-黄酮类化合物2课件

第六章 黄酮类化合物概述概述 结构与分类 理化性质 提取与别离、检识提取与别离、检识 结构研究、中药实例 第六章 黄酮类化合物概述黄酮类化合物大多具有颜色，在植物体内大局部与糖结合成苷，一局部以游离形式存在。黄酮类化合物广泛分布于植物界中，而且生理活性多种多样，引起了国内外的广泛重视，研究进展很快。概述概述 色原酮 2-苯基色原酮以前，黄酮类化合物(flavonoids)主要是指根本母核为2-苯基色原酮(2-phenyl-chromone)类化合物，现在那么是泛指两个苯环A-与B-环通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。概述C6-C3-C6 根据中央三碳链的氧化程度、B-环连接位置2-或3-位以及三碳链是否构成环状等特点，可将重要的天然黄酮类化合物分类如下：结构与分类黄酮类黄酮类黄酮类(flavones)结构与分类-黄酮类结构与分类-黄酮类v常见的黄酮及其苷类有芹菜素、木犀草素、黄芩苷等。芹菜素芹菜素木犀草素木犀草素结构与分类-黄酮类结构与分类-黄酮类黄芩苷结构与分类-黄酮类黄酮醇类黄酮醇(flavonol)结构与分类-黄酮醇类结构与分类-黄酮醇类v常见的黄酮醇及其苷类有山柰酚、槲皮素、杨梅素、芦丁等。山柰酚杨梅素结构与分类-黄酮醇类槲皮素R=H芦丁R=芸香糖结构与分类-黄酮醇类二氢黄酮类二氢黄酮类Flavanones结构与分类-二氢黄酮类结构与分类-二氢黄酮类v如橙皮中的橙皮素和橙皮苷；甘草中的甘草素和甘草苷。橙皮素R=H橙皮苷R=芸香糖甘草素R=H甘草苷R=glc结构与分类-二氢黄酮类二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类 FlavanonolsFlavanonols结构与分类-二氢黄酮醇类结构与分类-二氢黄酮醇类v如满山红叶中的二氢槲皮素和槲皮素共存，桑枝中的二氢桑色素和桑色素共存。二氢槲皮素二氢桑色素结构与分类-二氢黄酮醇类结构与分类-二氢黄酮醇类v黄柏叶中具有抗癌活性的黄柏素-7-O-葡萄糖苷也属于二氢黄酮醇类。黄柏素-7-O-葡萄糖苷结构与分类-二氢黄酮醇类异黄酮类异黄酮类异黄酮类IsoflavanoneIsoflavanone结构与分类-异黄酮类结构与分类-异黄酮类v豆科植物葛根中所含有的大豆素、大豆苷、大豆素-7，4-二葡萄糖苷、葛根素和葛根素木糖苷均属于异黄酮类化合物。大豆素R1=R2=R3=H大豆苷R1=R3=HR2=glc葛根素R2=R3=HR1=glc大豆素-7，4-二葡萄糖苷R1=HR2=R3=glc葛根素木糖苷R1=glcR2=xylR3=H结构与分类-异黄酮类二氢异黄酮类二氢异黄酮类二氢异黄酮类IsoflavanonesIsoflavanones结构与分类-二氢异黄酮类v如中药广豆根当中含有的紫檀素、三叶豆紫檀苷、高丽槐素具有抗癌活性，苷的活性强于苷元。毛鱼藤中所含有的鱼藤酮也属于二氢异黄酮的衍生物，具有较强的杀虫和毒鱼作用。它们都属于二氢异黄酮类的衍生物。结构与分类-二氢异黄酮类紫檀素R=CH3三叶豆紫檀苷R=glc高丽槐素R=H鱼藤酮结构与分类-二氢异黄酮类查耳酮查耳酮类Chalcones结构与分类-查耳酮v在酸的作用下，查耳酮可转化为无色的二氢黄酮，碱化后又转为深黄色的2-羟基查耳酮。2-羟基查耳酮二氢黄酮结构与分类-查耳酮结构与分类-查耳酮v如红花的花中含有的红花苷红花苷结构与分类-查耳酮二氢查耳酮类二氢查耳酮类Dihydrochalcones结构与分类-二氢查耳酮类v二氢查耳酮在植物界分布极少，如蔷薇科梨属植物根皮和苹果种仁中含有的梨根苷。梨根苷结构与分类-二氢查耳酮类橙酮类橙酮类结构与分类-橙酮类结构与分类-橙酮类v此类化合物较少见，主要存在于玄参科、菊科、苦苣苔科以及单子叶植物沙草科中，如在黄花波斯菊花中含有的硫磺菊素属于此类。硫磺菊素结构与分类-橙酮类花色素类花色素类花色素类花色素类花色素类AnthocyanidinsAnthocyanidins结构与分类-花色素类结构与分类-花色素类结构与分类-花色素类v花色素在中药中多以苷的形式存在。花色素是使植物的花、果、叶、茎等呈现蓝、紫、红等颜色的色素，如矢车菊苷元、飞燕草苷元和天竺葵苷元以及它们所组成的苷最为常见。矢车菊苷元R1=OHR2=H飞燕草苷元R1=R2=OH天竺葵苷元R1=R2=H结构与分类-花色素类黄烷-3-醇类黄烷黄烷-3-3-醇类醇类Flavan-3-olsFlavan-3-ols结构与分类-黄烷醇类结构与分类-黄烷醇类v主要存在于含鞣质的木本植物中。