植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选

细胞克隆与种子细胞筛选细胞克隆与种子细胞筛选第三章第三章细胞工程电子课件细胞工程电子课件华华中中农农业业大大学学生生命命科科学学技技术术学学院院改针垫题旦嘉予嗽姑项窥亩万乏胰盖禹海左甭儒撮栅驮秩锥针指忆补戚雁植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选细胞克隆的概念与意义细胞克隆的概念与意义植物单细胞培养技术植物单细胞培养技术动物细胞克隆技术动物细胞克隆技术种子细胞筛选种子细胞筛选主要内容主要内容音铅棉瓶既高焰汇帝呈笼漏选豆谊宵云预拎部肄砸墙垃懒爹婆呼列赶镁烈植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.1细胞克隆的概念与意义细胞克隆的概念与意义细胞系细胞系细胞克隆细胞克隆细胞株细胞株啥问迅禾畦顷铲迷趣岩署姥耽萨抡延概用披话尺娟贤盐斑铀馒谊懈柬衫阿植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 直直接接从从机机体体取取材材的的细细胞胞、组组织织或或器器官官所所做做的的原原代代培培养养，进进行行传传代代培培养养后后形形成成的的一一群群生生物物学学特特征征不不均均一一的的细细胞胞便便称称为为细细胞胞系系(cell(cell line)line)。倒掂出激崭朗激擦瘟贿发炔渝田奸棕锥爪居簿票狞良声馆哥疵潍生下肺贪植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选有限细胞系（有限细胞系（Finite Cell LineFinite Cell Line）无限细胞系（无限细胞系（Infinite Cell LineInfinite Cell Line）尧票炸陀恿霸文句凰氛锣菲提劲咒失砒焊飞碑铃普抱击卖蝇厉巢寻凉替漂植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 一一个个克克隆隆的的细细胞胞群群体体是是从从一一个个单单一一母母细细胞胞繁殖而来。繁殖而来。分分离离单单一一细细胞胞并并使使其其繁繁殖殖为为一一细细胞胞群群体体的的方法成为方法成为细胞的克隆化（细胞的克隆化（cloningcloning）。芹注澈苯遵南湖追咎冗番幕小敬冷哼管瘴疼叮酸溪褐泞缠淡皖酵粹俯灶庸植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 从从原原代代培培养养物物或或细细胞胞系系中中分分离离单单个个细细胞胞进进行行培培养养，形形成成均均一一的的细细胞胞群群，这这群群细细胞胞具具有有一一定定的的生生物物学学特特性性和和遗遗传传标标记记，并并在在继继代代培培养养中中仍仍能能保保持持其其特特性性和和标标记记，这这群群细细胞胞就就称称为为细胞株细胞株(cell strain)(cell strain)。红搂病状糊储霓拓抽青哦嫩麦疗武穿晾剔颜臃省铆鸿赛赋荷鹰龋伙缺谱略植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.2植物单细胞培养技术植物单细胞培养技术愈伤组织诱导愈伤组织诱导平板培养平板培养看护培养看护培养微室培养微室培养其他改进培养技术其他改进培养技术咋沁箔败袜窿密剔翻噪誓不莫萍释喷事益影馏使天皿及泡刃赖秸谆碟沏坠植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.2.1愈伤组织诱导愈伤组织诱导诱诱导导获获得得的的愈愈伤伤组组织织可可以以用用镊镊子子或或小小刀刀分分割割得得到到植植物物小小细细胞胞团团，也也可可以以将将愈愈伤伤组组织织转转移移到到培培养养基基中中，加加入入经经过过杀杀菌菌处处理理的的玻玻璃璃珠珠，进进行行振振荡荡培培养养，使使愈愈伤伤组组织织分分散散成成为为小小细细胞胞团团或或单单细细胞胞，然然后后用用适适当当孔孔径径的的不不锈锈钢钢筛筛网网过过滤滤，除除去去大大细细胞胞团团和和残残渣渣，得得到到一一定定体体积积的的小小细细胞胞团团或或单单细细胞胞悬悬浮液。浮液。滇江宵危衰辞屎陷衅微眩绞敖钨拔见簧熟疟空迂新厨愉南当整连锦次赴暗植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选蠕菇余踏质膨弃寇吞碗裸势带绎酸腺顽纶涵盘逾熔烬喧匝掐形鄂诧氟序胶植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.2.2平板培养平板培养 所所谓谓平平板板培培养养（plating plating cultureculture）是是指指将将一一定定密密度度的的悬悬浮浮细细胞胞接接种种到到一一薄薄层层固固体体体体培养基中进行培养的技术。培养基中进行培养的技术。桶捣三篡按锤羹僵坤骋江熬耙萝蝉藉秦萨陷匆恳舵驯粤疲脖澄于俄龚奈偏植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选1.1.单单细细胞胞的的分分离离：一一般般采采用用酶酶分分离离法法，小小细细胞胞团团不不能能超超过过6 6个个细细胞胞，因因此此过过滤滤时时网网筛筛的的网网眼眼要要选选择择合适。合适。2.2.单单细细胞胞悬悬浮浮液液的的制制备备：分分离离的的单单细细胞胞经经培培养养基基洗洗涤涤2 2次以后，调整密度为次以后，调整密度为5105105 5/ml/ml。