生化实验血糖的测定三组课件

血清葡萄糖浓度的测定血清葡萄糖浓度的测定主讲人：熊珍平主讲人：熊珍平第三小组成员第三小组成员:郑卓郑卓 郑子勤郑子勤 刘璐刘璐 黄巾帼黄巾帼血清葡萄糖浓度的测定主讲人：熊珍平11.1.血糖为何能保持恒定？血糖为何能保持恒定？2.2.什么是糖尿病？什么是糖尿病？3.3.临床上一般如何测血糖？临床上一般如何测血糖？4.4.实验室测血糖方法及比较实验室测血糖方法及比较？5.5.如何酶法测血糖？如何酶法测血糖？血糖为何能保持恒定？2血糖的来源、去路血糖的来源、去路 血糖的来源、去路 3生化实验血糖的测定三组课件4如果调节失衡，结果是什么？高血糖如果调节失衡，结果是什么？高血糖或者低血糖。或者低血糖。低血糖：生理性和病理性。低于低血糖：生理性和病理性。低于2.8 mmol/L。高血糖：高血糖：生理性生理性和和病理性病理性。高于。高于7.1 mmol/L。高于。高于8.89 mmol/L，出现糖尿。最常见病理性高血糖：，出现糖尿。最常见病理性高血糖：糖尿病。糖尿病。糖尿病：高血糖和糖尿。临床特点：糖尿病：高血糖和糖尿。临床特点：三多一少三多一少。病。病因：因：胰岛素分泌缺陷和胰岛素受体缺陷胰岛素分泌缺陷和胰岛素受体缺陷。糖尿病诊断标准？糖尿病诊断标准？如果调节失衡，结果是什么？高血糖或者低血糖。高血糖：生理性和5 糖尿病（糖尿病（diabetes）是由）是由遗传因素、免疫遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白糖、蛋白质、脂肪、水和电解质质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合等一系列代谢紊乱综合征，征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现出现多尿、多饮、多食、消瘦多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即等表现，即“三三多一少多一少”症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好会引发并发症，导致会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈病变，且无法治愈。糖尿病（diabetes）是由遗传因素、免疫61.相关临床知识胰岛B细胞靶细胞胰岛素胰岛素I 型糖尿病（型糖尿病（T1DM）l别名名：青年：青年发病型糖病型糖尿病尿病或胰或胰岛素依素依赖性糖尿病。性糖尿病。l原因原因：胰腺：胰腺产生胰生胰岛素的素的细胞已胞已经彻底底损坏。坏。l易易发病人群病人群：年：年龄轻，大多大多3030岁l治治疗：依：依赖胰胰岛素治素治疗II 型糖尿病（型糖尿病（T2DM）l别名名：非胰：非胰岛素依素依赖型糖尿病型糖尿病l原因原因：自身能：自身能产生胰生胰岛素，但素，但细胞无法胞无法对其做出反其做出反应。l易易发病人群病人群：中老年：中老年人，肥胖者人，肥胖者l治治疗：需要胰：需要胰岛素素单独或与口服独或与口服药联合合应用的治用的治疗有些患者血糖含量并不稳定，有什么办法进一步更准确诊断？有些患者血糖含量并不稳定，有什么办法进一步更准确诊断？1.相关临床知识胰岛B细胞靶细胞胰岛素I 型糖尿病（T1DM7生化实验血糖的测定三组课件8一般正常人进食后血糖都会一般正常人进食后血糖都会暂时性升高暂时性升高，进食后进食后30分种或分种或60分种可升到最高峰分种可升到最高峰，但，但血糖一般不超过血糖一般不超过8.9mmol/L；进食进食2小时后小时后又会回到空腹水平又会回到空腹水平，这就是人体，这就是人体对糖的耐对糖的耐受现象受现象。什么是什么是口服葡萄糖耐量试验口服葡萄糖耐量试验（Oralglucosetolerancetest，OGTT）？）？有何临床意义？有何临床意义？一般正常人进食后血糖都会暂时性升高，进食后30分种或60分种9口服葡萄糖耐量试验（口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose Oral glucose tolerance testtolerance test，OGTTOGTT）是一种口服葡是一种口服葡萄糖负荷试验，用以了解人体对进食葡萄糖负荷试验，用以了解人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力。萄糖后的血糖调节能力。通过通过OGTTOGTT试验，可以试验，可以早期发现糖代谢异早期发现糖代谢异常，早期诊断常，早期诊断糖尿病糖尿病(Diabetes(Diabetes Mellitus,DM)Mellitus,DM)，是一种简单、快捷的是一种简单、快捷的诊断方法。诊断方法。口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose toleran10测试前禁食测试前禁食10-16小时，清晨空腹进行。