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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,专题2 微生物的培养与应用,课题2:土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,专题2 微生物的培养与应用课题2:土壤中分解尿素的细菌的分离,1,【课题目标】,研究培养基对微生物的选择作用,进行微生物数量的测定。,【研究对象】,土壤中能分解尿素的细菌,【达到目的】,(1)从土壤中分离出能够分解尿素的细菌,(2)统计每克土壤样品中究竟含有多少这,样的细菌,【课题目标】研究培养基对微生物的选择作用,进行微生,2,【研究思路】,(一)筛选菌株,原理:,人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、PH等),同时抑制或阻止其他微生物生长。,回答:,1、在该配方中,为微生物生长提供碳源和氮源的是什么物质?,2、绝大多数的微生物都能利用葡萄糖,但是,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,请分析该培养基是否对微生物有选择作用?如果有,是如何进行选择的?,葡萄糖、尿素,有选择作用,【研究思路】(一)筛选菌株原理:人为提供有利于目的菌株生长,3,选择培养基:,在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。,选择培养基:在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑,4,【统计菌落数目】,常用方法,:稀释涂布平板法、显微镜直接计数法,,1、稀释涂布平板法(也叫活菌计数法),原理,:当样品的稀释度足够高时,培养基表,面生长的一个菌落,来源于样品稀释,液中的一个活菌,通过统计平板上的,菌落数,就能推测出样品中大约含有,多少活菌。,【统计菌落数目】常用方法:稀释涂布平板法、显微镜直接计数法,,5,为了保证结果的准确,一般选择菌落数在30300的平板进行计数,若设置的重复组中结果相差太远,意味着操作有误,需重新实验,。,计算公式,:,每克样品中的菌落数=(某一稀释度下平板上生长的平均菌落数涂布平板所用稀释液体积)稀释倍数,设置重复组,目的是增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释,然后选择三个稀释度的菌液,分别取0.1ml接种到已制备好的平板上,然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面,放在适宜的温度下培养计数菌落数。为是结果接近真实值,可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上,经涂布培养,计算出菌落平均数,操作,为了保证结果的准确,一般选择菌落数在30300的平板进行,6,思考题,1.想一想,如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数?,答:统计某一稀释度下平板上的菌落数,最好能统计3个平板,计算出平板菌落数的平均值,然后按课本旁栏的公式进行计算。,思考题 1.想一想,如何从平板上的菌落数推测出每克样品中,7,血球计数板构造:,实物图,正面图,纵切面图,计数室,滴液处,2、显微镜直接计数法,(1)原理:此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品,中微生物数量。,血球计数板构造:实物图正面图纵切面图计数室滴液处2、显微镜直,8,大方格,大方格,9,(2)计算,以一个大方格有16个中方格的计数板为例进行计算:假设1个小方格中总菌数为A,菌液稀释倍数为B,那么,一个大方格中的总菌数(即0.1mm,3,中的总菌数)为,A2516,B,因1ml1cm,3,=1000mm,3,故1ml菌液总的总菌数,A2516B,101000,大方格,(2)计算以一个大方格有16个中方格的计数板为例进行计算:假,10,2、显微镜直接计数法,(3)操作:将稀释的样品滴在计数板上,盖上盖玻片,然后在显微镜下计数45个中格中的细菌数,并求出每个小格所含的细菌数,再按计数公式求出每毫升样品中所含的细菌数。,(4)缺点:不能区分死菌与活菌。,2、显微镜直接计数法(3)操作:将稀释的样品滴在计数板上,盖,11,A同学的结果与其他同学不同,可能的解释有两种。,一是由于土样不同,;,二是由于培养基污染或操作失误,。,(三)设置对照,究竟是哪个原因,可以通过实验来证明。,A同学的结果与其他同学不同,可能的解释有两种。(三)设置,12,另一种方案,:,将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养,作为空白对照,以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出,实验结果要有说服力,对照的设置是必不可少的。,实验方案有两种,一种方案,:,可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验,如果结果与A同学一致,则证明A无误;如果结果不同,则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,另一种方案:实验方案有两种一种方案:,13,四、实验案例,实验的具体操作步骤:见录相。,土壤中某样品细菌的分离与计数,四、实验案例 实验的具体操作步骤:见录相。土壤中某样品细菌的,14,
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