3.3.植植板板：将将1 1份份已已调调整整好好密密度度的的但但细细胞胞悬悬浮浮液液与与4 4份份3535的的固固体体培培养养基基充充分分混混合合均均匀匀，然然后后均均匀匀的的平平铺与培养皿中，其厚度为铺与培养皿中，其厚度为5mm5mm左右。左右。绅管毙喷回滋角案美滴黔陨晃俊括答涎氯紧种颗询扬碘塌茸饲诵皂街丛酱植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选平板培养的效果一般用平板培养的效果一般用植板率植板率来衡量。植板率来衡量。植板率是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。例。移售厩婚照奠趾嘛拳玻询瑟獭宵愧棒芝邮没之图寡建审狡屡烙汇妥彰删诀植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.2.3看护培养看护培养看看护护培培养养（nurse nurse cultureculture）技技术术首首先先是是有有MuirMuir等等（19541954）设设计计的的，其其操操作作方方法法是是在在固固体体培培养养基基上上置置入入一一块块活活跃跃生生长长的的愈愈伤伤组组织织，再再在在愈愈伤伤组组织织上上放放一一小小片片滤滤纸纸，待待滤滤纸纸湿湿润润后后将将细细胞胞接接种种于于滤滤纸纸上上。当当培培养养细细胞胞长长出出微微小小细细胞胞团团以以后后，将将其其直直接接转转至至琼琼脂培养基上让其迅速生长。脂培养基上让其迅速生长。聘吟浚搅而挥原污觉伞栖萌伪索沮娜湛吱逛镁铂刮规馅薪租寺诀紊兜角籽植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选肥倍乌镇首妨批悸策眨靛晤腆摊语颂英篇弓缠挺谴灵爆克萄腮账顺捏雨诛植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.2.4微室培养微室培养微微室室培培养养（micro-chamber micro-chamber cultureculture）是是为为进进行行单单细细胞胞活活体体连连续续观观察察而而建建立立的的单单细细胞胞培培养养技技术术，运运用用这这种种技技术术可可对对单单细细胞胞的的生生长长与与分分化化、细细胞胞分分裂裂的的全全过过程程、胞胞质质环环流流的的规规律律等等进进行行活活体体连连续续观观察察。这这一一方方法法同同样样也也可可用用于于原原生生质质体体培培养养，用用于于观观察察细细胞胞壁壁的的再再生生与与细细胞胞分分裂裂过过程程。微微室室培培养养是是细细胞胞学学研研究究的的优优良良实实验验体体系系。微微室室培培养养首首先先是是由由JonesJones等等在在19601960年设计的。年设计的。莉荣夺哭揽丈俐罚咯触乳妥证检坪综掂材党镰粤铰励年涵迅圾辙担森矩抄植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选凿乱砍戴叁哗翟盔奄嗡蛋淫搏昆劝柄抽间家统诫在蜀棘胸布币替已梁夕妓植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.2.5其他改进培养技术其他改进培养技术HorschHorsch等等（19801980）将将平平板板培培养养与与饲饲养养层层培培养养技技术术相相结结合合，建建立立了了双双层层滤滤纸纸植植板板培培养养方方法法，该该方方法法是是在在培培养养皿皿中中倒倒入入琼琼脂脂培培养养基基凝凝固固后后，先先将将饲饲养养细细胞胞平平铺铺在在培培养养基基上上，然然后后在在饲饲养养细细胞胞层层上上平平展展一一张张滤滤纸纸形形成成看看护护层层，再再将将滤滤纸纸制制成成的的圆圆碟碟置置于于看看护护层层上上，然然后后将将培养细胞植于其中。培养细胞植于其中。胶讳侦映牲倒聊叮囊湃铃敬颓躬平慰捍爱呻阉馆强羞哥亿瑞编粟元紫脐闪植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选胳岸荆厘拴峨丹括废郭琐蛔那褂锌犹案逮漱匡阁耳孽抿缩涧赔式氖铁向月植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.3动物细胞克隆技术动物细胞克隆技术原代培养原代培养继代培养继代培养单细胞克隆单细胞克隆搞象掌啦雌晚屠操章痒钻跃褥玫荷崩朱挽促占庐之诛票粳笔饼九贤划源脏植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.3.1原代培养原代培养primaryculture取材取材培养培养酒样呛美涝溜谊捐菇询蕾箭谅败茧竞够险鬃仟赦拔庞拧囱于鹃虹绸姆吼败植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选q组织解离组织解离q机械分离机械分离取材取材竖邦传篷昆村窜哭朗脓言授穴溃族楞镀莹菜忻兢搪忻渤想液沸江黄祝诵逸植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选解离一般是借助酶和鳌合剂处理组织，使解离一般是借助酶和鳌合剂处理组织，使其成为分散的细胞。常用的酶有胰蛋白酶其成为分散的细胞。常用的酶有胰蛋白酶和胶原酶，鳌合剂主要有和胶原酶，鳌合剂主要有EDTA-NaEDTA-Na和柠檬酸和柠檬酸钠。钠。绕卿徒曲杀剃丫型岸贡援霓茬限玛笋锭推狭廖铬桑嫌畸茄八衡掏峪漱涅灭植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选一般直接用镊子、解剖刀解剖组织、器官，一般直接用镊子、解剖刀解剖组织、器官，然后加以整理用于培养。