血液病理课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,血液病理检测,血液病理课件,行业简介,金域血液病理项目,金域血液综合诊断报告,内容介绍,.,2,行业简介内容介绍.2,第三方医学实验室：,是指获得了卫生行政部门许可的、具有第三方法人资格的、专业从事医学检测的医疗机构。,行业认识,医学独立实验室定义,.,3,第三方医学实验室：行业认识医学独立实验室定义.3,行业认识,国内外独立医学实验室对比,产生：,上世纪,50,60,年代,规模：,共有,5000,多家独立医学实验室；有,QUEST,与,Labcorp,等大型,第三方,实验室,销售收入,(2009,年,),QUEST,：,80,亿美元，占检测市场的,14%,的份额；,Labcorp,：,50,亿美元，,份额：,美国,2009,年检验总量为,500,多亿美元，第三方实验室为,160,亿美元，约占检验市场份额,35%,美国,日本,SRL:,销售收入,70,亿人民币，有,140,余家分支实验室,日本,BML:,有,40,多家分支机构，检测项目超过,4 000,项,日本独立医学实验室的营业额占整个检验市场的,60%,香港：,有,150,余家第三方医学实验室,亚洲,初步探索：,90,年代初,数量,(,200,9,年,),：,据有关部门统计，全国,50,多,家,第三方医学,实验室,市场规模：,2009,年中国检验总量约,760,亿人民币；独立医学实验室约,7,亿人民币，,占的比例还,不到,1%,，检验项目,1000,多项,中国,绝对朝阳,.,4,行业认识国内外独立医学实验室对比产生：美国日本SRL:亚洲,成立于,1994,年,是中国,最早,进入医学独立实验室行业的,实验室,是中国目前规模,最大,的医学独立实验室,可检测,1000,余项检测项目,是中国,首家,同时通过,ISO15189,和,CAP,认证的临床实验室,覆盖“医学检验、病理诊断、新药临床试 验、卫 生检验、健康体检”五个方面,构建分子病理、细胞病理、血液病理、肾脏病理、分子遗传等专科化发展平台,SINCE 1994,金域检验简介,.,5,成立于1994年SINCE 1994金域检验简介.5,服务全国,11000,多家医疗机构，其中三甲医院,2000,多家，二甲医院,4000,多家。,与山东省内合作客户超过,1000,家，建立全省物流网络，合作客户包括山东大学齐鲁医院、军区总医院、山大二院、济南市中心医院等医院,南京,济南,西安,合肥,郑州,重庆,贵阳,昆明,南宁,福州,长春,广州,成都,长沙,天津,沈阳,杭州,全国市场网络,上海,香港,.,6,南京济南西安合肥郑州重庆贵阳昆明南宁福州长春广州成都长沙天津,白血病的分型标准,1976年法英美提出FAB分型,1999年WHO提出最新的分型建议,-MICM,.,7,白血病的分型标准1976年法英美提出FAB分型.7,血液病理,临床血液病医生,淋巴结,脾,CSF,FISH,流式细胞学,分子生物,外周血,骨髓,细胞遗传,形态学,WHO淋巴造血系统肿瘤分型,.,8,血液病理临床血液病医生淋巴结脾CSFFISH流式细胞学分子生,骨髓活检,.,9,骨髓活检.9,.,10,.10,.,11,.11,服务性血液病理学的地位,流式细胞术,.,12,服务性血液病理学的地位.12,粒细胞成熟过程,.,13,粒细胞成熟过程.13,流式细胞术方法原理,该法应用,荧光素标,记的抗人血细胞分化抗原的单克隆抗体与样本中细胞相应的抗原结合，用,流式细胞仪,检测结合在细胞表面抗体的荧光信号，分析异常细胞群的抗原表达情况。,这种多参数流式细胞分析术为白血病的诊断和分型提供了重要依据。