如儿茶素为中药儿茶中的主要成分，有四个光学异构体，但在植物中主要有异构体两个，儿茶素和表儿茶素。儿茶素表儿茶素结构与分类-黄烷醇类黄烷-3，4-二醇类黄烷3，4二醇类Flavan-3,4-diols)结构与分类-黄烷醇类v这类化合物在植物界中分布很广，在含鞣质的木本植物和蕨类植物中更为多见，如：无色矢车菊素。无色矢车菊素结构与分类-黄烷醇类v天然黄酮类化合物多和糖形成苷而存在，并且由于糖的种类、数量、连接位置及连接方式不同，组成了各种各样的黄酮苷类。结构与分类v组成黄酮苷的糖类主要有单糖、双糖类、三糖类和酰化糖类。单糖类：vD-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖及D-葡萄糖醛酸等。结构与分类v除氧苷外，天然黄酮类化合物中还发现有C-键苷，如：葛根黄素木糖苷。和葛根素共同构成了中药葛根扩张冠状动脉的有效成分。葛根黄素木糖苷结构与分类生物活性抗肝脏毒作用2抗菌及抗病毒作用4对心血管系统的作用3 1抗炎3 3雌性激素样作用6清除人体自由基作用8解痉作用3 5泻下作用3 7生物活性理化性质显色反响显色反响 酸碱性酸碱性 溶解性溶解性性状性状v黄酮类化合物多为晶状黄酮类化合物多为晶状固体，少数如黄酮苷固体，少数如黄酮苷类为无定形粉末。类为无定形粉末。v旋光性：苷元中，二氢旋光性：苷元中，二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇具有手性碳，烷及黄烷醇具有手性碳，具旋光性，其余黄酮类具旋光性，其余黄酮类无旋光性。无旋光性。理化性质形态 旋光性 性状v黄酮的色原酮局部无色，在2-位上引入苯环后，即形成交叉共轭体系，使共轭链延长，因而呈现出颜色。黄酮、黄酮醇及其苷类多显灰黄黄色，查耳酮为黄橙黄色，异黄酮类显微黄色，二氢黄酮、二氢黄酮醇不显色。颜色性状理化性质v在上述黄酮、黄酮醇分子中，尤其在7-位及4-位引入OH及OCH3等供电基助色团后，通过电子转移、重排使化合物的颜色加深，但在其它位置引入OH、OCH3等供电基影响较小。v花色素及其苷元的颜色随pH不同而改变，一般显红色(pH7)、紫色(pH8.5)、蓝色(pH8.5)等颜色。理化性质v一般来说，游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。v黄酮、黄酮醇、查耳酮等平面性强的分子，难溶于水;而二氢黄酮及二氢黄酮醇等非平面分子，分子间排列不紧密，分子间引力较低，有利于水分子进入，易溶于水。理化性质溶解性v花花色色苷苷元元花花青青素素类类以以离离子子形形式式存存在在，水水中中溶溶解解度度较较大大。黄黄酮酮类类苷苷元元分分子子中中羟羟基基数数越越多多，水中的溶解度越大。水中的溶解度越大。理化性质v黄黄酮酮苷苷类类，因因为为引引入入糖糖，水水溶溶性性比比相相应应苷苷元元为为大大；糖糖链链越越长长，那那么么水水溶溶度度越越大大，一一般般易易溶溶于于水水、甲甲醇醇、乙乙醇醇等等强强极极性性溶溶剂剂中中，但难溶或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。但难溶或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。理化性质v黄黄酮酮类类化化合合物物因因分分子子中中多多含含有有游游离离酚酚羟羟基基，故故显显酸酸性性，可可溶溶于于碱碱性性溶溶液液中中。酸性强弱顺序依次为：酸性强弱顺序依次为：v 7，4-二二OH v 7-或或4-OH v 一般酚一般酚OH v 5-OH v此性质可用于提取、别离及鉴定工作。此性质可用于提取、别离及鉴定工作。理化性质酸性酸碱性v黄酮类化合物分子中-吡喃酮环上的1-位氧原子，因有未共用的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成钅羊盐，但生成的钅羊盐不稳定，加水可分解。理化性质碱性酸碱性理化性质黄酮类化合物的提取1黄酮苷类以及极性稍大的苷元一般可用丙酮、乙酸乙酯、乙醇提取3在提取花青素类化合物时，可参加少量稀盐酸2一些多糖苷类可用沸水提取4大多数黄酮苷元宜用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等中极性溶剂提取，而对多甲氧基黄酮类游离苷元，甚至可用苯等低极性溶剂进行提取黄酮类化合物的提取粗提物的精制处理方法有：一溶剂萃取法：利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行地萃取可到达精制纯化目的。