,TLC,法,CMC-Na,，硅胶,G,展开剂,醋酸乙酯,-,丙酮,-,甲酸,-,水,（,10:7:2:0.5,）,显色剂,10%,硫酸乙醇,105,0,C,10min,TLC法 CMC-Na，硅胶G,160,栀子甙,供试品,栀子空白,栀子甙供试品栀子空白,161,5.,黄连的鉴别,供试品溶液的制备：取含量测定项下剩余的盐酸,-,甲醇提取液,4ml,，,水浴蒸干，残渣加甲醇,溶解，使成,1ml,作为,供试品溶液。,5.黄连的鉴别,162,对照药材溶液,的制备：黄连对照药材,50mg,，加甲醇,10ml,，回流加热,15min,滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇,1ml,使溶解，作为对照药材溶液。,对照品溶液的制备,：再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇,制成每1,ml,含,0.5mg,的溶液，作为对照品溶液。,对照药材溶液的制备：黄连对照药材50m,163,TLC,法,硅胶,G CMC-Na,展开剂,苯,-,醋酸乙酯,-,甲醇,-,异丙醇,-,浓氨试液（,12:6:3:3:1,）,显色剂,UV,（,365nm,）,TLC法,164,盐酸小檗碱,黄连,公式品,供试品,黄连空白,盐酸小檗碱黄连公式品供试品黄连空白,165,含量测定,1.,朱砂 取本品约,5g,，,剪碎，精密称定，置,250ml,凯氏烧瓶中，加硫酸,30ml,与硝酸钾,8g,，加热俟溶液至近无色，放冷，转入,250ml,锥形瓶中，用水,50ml,分次洗涤烧瓶，洗液并人溶液中，滴加,1%,高锰酸钾溶液至显粉红色，两分钟内不消失，再滴,加,2%,硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液,2ml,，用硫氰酸铵滴定液滴定，即得。每,1,ml,的,硫氰酸铵滴定液相当于,11.63mg,的硫化汞,。,含量测定 1.朱砂 取本品约5g，剪碎，精密称定,166,硫酸与硝酸钾,分解试样及有机破坏,高锰酸钾溶液,除去试样分解时产生的亚硫酸,粉红色两分钟内不消失,亚硫酸可将,Hg,2+,还原,Hg,+,使含量变低，观察两分钟完全除去亚硫酸,硫酸亚铁溶液,除去过量的高锰酸钾,滴定反应,Hg,2+,+2CNS,-,Hg(CNS),2,显色反应,CNS,-,(,过量,)+Fe,3+,Fe(CNS),2,+,(,红色,),硫酸与硝酸钾分解试样及有机破坏,167,2.,黄连 取本品约,4g,，剪碎，精密称定，置索氏提取器，盐酸,-,甲醇（,1:100,）适量，,加热回流提取至提取液无色，提取液移至,50ml,量瓶中，用盐酸,-,甲醇适量稀释至刻度，摇匀，照柱色谱法，精密量取,5ml,，上,AL,2,O,3,柱,25ml,洗脱，收集洗液置,50ml,量瓶中，乙醇稀释至刻度，精密吸取,2ml,置,50ml,量瓶中，加,0.05mol/L,硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。,UV345nm,测定,A,。为,728,本品含总生物碱按盐酸小檗碱计不得少于,1.7%,。,2.黄连 取本品约4g，剪碎，精密称定，置索氏提取器，,168,黄连 方中臣药之首,用量最大,有效成分清楚,黄连有效成分为小檗碱，尚含其它少量生物碱，如黄连碱、甲基黄连碱、药根碱、巴马亭等，均为原小檗碱型生物碱。,黄连 方中臣药之首,169,硫酸溶液,在酸性条件下，,N,原子呈共轭体系的季铵状态，在,345nm,处有最大吸收。其它五味药的空白提取液在该波长处略有吸收，约相当于,0.3%,小檗碱，因此测定结果偏高。,本品为蜜丸制剂，其黄连生物碱溶出速率较药材相对缓慢，回流至提取液无色后应放置一段时间。,硫酸溶液 在酸性条件下，N原子呈,170,