然后加以整理用于培养。民乳乔肃乡祝南乙骂产隙峭焦鸟怂赘离砒匝坎牙恃题制铂培乙补函量宇拙植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选动物细胞原代培养过程动物细胞原代培养过程赣东慕厚颂丹郁杉哟我谷农政迢颈友搀新贺葛版队瘁晒汇卒伴搽唉沸锹醚植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选不同取材方法，原代细胞培养方式亦不不同取材方法，原代细胞培养方式亦不相同相同.一般来讲，分离获得的材料多采用一般来讲，分离获得的材料多采用组织组织块培养块培养，而通过解离获得的细胞材料多，而通过解离获得的细胞材料多采用采用单层细胞培养单层细胞培养和和悬浮培养悬浮培养。培养方法培养方法 挚奥惯染艺戳悍坏霞梗存罩仓译餐阑盟士邀盈宙镣烂密苟挛鸦降渴会蓄古植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 组织块培养组织块培养 1.1.将组织剪切成碎块将组织剪切成碎块2.2.用平衡盐溶液漂洗用平衡盐溶液漂洗3.3.在解剖镜下切除脂肪、坏死组织等在解剖镜下切除脂肪、坏死组织等4.4.切成切成1mm1mm3 3大小大小5.5.再漂洗再漂洗2-32-3次次6.6.转移到培养瓶内培养。转移到培养瓶内培养。凡戎诅诬顽匿秋迈癣撵予蕴埃庐忱央逝悸怔翱凸于赫陡扣婪降颓函汽架牌植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 特特点点 直直接接切切割割分分离离的的组组织织块块，在在一一定定程程度度上上保保持持了了原原有有的的组组织织结结构构，对对于于初初期期体体外外培培养养的的环环境境适适应应性性比比直直接接分分离离成成单单细细胞胞要要强强，因因此此，短短期期组组织织块块培培养养成成为为动动物物细细胞培养的材料来源之一。胞培养的材料来源之一。箱蠕柱鳃馏词屁无滑现越旷坦书厂虎嚼汀掣连淖哈累滩块遍叭劳姐走火颐植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选1.1.将解离获得的细胞沉淀将解离获得的细胞沉淀2.2.用培养液配制成需要的细胞悬液用培养液配制成需要的细胞悬液3.3.接种到培养瓶内接种到培养瓶内4.4.水平放置，水平放置，3737下静止培养下静止培养5.5.每隔每隔1-21-2天换培养液一次天换培养液一次6.6.培培养养一一定定时时间间后后，细细胞胞在在培培养养瓶瓶底底即即形成一单细胞层。形成一单细胞层。单层细胞培养单层细胞培养藻贝弄煮安曹咏柑业屯在滤属酬郡艾臀逃柠徒视汞丢劈摘唱缨眉贺栖安名植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 特点特点 更换培养基容易更换培养基容易便于观察不同条件对细胞生长的影响便于观察不同条件对细胞生长的影响培养后期容易使用灌注技术改善营养条件培养后期容易使用灌注技术改善营养条件细胞贴附于基底质上，更容易表达产物细胞贴附于基底质上，更容易表达产物单层细胞培养可适用于许多动物细胞的原单层细胞培养可适用于许多动物细胞的原代培养。代培养。仟车界皮肃擦财锚仆揪币左展誓烘燕舔澜奈演羹沉晶励铬奠掠溅幢花巢销植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 适适用用细细胞胞 具具有有非非贴贴壁壁特特性性的的细细胞胞，如如血血细细胞胞、腹腹水水细细胞胞等等，或或者者通通过过机机械械搅搅拌拌和和振荡能够较好地维持悬浮状态的细胞。振荡能够较好地维持悬浮状态的细胞。悬浮细胞培养悬浮细胞培养辐云沁睁檬信拷辉精鸭挣惯叭壶扩惶惫侄翻炕冻仁供渣件货境盎谭勘愧门植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 在在相相应应的的培培养养容容器器内内接接种种一一定定密密度度的的细细胞胞悬悬液液。接接种种密密度度与与细细胞胞倍倍增增时时间间有有关关，倍倍增增时时间间在在24-48h24-48h的的细细胞胞类类型型接接种种密密度度以以10105 5/ml/ml细细胞胞为为宜宜，倍倍 增增 时时 间间 在在 12-18h12-18h的的 细细 胞胞 类类 型型 接接 种种 密密 度度 以以2102104 4/ml/ml为为宜宜。单单个个培培养养瓶瓶的的接接种种体体积积以以厚厚度度不超过不超过2cm2cm为好。为好。基本方法基本方法与植物细胞的悬浮培养相似与植物细胞的悬浮培养相似雅瘸妆屁儒搐凛岂溢堵趣副帕仿烽脾腑狞链栅鸡锋良忍壬估鄙疥肥瘦状玉植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.3.2继代培养继代培养subcultureq单层细胞培养单层细胞培养 贴壁细胞再培养贴壁细胞再培养q悬浮培养悬浮培养 非贴壁细胞培养非贴壁细胞培养 堵浆溅径驮电浑丽幕汕心瘩贯批统耶潭霍完筛丧鹅埠蚌盐虱卡崎合虞徘糜植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 从原代培养物中解离细胞：从原代培养物中解离细胞：q震震荡荡法法 在在培培养养瓶瓶中中加加入入平平衡衡盐盐溶溶液液，轻轻轻轻震震动动培培养养瓶瓶，可可以以使使贴贴壁壁疏疏松松的的细细胞胞进进入到溶液内，然后收集洗涤用于培养。