例如植物叶子的醇浸液，可用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素。某些药料水溶液那么可参加多倍量浓醇，以沉淀除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质。黄酮类化合物的提取v有时溶剂萃取过程也可以用逆流分配法连续进行。常用的溶剂系统有：水-醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。v溶剂萃取过程在除去杂质的同时，往往还可以收到别离苷和苷元或极性苷元与非极性苷元的效果。黄酮类化合物的提取二碱提取酸沉淀法黄酮类化合物的提取(黄酮苷类)碱性水提取碱水提取液酸沉淀药材v槐米中芦丁的提取v槐米槐树SophorajaponicaL.花蕾加约6倍量水，煮沸，在搅拌下缓缓参加石灰乳至pH=89，在此pH条件下微沸2030分钟，趁热抽滤，残渣同上再加4倍水煎1次，趁热抽滤。合并滤液，在6070下，用浓盐酸调至pH=5，搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水洗至中性，60枯燥得芦丁粗品，于水中重结晶，7080枯燥得芦丁纯品。黄酮类化合物的提取v在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性下，尤其加热时会破坏黄酮母核。v在加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成钅羊盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解，降低产品收率。黄酮类化合物的提取v当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性杂质时，如花、果类药材，宜用石灰乳或石灰水代替其它碱性水溶液进行提取，以使上述含羟基的杂质生成钙盐沉淀，不致溶出。这也有利于黄酮类化合物的纯化处理。黄酮类化合物的提取较常用的别离方法有：一柱层析法别离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有硅胶聚酰胺氧化铝黄酮类化合物的别离1.硅胶柱层析：此法应用范围最广，主要适于别离异黄酮二氢黄酮二氢黄酮醇高度甲基化或乙酰化的黄酮及黄酮醇类少数情况下，在加水去活化后也可用于别离极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。黄酮类化合物的别离2.聚酰胺柱层析：对别离黄酮类化合物来说，聚酰胺是较为理想的吸附剂。其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。黄酮类化合物的别离v聚酰胺柱层析可用于别离各种类型的黄酮类化合物，包括苷及苷元、查耳酮与二氢黄酮等。黄酮类化合物的别离v黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗脱时有以下规律：黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗脱时有以下规律：v1假假设设以以含含水水移移动动相相如如甲甲醇醇-水水作作洗洗脱脱剂剂，黄黄酮酮苷苷比比游游离离黄黄酮酮先先洗洗脱脱下下来来，且且洗洗脱脱的的先先后后顺顺序序一一般般是是：叁叁糖糖苷苷双双糖糖苷苷单单糖糖苷苷游游离离黄黄酮酮；假假设设以以有有机机溶溶剂剂如如氯氯仿仿-甲甲醇醇作作洗洗脱脱剂剂，结结果果那那么么相相反反，游游离离黄黄酮酮比比苷苷先先洗洗脱脱下来。下来。v2母核上增加羟基，洗脱速度减缓。母核上增加羟基，洗脱速度减缓。黄酮类化合物的别离3不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是：异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇4分子中芳香核、共轭双键多者那么吸附力强，所以查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。