沙门氏菌和志贺氏菌的检测培训课件

v肠肠道道感感染染细细菌菌是是通通过过粪粪-口口传传播播途途径径进进行行传传播播的的一一类细菌。类细菌。v主主要要包包括括肠肠杆杆菌菌科科细细菌菌、霍霍乱乱弧弧菌菌、副副溶溶血血性性弧弧菌、幽门螺杆菌菌、幽门螺杆菌等。等。v肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌科科科科中中与与医医学学有有关关的的包包括括：埃埃埃埃希希希希菌菌菌菌属属属属、志志志志贺贺贺贺菌属、沙门菌属、变形杆菌属菌属、沙门菌属、变形杆菌属菌属、沙门菌属、变形杆菌属菌属、沙门菌属、变形杆菌属等。等。概述概述 肠道感染细菌肠道感染细菌8/4/20241沙门氏菌和志贺氏菌的检测 肠肠 杆杆 菌菌 科科 共共 同同 特特 性性相似的形态染色相似的形态染色简单的培养条件简单的培养条件活泼的生化反应活泼的生化反应G-小杆菌，有鞭毛小杆菌，有鞭毛(痢疾杆菌外痢疾杆菌外)菌毛，某些有荚膜，无芽胞菌毛，某些有荚膜，无芽胞需氧或兼性厌氧，营养要求不高需氧或兼性厌氧，营养要求不高 致病菌致病菌非致病菌非致病菌 乳糖乳糖发酵发酵实验实验阴性阴性阳性阳性 SS琼脂培养基琼脂培养基（含胆盐、乳糖、中性红等）（含胆盐、乳糖、中性红等）8/4/20242沙门氏菌和志贺氏菌的检测4、抗原构造复杂、抗原构造复杂鞭毛抗原（H）IgG菌体抗原（O）IgMK或Vi抗原8/4/20243沙门氏菌和志贺氏菌的检测沙门菌检测美美国国细细菌菌学学家家SalmonSalmon与与SmithSmith于于18851885年年分分离离出出猪猪霍霍乱乱沙沙门门菌菌。19901990年年为为纪纪念念SalmonSalmon，定定名名这这类细菌为沙门菌属。类细菌为沙门菌属。沙沙门门菌菌是是肠肠杆杆菌菌科科的的重重要要致致病病菌菌。包包括括伤伤寒寒、副副伤伤寒寒甲甲、乙乙、丙丙型型，肠肠炎炎，鼠鼠伤伤寒寒等等沙沙门门菌菌，现今已发现现今已发现23242324个血清型。个血清型。在在世世界界各各地地的的食食物物中中毒毒中中，沙沙门门菌菌食食物物中中毒毒常常占占首首位位或或第第二二位位。规规定定在在药药品品和和食食品品中中不不得得检检出出沙沙门门菌菌。美美国国每每年年报报道道病病例例45 45 000000个个左左右右，实实际际数数量量可可能能多多达达200-300200-300万万。伤伤寒寒每每年年400-400-500500例。例。8/4/20245沙门氏菌和志贺氏菌的检测生物学特性1.1.形态形态 两端钝圆的革兰氏阴性杆菌，两端钝圆的革兰氏阴性杆菌，（0.4-0.90.4-0.9）m(1-3)mm(1-3)m，无芽，无芽孢，周生鞭毛，一般无荚膜，少孢，周生鞭毛，一般无荚膜，少数有包膜。数有包膜。光滑型的细菌大小均匀，粗光滑型的细菌大小均匀，粗糙型则大小不一，长短不一。糙型则大小不一，长短不一。8/4/20246沙门氏菌和志贺氏菌的检测培养和生化反应兼性厌氧，最适生长温度兼性厌氧，最适生长温度35353737，最适生长，最适生长PHPH为为6.86.87.8.7.8.本菌属对营养的要求不高，在本菌属对营养的要求不高，在普通营养琼脂上生长的菌落为圆形、光滑、湿普通营养琼脂上生长的菌落为圆形、光滑、湿润，半透明，边缘整齐的菌落，有时可出现粗润，半透明，边缘整齐的菌落，有时可出现粗糙型的菌落。在肠道选择性培养基上菌落小至糙型的菌落。在肠道选择性培养基上菌落小至中等，透明或半透明，乳糖不发酵，与志贺菌中等，透明或半透明，乳糖不发酵，与志贺菌的菌落相似，有些能产生硫化氢的菌株，在的菌落相似，有些能产生硫化氢的菌株，在SSSS琼脂上形成中心黑色的菌落。琼脂上形成中心黑色的菌落。8/4/20247沙门氏菌和志贺氏菌的检测抗原构造菌菌体体抗抗原原（o o）：不不被被乙乙醇醇、0.1%0.1%石石炭炭酸酸所所破破坏坏。与与特特异异性性抗抗血血清清呈呈颗颗粒粒状状凝凝集集，形形成成慢慢，不不易易摇摇散散。现现已已知知有有5050多多种种，多多数数沙沙门门菌菌含含有有两两种种以以上上的的O O抗抗原原，有有的的O O抗抗原原是是一一种种菌菌独独有有的的，有有的的是是几几种种菌菌共共有有的的，凡凡含含有有共共同同特特异异性性抗抗原原成成分分的的血血清清型型归归为为一一个个群群，可可将将沙沙门门菌菌化化分分为为4242群群，按按A-ZA-Z排排列列，Z Z以以后后的的顺顺序序以以O O5151-O-O6767表表示示。