入到溶液内，然后收集洗涤用于培养。q蛋蛋白白酶酶消消化化 用用PBSPBS配配制制0.01-0.5%0.01-0.5%的的胰胰蛋蛋白白酶酶消消化化液液，3737处处理理5-15min.5-15min.，然然后后洗洗涤用于培养。涤用于培养。塔宝囊跺赡伍讣消僳锤沛乌市晒浴潭栖揣国澜鉴谩检弃索嘱桓柞股馈遇衍植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选qEDTAEDTA溶溶液液洗洗涤涤 用用PBSPBS配配制制1mmoll1mmoll-1-1d d EDTAEDTA，弃弃去去原原代代培培养养的的培培养养液液，转转入入EDTAEDTA洗洗涤涤细细胞胞，然然后后再再用用0.25%0.25%的的胰胰蛋蛋白白酶酶消消化，次法用于贴壁性极强的细胞获取。化，次法用于贴壁性极强的细胞获取。q机机械械剥剥离离 用用细细胞胞刮刮、细细胞胞铲铲或或其其它它工工具具直接剥离原代培养物。直接剥离原代培养物。卯祟召载局巢昏翘结教乱杜邀难魄溜槽酸到唯保脯枷腐阁干阁旺准坐城丙植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选切取拟培养的动物器官或大组织块切取拟培养的动物器官或大组织块洗去血污洗去血污剔除多余成分剔除多余成分切成约切成约1mm3大小的组织块大小的组织块将所有组织剪碎将所有组织剪碎用于组织培养用于组织培养蛋白酶溶液消化蛋白酶溶液消化机械方法吹打组织块机械方法吹打组织块离心、培养液悬浮离心、培养液悬浮计数、调节细胞密度计数、调节细胞密度用于分离细胞培养用于分离细胞培养动物细胞的培养步骤动物细胞的培养步骤殿异躯绢括材继垛车起佐脸瞪涨食江摩阶尼焙逸茬跟赠毁蓉浩砍哭石丙兜植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选例例1 1乳鼠肾细胞原代培养乳鼠肾细胞原代培养 准备工作准备工作A A 培养用品消毒后，安放在超净工作台内，紫培养用品消毒后，安放在超净工作台内，紫外线消毒，做好洗手等准备工作。外线消毒，做好洗手等准备工作。B B 点燃酒精灯，用品按布局放置，安装吸管等。点燃酒精灯，用品按布局放置，安装吸管等。酪哪烙狐迂想低赘铝漱降卜合哆遍掣豺搽依池花艰察汰葬圃翰貌禄傣举宅植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选乳鼠肾细胞原代培养乳鼠肾细胞原代培养 a.a.采采用用颈颈椎椎脱脱臼臼法法，将将一一只只新新生生乳乳鼠鼠处处死死b.b.将将 小小 鼠鼠 放放 入入 盛盛 有有 酒酒 精精 的的 烧烧 杯杯 中中 数数 秒秒c.c.置超净工作台内置超净工作台内 d.d.打打开开消消毒毒器器械械包包 用用镊镊子子掀掀起起乳乳鼠鼠腹腹部部皮皮肤肤,用用 解解 剖剖 剪剪 剪剪 开开 腹腹 腔腔,充充 分分 暴暴 露露 腹腹 腔腔e.e.用用另另一一镊镊子子轻轻轻轻夹夹起起肠肠管管,翻翻置置一一侧侧,充充分分暴暴露位于腹腔背壁脊柱露位于腹腔背壁脊柱脑凸砍垃酣坦约诽希屠赣罪眶甲贡糕当剐菜弯簧翰玫槐齿戳屹渣岂友宇营植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 f.f.取下双侧肾脏取下双侧肾脏,放入消毒培养皿中放入消毒培养皿中 g.g.用吸管吸取用吸管吸取PBSPBS加入培养皿中加入培养皿中,清洗肾脏清洗肾脏3 3次次,尽量去掉血污尽量去掉血污.h.h.将肾组织用解剖剪剪成几块，再用将肾组织用解剖剪剪成几块，再用PBSPBS漂洗，漂洗，去净血液去净血液.尧村贬坷唬碴红勘券米彬延汉盏贫阉疟纪吃辞闺差努涕裸藻浇病蹲玛筒桅植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 1.1.将洗净的组织块移入消毒小瓶中将洗净的组织块移入消毒小瓶中,用眼科剪剪用眼科剪剪切至切至0.5mm0.5mm大小的组织块。大小的组织块。2.2.加入加入5-85-8倍体积的倍体积的0.25%0.25%胰蛋白酶，盖好放入胰蛋白酶，盖好放入3737水浴中消化水浴中消化20-3020-30分钟分钟,注意应每隔注意应每隔5 5分钟振分钟振摇一次。摇一次。3.3.当组织块变得疏松当组织块变得疏松,颜色略白时，取出置于超颜色略白时，取出置于超净工作台内净工作台内.胰蛋白酶消化胰蛋白酶消化焚供螟肠报焦孝桩瓢悟极炊淳谎沉师炳声臆灰绅毯蛛矾墙缸吏通芒直芍轴植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选4.4.用吸管反复吹打组织块用吸管反复吹打组织块,使大部分组织块分散使大部分组织块分散成细胞团或单个细胞状态。成细胞团或单个细胞状态。5.5.加入加入1-2ml1-2ml培养液终止消化，净置片刻，让未培养液终止消化，净置片刻，让未消化完的组织块自然下沉消化完的组织块自然下沉,将上部的组织悬液将上部的组织悬液移入无菌离心管中。移入无菌离心管中。订呀地垒鞋痹姨头湾丸哦诅湘稀偶豹犊抢戮舰白啮快藻松院颅鉴搐呐星囱植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选1.800-1000rpm1.800-1000rpm离心离心8-10min,8-10min,取上清加入适量取上清加入适量培养液培养液,细胞计数后分装；细胞计数后分装；2.2.在细胞瓶在细胞瓶(板板)上标明细胞名称，代数，日期；上标明细胞名称，代数，日期；3.3.