,.,14,流式细胞术方法原理该法应用荧光素标记的抗人血细胞分化抗原的,.,15,.15,正常细胞群的分布,粒细胞,单核细胞,淋巴细胞,CD45:,白细胞共同抗原，表达于所有白细胞,.,16,正常细胞群的分布粒细胞单核细胞淋巴细胞CD45:白细胞共同抗,流式细胞术在血液肿瘤免疫分型中的应用,1、急淋（T、B系列）和急髓（M,0,-M7）的辅助诊断和初步分型。,2,.急慢性血液肿瘤初步鉴别诊断。,3.微小残留白血病监测（MRD）的监测。,4.,NHL的筛查与初步分型诊断。,5.MDS鉴别诊断与风险评估。,6,.异常浆细胞筛查。,.,17,流式细胞术在血液肿瘤免疫分型中的应用.17,目前所开展的项目,急慢性白血病,/NHL/MDS,全面,CD,系列检测,(40CD),急慢性白血病,CD,系列检测,(28CD),急性白血病快速鉴别诊断,CD,系列检测,(15CD),MDS,相关,CD,系列检测,(15CD),多发性骨髓瘤（,MM,）相关,CD,系列检测,(15CD),非何杰金氏淋巴瘤（,NHL,）相关,CD,系列检测,(25CD),微小残留白血病检测（,28CD,、,15CD,）,毛细胞白血病（HCL）相关CD系列检测(15 CD),外周血淋巴细胞增多快速鉴别诊断CD系列检测 (15 CD),.,18,目前所开展的项目急慢性白血病/NHL/MDS全面CD系列检测,服务性血液病理学的地位,细胞遗传学,.,19,服务性血液病理学的地位 细胞遗传学.19,血液病染色体检查的意义,克隆性染色体异常的检出有助于白血病的诊断和鉴别诊断，特异性染色体重排的发现有利于急性白血病的分型。,染色体异常可作为监测急性白血病病情缓解或复发，以及,CML,急变的重要指标。,染色体也是独立的预后指标,对于患者治疗方案的选择和预后评估具有重要意义。,染色体异常的发现还可为分子学研究提供重要线索，从而进一步促进白血病发病机制的研究。,.,20,血液病染色体检查的意义克隆性染色体异常的检出有助于白血病,t(9;22)(q32;q23.2)in CML,Ph,染色体,.,21,t(9;22)(q32;q23.2)in CML,Ph,染色体,约见于,95%,的,CML,15-30%,的成人,ALL,2-5%,的儿童,ALL,，,1-2%,的,ANLL,及很少的,MDS,PV,MF,MM,淋巴瘤，,CLL,恶性组织细胞病,Ph,（,+,），,20%,保持,46,，,t,（,9,；,22,）核型不变。,80%,核型演变：常见,2Ph，+8，i（17q），+19，+21,.,22,Ph染色体约见于95%的CML.22,Ph,染色体,少数病例,Ph,染色体可与下列染色体异常同时出现，提示,CML,急变,t,（,8,；,21,）：提示,CML,急粒变,t,（,15,；,17,）：提示,CML,早幼粒变,t,（,9,；,11,）：提示,CML,急单变,inv,（,16,）：提示,CML,急粒单变,inv,（,3,）：提示,CML,巨核变,额外异常通常比临床或血液学急变征象早出现,2-4,个月因此,CML,病程中定期进行染色体检测有助于早起诊断,CML,急变,.,23,Ph染色体少数病例Ph染色体可与下列染色体异常同时出现，提示,培养不成功的原因分析,染色体短小,不分散,开叉,显带效果差,核型复杂,培养不成功率高,.,24,培养不成功的原因分析染色体短小,不分散,开叉,显带效果差,核,培养不成功的原因分析,样品原因,:,抽取时机不合适,化疗中或刚结束,选材不合格,(,开单,初诊或怀疑诊断不详,未抗凝,),样品耽搁时间过长,运输过程温度失控,.,25,培养不成功的原因分析样品原因:.25,患者取材时机,所有的恶性血液病在初诊时（未用化疗药之前）是最好最有价值时机；,治疗中的患者如果在临床允许情况下，一个疗程结束后（停化疗药）,10-15,天左右，抽取,骨髓标本,送检；,治疗过程监测,未完全细胞遗传学缓解前建议不少于每,3,个月一次抽取骨髓送检；,完全细胞遗传学缓解后建议不少于每,6,个月一次抽取骨髓送检；,异性间骨髓移植后患者首次检测一般在,1,个月左右，确认移植成功后复查，各病例不同，一般每,6,个月一次，对于复发的高危患者，应连续检测嵌合状态，推荐至少每月一次。