甲型HN流感标本采集运输与生物安全教学课件

甲型HN流感标本采集运输与生物安全甲型HN流感标本采集运输与生物安全1流感病毒有甲、乙、丙三种流感病毒有甲、乙、丙三种至今甲型流感病毒已发现的血凝素有至今甲型流感病毒已发现的血凝素有1616个亚型个亚型（H1-H16H1-H16），神经氨酸酶），神经氨酸酶9 9个亚型（个亚型（N1-N9N1-N9）猪流感是一种因甲型流感病毒引起的猪呼吸系猪流感是一种因甲型流感病毒引起的猪呼吸系统疾病统疾病 目前，已从猪身上分离到四种主要的亚型：目前，已从猪身上分离到四种主要的亚型：H1N1H1N1、H1N2H1N2、H3N2H3N2和和H3N1 H3N1 甲型流感病毒甲型流感病毒H1N1H1N1亚型是目前疫情的主要病原亚型是目前疫情的主要病原体体 一、概述流感病毒有甲、乙、丙三种 一、概述2 2 一、概述人流感病毒亚型 H1N1（季节）H2N2 H3N2猪流感病毒亚型 H1N1 H1N2 H3N2 H3N1 一、概述人流感病毒亚型3 3不同亚型流感病毒宿主分布不同亚型流感病毒宿主分布4 4 二、标本的采集标本采集人员:医疗机构的医生、护士或当地疾病预防控制中心流行病学专业人员负责标本采集。标本采集对象:新H1N1流感病毒感染疑似病例、可能病例、临床诊断病例以及其它需要进行新H1N1病毒实验排查者。二、标本的采集标本采集人员:5 5 二、标本的采集标本种类:病人咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子、鼻咽吸出液、气管吸取物、肺活检物、肺和气管组织、急性期和恢复期血清等.疑似新A/H1N1感染死亡病例:采集肺、气管、心、肝、脾、肾和淋巴结等组织(需征得家属同意)二、标本的采集标本种类:6 6二、标本的采集咽拭子咽拭子咽拭子咽拭子标本采集方法：标本采集方法：标本采集方法：标本采集方法：用灭菌棉签（最好用用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制头柄棉拭子会抑制PCRPCR实验）实验）擦拭双侧咽扁桃体及擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml3-4ml采集液中，尾部弃去。采集液中，尾部弃去。标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。推荐使用的采样液：推荐使用的采样液：PH 7.4-7.6PH 7.4-7.6的的HanksHanks液。液。二、标本的采集咽拭子标本采集方法：7 7二、标本的采集二、标本的采集8 8采咽拭子的器材和容器采咽拭子的器材和容器采咽拭子的器材和容器9 9鼻咽拭子 插入干的拭子到鼻孔插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，伸入鼻咽部，停留刻，缓慢旋转退出，另一缓慢旋转退出，另一鼻孔使用另一鼻孔使用另一 个棉签，个棉签，将尾部弃去，拧将尾部弃去，拧 紧管紧管盖。盖。鼻咽拭子1010二、标本的采集注意事项采样登记表信息是否齐全?装检材的容器是否符合要求?耐低温、外螺旋口、带密封垫圈采样液太多或 没有?二、标本的采集注意事项1111三、标本包装、保存、运送与接收标本的包装标本运输使用标本运输使用A A 类包装：类包装：三层包装三层包装,包装容器有生物安全危害标识。包装容器有生物安全危害标识。在生物安全柜内进行，标本分为一式三份；在生物安全柜内进行，标本分为一式三份；标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；入塑料袋内；送检单应信息完整，放入另一塑料袋内。送检单应信息完整，放入另一塑料袋内。三、标本包装、保存、运送与接收标本的包装1212三、标本包装、保存、运送与接收标本的保存呼吸道标本：呼吸道标本：4 4（短时间（短时间 ）；）；4848小时小时 -70-70 或以下；或以下；不推荐不推荐-20-20保存。保存。血清标本：血清标本：3 3天内天内 4 4 长期长期 -20-20 避免反复冻融避免反复冻融 采样前通知接收和检测单采样前通知接收和检测单位位三、标本包装、保存、运送与接收标本的保存1313三、标本包装、保存、运送与接收标本的运送：24小时内上送；专人专车；带冰送样。