黄酮类化合物的别离黄酮类化合物的别离5聚酰胺对处于C4羰基邻位的羟基即3-或5-位的吸附力小于处于其它位置的羟基；具有邻二酚羟基的黄酮的吸附力小于具有间二酚羟基或对二酚羟基的黄酮。黄酮类化合物的别离v6洗脱溶剂的影响 聚酰胺与各类化合物在水中形成氢键的能力最强，在有机溶剂中较弱，在碱性溶剂中最弱。因此，各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强的顺序为：水甲醇或乙醇浓度由低到高丙酮稀氢氧化钠水溶液或氨水甲酰胺二甲基甲酰胺DMF尿素水溶液。3.葡聚糖凝胶柱层析：对于黄酮类化合物的别离，主要用两种型 号 的 凝 胶：Sephadex-G型 及Sephadex-LH-20型。黄酮类化合物的别离v葡聚糖凝胶别离黄酮类化合物的机理是：v 别离游离黄酮时，主要靠吸附作用。凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离酚羟基的数目。但别离黄酮苷时，那么分子筛的属性起主导作用。在洗脱时，黄酮苷类大体上是按分子量由大到小的顺序流出柱体。黄酮类化合物的别离v别离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大顺序洗脱。v别离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小顺序洗脱。v总的洗脱顺序：含糖多的苷含糖少的苷游离苷元极性小大黄酮类化合物的别离二梯度pH萃取法梯度pH萃取法适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的别离。可以将混合物溶于有机溶剂如乙醚后，依次用5%NaHCO3萃取5%Na2CO3萃取0.2%NaOH萃取4%NaOH萃取黄酮类化合物的别离v酸性:v7，4-二OH(溶于5%NaHCO3液)v7-或4-一OH5%Na2CO3液v一般OH0.2%NaOH液v5-OH4%NaOH液黄酮类化合物的别离1、盐酸-镁粉或锌粉反响：多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红紫红色，少数显紫蓝色，B环有-OH或OCH3取代时，颜色随之加深。查耳酮、橙酮、儿茶素类不显色。异黄酮类一般不显色。一复原反响检识技术-化学检识技术花色素及局部查耳酮、橙酮等在单纯浓盐酸酸性条件下颜色也会发生变化，故须先做空白对照。检识技术-化学检识技术2、四氢硼钠钾反响：NaBH4是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种复原剂。与二氢黄酮类化合物产生红紫色。其它黄酮类化合物均不显色。一复原反响检识技术-化学检识技术1、铝盐：v生成的络合物多为黄色，并有荧光，可用于定性及定量分析。常用试剂为1%三氯化铝或硝酸铝溶液。二金属盐类试剂的络合反响检识技术-化学检识技术2、锆盐：多用2%二氯氧化锆ZrOCl2甲醇溶液。黄酮类化合物分子中有游离的3-OH或5-OH存在时，均可反响生成黄色的锆络合物。二金属盐类试剂的络合反响检识技术-化学检识技术检识技术-化学检识技术3、氯化锶SrCl2：在氨性甲醇溶液中，可与分子中具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物生成绿色棕色乃至黑色沉淀。二金属盐类试剂的络合反响检识技术-化学检识技术v在日光及紫外光下，通过纸斑反响，观察样品用氨蒸气和其他碱性试剂处理后的颜色变化的情况。v二氢黄酮类可转变为查耳酮类化合物，显橙黄色。三碱性试剂显色反响检识技术-化学检识技术v黄酮醇类在碱液中先呈黄色，通入空气后变为棕色。v当分子中有邻二酚羟基取代或3,4-二羟基取代时，在碱液中很快氧化，最后生成棕绿色沉淀。三碱性试剂显色反响检识技术-化学检识技术例如：例如：苯：甲酸甲酯：甲酸苯：甲酸甲酯：甲酸5：4：1 苯：甲醇：苯：甲醇：HAC35：5：5 CHCL3：MeOH：丁醇：吡啶：甲酸丁醇：吡啶：甲酸40：10：2黄酮类化合物的检识 适于苷和苷元适于苷和苷元 双向层析法双向层析法 1.溶剂的选择溶剂的选择：第一向：第一向：BAW洗脱、洗脱、TBA 第二向：水性溶剂，第二向：水性溶剂，26HAC水，水，3NaCL一PC法黄酮类化合物的检识黄酮类化合物的检识第一向采用醇性展开剂，为正相分配色谱，极性小的化合物比极性大的化合物Rf值大。