引起人类沙门菌病的引起人类沙门菌病的95%95%以上都在以上都在A-F 6A-F 6个群内。个群内。8/4/20248沙门氏菌和志贺氏菌的检测H H抗原：为不稳定的蛋白质抗原，加热或用乙抗原：为不稳定的蛋白质抗原，加热或用乙醇处理均被破坏。沙门菌醇处理均被破坏。沙门菌H H抗原有两个相抗原有两个相,第一第一相特异性较高称特异相相特异性较高称特异相,用小写英文字母用小写英文字母a a、b b、c c表示，直至表示，直至z z，z z以衙用以衙用z z加阿拉伯数字表示，加阿拉伯数字表示，如如z1z1、z2z2、z3z3等，第二相抗原为沙门菌共有，等，第二相抗原为沙门菌共有，称非特异相，直接用称非特异相，直接用1 1、2 2、3 3表示。同时有第表示。同时有第一相和第二相一相和第二相H H抗原的细菌称为双相菌，仅有抗原的细菌称为双相菌，仅有一相者称单相菌。一相者称单相菌。H H抗原是定型的依据，其刺抗原是定型的依据，其刺激机体产生的抗体以激机体产生的抗体以IgGIgG为主，与相应的抗血为主，与相应的抗血清呈絮状反应。清呈絮状反应。8/4/20249沙门氏菌和志贺氏菌的检测表面抗原：在沙门菌属中已被证实的表面抗原有表面抗原：在沙门菌属中已被证实的表面抗原有ViVi抗原、抗原、M M抗原、抗原、5 5抗原三种抗原三种ViVi抗原：是一种不耐热的酸性多糖聚合物，加热抗原：是一种不耐热的酸性多糖聚合物，加热60306030分分钟或经石炭酸处理即被破坏，经人工培养基传代后也易失钟或经石炭酸处理即被破坏，经人工培养基传代后也易失去。新分离的伤寒及副伤寒沙门菌常带有此抗原。去。新分离的伤寒及副伤寒沙门菌常带有此抗原。ViVi抗原抗原位于菌体的最表层，有抗吞噬及保护细菌免受相应抗体和位于菌体的最表层，有抗吞噬及保护细菌免受相应抗体和补体的溶菌作用。补体的溶菌作用。ViVi抗原存在时可阻止抗原存在时可阻止O O抗原与相应抗体抗原与相应抗体发生凝集，故在沙门血清学鉴定时应加以注意，需事先加发生凝集，故在沙门血清学鉴定时应加以注意，需事先加热破坏热破坏ViVi抗原之后，抗原之后，O O抗原才得以与相应的抗原才得以与相应的O O抗血清发生凝抗血清发生凝集。带集。带ViVi抗原的沙门菌亦可用抗原的沙门菌亦可用ViVi噬菌体进行分型，有助于噬菌体进行分型，有助于流行病学调查和追踪传染源。流行病学调查和追踪传染源。8/4/202410沙门氏菌和志贺氏菌的检测qM M抗抗原原：粘粘液液抗抗原原，在在菌菌型型鉴鉴定定上上无无特特殊殊意义。意义。q5 5抗原：抗原：8/4/202411沙门氏菌和志贺氏菌的检测4.抵抗力不强，加热不强，加热601h601h，或，或651520min651520min即即被杀死。在水中能存活被杀死。在水中能存活2323周，在粪便中周，在粪便中可存活可存活1212月。对胆盐和煌绿等染料有抵月。对胆盐和煌绿等染料有抵抗力。因此可用于制备沙门菌的选择培抗力。因此可用于制备沙门菌的选择培养基。养基。8/4/202412沙门氏菌和志贺氏菌的检测5.变异性S-RS-R变异变异:自临床标本初次分离的菌株一般都是光滑型，经人工培自临床标本初次分离的菌株一般都是光滑型，经人工培养，传代后可逐渐变民粗糙型菌落。此时菌体表面的特异多糖抗养，传代后可逐渐变民粗糙型菌落。此时菌体表面的特异多糖抗原丧失，在生理盐水中可出现自凝。原丧失，在生理盐水中可出现自凝。H-OH-O变异：是指有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的变异变异：是指有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的变异位相变异：具有双相位相变异：具有双相H H抗原的沙门菌变成只有其中某一相的单相菌，抗原的沙门菌变成只有其中某一相的单相菌，称位相变异。在沙门菌血清学分型时，如遇到单相菌，特别是只称位相变异。在沙门菌血清学分型时，如遇到单相菌，特别是只有第有第相（非特异相）抗原时，需反复分离和诱导出第相（非特异相）抗原时，需反复分离和诱导出第相（特相（特异相）抗原方可作出鉴定。