三、标本包装、保存、运送与接收标本的运送：1414三、标本包装、保存、运送与接收原则：不 污染环境，不影响检测要求：及时、稳妥、符合国家规定标本应冷藏运输三、标本包装、保存、运送与接收1515国际上感染性实验室标本的包装和运送的要求 使用螺旋盖容器+密封塑料袋；同一位患者的2份以上的密封的标本可以放在同一个塑料袋内并封好，不同患者的标本不应放在同一个袋里；绝缘容器的内部应该另外装一些物品以防止塑料容器在运送时发生移动；国际上感染性实验室标本的包装和运送的要求1616四、生物安全三层包装,带冰送样。对新甲型H1N1流感病毒疑似病例的临床标本进行的病毒分离工作，应在BSL3实验室内进行，并遵循三级个人防护。国际上感染性实验室标本的包装和运送的要求避免反复冻融 采样前通知接收和检测单位甲型流感病毒H1N1亚型是目前疫情的主要病原体如有人员在无防护情况下暴露于甲型H 1N1流感确诊病例的临床标本或活病毒，应考虑在暴 露后的7天时 间里使用奥司他韦（达菲）或扎那米韦微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 233-2002）要求：及时、稳妥、符合国家规定呼吸防护装备 检测合格的N95呼吸器或更高级别的防护装备。包装容器有生物安全危害标识。病毒分离阴性并不能排除感染甲型H1N1 病毒。采咽拭子的器材和容器（Zanamivir）进行抗病毒药物预防。对新甲型H1N1流感病毒疑似病例的临床标本进行的病毒分离工作，应在BSL3实验室内进行，并遵循三级个人防护。标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；流感病毒有甲、乙、丙三种原则：不 污染环境，不影响检测四、生物安全对实验室的要求:对新对新甲型甲型甲型甲型H1N1H1N1流感病毒流感病毒流感病毒流感病毒疑似病例的疑似病例的临床标本临床标本临床标本临床标本进行进行的诊断性实验工作，在的诊断性实验工作，在BSL2BSL2实验室内进行。所有样实验室内进行。所有样本操作均应在生物安全柜（本操作均应在生物安全柜（BSCBSC）内进行。并进行）内进行。并进行三级个人防护。三级个人防护。对新对新甲型甲型甲型甲型H1N1H1N1流感病毒流感病毒流感病毒流感病毒疑似病例的临床标本进行疑似病例的临床标本进行的的病毒分离病毒分离病毒分离病毒分离工作，工作，应在应在应在应在BSL3BSL3实验室实验室实验室实验室内进行，并遵循内进行，并遵循三级个人防护。三级个人防护。四、生物安全四、生物安全对实验室的要求:1717四、生物安全个人防护要求 生物安全等级三级个人防护（包括操作临床标本生物安全等级三级个人防护（包括操作临床标本和病毒分离物）和病毒分离物）推荐的个人防护装备（要基于特定场所的风险评估）推荐的个人防护装备（要基于特定场所的风险评估）呼吸防护装备呼吸防护装备 检测合格的检测合格的N95N95呼吸器或更高级别的防呼吸器或更高级别的防护装备。护装备。鞋套鞋套前封式手术服前封式手术服双层手套双层手套眼部防护装备（护目镜或面罩）眼部防护装备（护目镜或面罩）四、生物安全个人防护要求1818 四、生物安全防护措施普通环境采样穿戴防护服、医学防护口罩、乳胶普通环境采样穿戴防护服、医学防护口罩、乳胶手套、帽子；手套、帽子；病人采样加上隔离衣或围裙、防病人采样加上隔离衣或围裙、防 护鞋套、眼罩、护鞋套、眼罩、N95N95级或级或 N/P/R-100N/P/R-100防护面罩；防护面罩；穿上防护用品后应注意检查呼吸道防护的严密性；穿上防护用品后应注意检查呼吸道防护的严密性；脱掉防护用品时应先将污染最严重的部分脱掉，脱掉防护用品时应先将污染最严重的部分脱掉，最后摘口罩。最后摘口罩。四、生物安全防护措施1919四、生物安全实验室废弃物处理原则 应遵循所在机构标准实验室操作规程内的所应遵循所在机构标准实验室操作规程内的所有废弃物处置程序进行。有废弃物处置程序进行。121 121、3030分分钟钟高高压灭压灭菌菌处处理理 化学消毒剂浸泡化学消毒剂浸泡四、生物安全实验室废弃物处理原则2020四、生物安全健康监测:所有参与人员均应自所有参与人员均应自 测发热及其他症状。测发热及其他症状。感染甲型感染甲型H 1N1H 1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。如有不适，应立即向上级腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。如有不适，应立即向上级报告。报告。如有人员在无防护情况下暴露于甲型如有人员在无防护情况下暴露于甲型H 1N1H 1N1流感确诊病例的流感确诊病例的临床标本或活病毒，应考虑在暴临床标本或活病毒，应考虑在暴 露后的露后的7 7天时天时 间里使用奥司间里使用奥司他韦（达菲）或扎那米韦他韦（达菲）或扎那米韦（ZanamivirZanamivir）进行抗病毒药物预防。