血红蛋白的提取和分离讲义培训课件

血血红蛋白的提取和蛋白的提取和分离分离讲义2血红蛋白的提取和分离讲义蛋白质分离的原理：蛋白质分离的原理：根据蛋白质根据蛋白质各种特性各种特性的差异，如的差异，如分分子的形状和大小、所带电荷的性质和多子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力亲和力等等，可以用来分离等等，可以用来分离不同种类不同种类的的蛋白质。蛋白质。一、基础知识一、基础知识3血红蛋白的提取和分离讲义（一）（一）凝胶色谱法凝胶色谱法2.凝胶：大多数凝胶是由大多数凝胶是由多糖类化合物多糖类化合物（如（如葡聚糖或葡聚糖或琼脂糖琼脂糖）构成的）构成的多孔多孔小球体，小球体，内部有许多贯穿的内部有许多贯穿的通道通道。根据被分离物质的蛋白质根据被分离物质的蛋白质相对分子质量相对分子质量的大小，利用具有的大小，利用具有网状结构网状结构的凝胶，来进行的凝胶，来进行分离。分离。1.概念：（分配色谱法分配色谱法）4血红蛋白的提取和分离讲义3.凝胶色谱法分离蛋白质的具体过程5血红蛋白的提取和分离讲义6血红蛋白的提取和分离讲义4.凝胶色谱法的原理相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢的通道，路程较长，移动速度较慢;相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。进行体外实验时，如何保证蛋白质不进行体外实验时，如何保证蛋白质不会发生变性呢？会发生变性呢？7血红蛋白的提取和分离讲义 （二）缓冲溶液（二）缓冲溶液 能够抵制能够抵制外界的酸和碱外界的酸和碱对溶液对溶液PHPH值值的影响，的影响，维持维持PHPH基本不变。基本不变。1.1.作用作用:2.2.缓冲溶液的配制缓冲溶液的配制:通常由通常由1 12 2 种缓冲剂种缓冲剂溶解于水溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的中配制而成。调节缓冲剂的使用比例使用比例就可以制得在就可以制得在不不同同PHPH范围内范围内使用的缓冲液。使用的缓冲液。3 3 3 3.在本课题中使用的缓冲液是在本课题中使用的缓冲液是在本课题中使用的缓冲液是在本课题中使用的缓冲液是:磷酸缓冲液磷酸缓冲液,成分：磷酸二氢钠与磷酸氢二钠成分：磷酸二氢钠与磷酸氢二钠 如何证明凝胶色谱法获得的蛋白质是目的蛋白？如何证明凝胶色谱法获得的蛋白质是目的蛋白？8血红蛋白的提取和分离讲义 （三）（三）电泳：电泳：1.1.概念：概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。2.2.原理：原理：许多重要的生物大分子，如多肽、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的核酸等都具有可解离的基团，在一定的PHPH下，这下，这些基团会带上正电或负电。些基团会带上正电或负电。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。带电荷相反的电极移动。电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离分子的分离。9血红蛋白的提取和分离讲义3.3.类型类型:琼脂糖琼脂糖凝胶电泳、凝胶电泳、聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺凝胶电泳。凝胶电泳。10血红蛋白的提取和分离讲义 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳 在测定蛋白质分子量时常用在测定蛋白质分子量时常用十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠（SDSSDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂是由单体丙烯酰胺和交联剂N,NN,N-亚甲基双丙烯亚甲基双丙烯酰胺在酰胺在引发剂引发剂和和催化剂催化剂的作用下聚合交联成的具的作用下聚合交联成的具有三维网状结构的凝胶。有三维网状结构的凝胶。N,N-亚甲基双丙烯酰胺（形成交联）亚甲基双丙烯酰胺（形成交联）丙烯酰胺和交联剂丙烯酰胺和交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺的交联共聚反应亚甲基双丙烯酰胺的交联共聚反应11血红蛋白的提取和分离讲义 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。1.1.原理：原理：SDSSDSSDSSDS能使蛋白质发生完全变性能使蛋白质发生完全变性能使蛋白质发生完全变性能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成。由几条肽链组成的蛋白质复合体在的蛋白质复合体在SDSSDS的作用下会的作用下会解聚成单条肽链解聚成单条肽链解聚成单条肽链解聚成单条肽链，因此测定的结果只是因此测定的结果只是单条肽链的分子量单条肽链的分子量单条肽链的分子量单条肽链的分子量。SDSSDS能与各能与各种蛋白质形成种蛋白质形成蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质SDSSDSSDSSDS复合物复合物复合物复合物，SDSSDS所带负电荷所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量原有的电荷量原有的电荷量原有的电荷量。因而掩。因而掩盖了盖了不同种蛋白质间的电荷差别不同种蛋白质间的电荷差别不同种蛋白质间的电荷差别不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。全取决于分子的大小。