异相）抗原方可作出鉴定。V-WV-W变异：是指沙门菌失去变异：是指沙门菌失去ViVi抗原的变异。初次分离得到的具有抗原的变异。初次分离得到的具有ViVi抗原、抗原、O O抗原不凝集的沙门菌称抗原不凝集的沙门菌称V V型菌；型菌；ViVi抗原部分丧失，与抗原部分丧失，与O O抗原抗原血清发生凝集又可与血清发生凝集又可与ViVi抗血清凝集者称抗血清凝集者称VWVW型菌。型菌。ViVi抗原完全丧失，抗原完全丧失，与与O O抗原血清发生凝集又与抗原血清发生凝集又与ViVi抗血清不凝集者称抗血清不凝集者称W W型菌。型菌。V-WV-W变异的变异的过程是过程是V V型菌经人工培养，逐渐丧失部分型菌经人工培养，逐渐丧失部分ViVi抗原而成为抗原而成为VWVW型，进而型，进而丧失全部丧失全部ViVi抗原而成为抗原而成为W W型菌。型菌。8/4/202413沙门氏菌和志贺氏菌的检测 二、致病性与免疫性二、致病性与免疫性 致病物质：1.侵袭力：菌毛帮助细菌黏附肠粘膜上皮细胞 Vi抗原 可阻断相应抗体和补体的作用，抵抗吞噬细胞的吞噬作用。内毒素：可激活补体系统、吸引白细胞，引起肠道炎症，吸收入血可引起全身中毒，发热、白细胞减少、中毒性休克。肠毒素：类似于大肠杆菌肠毒素。8/4/202414沙门氏菌和志贺氏菌的检测 2.2.所致疾病所致疾病 1)1)肠热症（伤寒和副伤寒）：由伤寒沙门菌、甲、乙、肠热症（伤寒和副伤寒）：由伤寒沙门菌、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引起。丙型副伤寒沙门菌引起。2 2）食物中毒（急性胃肠炎）：由鼠伤寒沙门菌、猪霍乱）食物中毒（急性胃肠炎）：由鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌引起，有发热、恶心呕吐、水样泻，严沙门菌、肠炎沙门菌引起，有发热、恶心呕吐、水样泻，严重者致脱水、休克、肾衰而死亡（主见于婴儿、老人等），重者致脱水、休克、肾衰而死亡（主见于婴儿、老人等），但，大多但，大多2323天自愈。天自愈。3 3）败血症）败血症 ：常由猪霍乱沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、：常由猪霍乱沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等引起。有高热、寒战、贫血等鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等引起。有高热、寒战、贫血等严重症状。多见于儿童及免疫力低下者。严重症状。多见于儿童及免疫力低下者。免疫性：免疫性：主要依靠细胞免疫，牢固。主要依靠细胞免疫，牢固。8/4/202415沙门氏菌和志贺氏菌的检测二、微生物学检查标本采集 根据疾病的类型、病情和病程的不同分根据疾病的类型、病情和病程的不同分别采集不同的标本。分离培养原则上于发病第别采集不同的标本。分离培养原则上于发病第1 1周采血，第周采血，第2 2周取粪便或尿液，全程均可作骨周取粪便或尿液，全程均可作骨髓培养。血清学诊断应在病程的不同时期分别髓培养。血清学诊断应在病程的不同时期分别采集采集2 23 3份标本。份标本。8/4/202416沙门氏菌和志贺氏菌的检测血液、骨髓血液、骨髓粪、尿、可疑食物粪、尿、可疑食物增菌培养增菌培养（胆盐葡萄糖肉汤）（胆盐葡萄糖肉汤）分分 离离 培培 养养（SS、EMB、MAC、血平板）、血平板）增菌培养增菌培养(SF、CN、TT)37 1824h可疑菌落可疑菌落初初 步步 鉴鉴 定定（涂染检、（涂染检、KIA、MIU、IMViC等生化反应、等生化反应、A-F多价血清凝集）多价血清凝集）最最 终终 鉴鉴 定定肠道杆菌系统生化反应肠道杆菌系统生化反应 单价因子血清定血清型单价因子血清定血清型37 1824h37 1824h37 1824h检验程序检验程序8/4/202417沙门氏菌和志贺氏菌的检测8/4/202418沙门氏菌和志贺氏菌的检测检验方法直接检测直接检测 将病人标本或肉汤增菌培养物直将病人标本或肉汤增菌培养物直接用商品乳胶凝集试剂进行试验，可快速检出接用商品乳胶凝集试剂进行试验，可快速检出沙门菌和志贺菌。