空小时，清晨空腹进行。空腹抽静脉血，测空腹静脉血浆葡萄糖，然腹抽静脉血，测空腹静脉血浆葡萄糖，然后后成人口服成人口服75g无水葡萄糖无水葡萄糖，溶于溶于250ml水水中，中，510分钟内饮完分钟内饮完。饮后。饮后2小时抽静脉血，小时抽静脉血，测静脉血浆葡萄糖。测静脉血浆葡萄糖。mmol/L测试前禁食10-16小时，清晨空腹进行。空腹抽静脉血，测空腹11IFG 与 IGT空腹血糖损伤空腹血糖损伤(ImpairedFastingGlucose,IFG)：空腹血糖：空腹血糖6.1mmol/L,但但7.0mmol/L糖耐量受损糖耐量受损(ImpairedGlucoseTolerance,IGT)：餐后：餐后2h血糖血糖7.8mmol/L,但但11.1mmol/LIFG和和IGT可以说是一种可以说是一种正常人向糖尿正常人向糖尿病的过渡状态病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是，这部分人虽然现在还不是糖尿病，糖尿病，但是将来发生但是将来发生2型糖尿病的危险型糖尿病的危险性非常高，可以说是性非常高，可以说是糖尿病的后备军糖尿病的后备军。据。据有关研究报道，每年有关研究报道，每年5-8%的的IGT者将发展者将发展成为成为2型糖尿病。型糖尿病。IFG 与 IGT空腹血糖损伤(Impaired Fasti12无糖尿病史，空腹或者随机血糖异常无糖尿病史，空腹或者随机血糖异常无糖尿病史，有一过性或持续性糖尿无糖尿病史，有一过性或持续性糖尿无糖尿病史，有明显糖尿病家族史无糖尿病史，有明显糖尿病家族史有糖尿病症状，但空腹或者随机血糖有糖尿病症状，但空腹或者随机血糖不够标准不够标准分娩巨大胎儿的妇女和有巨大胎儿史分娩巨大胎儿的妇女和有巨大胎儿史的个体的个体不明原因肾病和视网膜病不明原因肾病和视网膜病妊娠期、甲亢、感染期出现糖尿者妊娠期、甲亢、感染期出现糖尿者OGTT的适应症无糖尿病史，空腹或者随机血糖异常OGTT的适应症13糖化血红蛋白糖化血红蛋白A1血液内的红血球内含血液内的红血球内含血红蛋白血红蛋白(HAEMOGLOBULIN HB)。它们会和血液内中的。它们会和血液内中的葡萄糖葡萄糖结合而成结合而成糖化血红蛋糖化血红蛋白白(HBA1C)。由于红血球在身体只存活由于红血球在身体只存活8-12个星期个星期，因此糖化血红蛋，因此糖化血红蛋白白(HBA1C)就可以显示在过去就可以显示在过去8-12星期的星期的血糖水平血糖水平。这。这个指数比起血糖更能个指数比起血糖更能显示糖尿病症是否受到控制显示糖尿病症是否受到控制。正常的糖化血红蛋白正常的糖化血红蛋白A1(HBA1C)的正常值为：的正常值为：5.89 0.9%(4.99-6.79%);超过超过7%显示控制糖尿的水平不佳。显示控制糖尿的水平不佳。糖化血红蛋白A1血液内的红血球内含血红蛋白(Haemoglo14血糖测定方法血糖测定方法无机化学法：如无机化学法：如Folin-Wu法法有机化学法：如邻甲苯胺法有机化学法：如邻甲苯胺法酶法：己糖激酶法，酶法：己糖激酶法，酶法：葡萄糖氧化酶法酶法：葡萄糖氧化酶法血糖测定方法无机化学法：如Folin-Wu法15原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 Cu2+还原成还原成Cu+，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量的含量 稳定、准确、稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖但对葡萄糖无特异性，受血中非糖还原物质的影响。还原物质的影响。空腹正常血糖参考值空腹正常血糖参考值 4.46.7mmol/L或或80-120mg/dL无机化学法：无机化学法：Folin-Wu法法原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 Cu2+还原成Cu16有机化学法：邻甲苯胺法有机化学法：邻甲苯胺法原理：原理：葡萄糖为一含醛基的已糖，在酸性条件下加热，可脱水生成葡萄糖为一含醛基的已糖，在酸性条件下加热，可脱水生成5-羟羟甲基甲基-2-呋喃甲醛呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合成青色的，后者与邻甲苯胺缩合成青色的Schiff碱。碱。Schiff碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。评价：操作简便，由于邻甲苯胺只与醛糖作用而显色，故此种测定评价：操作简便，由于邻甲苯胺只与醛糖作用而显色，故此种测定法法不受血液中其他还原物质的干扰不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质，因此该实验的特异性较高。中的蛋白质，因此该实验的特异性较高。