第二向常采用水性展开剂，其色谱行为类似于反相分配色谱，极性大的化合物比极性小的化合物Rf值大。黄酮类化合物的检识1水性展开剂如3%5%乙酸展开时，平面型分子如黄酮、黄酮醇、查耳酮等，几乎停留在原点不动Rf；而非平面型分子如二氢黄酮、二氢黄酮醇、二氢查耳酮等，因亲水性稍强，故Rf值较大。RfRf值与结构之间的关系值与结构之间的关系黄酮类化合物的检识2同一类型的游离黄酮类化合物，在用醇性展开剂如BAW展开时，如分子中羟基数目越多，极性越大，那么Rf值越小；羟基数目越少，那么Rf值越大。RfRf值与结构之间的关系值与结构之间的关系黄酮类化合物的检识3黄酮苷类如用醇性展开剂展开，因极性较游离黄酮增大，故Rf值较后者相应降低，故对同一类型苷元的黄酮苷其Rf值依次为：苷元单糖苷双糖苷。但在用水性展开剂如水或2%8%乙酸、3%氯化钠或1%盐酸展开时，那么上列顺序将会颠倒，游离黄酮几乎停留在原点不动，糖链越长，那么Rf值越大。RfRf值与结构之间的关系值与结构之间的关系v显色剂：v1可见光/荧光灯分别观察v2氨熏后荧光灯观察v3喷AlCL3/荧光灯观察黄酮类化合物的检识黄酮类化合物的检识适于弱极性苷元和苷适于弱极性苷元和苷 l展开剂展开剂 ：苷元苷元 有机溶剂的不同比例有机溶剂的不同比例苷苷 含水的中强极性有机溶剂含水的中强极性有机溶剂二硅胶二硅胶TLCTLC法法例如：例如：苯：甲酸甲酯：甲酸苯：甲酸甲酯：甲酸5：4：1 苯：甲醇：苯：甲醇：HAC35：5：5 CHCL3：MeOH：丁醇：吡啶：甲酸丁醇：吡啶：甲酸40：10：2黄酮类化合物的检识黄酮类化合物的检识u展开剂：展开剂：u别离检识游离黄酮常用有机溶剂为展开剂，如氯别离检识游离黄酮常用有机溶剂为展开剂，如氯仿仿-甲醇甲醇946946，964964u别离检识黄酮苷常用含水的有机溶剂为展开剂，别离检识黄酮苷常用含水的有机溶剂为展开剂，如甲醇如甲醇-乙酸乙酸-水水90559055、甲醇、甲醇-水水1111uRf Rf 在含水溶剂中服从聚酰胺吸附机制；在在含水溶剂中服从聚酰胺吸附机制；在亲脂性溶剂中服从分配机制亲脂性溶剂中服从分配机制三聚酰胺薄层色谱三聚酰胺薄层色谱一、目前主要采用的方法有：一、目前主要采用的方法有：与与标标准准品品或或与与文文献献对对照照PPC或或TLC得得到到的的Rf或或hRf值值Rf100分分析析比比照照样样品品在在甲甲醇醇溶溶液液中中及及参参加加诊诊断断试试剂剂后得到的后得到的UV光谱光谱1H-NMR 13C-NMR MS黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的检识u展开剂：展开剂：u别离检识游离黄酮常用有机溶剂为展开剂，如氯别离检识游离黄酮常用有机溶剂为展开剂，如氯仿仿-甲醇甲醇946946，964964u别离检识黄酮苷常用含水的有机溶剂为展开剂，别离检识黄酮苷常用含水的有机溶剂为展开剂，如甲醇如甲醇-乙酸乙酸-水水90559055、甲醇、甲醇-水水1111uRf Rf 在含水溶剂中服从聚酰胺吸附机制；在在含水溶剂中服从聚酰胺吸附机制；在亲脂性溶剂中服从分配机制亲脂性溶剂中服从分配机制三聚酰胺薄层色谱三聚酰胺薄层色谱一、目前主要采用的方法有：一、目前主要采用的方法有：与与标标准准品品或或与与文文献献对对照照PPC或或TLC得得到到的的Rf或或hRf值值Rf100分分析析比比照照样样品品在在甲甲醇醇溶溶液液中中及及参参加加诊诊断断试试剂剂后得到的后得到的UV光谱光谱1H-NMR 13C-NMR MS黄酮类化合物的结构鉴定二、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用n n可可用用于于确确定定黄黄酮酮母母核核类类型型及及确确定定某某些些位位置置是是否否含含有羟基。有羟基。n n一般程序：一般程序：n n 测定样品在甲醇中的测定样品在甲醇中的UVUV谱以了解母核类型；谱以了解母核类型；n n 在在甲甲醇醇溶溶液液中中分分别别参参加加各各种种诊诊断断试试剂剂后后测测UVUV谱谱和和可可见见光光谱谱以以了了解解3,5,7,3,43,5,7,3,4有有无无羟羟基基及及邻邻二二酚酚羟基；羟基；n n 苷苷类类可可水水解解后后或或先先甲甲基基化化再再水水解解，再再用用上法测苷元的上法测苷元的UVUV谱以了解糖的连接位置。谱以了解糖的连接位置。黄酮类化合物的结构鉴定一黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱n n多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：带I在300-400nm区间，由B环桂皮酰系统的电子跃迁所引起。