2.SDS2.SDS作用机理作用机理:12血红蛋白的提取和分离讲义用用SDS SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量的方法分子量的方法 使用使用SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳测定测定蛋白质的分子量时，可选用一组蛋白质的分子量时，可选用一组已知分子已知分子量的标准蛋白量的标准蛋白同时进行电泳，根据已知分同时进行电泳，根据已知分子量的标准蛋白的子量的标准蛋白的电泳区带位置电泳区带位置，可以测，可以测定定未知蛋白质未知蛋白质的分子量。的分子量。市场上有高分子市场上有高分子量、次高分子量及低分子量的标准蛋白试量、次高分子量及低分子量的标准蛋白试剂出售。剂出售。13血红蛋白的提取和分离讲义14血红蛋白的提取和分离讲义 二、实验操作二、实验操作样品处理样品处理粗分离粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定蛋白质提取和分离步骤蛋白质提取和分离步骤血血血血液液液液血浆血浆血浆血浆水水水水 分分分分固体物质：固体物质：固体物质：固体物质：血浆蛋白、血浆蛋白、血浆蛋白、血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等血细血细血细血细 胞胞胞胞白细胞白细胞白细胞白细胞血小板血小板血小板血小板红细胞红细胞红细胞红细胞（最多）（最多）（最多）（最多）血红蛋白血红蛋白血红蛋白血红蛋白（90909090）两个两个两个两个肽链肽链肽链肽链两个两个两个两个一肽链一肽链一肽链一肽链四个亚铁红素基团四个亚铁红素基团四个亚铁红素基团四个亚铁红素基团血液有哪些成分？血液有哪些成分？血液有哪些成分？血液有哪些成分？（一）血红蛋白（一）血红蛋白15血红蛋白的提取和分离讲义血红蛋白血红蛋白血红蛋白血红蛋白两个两个两个两个肽链肽链肽链肽链两个两个两个两个一肽链一肽链一肽链一肽链四个亚铁四个亚铁四个亚铁四个亚铁血血红素基团红素基团红素基团红素基团每个肽链环绕一个每个肽链环绕一个亚铁血红素亚铁血红素基团，基团，此基团可携带此基团可携带一分子氧一分子氧或一分子二氧化碳，或一分子二氧化碳，血红蛋白血红蛋白因含有因含有血红素血红素而呈而呈红色。红色。血红蛋白的特点：血红蛋白的特点：血红蛋白的特点：血红蛋白的特点：16血红蛋白的提取和分离讲义 用鸡的红细胞提取用鸡的红细胞提取用鸡的红细胞提取用鸡的红细胞提取DNADNADNADNA，用猪、牛、羊的红细胞，用猪、牛、羊的红细胞，用猪、牛、羊的红细胞，用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？提取血红蛋白的原因是什么？提取血红蛋白的原因是什么？提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有鸡的红细胞具有细胞核，含有鸡的红细胞具有细胞核，含有鸡的红细胞具有细胞核，含有DNADNADNADNA，便于进，便于进，便于进，便于进行行行行DNADNADNADNA的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。17血红蛋白的提取和分离讲义(1)(1)(1)(1)红细胞的洗涤红细胞的洗涤红细胞的洗涤红细胞的洗涤:洗涤目的洗涤目的洗涤目的洗涤目的:去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化，洗涤次数不可过少。分离纯化，洗涤次数不可过少。洗涤操作：洗涤操作：洗涤操作：洗涤操作：1 1、采集血样。、采集血样。2 2、低速短时间离心（速度越高和时间越长，会使白、低速短时间离心（速度越高和时间越长，会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀，达不到分离的效果）细胞和淋巴细胞等一同沉淀，达不到分离的效果）3 3、吸取血浆：上层透明的黄色血浆。、吸取血浆：上层透明的黄色血浆。4 4、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为0.90.9的氯的氯化钠溶液洗涤。化钠溶液洗涤。5 5、低速离心（低速短时间）、低速离心（低速短时间）6 6、重复、重复4 4、5 5步骤三次，直至上清液中已没有黄色，步骤三次，直至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净。表明洗涤干净。1.1.样品处理及粗分离样品处理及粗分离（二）操作过程（二）操作过程18血红蛋白的提取和分离讲义(2)(2)血红蛋白的释放血红蛋白的释放：加蒸馏水到原血液体积，再加：加蒸馏水到原血液体积，再加4040体积的甲苯体积的甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌，置于磁力搅拌器上充分搅拌1010分分钟（加速细胞破裂）钟（加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白。细胞破裂释放出血红蛋白。(3)(3)(3)(3)分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液：过程：过程：过程：过程：将搅拌好混合液转移到离心管内，以将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min2000r/min的速度离心的速度离心10 min10 min。试管中溶液层次：试管中溶液层次：试管中溶液层次：试管中溶液层次：第第1 1层（最上层）：甲苯层（无色透明）；层（最上层）：甲苯层（无色透明）；第第2 2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色）；层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色）；第第3 3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色)；第第4 4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。