有机化学法：邻甲苯胺法原理：17酶法：己糖激酶法（酶法：己糖激酶法（Hexokinase,HK）n原理：原理：NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。n评价评价：本法特异性高，本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分，适用于自动化分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵试剂较贵。酶法：己糖激酶法（Hexokinase,HK）原理：NA18酶法：葡萄糖氧化酶法（酶法：葡萄糖氧化酶法（glucoseoxidase,GOD）葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，GOD)利用氧和水利用氧和水将葡萄糖氧将葡萄糖氧化为葡萄糖酸化为葡萄糖酸，并释放，并释放过氧化氢过氧化氢。过氧化氢过氧化氢在在过氧化物酶过氧化物酶(peroxidase，POD)作用下，分解为水作用下，分解为水和氧的同时将无色的和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的红色的醌类化合物醌类化合物。红色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在红色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在510nm波长波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。酶法：葡萄糖氧化酶法（glucose oxidase,GO19葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理过氧化物酶法原理（1）葡萄糖）葡萄糖O2H2O葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶（GOD）（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚氨基安替吡啉苯酚葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2H2O 红色醌式物质红色醌式物质过氧化物酶过氧化物酶（POD）Trinder反应反应505nm光吸收法测定光吸收法测定相对血糖浓度相对血糖浓度葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理（1）葡萄糖O2H2O葡萄20实验试剂实验试剂0.1mol/L磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液(pH7.0)酶试剂酶试剂取过氧化物酶取过氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林氨基安替比林10mg，叠氮化钠，叠氮化钠100mg，溶于磷，溶于磷酸缓冲液酸缓冲液80ml中，定容至中，定容至100ml，置，置4保存保存酚溶液酚溶液称取重蒸馏酚称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水溶于蒸馏水100ml中，中，用棕色瓶贮存。用棕色瓶贮存。酶酚混合试剂酶酚混合试剂将酶试剂和酚试剂等量混合，将酶试剂和酚试剂等量混合，4下下可存放可存放1个月。个月。葡萄糖标准工作液：葡萄糖标准工作液：5mmol/L实验试剂0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)21实验操作实验操作加入物加入物 空白管空白管标椎管椎管测定管定管血清血清(ml)0.020葡萄糖葡萄糖标准液准液(ml)0.020蒸蒸馏水水(ml)0.020工作液工作液(ml)3.003.003.00 混匀，置混匀，置 37 37 水浴保温水浴保温2525分钟，在分钟，在510nm510nm波长处比色，以空波长处比色，以空白管（白管（B B管）调零，读取各管吸光度。根据各管吸光度管）调零，读取各管吸光度。根据各管吸光度计算其血计算其血糖浓度糖浓度。实验操作加入物 空白管标椎管测定管血清(ml)0.02022计算：计算：葡萄糖标准液：葡萄糖标准液：5 mmol/L5 mmol/L血清葡萄糖（血清葡萄糖（mmol/Lmmol/L）=A=AT T/A/AS S CCS S参考值：参考值：3.96.1 mmol/L计算：葡萄糖标准液：5 mmol/L参考值：3.96.123本法测定葡萄糖非常特异，从原理反本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知应式中可知第一步是特异反应，第二第一步是特异反应，第二步特异性较差步特异性较差。误差往往发生在反应。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如的第二步。