蛋白质分离技术电泳培训课件

概概 述述n n凝凝胶胶电电泳泳：由由琼琼脂脂、琼琼脂脂糖糖、淀淀粉粉胶胶及及聚聚丙丙烯烯酰酰胺等物质作支持体的电泳。胺等物质作支持体的电泳。n n特点：特点：1.1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔中泳动。中泳动。2.2.电泳操作方法简便，电泳速度快电泳操作方法简便，电泳速度快3.3.分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰。分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰。4.4.适用于生化，免疫等定性定量测定适用于生化，免疫等定性定量测定 7/22/20241蛋白质分离技术电泳琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶天然琼脂（天然琼脂（agaragar）:又名琼胶、菜燕、冻粉又名琼胶、菜燕、冻粉 从石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状从石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。高聚物。琼脂糖（琼脂糖（agaroseagarose）琼脂胶（琼脂胶（agaropectinagaropectin）Acid sulfateCarboxylic acid groups在电场作用下能产生较强的电渗现象在电场作用下能产生较强的电渗现象7/22/20242蛋白质分离技术电泳n n琼脂糖 半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷7/22/20243蛋白质分离技术电泳 琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。凝胶。凝胶。凝胶。D-D-半乳糖半乳糖3 3，6-6-脱水脱水-L-L-半乳糖半乳糖7/22/20244蛋白质分离技术电泳7/22/20245蛋白质分离技术电泳7/22/20246蛋白质分离技术电泳 琼脂糖凝胶的特点琼脂糖凝胶的特点（一）优点（一）优点1.1.因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗2.2.对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象。对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象。3.3.凝凝胶胶结结构构均均匀匀，孔孔径径较较大大，可可用用来来分分离离酶酶的的复复合合物、核酸、病毒物、核酸、病毒 等大分子物质。等大分子物质。4.4.透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色。透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色。5.5.不不吸吸收收紫紫外外光光，可可直直接接利利用用紫紫外外光光吸吸收收法法作作定定量量测定测定6.6.有热可逆性有热可逆性7/22/20247蛋白质分离技术电泳（二）缺点1.机械强度差，易破碎，浓度不能太低。2.易被细菌污染，不易保存，临用前配制。3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立即固定染色。4.与PAGE相比，分子筛作用小，区带少。7/22/20248蛋白质分离技术电泳应应 用用1.适用于大分子的核酸、核蛋白等的分离、鉴定及纯化2.临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的分离与检测3.为不同类型的高脂蛋白血症、冠心病等提供生化指标7/22/20249蛋白质分离技术电泳琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白n n原理 血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，在pH8.6巴比妥缓冲液中电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状分离成不同区带。7/22/202410蛋白质分离技术电泳(一一)血清脂蛋白血清脂蛋白(lipoprotein)lipoprotein)的组成的组成ApoAApoBApoAApoB蛋白质：即载脂蛋白蛋白质：即载脂蛋白 ApoCApoDApoEApoCApoDApoE甘油三酯甘油三酯（TGTG）脂类脂类磷脂磷脂（PLPL）游离胆固醇游离胆固醇（FCFC）胆固醇酯胆固醇酯（CECE）少量糖少量糖7/22/202411蛋白质分离技术电泳7/22/202412蛋白质分离技术电泳（二）分类1.按电泳法分乳糜微粒（chylomicron,CM）-脂蛋白（-位）前-脂蛋白（2-位）-脂蛋白（1-位）7/22/202413蛋白质分离技术电泳2.2.按超速离心法分按超速离心法分 乳糜微粒乳糜微粒(chylomicron,CM)(0.96)chylomicron,CM)(pI，各种脂蛋白均带负电，电泳时由负极到正极；VLDL为圆形，受阻力小，LDL形态不规则，受阻力大，所以VLDL跑在前。7/22/202418蛋白质分离技术电泳加样槽加样槽加样槽加样槽前前前前 CMLDLVLDLHDLCMLDLVLDLHDL+7/22/202419蛋白质分离技术电泳临床应用：高脂蛋白血症的分型CM前正常型a型b型型型型7/22/202420蛋白质分离技术电泳操作操作7/22/202421蛋白质分离技术电泳玻璃片7/22/202422蛋白质分离技术电泳7/22/202423蛋白质分离技术电泳预染色的标本预染色的标本预染色的标本预染色的标本7/22/202424蛋白质分离技术电泳7/22/202425蛋白质分离技术电泳7/22/202426蛋白质分离技术电泳7/22/202427蛋白质分离技术电泳7/22/202428蛋白质分离技术电泳7/22/202429蛋白质分离技术电泳7/22/202430蛋白质分离技术电泳7/22/202431蛋白质分离技术电泳n n正常参考值（百分比）正常参考值（百分比）-脂蛋白脂蛋白 30-40%30-40%前前-脂蛋白脂蛋白 15%15%-脂蛋白脂蛋白 55%55%l l注意事项：注意事项：血清样品要新鲜；血清样品要新鲜；为了免去离心步骤，吸取预染血清时，应为了免去离心步骤，吸取预染血清时，应吸取上层，下层或管底可能有染料颗粒沉渣，吸取上层，下层或管底可能有染料颗粒沉渣，否则应再离心后吸预染血清否则应再离心后吸预染血清。7/22/202432蛋白质分离技术电泳n n名词解释名词解释1.1.迁移率迁移率2.2.电渗电渗3.3.电泳电泳n n问答题问答题1.1.影响电泳迁移率的因素有哪些？影响电泳迁移率的因素有哪些？2.2.试述琼脂糖凝胶电泳分离脂蛋白的原理。试述琼脂糖凝胶电泳分离脂蛋白的原理。复习思考题7/22/202433蛋白质分离技术电泳参参 考考 书书 目目临床生物化学及生物化学检验临床生物化学及生物化学检验临床生物化学及生物化学检验临床生物化学及生物化学检验 第三版第三版第三版第三版 人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社 周新周新周新周新 主编主编主编主编电泳科学出版社电泳科学出版社电泳科学出版社电泳科学出版社 何忠效何忠效何忠效何忠效 张树政张树政张树政张树政 主编主编主编主编蛋白质电泳实验技术蛋白质电泳实验技术蛋白质电泳实验技术蛋白质电泳实验技术 科学出版社科学出版社科学出版社科学出版社 郭尧君郭尧君郭尧君郭尧君蛋白质技术手册蛋白质技术手册蛋白质技术手册蛋白质技术手册 科学出版社科学出版社科学出版社科学出版社 汪家政汪家政汪家政汪家政 范敏范敏范敏范敏 主编主编主编主编 7/22/202434蛋白质分离技术电泳