沙门菌和志贺菌。8/4/202419沙门氏菌和志贺氏菌的检测检验方法分离培养分离培养 常规的肠道选择鉴别培养基能有常规的肠道选择鉴别培养基能有效地分离沙门菌。常用肠道鉴别培养基（效地分离沙门菌。常用肠道鉴别培养基（MACMAC或或EMBEMB）和选择培养基（）和选择培养基（SSSS等），强选择性培等），强选择性培养基（孔雀绿和亚硫酸铋等）仅适用范围于暴养基（孔雀绿和亚硫酸铋等）仅适用范围于暴发流行时。发流行时。8/4/202420沙门氏菌和志贺氏菌的检测分离培养分离培养（1 1）血液和骨髓：血液）血液和骨髓：血液5ml5ml或骨髓液或骨髓液0.5ml0.5ml胆汁葡萄糖肉胆汁葡萄糖肉汤或胰化蛋白大豆肉汤中，汤或胰化蛋白大豆肉汤中，35-3735-37孵育，若有生长孵育，若有生长（多在（多在2424日内出现）则移种至血琼脂平板和日内出现）则移种至血琼脂平板和SSSS培养基培养基中。中。（2 2）粪便或肛拭：最好作床边接种，或用卡）粪便或肛拭：最好作床边接种，或用卡-布（布（Cary-Cary-BlairBlair）运送培养基。）运送培养基。（3 3）尿液和体液：无菌采集的中段尿、胆汁、脑脊液、）尿液和体液：无菌采集的中段尿、胆汁、脑脊液、胸腹水等经胸腹水等经3000r/min3000r/min离心沉淀后接种于增菌液、血琼离心沉淀后接种于增菌液、血琼脂和肠道选择培养基。脂和肠道选择培养基。（4 4）食物等固体物质：磨碎后加）食物等固体物质：磨碎后加10ml10ml无菌生理盐水混匀，无菌生理盐水混匀，接种于增菌液和肠道选择培养基。接种于增菌液和肠道选择培养基。8/4/202421沙门氏菌和志贺氏菌的检测鉴定与分型生化鉴定 疑为沙门菌的可疑菌落可用手工或商品生化反应进行疑为沙门菌的可疑菌落可用手工或商品生化反应进行生化鉴定，常用三糖铁生化鉴定，常用三糖铁(TSI)(TSI)琼脂和赖氨酸琼脂来初步鉴定。琼脂和赖氨酸琼脂来初步鉴定。本菌在本菌在TSITSI上典型的生化模式为：碱上典型的生化模式为：碱/酸，葡萄糖产气，硫酸，葡萄糖产气，硫化氢阳性（化氢阳性（K/A+K/A+）。少数菌株为乳糖发酵型，呈（）。少数菌株为乳糖发酵型，呈（A/AA/A），），这些菌株的硫化氢往往阴性。在赖氨酸铁琼脂上的典型生这些菌株的硫化氢往往阴性。在赖氨酸铁琼脂上的典型生化模式为化模式为K/KK/K和硫化氢阳性，但亦存在赖氨酸和硫化氢阴性和硫化氢阳性，但亦存在赖氨酸和硫化氢阴性的菌株（副伤寒的菌株（副伤寒A A沙门菌）。初步反应疑为沙门菌的菌株必沙门菌）。初步反应疑为沙门菌的菌株必须经全面生化反应证实和血清学分型后才能发出报告须经全面生化反应证实和血清学分型后才能发出报告。8/4/202422沙门氏菌和志贺氏菌的检测|乳糖乳糖:蔗糖蔗糖:葡萄糖葡萄糖=10:10:1|以酚红作指示剂以酚红作指示剂|当当待待检检菌菌发发酵酵乳乳糖糖或或蔗蔗糖糖时时，产产酸酸量量多多，使使整整个个培培养养基基均均呈呈黄黄色色；如如仅仅发发酵酵葡葡萄萄糖糖，则则产产酸酸少少，斜斜面面由由于于细细菌菌生生长长分分解解蛋蛋白白胨胨而而释释放放氨氨，酚酚红红显显碱碱性性红红色色、而而底层黄色底层黄色|细细菌菌对对培培养养基基中中硫硫代代硫硫酸酸钠钠或或硫硫酸酸钠钠、亚亚硫硫酸酸钠钠的的还还原原作作用用，生生成成硫硫化化氢氢。硫硫化化氢氢遇遇硫硫酸酸亚亚铁铁或或柠柠檬檬酸酸铁铁铵产生不溶性黑色硫化亚铁。铵产生不溶性黑色硫化亚铁。生化反应生化反应初步鉴别：三糖铁琼脂初步鉴别：三糖铁琼脂8/4/202423沙门氏菌和志贺氏菌的检测斜面红色、底层黄色，出现部分黑色或全部黑斜面红色、底层黄色，出现部分黑色或全部黑色色斜面红色、底层黄色，无黑色斜面红色、底层黄色，无黑色斜面、底层均黄色，出现部分黑色或全部黑色斜面、底层均黄色，出现部分黑色或全部黑色 除沙门菌外，变形杆菌、柠檬酸盐菌、志贺菌除沙门菌外，变形杆菌、柠檬酸盐菌、志贺菌等也可出现上述反应。等也可出现上述反应。吲哚试验：阴性吲哚试验：阴性8/4/202424沙门氏菌和志贺氏菌的检测志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生不产生H H2 2S S。