一些还原性物质如尿酸、尿酸、维生素维生素 C、胆红素和谷胱甘肽、胆红素和谷胱甘肽等，可等，可与色原性物质与色原性物质竞争过氧化氢竞争过氧化氢，从而消，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生生竞争性抑制竞争性抑制，使测定结果偏低。但，使测定结果偏低。但是对测定结果无显著影响。是对测定结果无显著影响。实验误差分析：实验误差分析：本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，24葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液的葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液的葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。这是因为萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等尿液中的尿酸等干扰物质浓度过高干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。酶反应，造成结果假性偏低。对于血液样品需及时对于血液样品需及时分离红细胞分离红细胞。因。因为为红细胞的酵解将会导致测定结果偏红细胞的酵解将会导致测定结果偏低低。建议测定样品以草酸钾。建议测定样品以草酸钾-氟化钠为氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。抗凝剂以抑制糖酵解。注意事项注意事项葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液的葡萄糖含量，但不能直接测定尿25严重黄疸、溶血及乳糜样血清严重黄疸、溶血及乳糜样血清先制备先制备无蛋白血滤液无蛋白血滤液，然后在进行测定。然后在进行测定。酶酚混合液一般酶酚混合液一般现用现配现用现配。葡萄糖氧化酶对葡萄糖氧化酶对 -D 葡萄糖高度特异葡萄糖高度特异，溶液中的葡，溶液中的葡萄糖约萄糖约 36%为为 型，型，64%为为 型。葡萄糖的完型。葡萄糖的完全氧化需要全氧化需要 型到型到 型的变旋反应。葡萄糖变旋酶，型的变旋反应。葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，延长孵育时间可达到完成自发变旋可加速这一反应，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是过程。新配制的葡萄糖标准液主要是 型，故须放型，故须放置置 2h 以上以上 (最好过夜最好过夜 )，待变旋平衡后方可应用。，待变旋平衡后方可应用。注意事项注意事项严重黄疸、溶血及乳糜样血清先制备无蛋白血滤液，然后在进行测定26临床意义临床意义1.肾性糖尿肾性糖尿：正常人每分钟约有：正常人每分钟约有100毫克糖从肾脏排毫克糖从肾脏排出，但经肾脏时又被重新吸收而进入血液循环，因此，出，但经肾脏时又被重新吸收而进入血液循环，因此，正常人尿中是不会有糖。当肾脏有病时，如患了正常人尿中是不会有糖。当肾脏有病时，如患了慢性肾慢性肾炎、肾病综合症、老年性肾病等疾患炎、肾病综合症、老年性肾病等疾患时，肾脏的重新吸时，肾脏的重新吸收能力会下降，于是便出现了糖尿。收能力会下降，于是便出现了糖尿。2.神经性糖尿神经性糖尿：某些疾病，如：某些疾病，如休克、外伤、脑出血休克、外伤、脑出血等，等，使人体处于使人体处于应激状态应激状态，引起，引起神经神经内分泌紊乱内分泌紊乱，肝糖元，肝糖元大量分解，血糖浓度上升，出现糖尿。大量分解，血糖浓度上升，出现糖尿。3.药物性糖尿药物性糖尿：如长期使用激素，如：如长期使用激素，如糖皮质激素糖皮质激素(肥仔肥仔药药)以及吗啡、解热止痛药以及吗啡、解热止痛药等，可使某些人出现糖尿。等，可使某些人出现糖尿。临床意义1.肾性糖尿：正常人每分钟约有100毫克糖从肾脏排出27临床意义临床意义4.妊娠性糖尿妊娠性糖尿：妊娠妇女在妊娠中及后期，由于：妊娠妇女在妊娠中及后期，由于乳乳腺功能活跃，所分泌的乳糖增多腺功能活跃，所分泌的乳糖增多，同时因妊娠使，同时因妊娠使肾脏重肾脏重新吸收葡萄糖的能力下降新吸收葡萄糖的能力下降，都有可能使妊娠妇女血糖浓，都有可能使妊娠妇女血糖浓度升高，尿糖增高，尿糖检查阳性。度升高，尿糖增高，尿糖检查阳性。5.饮食性糖尿饮食性糖尿：当人们：当人们从食物中摄取大量的糖类物从食物中摄取大量的糖类物质时质时，可以从尿中验到糖，如，可以从尿中验到糖，如甲状腺机能亢进或植物神甲状腺机能亢进或植物神经功能紊乱经功能紊乱的病人，因其肠道对食物中的的病人，因其肠道对食物中的糖类吸收过快糖类吸收过快，可出现血糖水平升高过急，糖份经肾脏排出体外。可出现血糖水平升高过急，糖份经肾脏排出体外。临床意义4.妊娠性糖尿：妊娠妇女在妊娠中及后期，由于乳腺功能28谢谢观赏29