课题血红蛋白的提取和分离自制培训课件

课题血红蛋白的提取和分课题血红蛋白的提取和分离自制离自制(一）蛋白质一）蛋白质占细胞干重的占细胞干重的5050以上，细胞中含量最多的以上，细胞中含量最多的有机物有机物2 2、组成元素、组成元素C C、H H、O O、N N一、基础知识一、基础知识1 1、含量、含量3 3、相对分子质量、相对分子质量高分子化合物高分子化合物2课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制4 4、基本组成单位、基本组成单位氨基酸氨基酸5 5、氨基酸通式、氨基酸通式R RH HC CCOOHCOOHNHNH2 26 6、氨基酸连接方式、氨基酸连接方式脱水缩合脱水缩合写出氨基酸脱水缩合形成二肽写出氨基酸脱水缩合形成二肽示意图示意图3课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制氨基酸的结合方式CHCOOHR1CHNH2COOHR2NH2COHNHOH4课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制氨基酸的结合方式CHR1NH2OHCOH2OCHCOOHR2HNH5课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制氨基酸的结合方式氨基酸的结合方式:CHR1NH2COCHCOOHR2HNH2O二二肽肽肽键肽键脱水缩合脱水缩合6课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制氨基酸的结合方式氨基酸的结合方式:脱水缩合脱水缩合肽键肽键CHCOOHR3HNOH HCCHR1NH2COCHR2HNO二肽二肽H2OH2O7课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制氨基酸的结合方式氨基酸的结合方式:脱水缩合脱水缩合CCHR1NH2COCHR2HNO肽键肽键二肽二肽CHCOOHR3HNH2O肽键肽键三三肽肽以此类推，由多个氨基酸分子缩合而成的含有多个以此类推，由多个氨基酸分子缩合而成的含有多个肽键的化合物，叫多肽（链状）。肽链盘曲，折叠，肽键的化合物，叫多肽（链状）。肽链盘曲，折叠，形成有一定空间结构的蛋白质分子。形成有一定空间结构的蛋白质分子。H2O8课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制8 8、分子结构、分子结构7 7、肽键、肽键COCONHNH氨基酸氨基酸肽链肽链蛋白质蛋白质脱水缩合脱水缩合盘曲折叠盘曲折叠（一条或者多条）（一条或者多条）9课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制1010、生理功能、生理功能细细胞胞和和生生物物体体的的结结构构物物质质，是是人人体体发发育育和和组组织织更更新新的的主主要要原原料料，具具有有运运输输、调调节节、免免疫疫、催化等作用，是一切生命活动的主要承担者催化等作用，是一切生命活动的主要承担者氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽链的空间结构千差万别序变化多端；多肽链的空间结构千差万别9 9、蛋白质结构的多样性、蛋白质结构的多样性10课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制氨基酸间脱水缩合时，原来的氨基和羧基就不氨基酸间脱水缩合时，原来的氨基和羧基就不存在了，形成的化合物即多肽的一端只有一个氨存在了，形成的化合物即多肽的一端只有一个氨基，另一端只有一个羧基（不计基，另一端只有一个羧基（不计R R基上的氨基和基上的氨基和羧基）。所以对于一条多肽链说，至少应有的氨羧基）。所以对于一条多肽链说，至少应有的氨基和羧基都是一个基和羧基都是一个若有个若有个n n氨基酸分子缩和成氨基酸分子缩和成m m条肽链条肽链,则可形成则可形成 _个肽键个肽键,脱去脱去_个水分子，至有氨基个水分子，至有氨基和和 羧基各羧基各 _个个1111、相关计算、相关计算n-mn-mn-mn-mm m11课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制蛋白质可以含有一条或蛋白质可以含有一条或n n条肽链、肽链通过化条肽链、肽链通过化学键（如二硫键）互相连接，具有不同的空间结学键（如二硫键）互相连接，具有不同的空间结构构12课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制13课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制关于蛋白质相对分子量的计算：关于蛋白质相对分子量的计算：n n 个氨基酸形个氨基酸形成成m m条肽链，每个氨基酸的平均相对质量为条肽链，每个氨基酸的平均相对质量为a,a,那么那么由此形成的蛋白质的相对分子量为由此形成的蛋白质的相对分子量为_n n a-(n-m)a-(n-m)181814课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制课题课题3 3 血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离15课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制思考思考1 1 分离生物大分子的基本思路是什么？分离生物大分子的基本思路是什么？选用一定的物理或化学的方法分离具有选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。不同物理或化学性质的生物大分子。思考思考2 2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？蛋白质的分离和提取的原理是什么？根据蛋白质各种特性的差异根据蛋白质各种特性的差异分子的形状和大小分子的形状和大小所带电荷的性质和多少所带电荷的性质和多少溶解度溶解度分离不同蛋白质分离不同蛋白质16课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制思考思考3 3 高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？的何种作用，作用结果是什么被破坏？变性、变性、空间结构变性、变性、空间结构思考思考4 4 人们用鸡的红细胞提取人们用鸡的红细胞提取DNADNA，用人，用人 的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有鸡的红细胞具有细胞核，含有DNADNA，便，便于进行于进行DNADNA的提取，人的红细胞无细胞的提取，人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。于提取血红蛋白。17课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制 一、凝胶色谱法原理一、凝胶色谱法原理一些微小多孔的球体一些微小多孔的球体内含许多贯穿的通道，内含许多贯穿的通道，由多糖类化合物构成的如葡聚糖、琼脂糖，由多糖类化合物构成的如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛具多孔的凝胶就叫分子筛什么是凝胶？什么是凝胶？