大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生产生H H2 2S S。沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖、蔗糖，大多数产生沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖、蔗糖，大多数产生H H2 2S S，多数产气。，多数产气。下面照片所示下面照片所示2-3-42-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌？氏菌？8/4/202425沙门氏菌和志贺氏菌的检测沙门菌属细菌的初步鉴定沙门菌属细菌的初步鉴定MIU触酶氧化酶硝酸盐硝酸盐还原还原诊断血清凝集诊断血清凝集KIA斜面斜面 底层底层 产气产气 H2S甲型副伤寒KA+-/+-+AF多价+A群+乙型副伤寒KA+-+AF多价+B群+丙型副伤寒KA+-+AF多价+C群+vi+猪霍乱沙门菌KA+-/+-+AF多价+C群+伤寒沙门菌KA-+/-+-+AF多价+D群+vi+其他沙门菌KA+-+AF多价+肠炎+8/4/202426沙门氏菌和志贺氏菌的检测鉴定与分型鉴定与分型血清学分型血清学分型2.2.血清学分型血清学分型 用抗血清对所分离菌种的用抗血清对所分离菌种的O O抗原、表面抗原、表面ViVi抗原，第一相和第二相抗原，第一相和第二相H H抗原进行凝集试验（抗原进行凝集试验（O O：ViVi：第一相第一相H H：第二相：第二相H H）。多数实验室先用多价）。多数实验室先用多价O O抗血清抗血清（A-FA-F）对沙门菌分离株进行分群。）对沙门菌分离株进行分群。95%95%以上的沙门菌临以上的沙门菌临床分离株都属床分离株都属A-FA-F群，多价抗血清凝集后再用分别代表群，多价抗血清凝集后再用分别代表每一个每一个O O血清群的单价因子血清定群。血清群的单价因子血清定群。O O分群之后再用分群之后再用H H因子血清检查第一相和第二相因子血清检查第一相和第二相H H抗原，综合抗原，综合O O、H H及及ViVi因因子血清的检查结果，判断血清型。子血清的检查结果，判断血清型。8/4/202427沙门氏菌和志贺氏菌的检测鉴定与分型鉴定与分型血清型分型血清型分型注意：试验时与多价血清不凝集时，可在玻璃试管内注意：试验时与多价血清不凝集时，可在玻璃试管内用生理盐水将细菌制成尝菌液，放入沸水中用生理盐水将细菌制成尝菌液，放入沸水中1530min1530min，冷却后再次做凝集试验。因，冷却后再次做凝集试验。因ViVi抗原能阻断抗原能阻断O O凝集反应，凝集反应，而煮沸处理能破坏菌体表面的而煮沸处理能破坏菌体表面的ViVi抗原。仅出现单相抗原。仅出现单相H H抗抗原（第一相或第二相）时，需用位相分离的方法诱导原（第一相或第二相）时，需用位相分离的方法诱导出另一相抗原后再进行检查。出另一相抗原后再进行检查。8/4/202428沙门氏菌和志贺氏菌的检测鉴定与分型鉴定与分型ViVi噬菌体分型噬菌体分型 标准的标准的ViVi噬菌体共有噬菌体共有3333型，该法可用于流行病型，该法可用于流行病学调查和追踪传染源，常在一些特殊的参考实验室内学调查和追踪传染源，常在一些特殊的参考实验室内进行，一般医院的微生物实验室不列为常规检查项目。进行，一般医院的微生物实验室不列为常规检查项目。8/4/202429沙门氏菌和志贺氏菌的检测血清学诊断血清学诊断用已知伤寒、副伤寒的用已知伤寒、副伤寒的O O、H H抗原，检测受检血清中有抗原，检测受检血清中有无相应的抗体的半定量试管内凝集试验，称为肥达反无相应的抗体的半定量试管内凝集试验，称为肥达反应。应。方法方法 将受检血清用生理盐水作倍比稀释，每个稀将受检血清用生理盐水作倍比稀释，每个稀释度需作出努力个复管，分别加入等量的伤寒沙门菌释度需作出努力个复管，分别加入等量的伤寒沙门菌O O、H H抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙的抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙的H H抗原进行试管内抗原进行试管内凝集，凡血清最高稀释度出现明显凝集者为凝集将价。