血常规、尿常规、白带常规、血型检测的操作规范及质量控制

孕前优生孕前优生血、尿、血型及阴道分泌物检测血、尿、血型及阴道分泌物检测-操作规范质量控制操作规范质量控制内容提要内容提要n血液学检验的操作规范及质量控制n尿常规检测的操作规范及质量控制n阴道分泌物检测的操作规范及质量控制nABO血型检测的操作规范及质量控制血液学检验的操作规范及质量控制血液学检验的操作规范及质量控制n概述n血液学检测的操作规范n血液学检测的质量控制n危机值报告一、概述发展历程 由手工操作进入半自动仪计数，再进入全自动血细胞分析仪测定，直到目前的全自动血细胞分析流水线这个里程碑式的历程，见证了血常规检验技术的进步。概念 血液的一般检查（血常规检查)：是对血液中的有形成分（红细胞、白细胞和血小板）的数量和质量进行检测。包括全血细胞计数和白细胞的分类计数。1.三分类与五分类：n仪器检测原理 三分类大都采用电阻抗检测技术；五分类的产品大 都采用光散射检测技术。n白细胞分类方法 三分群是将白细胞分为淋巴细胞，单核细胞，粒细胞；五分群则是将白细胞分为淋巴细胞、单核细胞、粒细胞（中性细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞）。二、血液学检测的操作规范2.三分类原理电阻抗法在待测液体中置一微孔，在微孔的两端各加一定电压的电极，当液体中的颗粒经过微孔时，电极间的电阻就会产生训瞬间的变化，因而产生电脉冲，对这种电脉冲进行计数就可得到颗粒的数量，脉冲幅度的大小表示颗粒的体积的大小，经过对各种细胞所产生脉冲的大小的电子的选者择，可以区分出不同种类的细胞；在液体中加上一定的负压就能使经过微孔的液体流动3.五分类检测原理n容量、传导、光散射分类法（VCS）n阻抗、射频和特殊稀释液处理的联合分类n多角度偏振光三色分类法（MAPSS）n光散射与细胞化学技术联合应用分类法n利用激光流式细胞分析系统加核酸荧光染色技术分类法4.操作规程开机后先做质控，质控通过后进行样本检测将合格样本编号，待检标本检测1.上下颠倒试管将内容物充分混匀，检查有无 凝血。2.将试管正确放入试管架上。3.按start键，样品开始吸取。4.当ready led 暗（并发出两声短音）移开试管。5.当ready led再次亮起时，准备下一个样品，重复上述步骤。5.镜检筛选n为了保证血液分析结果准确，镜检是细胞形态分析的最终手段。n2005年国际血液学复检专家组经详细分析后，制定了41条指导性自动血细胞分析和分类的复检标准。n三分群血液分析仪：100%显微镜WBC分类及血细胞形态检查。三、血液学检测的质量控制n分析前质量控制n分析中质量控制n分析后质量控制四、危机值报告RBC 2.51012/L HGB50g/L 或250g/LPLT 30109/L或600109/LWBC2.0109/L或28.0109/L尿常规检测的操作规范及质量控制尿常规检测的操作规范及质量控制n尿液检验的流程n尿液干化学检查n尿沉渣显微镜检查一、尿液检验流程二、尿液干化学检查（一）尿液干化学分析的发展尿液干化学分析的发展n1956年：美国人Ames和Lilly发明了尿糖干化学试带n1957年：利用“蛋白质误差”的原理推出尿蛋白检测试带，n1958年：推出尿糖、尿蛋白二联试带n1959年：推出尿糖、尿蛋白、尿pH三联试带n20世纪70年代：第一台干化学分析仪问世 现代尿液分析自动化的标志n试带逐步发展到多项，八联、十联、十一联、十二联n从目测发展到自动化仪器检测，由半自动化到全自动化 国产试剂代替进口试剂。（二）尿干化学分析仪分类n按自动化程度 1.半自动尿液分析仪：2.全自动尿液分析仪：n按检测项目n8项：pH、PRO、GLU、KET、BIL、URO、BLD、NIT 10项：8项+LEU、SG 11项：10项+VitC 12项：10项+颜色、透明度（三）尿液分析仪的原理n尿液分析仪的测试原理主要有以下三个方面n尿液分析仪的试剂带原理n尿液分析仪测量原理n尿液分析仪计算原理（四）尿干化学试剂带的使用规范n操作人员必须仔细阅读试带性能和仪器的操作方法；n操作中应充分混匀新鲜尿液标本；n将试带全部迅速浸入尿液标本；n试带从标本中取出时，除去多余的尿液n可疑结果必须进行确诊实验；n干化学实验结果应与理学、显微镜结果相关联。n不能丢掉镜检（五）尿干化学检测的质量控制分析前质量控制n人员培训n建立标准操作规程n尿液标本的采集及保存n仪器设备定期校准和保养n尿试纸的正确使用n质控品的选择三、尿沉渣显微镜检查 尿沉渣检测是对尿液离心沉淀物中有形成分的鉴定。