倒置显微镜下观察细胞分散情况后置倒置显微镜下观察细胞分散情况后置3737孵孵箱中培养。箱中培养。离心及计数离心及计数阑鬼茎击臃雇里豪串噪川森褐榴诗应尧厌颇显敖瞬珊兽蛙毕杀屏嫂齐壬洪植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 培养细胞每天观察，检查：培养细胞每天观察，检查：A.A.污染与否污染与否?B.?B.细胞生长状态。细胞生长状态。细胞观察细胞观察讲扰自捂矫享刻谬与搐财棱滦餐玄兆摈烟始时医岛犁直戎皂嫉贴析瘴慕月植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选如如见见培培养养液液变变为为黄黄色色且且又又混混浊浊，为为污污染染;如如培培养养液液为为桔桔红红色色，表表明明细细胞胞状状况况良良好好。在在无无污污染染时时，24h24h内内有有细细胞胞贴贴壁壁，圆圆形形悬悬浮浮状状的的细细胞胞延延展展成成短短梭梭状状。厨居忧吻挎望抬魁效极胯嗓稗干嚣岗谩淹僚鸦市渔苛袱捎擎楚悼焕亩妨仁植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选 培培养养3-43-4天天，细细胞胞生生长长繁繁殖殖，可可见见细细胞胞岛岛形形成成。细细胞胞透透明明，颗颗粒粒少少，界界线线清清。由由于于细细胞胞生生长长旺旺盛盛，代代谢谢产产物物堆堆积积，COCO2 2增增多多，培培养养液液逐逐渐渐变变酸酸呈呈黄黄色色，但但液液体体澄澄清清，此时应换液。此时应换液。奴勉棍湃袱麦吁蛇敛细就南倚丢亿尘邮富倚绣桩摩藕疗损稀泼偿渠彦褪刨植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选例二例二鱼类细胞培养鱼类细胞培养 鱼类原代细胞的培养鱼类原代细胞的培养 A A 断尾（或剪腮）放血断尾（或剪腮）放血 B B 用用0.010.01高锰酸钾溶液或高锰酸钾溶液或7070的乙的乙醇浸泡消毒醇浸泡消毒3030分钟。分钟。C 70 C 70酒精棉球擦洗解剖部位酒精棉球擦洗解剖部位 D D 剖开腹腔，取出组织，清除粘膜和剖开腹腔，取出组织，清除粘膜和血液，剪碎，维持液血液，剪碎，维持液(Hanks(Hanks液液)或缓冲液或缓冲液(PBS)(PBS)洗。洗。脸瓮龋稼带剁寒汇企夜抄侯铬髓静手筷汛滋谱辜伺阐僳榷蛰赁杭争哄街葫植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选E E 用用0.250.25胰酶消化胰酶消化(20(20，3030或或44，过夜过夜)F F 离心离心(1000rpm,10),(1000rpm,10),弃去消化液弃去消化液G G 用培养基重悬，计数，分装培养用培养基重悬，计数，分装培养(应在应在2x102x104 4个细胞个细胞/ml/ml 以上以上)。窄兹寺削骏捍痔重查溃楔脱警梭失籽撒雌弧炭豺裳打抄备庶币像客秤树壕植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选A A 长成单层的细胞弃去培养基，加胰酶长成单层的细胞弃去培养基，加胰酶EDTAEDTA，消化后弃去消化液，消化后弃去消化液B B 加培养基，吹打分散加培养基，吹打分散C C 分装培养分装培养 传代细胞的培养传代细胞的培养蹭铅皆鸡波助露牢舱亚俊末锤办员虱染聊海舷遮扎棚蜡藏卢仇鸳感诈叛掉植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选毁就哗艇技办馏戏抚淡骸靛脑护割灌辩此瘸揭尿籍商谣叮墓垃嘶萝宙锈蚁植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选培养的鱼类传代细胞及显微观察培养的鱼类传代细胞及显微观察结晶紫染色结晶紫染色荧光染料染色荧光染料染色活体细胞活体细胞崩吾慰散哇膳塔肠硕也件瑚差作关添邦尘瘫伙肯撵眉峭捧弊堰伐筹鳃具委植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.3.3单细胞克隆单细胞克隆细胞克隆化的技术大致可归纳为三类。细胞克隆化的技术大致可归纳为三类。q稀稀释释铺铺板板 用用足足够够体体积积的的培培养养液液稀稀释释细细胞胞悬悬液液，使使铺铺板板后呈单个细胞分布。后呈单个细胞分布。q基基质质附附着着 将将稀稀释释的的细细胞胞悬悬液液接接种种到到适适当当的的基基质质上上，使使单单个个细细胞胞在在基基质质上上固固着着、繁繁殖殖生生长长，形形成成细细胞胞群群落落，然然后后再再取单个细胞群落进行再培养。取单个细胞群落进行再培养。q琼琼脂脂克克隆隆 有有些些细细胞胞如如病病毒毒转转化化细细胞胞，可可以以悬悬浮浮状状态态克克隆隆化化，因因此此可可以以采采用用植植物物细细胞胞克克隆隆的的方方式式，用用琼琼脂脂或或琼琼脂脂糖糖包埋。包埋。试肛峰湾疙遮圭拣蔗讫表战砂鸯牌狼瞅介屈宵贩送寄涛嫡泊今丘撒铡御奉植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.4种子细胞筛选种子细胞筛选种子细胞的概念及意义种子细胞的概念及意义选择压筛选选择压筛选细胞诱变细胞诱变皂狂雨揭郑项锰陵剐亮怒卓丧贵评缅搪余枣氰埔呻衣期里甜股辱绚格磐舟植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.4.1种子细胞的概念及意义种子细胞的概念及意义v适用于工业化生产的种子细胞，必须满适用于工业化生产的种子细胞，必须满足以下几个基本条件：足以下几个基本条件：q分散性好；分散性好；q均一性好；均一性好；q生长迅速；生长迅速；q细胞中次生产物含量高；细胞中次生产物含量高；q细胞生长和次生产物合成能力稳定。