,.,26,患者取材时机 所有的恶性血液病在初诊时（未用化疗药之前）是最,样品要求,1.抽取骨髓,2ml,，外周血,3ml,，加入普通肝素管，轻轻摇匀,2.慢淋患者除正常骨髓外加送一个肝素管抗凝的外周血（2ml）,3.,淋巴瘤患者（未侵犯骨髓之前），淋巴结穿刺液,4.,慢性增殖性疾病只能送骨髓血,.,27,样品要求1.抽取骨髓2ml，外周血3ml，加入普通肝素管,服务性血液病理学的地位,荧光原位杂交,FISH,.,28,服务性血液病理学的地位荧光原位杂交.28,荧光原位杂交技术与应用,就是用标记有荧光分子的,小段,DNA,序列,(,探针,),，在合适的湿度和盐离子浓度条件下，与,染色体上,的互补序列特异地退火结合而不破坏染色体的整体形态，以便在显微镜下观察到此特异的,DNA,序列及其在染色体上的位置。,.,29,荧光原位杂交技术与应用.29,FISH的原理示意图,.,30,FISH的原理示意图.30,结果分析流程:,分析200细胞,判读每一个细胞中信号模式,计数各信模式细胞所占的比例.根据不同信号模式细胞的比例来判断阴阳性.,如结果在临界范围应如临床进行沟通,结合其它检测结果,临床特征综合分析.,.,31,结果分析流程:分析200细胞,判读每一个细胞中信号模式,计数,信号模式图,图,3,（,2R2G,阴性细胞）,图,4,（,1R1G2F,阳性细胞）,.,32,信号模式图图3（2R2G 阴性细胞）图4（1R1G2F 阳,FISH,技术的优点,1.,高敏感度、特异性,2.,结果直接客观,3.,应用于多种类型的标本,4.,中期、间期,5.,一个标本可同时检测多个基因,6.,标本较稳定,.,33,FISH技术的优点1.高敏感度、特异性.33,FISH,的临床应用,慢性粒细胞性白血病(CML)检测,慢性淋巴细胞白血病(CLL)检测,急性髓细胞白血病(AML)检测,急性淋巴细胞白血病(ALL)检测,多发性骨髓瘤(MM)检测,骨髓增生异常综合症(MDS)检测,非霍奇金淋巴瘤(NHL)检测,.,34,FISH的临床应用 慢性粒细胞性白血病(CML)检,急性髓细胞白血病,(AML),检测,可供选择的探针:,1.AML1/ETO 2,.,PML/RARA 3.CBF,4.MLL（,11q23,）5.,+,8 6.,5q-/-5,7.7,q-/-7,8.BCR/ABL 9.20q,-,可选择以上多个探针进行组合检测!,.,35,急性髓细胞白血病(AML)检测可供选择的探针:.35,急性髓细胞白血病,(AML),检测,1.AML1/ETO,t,（,8,；,21,）（,q22,；,q22,）,AML-M2的最特异性分子标志,提示预后较好;但 少数,M4,，,M1,和,M6,患者也可出现。,2.PML/RARA,辅助诊断AML-M3,指导用药。,3.CBF,辅助诊断AML-M4E,o,，占总,AML,的,5-10%,监测,inv,（,16,）的微小残留病变，提示预后较好;,.,36,急性髓细胞白血病(AML)检测1.AML1/ETO t（8；,急性髓细胞白血病,(AML),检测,4.MLL（,11q23,）,MLL,融合基因,60,多种，是急性白血病预后不良的独立指征。伴有,MLL,重排的,AML,提示预后较差。,5,.,+,8；,5q-/-5,；7,q-/-7,；,BCR/ABL,伴有上述染色体异常的,AML,的患者预后差。,6.20q-,：,伴此突变,AML,患者预后较好。,.,37,急性髓细胞白血病(AML)检测.37,非霍奇金淋巴瘤,(NHL),检测,临床检测意义：,主要是为NHL提供鉴别诊断，预后评估和治疗方案提供参考。