专题复习PCR技术课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,PPT课件,*,PCR,技术,高考专题复习,1,PPT课件,PCR技术高考专题复习1PPT课件,多聚酶链式反应（,Polymerase Chain Reaction,），是一种体外迅速扩增,DNA,片段的技术。,1988,年美国穆里斯（,K.Mullis,）等人,发明，荣获,1993,年诺贝尔化学奖。,PCR,2,PPT课件,多聚酶链式反应（Polymerase Chain React,【基础知识】,一、,PCR,原理：,DNA,复制：,半保留复制；,3,PPT课件,【基础知识】一、PCR原理：DNA复制：半保留复制；3PPT,【基础知识】,一、,PCR,原理：,DNA,复制：,半保留复制；,需要提供合成模板；,不能起始新的,DNA,链，必须要有引物提供,3-OH,；,合成的方向都是,53,。,DNA,聚合酶,4,PPT课件,【基础知识】一、PCR原理：DNA复制：半保留复制；需要提供,【基础知识】,一、,PCR,原理：,DNA,复制：,半保留复制；,DNA,的热变性原理。,Taq,DNA,聚合酶,耐高温。,5,PPT课件,【基础知识】一、PCR原理：DNA复制：半保留复制；DNA的,【基础知识】,二、,PCR,条件：,胞内,DNA,复制与,PCR,技术的比较：,变性,Taq,DNA,聚合酶,DNA,母链,dNTP,3,个温度,Mg,2+,缓冲对,连续复制,DNA,6,PPT课件,【基础知识】二、PCR条件：胞内DNA复制与PCR技术的比较,【基础知识】,二、,PCR,条件：,引物：,利用软件设计。,引物设计的原则：,决定,PCR,扩增产物的特异性和长度。,1.,引物长度：,通常为,20,30bp,，尽量,降低引物与非扩增区的同源性；,2.,引物内部不能存在部分互补序列；,3.,两个引物之间不能存在部分互补序列；,4.,引物的,5,端可以修饰，但,3,端不可以修饰：,如探针标记。,7,PPT课件,【基础知识】二、PCR条件：引物：利用软件设计。引物设计的原,例题,1,【,2011,年安徽】家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。,采用,PCR,技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该,PCR,反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含,Mg,2+,）、水、,4,种脱氧核糖核苷酸、模板,DNA,、,和,。,对干扰素基因特异的,DNA,引物对,Taq,DNA,聚合酶,8,PPT课件,例题 1【2011年安徽】家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。,例题,2,【,2011,年江苏】请回答基因工程方面的有关问题：,（,1,）设计引物是,PCR,技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。,第一组：,；,第二组：,。,引物,和引物局部发生碱基互补配对而失效,引物,自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效,（,2,）,PCR,反应体系中含有热稳定,DNA,聚合酶，下面的表达式不能正确反映,DNA,聚合酶的功能，这是因为,。,DNA,聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链,DNA,片段的引物链上,9,PPT课件,例题 2【2011年江苏】请回答基因工程方面的有关问题：,【基础知识】,二、,PCR,条件：,温度：,70,75,：,90,95,：,55,60,：,变性；,复性；,延伸。,【注意】,具体温度与,DNA,母链及引物中的,G,、,C,含量有关。,10,PPT课件,【基础知识】二、PCR条件：温度：7075：909,例题,3,【,2008,年江苏】回答下列问题。,（,1,）在采用常规,PCR,方法扩增目的基因的过程中，使用的,DNA,聚合酶不同于一般生物体内的,DNA,聚合酶，其最主要的特点是,。,（,2,）,PCR,过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表,1,为根据模板设计的两对引物序列，图,2,为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？,。,耐高温,引物对,B,11,PPT课件,例题 3【2008年江苏】回答下列问题。耐高温 引物对B 1,【基础知识】,三、,PCR,过程：,预变性；,复性；,延伸；,循环。,变性；,12,PPT课件,【基础知识】三、PCR过程：预变性；复性；延伸；循环。变性；,【,2011,年江苏】利用,PCR,技术扩增目的基因，其原理与细胞内,DNA,复制类似（如下图所示）。图中引物中为单链,DNA,片段，它是子链合成延伸的基础。,（,1,）从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物,A,的,DNA,片段所占比例为,。,（,2,）在第,轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的,DNA,片段。,15/16,三,例题,4,13,PPT课件,【2011年江苏】利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内,【实验操作】,一、实验仪器：,14,PPT课件,【实验操作】一、实验仪器：14PPT课件,二、设置对照：,【实验操作】,三、程序设计：,避免外源,DNA,的污染。,15,PPT课件,二、设置对照：【实验操作】三、程序设计：避免外源DNA的污染,【实验操作】,微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌；,微量离心管在每吸取一种试剂都必须更换枪头；,所有的成分加入离心管后，盖严盖子，用手指轻轻弹击管的侧壁，离心,10s,，使反应液集中在离心管底部，再放入,PCR,仪中进行反应。,四、操作提示：,16,PPT课件,【实验操作】微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须,【实际应用】,一、遗传疾病的诊断：,二、刑侦破案；,三、古生物学；,四、基因克隆：,五、,DNA,序列测定。,基因诊断；,17,PPT课件,【实际应用】一、遗传疾病的诊断：二、刑侦破案；三、古生物学；,