进行抗病毒药物预防。四、生物安全健康监测:2121四、生物安全生物安全条例和规定:病原微生物实验室生物安全管理条例病原微生物实验室生物安全管理条例可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或 样本运输样本运输管理规定管理规定微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 233-WS 233-20022002）实验室生物安全通用要求（实验室生物安全通用要求（GB19489GB1948920042004）四、生物安全生物安全条例和规定:2222目前甲型目前甲型H1N1主要的检测主要的检测方法方法快速流感抗原检测快速流感抗原检测 B B型流感病毒阳性，可排除新型流感病毒阳性，可排除新H1N1H1N1流感流感 无论无论A A型流感病毒抗原阳性或阴性，不能型流感病毒抗原阳性或阴性，不能排除新排除新H1N1H1N1流感流感 目前甲型H1N1主要的检测方法快速流感抗原检测 2323目前甲型目前甲型H1N1主要的检测主要的检测方法方法核酸检测：核酸检测：Real-time RT-PCR 检测检测（美国CDC建立）RT-PCR 检测（病毒病所（病毒病所 国家流感中心建国家流感中心建立）立）目前甲型H1N1主要的检测方法核酸检测：2424目前甲型目前甲型H1N1主要的检测主要的检测方法方法免疫荧光法免疫荧光法免疫荧光试验可以区分免疫荧光试验可以区分A A和和B B型流感病毒型流感病毒 。免疫荧光试验的。免疫荧光试验的结果取决于临床标本的质量，操作技能，对检测结果取决于临床标本的质量，操作技能，对检测甲型甲型甲型甲型H1N1H1N1病毒临床标本的敏感性和特异性未知。因此，免疫荧光试病毒临床标本的敏感性和特异性未知。因此，免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性，不能作为验阴性结果可能是假阴性，不能作为甲型甲型甲型甲型H1N1H1N1感染的最后感染的最后诊断。诊断。病毒培养病毒培养用用MDCKMDCK细胞和细胞和SPFSPF鸡胚分离鸡胚分离甲型甲型甲型甲型H1N1H1N1病毒可以诊断感染，病毒可以诊断感染，但无法为临床诊断及时提供结果。病毒分离阴性并不能排但无法为临床诊断及时提供结果。病毒分离阴性并不能排除感染除感染甲型甲型甲型甲型H1N1H1N1 病毒。病毒。血清学检测血清学检测 血凝抑制实验血凝抑制实验目前甲型H1N1主要的检测方法免疫荧光法免疫荧光试验可以区2525标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；国际上感染性实验室标本的包装和运送的要求标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；流感病毒有甲、乙、丙三种生物安全等级三级个人防护（包括操作临床标本穿上防护用品后应注意检查呼吸道防护的严密性；普通环境采样穿戴防护服、医学防护口罩、乳胶手套、帽子；标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；病毒培养用MDCK细胞和SPF鸡胚分离甲型H1N1病毒可以诊断感染，但无法为临床诊断及时提供结果。推荐使用的采样液：目前甲型H1N1主要的检测方法国际上感染性实验室标本的包装和运送的要求插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，缓慢旋转退出，另一鼻孔使用另一 个棉签，将尾部弃去，拧 紧管盖。推荐的个人防护装备（要基于特定场所的风险评估）普通环境采样穿戴防护服、医学防护口罩、乳胶手套、帽子；包装容器有生物安全危害标识。避免反复冻融 采样前通知接收和检测单位生物安全等级三级个人防护（包括操作临床标本目前甲型H1N1主要的检测方法对新甲型H1N1流感病毒疑似病例的临床标本进行的诊断性实验工作，在BSL2实验室内进行。RT-PCR 检测（病毒病所 国家流感中心建立）免疫荧光法免疫荧光试验可以区分A和B型流感病毒。目前甲型H1N1主要的检测方法脱掉防护用品时应先将污染最严重的部分脱掉，最后摘口罩。病人采样加上隔离衣或围裙、防 护鞋套、眼罩、N95级或 N/P/R-100防护面罩；（Zanamivir）进行抗病毒药物预防。包装容器有生物安全危害标识。三、标本包装、保存、运送与接收绝缘容器的内部应该另外装一些物品以防止塑料容器在运送时发生移动；生物安全等级三级个人防护（包括操作临床标本病毒培养用MDCK细胞和SPF鸡胚分离甲型H1N1病毒可以诊断感染，但无法为临床诊断及时提供结果。