BB黄酮类化合物的结构鉴定带II在240-285nm区间，由A环苯甲酰系统的电子跃迁所引起。AA黄酮类化合物的结构鉴定带带II(240-285nm)（苯（苯甲酰系统）甲酰系统）带带I(300-400nm)桂皮酰系统桂皮酰系统类类型型说说明明250-285304-350黄酮类黄酮类-OH越多，带越多，带I带带II越红移越红移328-357黄酮醇类黄酮醇类(3-OR)352-385黄酮醇类黄酮醇类(3-OH)245-270270-295300-400异黄酮类异黄酮类二氢黄酮二氢黄酮（醇）（醇）B环上有环上有-OH,OCH3对带对带I影响不大影响不大220-270340-390或或340-390(Ia)300-320(Ib)查耳酮类查耳酮类查耳酮查耳酮2-OH使带使带I红移的红移的影响最大影响最大370-430(3-4个小峰个小峰)橙酮类橙酮类不同化合物的UV光谱5，7，4-三羟基异黄酮5，7，4-三羟基二氢黄酮5，7，4-三羟基黄酮5，7，4-三羟基黄酮醇4，2，4-三羟基查尔酮4，6，4-三羟基橙酮5，7，4-三羟基3-O-鼠李糖花青素苷(二参加诊断试剂后引起的位移及结构测定黄酮类化合物的结构鉴定加入试剂带II带I说明样品+MeOH（黄酮类及黄酮醇类）250-285304-385两两峰峰强强度度基基本本相相同同，具具体体位位置置与与母母核核上上电电负负性性取取代代基基(-OH,-OCH3)有有关关，-OH,-OCH3越越多，越长移多，越长移+NaOMe 40-60nm（不不变变或或增强）增强）50-60nm（下降）下降）有有4-OH，无，无3-OH有有3-OH，无，无4-OH有有3,4-OH或或3,3,4-OH（衰衰减减更快）更快）7-OH带带I，II随随加加NaOMe时时间延长，逐渐衰减间延长，逐渐衰减320-330nm有有吸吸收收,成成苷后消失苷后消失+NaOAc(未熔融未熔融)5-20在在长长波波一一侧侧有有明明显显的的肩肩峰峰7-OH+NaOAc(熔融熔融)4065有有4-OH+NaOAc/H3BO3 5-1012-30有有6,7-OH或或7,8-OH(5,6-OH无无)B环有邻二酚羟基环有邻二酚羟基AlCl3/HCl 60 50-60 35-55 17-20 0有有3-OH有有3,5-二二OH有有5-OH，无，无3-OH有有6-OR无无3-OH,5-OHAlCl3光光 谱谱-AlCl3/HCl光谱光谱30-4050-650B环有邻二酚羟基A,B环皆有邻二酚羟基A,B环皆无邻二酚羟基带II带I说明说明：1+NaOMe或NaOAc,OHONa，变为离子化合物，共轭系统中的电子云密度增加，红移另有3,4-OH或3,3,4-OH时，在NaOMe作用下易氧化破坏，故峰有衰减。2NaOAc为弱碱，仅使酸性较强者，如7,4-OH解离。黄酮类化合物的结构鉴定3形成络合物的能力：黄酮醇3-OH黄酮5-OH二氢黄酮5-OH邻二酚羟基二氢黄酮醇5-OH邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在酸性条件下不与AlCl3络合；非酸性条件下，五者皆与Al3+络合；形成络合物越稳定，红移越多。黄酮类化合物的结构鉴定4根据只加AlCl3和参加AlCl3及盐酸的紫外光谱吸收峰位相减的结果，可以判断邻二酚羟基的取代情况。黄酮类化合物的结构鉴定山柰苷山柰苷山柰酚山柰酚UVmax(nm)UVmax(nm)带带IIII带带II带带IIII带带I IMeOH265345267367MeOH265345267367NaOMe265388278416NaOMe265388278416分解分解AlCl3275399268424AlCl3275399268424AlCl3/HCl275399269424AlCl3/HCl275399269424NaOAc265399276387NaOAc265399276387NaOAc/H3BO3265345267367NaOAc/H3BO3265345267367从中药柴胡中别离得到山柰苷，经酸水解后，用PC检出有鼠李糖，山柰苷及山柰酚的紫外光谱数据如下：黄酮类化合物的结构鉴定山柰酚3，7-二鼠李糖苷黄酮类化合物的结构鉴定三、1H-NMRn n常用溶剂：氘代氯仿CDDl3，氘代二甲基亚砜DMSO-d6，氘代吡啶C5D5N。