血液中心核酸检测经验介绍培训课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,血液中心核酸检测经验介绍,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,血液中心核酸检测经验介绍,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,血液中心核酸检测经验介绍,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,血液中心核酸检测经验介绍,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,血液中心核酸检测经验介绍,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,血液中心核酸检测经验介绍,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,血液中心核酸检测经验介绍,血液中心核酸检测经验介绍,血液中心核酸检测经验介绍,1,主要内容,中心简介,核酸检测实验室的设置及工作流程,核酸检测实验室管理和检测关键控制点,开站核酸检测情况,2,血液中心核酸检测经验介绍,主要内容中心简介2血液中心核酸检测经验介绍,2,江西省血液中心概况,江西省血液中心于,1984,年成立，隶属省卫生厅管理的公共卫生事业单位。占地面积,63.4,亩，总建筑面积,21788,现有职工,171,人，供应省直,13,家医疗机构临床用血，,2011,年总供血量为,23.8,吨，并承担全省采供血机构质量控制与评价、业务技术指导、人才培训及血液相关的科研等任务。自,2006,年起，临床用血已实现,100%,来自于自愿无偿献血。成分输血达到,99.8%,。,3,血液中心核酸检测经验介绍,江西省血液中心概况 江西省血液中心于1984年,3,中心重视科研工作，致力从临床输血治疗和开展新技术治疗的需求出发，开展了血液去除白细胞、血浆病毒灭活等新技术。,2010,年,4,月份，中心与北京、上海、广州等,12,个省市,15,所采供血机构一道，被卫生部列为我国内地首批核酸检测试点单位。此外，中心先后开展了骨髓移植配血、器官移植配型,(,基因法,),、产前血型血清学检测、新生儿溶血病检测、亲子鉴定,(,基因法,),等研究工作。,4,血液中心核酸检测经验介绍,中心重视科研工作，致力从临床输血治疗和开展新技术治疗的需求出,4,中心核心价值观,忠诚履行输血使命精益服务健康人生,5,血液中心核酸检测经验介绍,中心核心价值观忠诚履行输血使命精益服务健康人生5血液中心,5,中心环境,6,血液中心核酸检测经验介绍,中心环境6血液中心核酸检测经验介绍,6,标本交接离心区,：用于核酸标本的接收、离心处理；,设备：大容量,低温,离心机,2,台,混样区,：用于血液标本开盖、混样、以及质控品的加样；,设备：全自动混样仪,HAMILTON STARIVD 2,台、生物安全柜,1,台、移动紫外车,3,台；,提取扩增检测区,：用于核酸的提取、,PCR,扩增和检测。,设备：,3,套,COBAS AmpliPrep+COBAS TaqMan,、服务器,1,台、试剂暂存冰箱,1,台、移动紫外车,3,台,核酸检测实验室的设置,7,血液中心核酸检测经验介绍,标本交接离心区：用于核酸标本的接收、离心处理；核酸检测实验室,7,核酸检测实验室的设置,实验室平面图,8,血液中心核酸检测经验介绍,核酸检测实验室的设置实验室平面图 8血液中心核酸检测经验,8,检测系统：,cobas s 201,核酸血液筛查系统,设备配置：,2 STAR+3CAP+3docking+3CTM,试剂组成：,cobas,TaqScreen MPX Test,（,96,人份，一代）,cobas,TaqScreen MPX Control Kit,（一代：,6*6,）,cobas,TaqScreen Wash Reagent,9,血液中心核酸检测经验介绍,检测系统：9血液中心核酸检测经验介绍,9,全血标本,标本采集后,4,小时内进行离心处理。样本离心后先进行常规酶免检测，然后将酶免试剂阴性结果标本进行六混样核酸检测。如混样检测有反应性，再进行拆分检测。