分离：分离：分离：分离：用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。19血红蛋白的提取和分离讲义(4)(4)(4)(4)透透透透 析：析：析：析：过程：过程：过程：过程：取取1ml1ml的血红蛋白溶液装入透析袋中，将的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有透析袋放入盛有300ml300ml的物质的量浓度为的物质的量浓度为20mmol/l20mmol/l的的磷酸缓冲液磷酸缓冲液中（中（pHpH为为7.07.0），透析），透析1212小时。小时。透析目的：透析目的：透析目的：透析目的：除去样品中分子量较小的杂质。除去样品中分子量较小的杂质。20血红蛋白的提取和分离讲义2.2.凝胶色谱操作凝胶色谱操作:（1 1 1 1）凝胶色谱柱的制作：）凝胶色谱柱的制作：）凝胶色谱柱的制作：）凝胶色谱柱的制作：取长取长4040厘米，内径厘米，内径1.61.6厘米的玻璃管，厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨两端需用砂纸磨平。平。底塞的制作：底塞的制作：打孔打孔挖出凹穴挖出凹穴安装移液管头部安装移液管头部覆盖覆盖尼龙网，再用尼龙网，再用100100目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端。注意事注意事注意事注意事项项项项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。顶塞的制作：顶塞的制作：打孔打孔安装玻璃管安装玻璃管。组装：组装：将上述三者按相将上述三者按相应位置组装成一个整体应位置组装成一个整体。安装其他附属结构。安装其他附属结构。21血红蛋白的提取和分离讲义（2 2）凝胶色谱柱的装填）凝胶色谱柱的装填凝胶的选择凝胶的选择：A A、材料：交联葡聚糖凝胶（、材料：交联葡聚糖凝胶（G-75G-75）。）。B B、代表意义：、代表意义：“G G”表示凝胶的交联程度，膨表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围胀程度及分离范围。7575表示凝胶的得水值，即表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水每克凝胶膨胀时吸水7.57.5克。克。凝胶的前处理凝胶的前处理：配置凝胶悬浮液：计算并称配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成凝胶悬浮液。溶胀后，配成凝胶悬浮液。22血红蛋白的提取和分离讲义 洗涤平衡洗涤平衡：装填完毕后，装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在立即用缓冲液洗脱瓶，在50cm50cm高的操作压下，用高的操作压下，用300ml300ml的的20mmol/l20mmol/l的磷酸缓冲液（的磷酸缓冲液（pHpH为为7.07.0）充分洗涤平衡）充分洗涤平衡1212小时。小时。注意：注意：注意：注意：1 1、液面不要低于凝胶、液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。生物大分子物质的分离效果。2 2、不能发生洗脱液流干，露、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象出凝胶颗粒的现象。50cm50cm高高高高（2 2）凝胶色谱柱的装填）凝胶色谱柱的装填24血红蛋白的提取和分离讲义（3 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱 调节缓冲液面：调节缓冲液面：打开下端出口，使柱内打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。滴加透析样品：滴加透析样品：吸管吸吸管吸1ml1ml样品加到色谱样品加到色谱柱的顶端，滴加样品时，吸管管口贴着管壁环柱的顶端，滴加样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。25血红蛋白的提取和分离讲义注意：注意：注意：注意：正确的加样操作是：正确的加样操作是：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴壁加样。、贴壁加样。3 3、使吸管管口沿管壁环绕移动。、使吸管管口沿管壁环绕移动。26血红蛋白的提取和分离讲义样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：加样后打开下端出口，加样后打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全进入凝胶使样品渗入凝胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口层后，关闭下端出口洗脱：洗脱：小心加入小心加入pH=7.0 的的20mmol/l的磷的磷酸缓冲液到适当高度，连接缓冲液洗脱瓶，酸缓冲液到适当高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。打开下端出口进行洗脱。收集：收集：待红色的蛋白质接近色谱柱底端待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每时，用试管收集流出液，每5ml收集一试管，收集一试管，连续收集。（在分离过程中，如果红色区带连续收集。（在分离过程中，如果红色区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功）均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功）27血红蛋白的提取和分离讲义思考下面的问题：思考下面的问题：让血红蛋白处在稳定的让血红蛋白处在稳定的pHpH范围内，维持结构范围内，维持结构和功能正常。