传统的尿沉渣检测包括用显微镜对尿沉渣进行定性、定量检查以及各种有形成分的计数检测；现在可用尿液分析仪(试纸条法)及尿沉渣自动分析仪，对尿中某些有形成分进行自动检测。尿液显微镜检测方 法1.取混匀新鲜晨尿10ml，1500rpm离心5min，留沉淀物0.25-0.35ml混匀取50 l涂片2.以弱光低倍镜观察，用高倍镜辨认3.记录各类细胞或各类管型在10个视野内所见到的最低和最高数目红细胞n尿沉渣中不染色红细胞典型形状为浅黄色双凹盘状。但受PH、渗透压及红细胞来源的影响，可发生变化。n碱性尿中红细胞边缘不规则，高渗尿中红细胞因脱水皱，呈表面带刺、颜色较深的桑葚状；低渗尿中红细胞因吸水胀大，并可有血红蛋白逸出，呈大小不等的空环形，称红细胞淡影。n参考值：正常平均每高倍视野0-3个，3个/HP称镜下血尿。定量检查0-5个/L。尿液中主要的有形成分白细胞和脓细胞n白细胞外形完整，分散存在，以中性粒细胞多见。脓细胞是指在炎症过程中破坏或死亡的中性粒细胞，外形不规则，常成堆聚集存在。n参考值：正常平均0-5个/高倍视野，定量检查0-10个/L 上皮细胞：上皮细胞：n尿液中上皮细胞来自肾至尿道的整个泌尿系统，包括肾小管上皮细胞、移行上皮细胞和复层扁平上皮细胞。管型管型n尿液中的蛋白在肾小管内凝集而成，尿内出现管型是肾实质病变的证据。如急性肾小球肾炎多见透明管型和颗粒管型，慢性肾小球肾炎多见细、粗颗粒管型；在慢性肾炎，肾病综合症，高血压肾损伤时可见透明管型增多。结晶n尿中出现结晶称晶体尿。n尿液中是否析出结晶。取决于某些物质在尿液中的溶解度、浓度、pH、温度及胶体状况等因素。当种种促进与抑制结晶折出的因子和使尿液过饱和状态维持稳定动态平衡的因素失衡时，则可见结晶折出。报告方式n分数报告法 细胞成分：最低 最高/HPF 管型成分：最低 最高/LPFn加号报告法以有形成分占视野面积来判定，1/4视野为+，满视野为+。多用于细胞数极多和结晶、粘液丝、脂肪滴、细菌等的报告。n定量报告法 （/ml /ul）质量控制n标本量应达到10ml，离心速度在1500 r/min，5min。n细胞等有形成分较多时，应在载玻片上选择较薄处进行检查，防止因遮盖漏报或少报。n观察管型时光线不能太强，避免透明管型的漏检。阴道分泌物检测的操作规范及质量控制阴道分泌物检测的操作规范及质量控制n概述n标本采集及处理n阴道分泌物检查的规范化程序n质量控制一、概述n女性生殖系统分泌的液体，俗称“白带”，主要是由宫颈腺体和前庭大腺的分泌物组成，也含有来自子宫内膜和阴道黏膜的分泌物。n常用于女性生殖系统炎症、肿瘤的诊断及雌激素水平的判断。二、标本的采集及处理n常由妇产科医师给检验对象采集，取材后，棉拭子放于生理盐水试管内。n制成生理盐水涂片n固定、染色n患者准备：在采集标本前24小时内应无性交、无盆浴、无阴道灌洗、近期内未服用激素类药物。n标本要求：用无菌棉拭子从阴道后穹隆处取分泌物；所用窥阴器不可用润滑剂，只能用少量无菌等渗盐水润湿。n标本储存：取材后应立刻检查，避免因放置时间太久影响滴虫的活动性或虫体受到破坏使检查结果受到影响。n标本运输：一般室温运输，如冬季气温较低应注意保温运输。三、阴道分泌物检查的规范化程序1.一般性状检查：n外观检查：正常阴道分泌物为白色稀糊状，无气味，其量多少与雌激素水平高低和生殖器官充血程度有关。nPH值：在生理情况下，由于阴道杆菌的作用使正常健康妇女阴道pH5.0。【参考值】pH 4.04.5一般性状检查 阴道清洁度检查【检测方法】涂片高倍镜观察判断阴道清洁度 2.显微镜检查湿片检查a.NS1滴b.标本涂抹混匀分级n微生物及寄生虫检查滴虫 主要是阴道毛滴虫，致滴虫性阴道炎。检测采用生理盐水悬滴法或湿片法，滴虫呈梨形，后端尖，约为白细胞的23倍大小。低倍显微镜下可见波动状或螺旋状运动。真菌 采用悬滴法于低倍镜下可见到白色丝假酵母菌的卵圆形孢子和假菌丝。如取阴道分泌物涂片并时行革兰氏染色后油观察，可见芽孢、孢子或与出芽细胞相连接的菌丝，成链状及分支状。阴道加德纳菌 阴道加德纳菌为革兰氏染色阴性或染色不定小杆菌。大小为1.5-2.5m，具有多形性，呈杆状或球杆状，致阴道分泌物PH4.5，胺试验阳性。