,机采标本,标本采集后,4,小时内进行离心处理；,加样模式：六混样（,1,机采标本,+5,全血标本）,核酸检测实验室工作流程,10,血液中心核酸检测经验介绍,全血标本核酸检测实验室工作流程10血液中心核酸检测经验介绍,10,核酸检测（酶免第一批阴性）,23.00,08.00,09.00,10.00,11.00,12.00,13.00,14.00,15.00,16.00,17.00,18.00,19.00,20.00,21.00,22.00,核酸检测（酶免第二批阴性）,核酸检测（酶免第三批阴性）,酶免检测第一批,2 staffs,Start NAT,酶免检测第二批,酶免检测第三批,核酸检测如有阳性结果，当天进行拆分实验,核酸检测实验室工作流程,11,血液中心核酸检测经验介绍,核酸检测（酶免第一批阴性）23.0008.0009.0010,11,核酸检测阳性样本拆分实验,03.00,04.00,06.00,19.00,20.00,21.00,22.00,23.00,24.00,01.00,02.00,1 staff,05.00,07.00,全部样本在,48,小时内出报告，符合卫生部核酸检测要求,核酸检测实验室工作流程,12,血液中心核酸检测经验介绍,核酸检测阳性样本拆分实验03.0004.0006.0019.,12,核酸检测的关键控制点,标本,采血管的选择,留样方式及注意事项,运输过程中标本质量保证,标本处理方式及细节解读,标本检测,13,血液中心核酸检测经验介绍,核酸检测的关键控制点标本采血管的选择13血液中心核酸检测经,13,核酸检测采血管的要求,抗凝剂：首选,EDTA,和枸橼酸盐，避免使用肝素抗凝。,无菌,无,DNA,酶、无,RNA,酶：,含分离胶的真空采血管；,14,血液中心核酸检测经验介绍,核酸检测采血管的要求抗凝剂：首选EDTA和枸橼酸盐，避免使用,14,标本留取细节解读,防污染,留取人员的个人防护，留取前的清洁消毒，留取过程中保持密闭，防止其他可能污染物。,充分混匀,注意样品采集后的充分混匀，一般上下颠倒次以上，如操作不规范，则容易出现凝块，给后续检测带来弊端：核酸检测出现凝块报错，引起人力、试剂等不必要的浪费，增加标本污染风险。,标本量,标本留取应检查是否足量，如量少，应更换采血管重新留取，杜绝开盖留取。,15,血液中心核酸检测经验介绍,标本留取细节解读防污染15血液中心核酸检测经验介绍,15,NAT,标本溶血及影响,溶血,：原因多为标本留取中机械作用致红细胞破裂引起，如标本留取不畅、留取速度过快等；另外，剧烈震荡也可引起溶血，如运输颠簸等,溶血对,NAT,检测的影响,：,血红蛋白是核酸检测的主要抑制物之一，可抑制核酸检测；另外可核酸酶的释放加速核酸降解。,如何避免溶血现象出现？,标本留取时将血液顺管壁缓慢注入真空管中；另外避免震荡，以防血细胞破裂而溶血。,16,血液中心核酸检测经验介绍,NAT标本溶血及影响溶血：原因多为标本留取中机械作用致红细胞,16,NAT,标本脂血及影响,脂血,是指血液标本采集后，经过离心处理，分离出来的血清中含有脂类物质。从外观上看，血浆呈浑浊的乳白色。,脂血对,NAT,检测的影响,：脂血易引起加样环节液面感应异常报错；高脂血标本可通过对荧光的屏蔽和吸收作用而干扰检测。,如何避免留取脂血标本？,应注意饮食情况等的征询，可一定程度消除留取脂血标本。,17,血液中心核酸检测经验介绍,NAT标本脂血及影响脂血是指血液标本采集后，经过离心处理，分,17,NAT,标本中的其它影响因素,内源性,：免疫球蛋白、蛋白酶、离子等；,外源性,：肝素抗凝剂、手套滑石粉、标本容器或采样器材中含有的抑制物等。,18,血液中心核酸检测经验介绍,NAT标本中的其它影响因素内源性：免疫球蛋白、蛋白酶、离子等,18,标本的运输,冷链控制,专用标本运输箱的使用；,确保标本在采集后,4,小时内离心。,19,血液中心核酸检测经验介绍,标本的运输冷链控制19血液中心核酸检测经验介绍,19,血液中心核酸检测经验介绍培训课件,20,检测前准备,检测前核对：,状态、标识、离心时间、保存条件等；,室温平衡,：如标本在,4,中保存，检测前应室温平衡,30,分钟以上（,非常重要，否则易产生,clot,）；,开盖,：,加样前开盖；,在生物安全柜中进行,；,21,血液中心核酸检测经验介绍,检测前准备检测前核对：状态、标识、离心时间、保存条件等；21,21,加样过程中凝块报错原因分析,采血后混匀不充分,：局部抗凝效果不佳致凝块析出；,离心条件不充分,：离心力或离心时间不足所致，如血浆中存在的微量血细胞、分离胶、纤维蛋白等为引发凝块的原始因素。,加样前室温平衡时间不足,。,加样设备问题,：为假凝块，多为设备感应异常、设备硬件与软件的兼容性欠缺等原因引起，可通过调整参数、软件兼容性等方法解决；,22,血液中心核酸检测经验介绍,加样过程中凝块报错原因分析采血后混匀不充分：局部抗凝效果不佳,22,核酸标本的采集、运送、处理和保存的关键点,采血管,：抗凝剂、一次性密闭、无菌、无核酸酶及其他扩增抑制物,采集,：人员、防污染、采集方式,标本的运送：,冷链控制？尽可能快？