三、标本包装、保存、运送与接收标本运输使用A 类包装：耐低温、外螺旋口、带密封垫圈标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；包装容器有生物安全危害标识。生物安全等级三级个人防护（包括操作临床标本穿上防护用品后应注意检查呼吸道防护的严密性；对新甲型H1N1流感病毒疑似病例的临床标本进行的病毒分离工作，应在BSL3实验室内进行，并遵循三级个人防护。病毒分离阴性并不能排除感染甲型H1N1 病毒。四、生物安全标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；专人专车；可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或 样本运输管理规定眼部防护装备（护目镜或面罩）因此，免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性，不能作为甲型H1N1感染的最后诊断。免疫荧光法免疫荧光试验可以区分A和B型流感病毒。呼吸防护装备 检测合格的N95呼吸器或更高级别的防护装备。穿上防护用品后应注意检查呼吸道防护的严密性；标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；因此，免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性，不能作为甲型H1N1感染的最后诊断。目前甲型H1N1主要的检测方法耐低温、外螺旋口、带密封垫圈血凝抑制实验标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；目前甲型H1N1主要的检测方法三、标本包装、保存、运送与接收对新甲型H1N1流感病毒疑似病例的临床标本进行的诊断性实验工作，在BSL2实验室内进行。一、概述三、标本包装、保存、运送与接收H1N1 H1N2 H3N2 H3N1包装容器有生物安全危害标识。普通环境采样穿戴防护服、医学防护口罩、乳胶手套、帽子；耐低温、外螺旋口、带密封垫圈生物安全等级三级个人防护（包括操作临床标本Real-time RT-PCR 检测（美国CDC建立）RT-PCR 检测（病毒病所 国家流感中心建立）标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；三、标本包装、保存、运送与接收如有不适，应立即向上级报告。要求：及时、稳妥、符合国家规定24小时内上送；所有样本操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。血凝抑制实验因此，免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性，不能作为甲型H1N1感染的最后诊断。免疫荧光试验的结果取决于临床标本的质量，操作技能，对检测甲型H1N1病毒临床标本的敏感性和特异性未知。标本运输使用A 类包装：4（短时间）；标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；要求：及时、稳妥、符合国家规定标本运输使用A 类包装：目前甲型H1N1主要的检测方法不推荐-20保存。采样登记表信息是否齐全?流感病毒有甲、乙、丙三种呼吸防护装备 检测合格的N95呼吸器或更高级别的防护装备。生物安全等级三级个人防护（包括操作临床标本三层包装,可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或 样本运输管理规定所有样本操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。实验室生物安全通用要求（GB194892004）病人采样加上隔离衣或围裙、防 护鞋套、眼罩、N95级或 N/P/R-100防护面罩；避免反复冻融 采样前通知接收和检测单位包装容器有生物安全危害标识。标本运输使用A 类包装：普通环境采样穿戴防护服、医学防护口罩、乳胶手套、帽子；二、标本的采集因此，免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性，不能作为甲型H1N1感染的最后诊断。目前甲型H1N1主要的检测方法标本运输使用A 类包装：标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；RT-2626