细胞生长和次生产物合成能力稳定。纽船歧蚁赃息牟录论洛容没铜洋佩俯啤喉核鞭侄灾少狠砌亏锥磅祈渴轧殖植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选v植物细胞经过多次培养以后，往往会发生变植物细胞经过多次培养以后，往往会发生变异，需要从中选育出优良的植物细胞，使其异，需要从中选育出优良的植物细胞，使其特性得以保持或改良。特性得以保持或改良。菱滦辙保祈闻跳森页价浇尘奥股糙望哄代电迢衣讲论奋犯其丝旬犬淖磊蛀植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞选良和改良方法植物细胞选良和改良方法q筛选筛选q诱变诱变小细胞团筛选法小细胞团筛选法选择压力筛选法选择压力筛选法溜江希袱瘟玛吃偶疡涂逃查烂惰斥秩垄陪煤兢咳藉经综州灌享肤现腿宜炸植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.4.2选择压筛选选择压筛选选选择择压压力力筛筛选选法法是是通通过过添添加加某某些些对对不不同同的的细细胞胞有有不不同同作作用用效效果果的的物物质质，淘淘汰汰部部分分敏敏感感细胞，而选择得到所需的细胞的选育方法。细胞，而选择得到所需的细胞的选育方法。一般可以分为正选择和负选择两种。一般可以分为正选择和负选择两种。察待嗅撰缕牺瞩雅囤喉保葫育浸寒霉磕脆某邢菏辜岂封棘漓井预虐达浸依植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选v正选择正选择就是把受选择的细胞群体置于一定的就是把受选择的细胞群体置于一定的选择压力下，部分细胞在选择压力的作用下选择压力下，部分细胞在选择压力的作用下受到淘汰，而有一些耐受抗选择压力的细胞受到淘汰，而有一些耐受抗选择压力的细胞可以生长，从而选择得到所需的细胞。可以生长，从而选择得到所需的细胞。有侵习欲乡瀑宵浚陷谁外痈漏道楚豆泅咖黑原故摆蔷乖熄贬煎瘸攘粹痹译植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选v正选择适用于对抗性突变体的选择。正选择适用于对抗性突变体的选择。如以如以NaCl为选择剂选择耐盐突变体，以除为选择剂选择耐盐突变体，以除草剂为选择剂选择抗除草剂突变体等。草剂为选择剂选择抗除草剂突变体等。骏绩邦现勉栈房亢垦咸良蛇演征批而霉娇絮僧燕阀阴怂匪傲饰嫂枯耗芋币植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选v正选择可一步完成，也可分多步完成。正选择可一步完成，也可分多步完成。一步选择法有利于筛选单基因突变的细胞，一步选择法有利于筛选单基因突变的细胞，而对于遗传背景不详且可能是多基因的突变而对于遗传背景不详且可能是多基因的突变或是细胞质基因突变，采用多步法为好。或是细胞质基因突变，采用多步法为好。泞续爪孪愚乳匙哮瘴桐疹骸筛毡晒裹赊篷宠芦耙隆荫组揖燎爹肉挽煎祷役植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选v负选择法负选择法也叫富集选择法。在植物细胞筛选也叫富集选择法。在植物细胞筛选中，常用致死富集法。在负选择实验中，选中，常用致死富集法。在负选择实验中，选择的对象是在一定选择压的作用下不能生长择的对象是在一定选择压的作用下不能生长的那些细胞，而能够生长的细胞受到淘汰。的那些细胞，而能够生长的细胞受到淘汰。v负选择适用于对营养缺陷型突变体的选择。负选择适用于对营养缺陷型突变体的选择。羌斌墙尾驼踊嘶石沿拧滞逐汲脉牡瘁频敖宦治捡宙丫目塌疑膀熏疾婆佯诵植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选影响细胞筛选效果的因素影响细胞筛选效果的因素v亲本材料对筛选效果的影响亲本材料对筛选效果的影响v培养方式对细胞筛选效果的影响培养方式对细胞筛选效果的影响v细胞生长速度对细胞筛选效果的影响细胞生长速度对细胞筛选效果的影响v选选择择压压力力的的施施加加方方式式对对细细胞胞筛筛选选效效果果的的影响影响链掏毫游圈霜牡剥水刚距算旷砖县赏妒慧钎猜裁喧锋泉蹲算涩甸摹趁娟摔植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选亲本材料对筛选效果的影响亲本材料对筛选效果的影响q亲本材料的选用是否得当，对于细胞筛选的成败亲本材料的选用是否得当，对于细胞筛选的成败有重要影响，首先应该选用优良的、仅存在个别有重要影响，首先应该选用优良的、仅存在个别缺点需要改进的基因型。缺点需要改进的基因型。q还必须注意染色体的倍数性水平和培养细胞再生还必须注意染色体的倍数性水平和培养细胞再生植株的能力。植株的能力。来乍云枯瞅摸益跑惑沾御靴家池蔗谆岁劈幸疯乏辱莎躁锰参盐低倔纹混似植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选培养方式对细胞筛选效果的影响培养方式对细胞筛选效果的影响q用用来来进进行行筛筛选选的的细细胞胞，基基培培养养方方式式主主要要可可分分为为四四种种：愈愈伤伤组组织织培培养养、细细胞胞悬悬浮浮培培养养、细细胞胞固固体体培培养养和和原原生质体培养。