,标本的处理,：离心时间、离心强度，,4,小时内离心,合格标本,:,外观质量符合要求、容器完整、量够、,23,血液中心核酸检测经验介绍,核酸标本的采集、运送、处理和保存的关键点采血管：抗凝剂、一次,23,核酸检测的关键控制点,防污染措施,核酸检测的最大特点是具有强大的扩增能力与极高的灵敏度，这也意味着极其微量的污染即可造成假阳性结果。,24,血液中心核酸检测经验介绍,核酸检测的关键控制点防污染措施核酸检测的最大特点是具有强大,24,易引发,NAT,检测污染的几个环节,标本的开盖,NAT,检测试剂、外部质控品,的准备,扩增产物的处理,用品的专用与清洁（如手套、纱布等），,25,血液中心核酸检测经验介绍,易引发NAT检测污染的几个环节标本的开盖25血液中心核酸检测,25,基因扩增实验室管理办法,规定：,在核酸纯化过程中可能会发生气溶胶所致的污染,为避免样本间的交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反应混合液的反应管。,26,血液中心核酸检测经验介绍,26血液中心核酸检测经验介绍,26,Roche cobas s 201,系统防污染设计,全球唯一的三重防污染设计,仪器,：全自动封闭系统,反应管,：全程封闭状态，杜绝交叉污染,试剂,：专利的,UNG,酶消除扩增产物带来的污染,27,血液中心核酸检测经验介绍,Roche cobas s 201系统防污染设计全球唯一的三,27,移动紫外灯,照射；,70%,乙醇,；,日常仪器和架子的维护清洁,新鲜配置的,0.5%,次氯酸钠溶液,；,实验室工作台面和样本外溅时使用,实验室,通风,其他实验室防污染措施,28,血液中心核酸检测经验介绍,移动紫外灯照射；其他实验室防污染措施28血液中心核酸检测经,28,温度在,15-30,度之间，超出这个范围仪器报警；,注意除湿，湿度不宜超过,60%,，超过这个湿度仪器故障率高。,核酸检测的关键控制点,温度与湿度,29,血液中心核酸检测经验介绍,温度在15-30度之间，超出这个范围仪器报警；核酸检测的关键,29,核酸检测实验室检测管理,严格单向工作流向制度,进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即：试剂贮存和准备区标本制备,PCR,扩增产物分析；,各区在物理空间上完全互相独立，使用功能上互相分割；,各区之间不能有空气直接相通。,严格物品专用制度,各区使用的仪器设备、移液器、,Tip,、试管架、笔记本、记号笔、手套等包括清洁用物品都必需执行专区专用原则。,各工作区域用品必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用,。,30,血液中心核酸检测经验介绍,核酸检测实验室检测管理严格单向工作流向制度30血液中心核酸检,30,分区内操作流程的合理化,了解实验室污染的来源，可能产生污染的实验操作（如阳性样本、实验过程中每一次的开盖过程等）,操作顺序应尽量从相对清洁到相对污染（如混样区相对清洁度：检测耗材,标本,阳性质控品,),操作顺序颠倒时应及时更换手套或进行相应的处理；,养成良好的实验室操作习惯，规范行为。,避免携带污染,操作人员应注意防止通过头发、眼镜等非专用物品将污染物携带到清洁区；,警惕手套可能接触污染物或污染其它物品等。,31,血液中心核酸检测经验介绍,分区内操作流程的合理化31血液中心核酸检测经验介绍,31,2010,年,8,月,9,日,-2013,年,7,月,31,日共完成,177916,份血液标本的核酸检测。其中拆分检测,586,次；拆分出,390,例酶免阴性而,NAT,阳性的标本，阳性率为,0.22%,。,鉴别阳性标本,190,例，其中,188,例为,HBV,阳性，另有,1,例,HBV,、,HCV,合并感染,1,例,HCV,阳性。,血站开展核酸检测情况,32,血液中心核酸检测经验介绍,2010年8月9日-2013年7月31日共完成177916,32,检测常见现象分析,问题,1,：初混阳性，拆分阴性标本如何解释？,因根据检测,CT,值、扩增曲线等综合判断，一般,CT,值在,37,以上可考虑为初混时产生了假阳性反应，因拆分实验所检测的样本量要高于混样，拆分检测可信度高于初混检测，对于拆分实验为阴性的标本可视为合格标本，,问题,2,：拆分为阳性，鉴别试验阴性，如何解释？,原因分析：标本病毒含量极低，因此在病毒载量系统上检测无结果；其次，对于极低浓度样本，其取样也存在随机性，不能够保证每次取样都能吸取到含有病毒的部分。,建议：对于拆分检测阳性标本，无论其鉴别试验结果如何，有必要进行血液报废处理。,33,血液中心核酸检测经验介绍,检测常见现象分析问题1：初混阳性，拆分阴性标本如何解释？33,33,34,血液中心核酸检测经验介绍,34血液中心核酸检测经验介绍,34,