淋球菌 革兰氏染色阴道性双球菌，形似肾或咖啡豆状，凹面相对，除散在于白细胞之间外，还可见其被吞噬于中性粒细胞胞质之内，因淋病奈瑟菌对各种理化因子抵抗力弱，涂片法可被漏诊，必要时可进行淋病奈瑟菌培养，且有利于菌株分型和药过敏试验。四、质量控制n结果报告应全面，符合规范；首先报告阴道分泌物清洁度，其次报告所发现的病原微生物。n分析检测结果之间的关联性。n检验报告的审核、签发、登记。ABOABO血型检测的操作规范及质量控制血型检测的操作规范及质量控制n概述nABO血型鉴定的标准化操作规程nABO血型检测的质量控制n常见的问题一、概述一、概述血型的概念血型的概念n血型(blood group)是人体血液的一种遗传性状。20世纪初发现红细胞ABO血型系统以来，血型的概念仅指红细胞表面抗原的差异。n随着对血型研究的进展，白细胞、血小板和血清中血型抗原的发现，血型已被认为是指各种血液成分的遗传多态性标记。nKarl Landsteinern奥地利科学家n1901年发现人类ABO血型系统二、标准化操作规程方法一：玻片法n试验原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。n适用范围：初筛血型或普通体检 n操作步骤：1.取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用肥皂水刷洗后晾干，用蜡笔划出小格，并注明A、B字样。将抗A试剂、抗B试剂各一滴分别滴于玻片（或瓷盘）上A、B处。分别取等体积待检血样（5-10红细胞悬液或全血）于抗A试剂和抗B试剂。2.另取洁净玻片1张（或白瓷板1块），用记号笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。3.用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻片（或瓷盘）并观察血型凝集（或溶血）反应。如以玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。方法二：试管法n试验原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。正定型，是用已知的抗A、抗B分型血清来测定红细胞膜上有无相应的A抗原或/和B抗原所谓；反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或/和抗B。n试剂：抗A、抗B分型标准血清（单克隆抗体）24A1型、B型和O型试剂红细胞悬液n受检者新鲜血清n受检者24红细胞盐水悬液n操作步骤：1.取洁净试管2支，分别标记：编号、抗A抗B2.分别加抗A、抗B分型血清各2滴于试管底部，再以吸管分别加入受检者24红细胞盐水悬液1滴，混合3.取洁净试管3支，分别标记：编号、AC、BC、OC4.用吸管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别加入24A1型、B型和O型试剂红细胞悬液1滴，混合。5.取洁净试管1支，标记:编号、自身6.用试管分别加入受检者血清2滴和受检者红细胞悬液1滴混合。7.离心：根据试剂说明书选择离心转速和。8.待离心机停止后，取出试验管，肉眼观察有无溶血现象，然后将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞再悬浮，观察凝聚强度，必要时以低倍镜观察结果时间方法三：微柱凝胶法n原理：在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，利用凝胶的空间位阻，经低速离心，凝集的红细胞悬浮在凝胶上层，而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶低部（管底尖部）。微柱凝胶结果判定标准三、ABO血型检测的质量控制n人员培训、考核n标准化操作规程n仪器性能的评估n实验室内温湿度、冰箱状态等n外部供应的评估（试剂、耗材等）n室内质控n室间质评n结果审核n临床沟通四、ABO血型鉴定中常见问题n工作中经常遇到血型鉴定错误或正反定型不符的情况，除了个别疑难血型出现的技术上的原因外，更多的是由于标本的采集、离心、判读等非技术因素造成血型鉴定结果错误，很可能而发生重大的医疗差错或事故。n血型鉴定操作的标准化 现状：只做ABO正定型 做ABO正反定型，但不检测RhD血型 做ABO正反定型和RhD血型 谢谢 谢谢 ！