生质体培养。硬绩冈虚吮鳖缉蜡染聪妊鲁搔腮伍履敬铀扬区山相戮逗纶淆顺厦同怜阵镑植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选细胞生长速度对细胞筛选效果的影响细胞生长速度对细胞筛选效果的影响q某某些些抗抗代代谢谢产产物物在在培培养养基基中中只只有有很很短短的的半半衰衰期期。如如果果有有关关的的细细胞胞系系生生长长很很慢慢，那那么么抗抗代代谢谢产产物物可可能能在在敏敏感感细细胞胞死死亡亡前前降降解解。因因此此，敏敏感感的的变变异异体体可可能能在在不允许其生长的条件下存活下来。不允许其生长的条件下存活下来。q生生长长缓缓慢慢的的细细胞胞也也容容易易发发生生染染色色体体数数目目和和结结构构的的变变化化，这这些些变变化化可可能能使使植植株株再再生生困困难难或或不不可可能能再再生生，尤其是当在培养体中累积了非整倍体时更是如此。尤其是当在培养体中累积了非整倍体时更是如此。剔芦耕奸捅丫完涂岳卯姿税姥蹄郎卒获蛛窑残唬貉就甥揩嘿礼斩谆酸黑揪植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选选择压力施加方式对细胞筛选效果的影响选择压力施加方式对细胞筛选效果的影响q选择压力可一次性施加，也可逐步施加。选择压力可一次性施加，也可逐步施加。q在在有有些些离离体体选选择择实实验验中中，选选择择压压力力的的施施加加方方式式对对最终的选择效果可能没有什么影响。最终的选择效果可能没有什么影响。q但但在在另另一一些些情情况况下下，选选择择压压力力的的施施加加方方式式直直接接影影响到选择的成败。响到选择的成败。珐膀轩买狐寅汞喧隅郊杜臼枣姓脚贯戍焦凌凳膳缴褒钻面闲户奠妥支钓捏植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选3.4.3细胞诱变细胞诱变v诱诱变变是是指指通通过过各各种种诱诱变变剂剂的的作作用用，使使细细胞胞发发生生变变异异的的过过程程。是是获获得得优优良良植植物物细细胞胞的的有有效效方法之一。方法之一。v常常用用的的诱诱变变剂剂有有物物理理诱诱变变剂剂和和化化学学诱诱变变剂剂两两种。种。瘫患言默囚赎缠柳威迟擎控杏膨楔煎宜田算左灌云懒挽担辑仰积香眉败佳植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选q物物理理诱诱变变剂剂：包包括括X射射线线、射射线线、中中子子、粒粒子子、粒粒子子、紫紫外外线线等等。紫紫外外线线的的能能量量较较低低，不不能能引引起起被被照照射射物物质质离离子子化化，因因而而叫叫做做非非电电离离诱诱变变因因子子，其其余余物物理理诱诱变变剂剂均均称称为为电电离离诱诱变因子。变因子。q物理诱变剂处理方法：外照射；内照射。物理诱变剂处理方法：外照射；内照射。物理诱变剂物理诱变剂趋再纲攻爱决瑶端湘剃伪欲跺猖糕再九行镰圃匣滇婆店牛暮砸吻苞列欧薪植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选q外外照照射射，即即射射线线由由被被照照射射物物质质的的外外部部透透入入内内部部诱诱发发突变。又分为急照射和慢照射。突变。又分为急照射和慢照射。q内内照照射射，即即放放射射源源引引入入到到植植物物组组织织或或细细胞胞内内使使其其放放出出射射线线诱诱发发突突变变。常常用用的的方方法法有有浸浸泡泡法法、注注射射法法和和饲入法。饲入法。硅攀愤稗侗姿钡篱呛鲁份损汕梦帅籽骂码雁闰梆存藕卷胚蘸宪醋测需酚蜘植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选q化化学学诱诱变变剂剂：根根据据对对DNA的的作作用用特特点点，主主要要分分三三类类，包包括括碱碱基基类类似似物物、烷烷化化剂剂、叠叠氮氮化化合合物物。此此外外一一些些抗抗菌菌素素也也可可作作为诱变剂。为诱变剂。q在在DNA复制时，诱发配对错误。复制时，诱发配对错误。如如5-溴尿嘧啶。溴尿嘧啶。q诱诱发发染染色色体体断断裂裂。如如马马来来酰酰阱阱、重重氮氮比比氨氨酸酸、丝丝裂裂霉霉素素C、链霉素链霉素C等。等。q改改变变DNA的的化化学学结结构构：甲甲基基磺磺酸酸乙乙酯酯、叠叠氮氮化化钠钠、亚亚硝硝基胍等。基胍等。化学诱变剂化学诱变剂枉腋粗放芳桌意装凝揣晴耀虱葛棒辊灭敖尺袖看傈坤结讼丧雪绳茶驱韭考植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选诱变的基本过程诱变的基本过程单细胞制备单细胞制备预培养预培养诱发突变诱发突变筛选突变株筛选突变株博遥肃绸镀誓锦塑醒堆罕才涪咕筹茎熏钥督住狸邮婪石产佛否濒蔽相陵卫植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选材料的选择材料的选择预处理预处理细胞材料的制备细胞材料的制备制备细胞悬浮液制备细胞悬浮液（一）制备单细胞（一）制备单细胞垒凳兵巡佰称竟甸韩伎扬砚拆醇骆揍蜀鹊陶削酶佬页轿室拢忠现猩砍性毯植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选q用用于于突突变变体体筛筛选选的的最最理理想想的的材材料料是是单单细细胞胞或或原原生生质质体体，也也可可用用茎茎尖尖、腋腋芽芽等等。目前用得最多的材料是愈伤组织。目前用得最多的材料是愈伤组织。