1.IGH/MYC,CEP8,:,主要应用于Burkitt淋巴瘤的鉴别诊断,以及治疗预后的判断;2.IGH/BCL2,:,主要应用于滤泡性淋巴瘤的鉴别诊断,以及治疗预后的判断;3.IGH/CCND1,:,主要应用于套细胞淋巴瘤的鉴别诊断,以及治疗预后的判断;,4.ALK:,辅助诊断,B,间变性大细胞淋巴瘤,.,38,非霍奇金淋巴瘤(NHL)检测临床检测意义：.38,分子生物学检测,PCR,.,39,分子生物学检测.39,内容简介,基因重排,IGH,、,TCRG,基因重排,AML,预后相关,c-kit,基因突变,NPM1,（,exon12),基因突变,FLT3/ITD,突变检测,FLT3 D835,突变检测,MPD,诊断相关,JAK2 V617F,，,exon12&13,突变检测,靶向治疗,BCR-ABL,融合基因,ABL,区突变,荧光定量,PCR,BCR-ABL,、,PML-RARa,和,AML-ETO,.,40,内容简介 基因重排.40,IGH,、,TCR,基因重排,淋巴瘤是一类起源于淋巴结或其他淋巴组织的恶性肿瘤。,约有,5-10%,的病例无法通过形态学结合免疫组化或流式确诊。,IGH,重排检测主要应用于辅助,B,系淋巴瘤的诊断,TCR,重排检测主要应用于辅助,T,系淋巴瘤的诊断,.,41,IGH、TCR基因重排淋巴瘤是一类起源于淋巴结或其他淋巴组,AML,中,c-kit,基因突变,CBF-AML,：核心结合因子,AML,携带,t(8;21)/AML1-ETO,或,Inv,（,16,）,/CBFA-MYH11,的,AML.,c-kit,基因：,编码第,类酪氨酸激酶受体，在约,20-40%,的,CBF-AML,患者中存在突变。,突变主要集中于激酶区（,exon17 codon816&822,的点突变）和胞外区（,exon8 codon419,的插入,/,缺失）,在,CBF-AML,中，携带,Kit,基因突变的患者一般具有较差的预后，尤其是,exon17,的突变。,.,42,AML中c-kit 基因突变CBF-AML：核心结合因子AM,AML-NK,预后相关的基因,NPM1,基因,好的预后因素，仅携带NPM1基因突变的AML-NK患者具有较好的预后,FLT3/ITD,较差的预后因素，FLT3/ITD阳性的患者具有较差的预后,其它相关基因,PTD-MLL,CEBPA,Ras,Falini B,Nicoletti I,Martelli M etal.Blood,2007,109(3):874-885,.,43,AML-NK预后相关的基因NPM1基因Falini B,Ni,NPM1&FLT3/ITD,对,AML,预后的影响,Good,FLT3/ITD,-,NPM1,+,Intermediate,FLT3/ITD,+,NPM1,+OR,FLT3/ITD,-,NPM1,-,Poor,FLT3/ITD,+,NPM1,-,Falini B,Nicoletti I,Martelli M etal.Blood,2007,109(3):874-885,NPM1&FLT3,的突变检测应同时进行,.,44,NPM1&FLT3/ITD 对AML预后的影响 Good,骨髓增殖性疾病（,MPD,）：,以真性红细胞增多症,（,PV,），,原发性血小板增多症,（,ET,）,骨髓纤维化（,MF,）常见,JAK2,基因位于,9,号染色体上，编码非受体型的胞浆酪氨酸蛋白激酶,.,JAK2,基因突变在,MPD,中常见，在修订的,2008,年,WHO,分类系统中，有无,JAK2,突变已成为,MPD,主要的诊断标准,JAK2 V617F,突变是,JAK2,最为常见的突变，在,65-97%PV,，,23-57%ET,和,35-67%,的,MF,中存在该位点的突变。