凝集，凡血清最高稀释度出现明显凝集者为凝集将价。8/4/202430沙门氏菌和志贺氏菌的检测1 1）正常凝集价）正常凝集价 正常人由于隐性感染或预防接种，血清中通常可含正常人由于隐性感染或预防接种，血清中通常可含有一定水平的凝集抗体，正常的凝集价可因不同地区而有差异有一定水平的凝集抗体，正常的凝集价可因不同地区而有差异 一般情况下，伤寒沙门菌一般情况下，伤寒沙门菌O O抗体的凝集价应在抗体的凝集价应在180180以上，以上，H H抗体抗体凝集价在凝集价在11601160以上，引起副伤寒沙门菌以上，引起副伤寒沙门菌H H抗体凝集价在抗体凝集价在180180以以上才有诊断意义上才有诊断意义 2 2）动态观察）动态观察 有时单次效价不能定论，可在病程中逐周检查。若效有时单次效价不能定论，可在病程中逐周检查。若效价逐次增加或恢复期效价比初次价逐次增加或恢复期效价比初次44倍者有意义倍者有意义 8/4/202431沙门氏菌和志贺氏菌的检测O O与与H H抗体的诊断意义：抗体的诊断意义：O O抗体出现较早，为抗体出现较早，为IgMIgM，持续时间短（约半年），消，持续时间短（约半年），消退后不易受非特异性病原刺激而重现。退后不易受非特异性病原刺激而重现。H H抗体出现较晚，抗体出现较晚，为为IgGIgG，持续时间长达数年，消退后易受非特异性病原刺，持续时间长达数年，消退后易受非特异性病原刺激而重现。激而重现。O O、H H凝集价均超过正常值，则肠热症的可能性大：凝集价均超过正常值，则肠热症的可能性大：若两者均底，肠热症的可能性小：若两者均底，肠热症的可能性小：若若O O不高不高 H H高，可高，可能是预防接种或非特异性反应；能是预防接种或非特异性反应；若若 O O高高H H不高，则可能不高，则可能为伤寒早期，或与其他沙门菌有交叉反应。为伤寒早期，或与其他沙门菌有交叉反应。8/4/202432沙门氏菌和志贺氏菌的检测结果判断及报告结果判断及报告（1 1）生生化化试试验验符符合合沙沙门门菌菌属属反反应应，沙沙门门菌菌属属A-FA-F多多价价O O血血清凝集试验阳性反应，做出检出沙门菌报告。清凝集试验阳性反应，做出检出沙门菌报告。（2 2）生生化化试试验验不不符符合合沙沙门门菌菌属属反反应应，沙沙门门菌菌属属A-FA-F多多价价O O血清凝集试验阴性反应，做出未检出沙门菌报告。血清凝集试验阴性反应，做出未检出沙门菌报告。（3 3）生生化化试试验验符符合合沙沙门门菌菌属属反反应应，沙沙门门菌菌属属A-FA-F多多价价O O血血清清凝凝集集试试验验阴阴性性反反应应；或或生生化化试试验验不不符符合合沙沙门门菌菌属属反反应应，沙沙门门菌菌属属A-FA-F多多价价O O血血清清凝凝集集试试验验阳阳性性反反应应；均均应应进一步鉴定后再做结论报告。进一步鉴定后再做结论报告。8/4/202433沙门氏菌和志贺氏菌的检测对于疑似菌株或须进一步鉴定的菌株，对于疑似菌株或须进一步鉴定的菌株，根据待检菌已测试的特性，可选择增添根据待检菌已测试的特性，可选择增添一些必要的生化试验。一些必要的生化试验。糖醇发酵试验糖醇发酵试验 明胶液化试验明胶液化试验硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验甲基红试验甲基红试验VPVP试验试验柠檬酸盐利用试验柠檬酸盐利用试验半乳糖苷酶试验半乳糖苷酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验丙二酸钠试验丙二酸钠试验有机酸盐利用试验有机酸盐利用试验甘油品红试验甘油品红试验8/4/202434沙门氏菌和志贺氏菌的检测注意事项注意事项培养基培养基对照对照挑取菌落挑取菌落纯培养纯培养严格按照规定进行严格按照规定进行避免对环境造成污染避免对环境造成污染8/4/202435沙门氏菌和志贺氏菌的检测志贺菌属检测 志贺菌属是人类细菌性痢疾最常见的病原菌，通称志贺菌属是人类细菌性痢疾最常见的病原菌，通称痢疾杆菌。根据生化反应与血清学试验该属细菌分为痢痢疾杆菌。根据生化反应与血清学试验该属细菌分为痢疾、福氏、鲍氏和宋内志贺菌四群。疾、福氏、鲍氏和宋内志贺菌四群。