和功能正常。1 1、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？磷酸缓冲液处理的目的是什么？2 2、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这一特点对你进行血红蛋白的分离有什特点？这一特点对你进行血红蛋白的分离有什么启示？么启示？血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。实验操作。28血红蛋白的提取和分离讲义（三）（三）SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）鉴定血红蛋白纯度。鉴定血红蛋白纯度。1.1.目的：目的：29血红蛋白的提取和分离讲义1.1.样品的处理样品的处理通过洗涤红细胞、血红蛋白通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液2.2.样品的粗分离样品的粗分离经过透析去除分子量较小经过透析去除分子量较小的杂质的杂质3.3.样品的纯化样品的纯化通过凝胶色谱法通过凝胶色谱法将相对分子将相对分子质量较大的杂质蛋白除去质量较大的杂质蛋白除去4.4.经经聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳进行进行纯度鉴定纯度鉴定。小结：小结：你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？30血红蛋白的提取和分离讲义 观察你处理的血液样品离心后观察你处理的血液样品离心后是否分层是否分层（见教科书图（见教科书图5-185-18），），如果分层不明显，可能如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。影响后续血红蛋白的提取纯度。三、结果分析与评价三、结果分析与评价 1 1、你是否完成了对血液样品的处理？你能、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？描述处理后的样品发生了哪些变化吗？31血红蛋白的提取和分离讲义2 2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，有色物质，例如蓝色葡聚糖例如蓝色葡聚糖20002000或红色葡聚糖，或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。除不了时要重新装柱。32血红蛋白的提取和分离讲义 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。3 3、你能观察到蛋白质的分离过程中红色区、你能观察到蛋白质的分离过程中红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？此判断分离效果？33血红蛋白的提取和分离讲义作业作业完成血红蛋白的提取和分离学案巩完成血红蛋白的提取和分离学案巩固固1 1、巩固、巩固2 2、例、例1 1；随堂达标检测；随堂达标检测1 1、3 3；活页；活页1 1、3 3、5 5、7 75月月15日日34血红蛋白的提取和分离讲义作业作业完成血红蛋白的提取和分离学案全部完成血红蛋白的提取和分离学案全部5月月16日日35血红蛋白的提取和分离讲义教学反馈教学反馈 1凝胶色谱法是根据（凝胶色谱法是根据（）分离蛋白质的有效方法。）分离蛋白质的有效方法。A分子的大小分子的大小 B相对分子质量的大小相对分子质量的大小 C带电荷的多少带电荷的多少 D溶解度溶解度2缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（维持（）基本不变。）基本不变。A温度温度 B pH C渗透压渗透压 D氧气浓度氧气浓度3电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（）的电极移动。）的电极移动。A相同相同 B相反相反 C相对相对 D相向相向4.哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（）与氧气的）与氧气的运输有关。运输有关。A血红蛋白血红蛋白 B肌红蛋白肌红蛋白 C肌动蛋白肌动蛋白 D肌球蛋白肌球蛋白BBBA36血红蛋白的提取和分离讲义5血液由血浆和各种血细胞组成，其中（血液由血浆和各种血细胞组成，其中（）的含量最多。的含量最多。A白细胞白细胞 B血小板血小板 C红细胞红细胞 D淋巴细胞淋巴细胞6为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（凝血剂（）。）。A.NaCl B.甲苯甲苯 C.蒸馏水蒸馏水 D.柠檬酸钠柠檬酸钠7将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为可以明显看到试管中的溶液分为4层，层，其其中第中第3层是（层是（）A无色透明的甲苯层无色透明的甲苯层 B脂溶性物质的沉淀层脂溶性物质的沉淀层 C血红蛋白的水溶液血红蛋白的水溶液 D其他杂质的暗红色沉淀物其他杂质的暗红色沉淀物CDC37血红蛋白的提取和分离讲义8、一分子血红蛋白最多可携带的、一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数分子数和和CO2分子数分别是分子数分别是A 4、2 B 4、4 C 2、1 D、1、19、记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后、记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序分层顺序自上而下自上而下是：是：有有机溶剂机溶剂-脂脂类物质类物质-血血红蛋白溶液红蛋白溶液-红红细胞破碎物沉淀细胞破碎物沉淀38血红蛋白的提取和分离讲义