,JAK2 V617F,检测阴性的,MPD,中，较为常见的突变发生于外显子,12,和,13,JAK2,基因突变检测,.,45,骨髓增殖性疾病（MPD）：以真性红细胞增多症（PV），原发性,慢性粒细胞白血病,（,CML,）,是一种起源于造血干细胞的克隆性恶性疾病。,ABL,激酶区的突变被认为是,CML,患者对格列卫耐药的主因之一。,目前发现的,ABL,激酶区突变主要集中于,ATP,结合区,(P,环，第,244,255,氨基酸,),、,T315,、,M351,及活化区,(A,环,),四个区，不同突变位点引起的耐药程度不同。,ABL,激酶区突变,.,46,慢性粒细胞白血病（CML）是一种起源于造血干细胞的克隆性恶性,BCR-ABL,、,AML-ETO&PML-RARa,定量检测,95%,以上的,CML,患者具有标志性的,Ph,染色体，分子水平上,CML,患者几乎均表现为,M-bcr-abl(p210),90%,以上的,APL,具有特异性融合基因,PML-RARa,，由,t(15;17)(q22;q21),易位形成，断裂点不同分为三型：,bcr1(55%),、,bcr2(5%),和,bcr3(40%,）,AML-ETO,由,t(8;21)(q22;q22),易位形成，与,M2,相关,。,.,47,BCR-ABL、AML-ETO&PML-RARa定量检,遗传学检测的选择？,.,48,.48,G,P,S,形态学及分子病理解决方案综合报告,.,49,GPS形态学及分子病理解决方案综合报告.49,淋巴造血系统肿瘤诊断综合解决方案（,GPS),金域检验利用其自身的技术优势，,2007,年，与美国先进的血液肿瘤检测服务实验室进行合作，成立了血液淋巴造血系统肿瘤诊断会诊中心，在国内率先提出形态学及分子病理解决方案综合报告模式（,GPS,：,Genetic&Pathology Solutions,），即将形态学,(Morphology),，流式细胞术（,Flow Cytometry,），分子生物学（,Molecular Diagnosis,）、荧光原位杂交（,FISH,）、细胞遗传（,Cytogenetics,）和免疫组织化学,(IHC),结果整合于一份结论性报告中，致力于为临床医生提供可靠的，全方位的血液淋巴造血系统肿瘤的实验诊断服务。,.,50,淋巴造血系统肿瘤诊断综合解决方案（GPS),全面的、整合的血液病理检测服务,M,形态,C,遗传,M,分子,金域检验,全面整合检测信息,GPS,综合诊断报告,结合临床专家意见,最终诊断,合理治疗,血液科医生,标本收集,病理咨询,GPS,报告,I,免疫,GPS,Genetic Pathology Solution,遗传病理学解决方案,G=Genetic(Cytogenetic/Molecular),P=Pathology(Morphology/Immunophenotype),S=Solution(Personalized Diagnostics),.,51,全面的、整合的血液病理检测服务M 形态C 遗传M 分子,为,临床医生搭建最好的诊断平台,将传统形态学分析和现代实验室诊断技术置于,同一屋顶之下,合理使用各种诊断技术以最佳组合使一个标本,得到充分利用,避免不必要的检测,实现一站化,服务,将各种检测结果综合分析以达到最合理的分析,结论,将优秀的血液病理学检测服务送到临床血液医生,手中,.,52,为临床医生搭建最好的诊断平台将传统形态学分析和现代实验室诊,Morphology,.,53,Morphology.53,Biopsy,.,54,Biopsy.54,Flow,.,55,Flow.55,Cytogenetics,.,56,Cytogenetics.56,G,P,S,.,57,G.57,一切以客户为中心,.,58,一切以客户为中心.58,