CDCCDC分类系统分类系统（19891989）将生化性状相近的）将生化性状相近的A A、B B、C C群归为一群，统称群归为一群，统称为为A A、B B、C C血清群，将鸟氨酸脱羧酶和血清群，将鸟氨酸脱羧酶和-半乳糖苷酶均半乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。我国以福氏和宋内志贺菌阳性的宋内志贺菌单列出来。我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢引起的菌痢-最为常见。最为常见。细菌性痢疾是一种常见病，主细菌性痢疾是一种常见病，主要流行于发展中国家，全世界年病例数超过要流行于发展中国家，全世界年病例数超过2 2亿，其中亿，其中500500万例需住院治疗，年死亡病例达万例需住院治疗，年死亡病例达6565万。万。8/4/202436沙门氏菌和志贺氏菌的检测生物学性状形态结构和染色革兰阴性杆菌，菌体短小，无芽胞，无荚膜，无鞭毛，有菌毛。8/4/202437沙门氏菌和志贺氏菌的检测培养特性培养特性兼性厌氧、营养要求不高兼性厌氧、营养要求不高在肠道选择培养基上呈无色半透明在肠道选择培养基上呈无色半透明S S型菌落菌型菌落菌落落 SS SS平板无色菌落平板无色菌落MacMac平板无色菌落平板无色菌落EMBEMB平板无色菌落平板无色菌落宋内志贺菌多呈扁平、宋内志贺菌多呈扁平、R R型菌落，个别菌株可型菌落，个别菌株可迟分解乳糖迟分解乳糖 8/4/202438沙门氏菌和志贺氏菌的检测生化反应生化反应氧化酶试验（）氧化酶试验（）分解葡萄糖、不分解乳糖，（个别菌株分解葡萄糖、不分解乳糖，（个别菌株迟分解乳糖或不分解乳糖）迟分解乳糖或不分解乳糖）KIAKIA：KAKAMIUMIU：/IMViCIMViC：/除除A A群外，均能发酵甘露醇群外，均能发酵甘露醇8/4/202439沙门氏菌和志贺氏菌的检测抗原结构只有O、K抗原，无H抗原K抗原可阻断O抗原与相应抗体的凝集根据O抗原分4群和44型8/4/202440沙门氏菌和志贺氏菌的检测志贺菌抗原分类8/4/202441沙门氏菌和志贺氏菌的检测抵抗力对理化因素抵抗力弱尤其对酸敏感对消毒剂敏感易产生耐药性8/4/202442沙门氏菌和志贺氏菌的检测变异性S-R变异 宋内志贺的菌落由光滑型变为粗糙型为S-R变异,此外尚伴有生化特征、抗原构造及致病性的变异，而出现不典型菌株。耐药性变异 志贺菌于50年代首先出现对磺胺的耐药性，后发展成多重耐药性，在70年代和80年代分别出现对四环素和氨苄青霉素的耐药性，最近又出现对SMZ-TMP的耐药性。志贺菌的多重耐药性的问题已成为一个严重的医学问题8/4/202443沙门氏菌和志贺氏菌的检测临床意义致病物质：侵袭力：菌毛、大质粒 内毒素：志贺毒素：属外毒素，由A群志贺菌产生，具有肠毒、细胞毒、神经毒作用8/4/202444沙门氏菌和志贺氏菌的检测急性菌痢急性菌痢 发热、腹痛、里急后重、脓血粘液便。发热、腹痛、里急后重、脓血粘液便。急性中毒性菌痢急性中毒性菌痢 休休克克为为主主要要表表现现的的全全身身中中毒毒症症状状；小小儿儿多多见见，为内毒素在特殊情况下的反应。为内毒素在特殊情况下的反应。慢性菌痢慢性菌痢 病程超过病程超过2 2个月，反复发作或迁延不愈。个月，反复发作或迁延不愈。携带者携带者 恢复期带菌、慢性带菌、健康带菌恢复期带菌、慢性带菌、健康带菌所致疾病所致疾病8/4/202445沙门氏菌和志贺氏菌的检测免免 疫疫 性性 志贺菌感染局限与肠粘膜，志贺菌感染局限与肠粘膜，一般不入血一般不入血，SIgASIgA为主，病后为主，病后免免疫力短暂疫力短暂。8/4/202446沙门氏菌和志贺氏菌的检测致病性与免疫性致病性与免疫性1 1、侵袭力：、侵袭力：菌毛菌毛有利于菌粘附回结肠粘膜有利于菌粘附回结肠粘膜2 2、毒、毒 素：素：加重局部和全身症状加重局部和全身症状内毒素内毒素作用于肠壁作用于肠壁通透性增加通透性增加粘膜炎症、溃疡粘膜炎症、溃疡局部局部全身全身内毒素血症内毒素血症外毒素（外毒素（A A群群1 1型）型）与内毒素协同作用与内毒素协同作用 致致 病病 物物 质质肛门括约肌肛门括约肌8/4/202447沙门氏菌和志贺氏菌的检测临床表现临床表现急性细菌性痢疾急性细菌性痢疾急性典型：发热、腹痛、脓血粘液便急性典型：发热、腹痛、脓血粘液便非急性典型：小儿非急性典型：小儿中毒型中毒型 