n n也可将黄酮类化合物制成三甲基硅醚衍生物溶于四氯化碳中进行测定。黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物1H-NMR谱(DMSO-d6)羟基的特征5OH：12ppm7OH：11ppm3OH：10ppm黄酮类化合物的结构鉴定v氘代二甲基亚砜DMSO-d6对鉴别黄酮母核上的酚羟基，是十分理想的溶剂，在试样中参加重水D2O羟基质子信号消失。黄酮类化合物的结构鉴定一A环质子15,7-二-OH黄酮黄酮类1H-NMR黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定v当7-OH成苷时，那么H-6及H-8信号均向低场方向位移。黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定27-OH黄酮H-5较H-6、H-8低场，是由于羰基的负屏蔽效应的影响。H-6、H-8较5,7-二OH黄酮在较低场，且相互位置可能颠倒。黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定二B环质子14-氧取代黄酮类化合物H-3,5H-2,6由于C环对H-2,6的负屏蔽作用大于对H-3,5，且H-3,5受4-OR的屏蔽作用，故前者较低场；C环氧化程度越高，H-2,6处于越低场的位置。黄酮类化合物的结构鉴定23,4-二氧取代黄酮类化合物vB环H-5因与H-6的邻位偶合以双重峰的形式出现在。H-2因与H-6的间偶，亦以双重峰的形式出现在约7.20(d,J=2.0Hz)处。H-6H-6因分别与因分别与H-2H-2和和H-H-5 5偶合，那么以双二重偶合，那么以双二重峰出现在约和峰出现在约和8.0Hz)8.0Hz)处。处。黄酮类化合物的结构鉴定v从H-2和H-6的化学位移分析，可以区别黄酮和黄酮醇的3,4-位上是3-OH，4-OMe还是3-OMe，4-OH。在4-OMe，3-OH黄酮和黄酮醇中，H-2通常比H-6出现在高磁场区，而在3-OMe，4-OH黄酮和黄酮醇中,H-2和H-6的位置那么相反。黄酮类化合物的结构鉴定3 3,4,5-三氧取代黄酮类化合物v如果3,4,5-均为羟基，那么H-2和H-6以一个相当于二个质子的单峰出现在区域。但当3-或5-OH被甲基化或苷化，那么H-2和H-6因相互偶合而分别以一个双重峰出现。三三C环质子环质子1.黄酮和黄酮醇类黄酮和黄酮醇类黄酮类H-3常以一个锋利的单峰出现在处黄酮醇类的3位有含氧取代基，故在1H-NMR谱上无C环质子黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定三三C环质子环质子2异黄酮类异黄酮类H-2因受到1-位氧原子和4-位羰基影响，以一个锋利的单峰出现在，比一般芳香质子位于较低的磁场。黄酮类化合物的结构鉴定三三C环质子环质子3二氢黄酮类二氢黄酮类H-2因受两个不等价的H-3偶合，故被分裂成一个双二重峰，中心位于约。两个H-3各因偕偶和与H-2的邻偶也被分裂成一个双二重峰，中心位于处黄酮类化合物的结构鉴定三三C环质子环质子4二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类H-2和H-3为反式二直立键，故分别以二重峰出现，H-2位于处，H-3位于处。当3-OH成苷后，那么使H-2和H-3信号均向低磁场方向位移，H-2位于，H-3位于间黄酮类化合物的结构鉴定三三C环质子环质子5查耳酮类查耳酮类H-和H-分别以二重峰形式出现，其化学位移分别约为和处。黄酮类化合物的结构鉴定三三C环质子环质子6橙酮类橙酮类C环的环外质子=CH常以单峰出现在处，其确切的峰位取决于A环和B环上羟基取代情况，增大羟基化作用，使该峰向高磁场区位移与没有取代的橙酮相比，其中以C4-位和C6-位羟基化作用影响最明显。黄酮类化合物的结构鉴定四糖上的质子糖与苷元相连时，糖上1-H与其它H比较，一般位于较低磁场区。因-OR(R=苷元)不表现供电子，仅表现吸电子的诱导作用，端基H受两个O的诱导，处于低场黄酮类化合物的结构鉴定(五)其他质子v1酚羟基质子测定酚羟基质子，可将黄酮类化合物直接用DMSO-d6为溶剂测定。例如，在木犀草素-7-0-D-葡萄糖苷的1H-NMR谱中，酚羟基质子信号分别出现在12.99(5-OH)、10.01(4-OH)和9.42(3-OH)处。向被测定的样品溶液中参加D2O，这些信号即消失。