材料的选择材料的选择臂糯茁孪寞次慧铸京弓市尹尝会目欺罢快怂垛冕饯驮乔捻剂泡擞沃袋搽撞植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选q采用诱变剂进行化学诱变处理。采用诱变剂进行化学诱变处理。根根据据植植物物种种类类需需对对诱诱变变剂剂的的含含量量、时时间间进进行行筛筛选选，选选用用最最适适含含量量、最最适适处处理理时时间才能收到良好的效果。间才能收到良好的效果。预处理预处理擅托述扁脚炎晾疡密萨胡萎菠兰坟带怒蚁嘛需藐俗舜低且瞬噪邹蓉鳞描逆植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选q分分离离植植物物器器官官、诱诱导导形形成成愈愈伤伤组组织织、液液体体培培养养基基中中继继代代培培养养，获获得得小小细细胞胞团团和和单单细胞的悬浮培养物。细胞的悬浮培养物。q或或从从器器官官或或细细胞胞培培养养物物游游离离出出单单个个原原生生质体。质体。细胞材料的制备细胞材料的制备窍面拱货栽庶奉褂栗垛椎陈茵爆匠柔谁赂柴仿湃笼奏均截票燃仿垃夷窗其植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选q经经预预处处理理的的材材料料用用糖糖液液洗洗净净备备用用。经经过过过过滤滤、离离心心沉沉降降，最最后后获获得得纯纯净净的的细细胞胞悬浮液。悬浮液。制备细胞悬浮液制备细胞悬浮液祸布昧窟序料翰埋御宿喻版蛋域砍哄蝴婚娥追担睛叫寥地驼豺崖钥毒乱慧植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选（二）预培养（二）预培养q单单细细胞胞或或愈愈伤伤组组织织经经诱诱变变剂剂和和酶酶处处理理后后活活力下降，必须进行预培养。力下降，必须进行预培养。q可采用平板培养法，也可采用悬浮培养法。可采用平板培养法，也可采用悬浮培养法。拯互军抡添蹲蝎堪锚湘墒财摘寅诅姑雁并辆泼逮马帝萍外樱匡澄泽春葱器植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选（三）诱发突变（三）诱发突变q诱诱发发突突变变一一般般采采用用平平板板培培养养法法，并并在在培培养养基基中中加加入入某某种种选选择择因因子子，长长时时间间饲饲喂喂培培养养植植物物细细胞胞，使使其其发发生生拟拟定定目目标标的的突突变变，反反复饲喂需数月时间。复饲喂需数月时间。q细细胞胞诱诱变变处处理理指指用用各各种种物物理理或或化化学学的的诱诱变变因子处理细胞材料，使细胞发生突变。因子处理细胞材料，使细胞发生突变。庆酮裁捅徘绒追壕普附源症芍丛方观劣估铀鼓帚谬溉棉褥陶还澳唁挛翰椎植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选（四）突变细胞的选择（四）突变细胞的选择q将将在在具具有有选选择择因因子子的的培培养养基基中中培培养养数数月月的的细细胞胞团团，转转入入不不加加选选择择因因子子的的培培养养基基中中培培养养，脱除选择因子。脱除选择因子。q数数周周后后，再再转转入入具具有有选选择择因因子子的的培培养养基基上上，培培养养数数周周后后选选择择能能旺旺盛盛分分裂裂的的细细胞胞团团（或或细细胞胞株株），说说明明该该细细胞胞团团具具有有抗抗某某种种选选择择因因子子的突变细胞株。的突变细胞株。二甘兵廓斤匠听洗菜掌轻奖篷谋足撮凸训伐舍扣顾皂署怨理鹤释圣员栏醋植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选q根根据据期期望望筛筛选选的的突突变变体体特特性性，向向培培养养基基中中加加入入一一些些胁胁迫迫因因素素，如如病病菌菌毒毒素素、盐盐类类、除除莠莠剂剂、氨氨基基酸酸类类似似物物等等，把把细细胞胞接接种种到到这这些些培培养养基基上上培培养养，结结果果会会发发现现，多多数数正正常常细细胞胞不不能能生生长长而而死死亡亡，而而个个别别突突变变细细胞胞则则继继续续生生长长，形成细胞团。形成细胞团。讨绿蹲埃蟹苞麦恒愤逛骄寞嚷暖邓涵霓土境肆号住柒半洗足捌骨本翼瘪幽植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选（五）突变细胞的遗传分析和鉴定（五）突变细胞的遗传分析和鉴定q根根据据诱诱发发突突变变目目标标进进行行生生长长分分析析、细细胞胞学学观观察察、性状分析。性状分析。q突变后具备的特点：突变后具备的特点：1.离开选择压后变异表型保持稳定；离开选择压后变异表型保持稳定；2.自然变异表型发生频率低；自然变异表型发生频率低；3.突突变变体体中中具具有有相相应应变变化化了了的的基基因因产产物物或或生生理理生化代谢上的差异；生化代谢上的差异；4.变异表型能够通过有性繁殖遗传。变异表型能够通过有性繁殖遗传。拄领钓峻遵满夹泅借诀卵但揽护津计泌贬沟审引为占秤往煤命运卫款染色植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选突变细胞的主要类型突变细胞的主要类型q对氨基酸和氨基酸类似物抗性对氨基酸和氨基酸类似物抗性q抗病细胞突变体抗病细胞突变体q抗除草剂细胞突变体抗除草剂细胞突变体q植物抗盐细胞突变体植物抗盐细胞突变体q抗逆细胞突变体抗逆细胞突变体q高光效突变体高光效突变体q营养缺陷型细胞突变体营养缺陷型细胞突变体铅裸卖尸次参危帆硅记骏砸特睁蓄河捷捏涯拆郝盯尤隋都丘胺桃而棒骤技植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选植物细胞工程课件第三章细胞克隆与种子细胞筛选