成人成人易误漏诊易误漏诊慢性细菌性痢疾：病程迁移二月以上慢性细菌性痢疾：病程迁移二月以上传染源传染源:患者与带菌者患者与带菌者 所所 致致 疾疾 病病免疫力免疫力:SIgA8/4/202448沙门氏菌和志贺氏菌的检测中毒性痢疾病人中毒性痢疾病人8/4/202449沙门氏菌和志贺氏菌的检测微生物学检验标本采集 粪便或肛拭 新鲜脓血便 立即送检或床边接种 保存于30甘油盐水或卡-布培养基8/4/202450沙门氏菌和志贺氏菌的检测及时送及时送/暂用暂用3%3%甘油缓冲水保存甘油缓冲水保存SSSS平板（无色透明小菌落）平板（无色透明小菌落）血清学反应（玻片凝集）血清学反应（玻片凝集）检检 测测 报报 告告分离培养分离培养新鲜脓血便新鲜脓血便/肛拭肛拭双糖培养基（生化反应）双糖培养基（生化反应）快速诊断快速诊断荧光菌球试验荧光菌球试验协同凝集试验协同凝集试验三、三、微微 生生 物物 学学 检检 查查 PCR、基因探针、基因探针8/4/202451沙门氏菌和志贺氏菌的检测检验方法检验方法将待检标本接种肠道选择平板，将待检标本接种肠道选择平板，3535培养培养18182424小时。小时。若标本含菌量少，可先增菌（若标本含菌量少，可先增菌（GNGN增菌液）增菌液）4 46 6小时再小时再分离培养。分离培养。挑取无色半透明菌落，进行初步生化反应鉴定。挑取无色半透明菌落，进行初步生化反应鉴定。符合志贺菌生化反应特征可进行血清学鉴定符合志贺菌生化反应特征可进行血清学鉴定血清学鉴定先用志贺氏多价诊断血清作玻片凝集试验，血清学鉴定先用志贺氏多价诊断血清作玻片凝集试验，若凝集再用若凝集再用A A、B B、C C、D D群诊断血清鉴定到种、型。群诊断血清鉴定到种、型。血清学鉴定需注意血清学鉴定需注意K K抗原的阻断作用，并应考虑是否为抗原的阻断作用，并应考虑是否为EIECEIEC。8/4/202452沙门氏菌和志贺氏菌的检测志贺菌鉴定初步鉴定 挑取可疑菌落接种KIA、MIU培养基 若符合KIA：KA；MIU：/，再作志贺菌多价诊断血清玻片凝集试验最后鉴定：全面生化反应和单价血清玻片凝集试验若出现生化反应符合，血清学不凝集现象，应考虑K抗原的阻断作用，可将菌液加热1001530min后，重复凝集试验，仍不凝集可考虑EIEC，需进行鉴别。8/4/202453沙门氏菌和志贺氏菌的检测志贺菌血清学鉴定志贺菌血清学鉴定先用志贺菌多价诊断血清鉴定群，再用先用志贺菌多价诊断血清鉴定群，再用A A、B B、C C、D D群单价血清鉴定血清型。群单价血清鉴定血清型。A A群以群以1 1、2 2型为主，多有型为主，多有K K抗原抗原C C群型别多群型别多D D群只有群只有1 1个血清型个血清型B B群型别多，抗原结构复杂，多无群型别多，抗原结构复杂，多无K K抗原。抗原。我国以我国以B B群为主群为主8/4/202454沙门氏菌和志贺氏菌的检测不典型菌株的鉴定不典型菌株的鉴定在鉴定中如遇生化反应符合，血清学不在鉴定中如遇生化反应符合，血清学不凝集；血清学凝集，生化反应不符合，凝集；血清学凝集，生化反应不符合，可考虑不典型菌株。可考虑不典型菌株。将不典型菌株在肉汤中反复传代，促其将不典型菌株在肉汤中反复传代，促其恢复典型性状恢复典型性状8/4/202455沙门氏菌和志贺氏菌的检测志贺菌鉴定依据志贺菌鉴定依据肠道选择平板上无色半透明菌落肠道选择平板上无色半透明菌落KIAKIA：KAKAMIUMIU：/与志贺菌多价诊断血清和各群血清凝集与志贺菌多价诊断血清和各群血清凝集注意与注意与EIECEIEC、类志贺邻单胞菌、动力不、类志贺邻单胞菌、动力不明显的沙门菌鉴别明显的沙门菌鉴别8/4/202456沙门氏菌和志贺氏菌的检测与EIEC的鉴别8/4/202457沙门氏菌和志贺氏菌的检测与类志贺邻单胞菌的鉴别8/4/202458沙门氏菌和志贺氏菌的检测与动力不明显、与动力不明显、H H2 2S S阴性沙门菌的鉴别阴性沙门菌的鉴别8/4/202459沙门氏菌和志贺氏菌的检测志贺菌快速鉴定试验志贺菌快速鉴定试验直接凝集试验直接凝集试验免疫荧光菌球法免疫荧光菌球法协同凝集试验协同凝集试验乳胶凝集试验乳胶凝集试验分子生物学方法分子生物学方法8/4/202460沙门氏菌和志贺氏菌的检测