v(五)其他质子v2甲氧基质子除少数例外，甲氧基质子一般以单峰出现在处。虽然糖基上的一般质子也在此区域出现吸收峰，但它们均不是单峰，故极易区别。四、13C-NMR方法：1比照法：与简单的模型化合物如苯乙酮、桂皮酸及它们的衍生物光谱的比较；2计算法：用经验的简单芳香化合物的取代位移加和规律进行计算；3选用各种一维和二维NMR技术。黄酮类化合物的结构鉴定一骨架类型的判断n n根据中央三碳链的碳信号，即先根据羰基碳的值，再结合C2、C3在偏共振去偶谱中的裂分和值判断。黄酮类化合物的结构鉴定C=OC-2（或（或C-）C-3（或（或C-）归属归属174.5184.0(s)160.5163.2(s)104.7111.8(d)黄酮类黄酮类149.8155.4(d)122.3125.9(s)异黄酮类异黄酮类147.9(s)136.0(d)黄酮醇类黄酮醇类182.5182.7(s)146.1147.7(s)111.6111.9(d)(=CH-)橙酮类橙酮类188.0197.0(s)136.9145.4(d)116.6128.1(d)查耳酮类查耳酮类75.080.3(d)42.844.6(t)二氢黄酮类二氢黄酮类82.7(d)71.2(d)二氢黄酮醇二氢黄酮醇类类五、质谱在黄酮类结构测定中的应用n n多数黄酮类化合物苷元在电子轰击质谱(El-MS)中因分子离子峰较强，往往成为基峰，故一般无须作成衍生物即可进行测定。黄酮类化合物的结构鉴定v但是当测定极性强、难气化以及对热不稳定的黄酮苷类化合物时，那么采用FD-MS和FAB-MS、ESI-MS等软电离质谱技术获得强的分子离子峰M+及具有偶数电子的准分子离子峰(quasi-molecularionpeak)M+H+。黄酮类化合物的结构鉴定(一)黄酮类化合物苷元的电子轰击质谱(El-MS)n n黄酮类化合物苷元的El-MS中，除分子离子峰M+外，也常常生成M-1+即(M-H)基峰。如为甲基化衍生物，那 么 可 以 得 到 M-15+即(M-CH3)离子。黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物主要有以下两种根本裂解途径：途径-IRDA裂解：120102黄酮类化合物的结构鉴定途径途径-II此外，还有分子离子M+.生成M-1+，(M-H)及M-28+.(M-CO)；由A1生成A1-28+.，(A1-CO)及B2生成B2-28+，(B2-CO)等碎片离子。黄酮类化合物的结构鉴定化合物A1+.B1+.黄酮1201025，7-二氢黄酮1521025，7，4-三羟基黄酮（芹菜素）1521185，7-二羟基，4-甲氧基黄酮（刺槐素）152132A-环的取代图式可通过测定A1+.的m/z的值进行确定。同样，根据B-环碎片离子的m/z值，也可精确测定B环的取代情况。一些黄酮类化合物的质谱数据ContentsClicktoaddTitle2ClicktoaddTitle4ClicktoaddTitle3 1ClicktoaddTitle3 3HotTipvHow do I incorporate my logo to a slide that will apply to all the other slides?uOntheViewmenu,pointtoMaster,andthenclickSlideMasterorNotesMaster.Changeimagestotheoneyoulike,thenitwillapplytoalltheotherslides.DiagramThemeGalleryisaDesignDigitalContent&ContentsmalldevelopedbyGuildDesignInc.ThemeGalleryisaDesignDigitalContent&ContentsmalldevelopedbyGuildDesignInc.TitleAddyourtextCycleDiagramAddYourTexthereATitleTitleAddYourTexthereCTitleTitleAddYourTexthereBTitleTitleDiagramTextTextTextAdd YourTitle TextText 1Text 2Text 3Text 4Text 5Add YourTitle TextText 1Text 2Text 3Text 4Text 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