18课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制原理：原理：当不同的蛋白质通过凝胶时当不同的蛋白质通过凝胶时相对分子质量较小相对分子质量较小相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶内部的通道凝胶内部的通道容易进入容易进入无法进入凝胶无法进入凝胶内部的通道内部的通道只能在只能在凝胶外部凝胶外部移动移动路程路程较长较长移动速度移动速度较慢较慢路程路程较短较短移动速度移动速度较快较快相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。19课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制20课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制21课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制缓冲溶液的配制缓冲溶液的配制 调节缓冲剂的（调节缓冲剂的（）就可以）就可以制得（制得（）使用的）使用的缓冲液。缓冲液。12使用比例使用比例在不同在不同PHPH范围内范围内 通常由（通常由（）种缓冲剂溶解）种缓冲剂溶解于水中配制而成。于水中配制而成。22课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制(1)0.2 mol/L(1)0.2 mol/L的的Na2HPO4Na2HPO4溶液溶液 将将71.64 g71.64 g的的NaNa2 2HPOHPO4 412H12H2 2O O溶解在溶解在1 000 mL1 000 mL的蒸馏水中的蒸馏水中 (2)0.2 mol/L(2)0.2 mol/L的的NaH2PO4NaH2PO4溶液溶液 将将31.21 g31.21 g的的NaH2PO4NaH2PO42H2O2H2O溶解在溶解在1 000 mL1 000 mL的蒸馏水中的蒸馏水中 23课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制pHpHpHpH5.86.06.26.46.66.88.012.318.526.537.549.092.087.781.573.562.551.07.07.27.47.67.88.061.072.081.087.091.594.739.028.019.013.08.55.30.2 mol/LNaHNaH2 2POPO4 4/mL/mL0.2 mol/LNaNa2 2HPOHPO4 4/mL/mL0.2 mol/L 0.2 mol/LNaHNaH2 2POPO4 4/mL/mLNaNa2 2HPOHPO4 4/mL/mL24课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的液模拟细胞内的PHPH环境，保证血红蛋白环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）和材料的科学研究（活性）25课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制二、电泳的原理二、电泳的原理概念：指概念：指带电粒子带电粒子在在电场作用下电场作用下发生发生 迁移的过程。迁移的过程。26课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制待分待分离样离样品中品中各种各种分子分子带电性质的差异带电性质的差异大小、形状的不同大小、形状的不同带电分子产生不带电分子产生不同的同的迁移速度迁移速度27课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制28课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制 1 1、蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于、蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 等因素。等因素。分子的大小分子的大小它所带静电荷的多少以及分子的大小它所带静电荷的多少以及分子的大小2、SDS：十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠为了消除静电荷对迁移率的影响为了消除静电荷对迁移率的影响SDSSDS能与各种蛋白质形成蛋白质能与各种蛋白质形成蛋白质SDSSDS复合物，复合物，SDSSDS所所带负电荷带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于荷差别，使电泳迁移率完全取决于()。29课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制电泳检测电泳检测PCR结果结果琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳30课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制课堂小结：课堂小结：31课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制1、凝胶色谱法原理：、凝胶色谱法原理：当不同的蛋白质通过凝胶时当不同的蛋白质通过凝胶时相对分子质量较小相对分子质量较小相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶内部的通道凝胶内部的通道容易进入容易进入无法进入凝胶无法进入凝胶内部的通道内部的通道只能在只能在凝胶外部凝胶外部移动移动路程路程较长较长移动速度移动速度较慢较慢路程路程较短较短移动速度移动速度较快较快相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。32课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制待分待分离样离样品中品中各种各种分子分子带电性质的差异带电性质的差异大小、形状的不同大小、形状的不同带电分子产生不带电分子产生不同的同的迁移速度迁移速度2、凝胶电泳原理、凝胶电泳原理33课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制二二 实验操作实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：蛋白质的提取和分离一般分为四步：1.样品处理和粗分离样品处理和粗分离血血液液血浆血浆水分水分固体物质固体物质血浆蛋白血浆蛋白无机盐无机盐磷脂磷脂葡萄糖等葡萄糖等血细胞血细胞白细胞白细胞血小板血小板红细胞红细胞（最多）（最多）血红血红蛋白蛋白（）两个两个a a肽链肽链两个两个一肽链肽链样品处理和粗分离样品处理和粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定共四条肽链共四条肽链9034课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制亚铁血红素集团亚铁血红素集团35课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制36课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制37课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制1、红细胞的洗涤：目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用生理盐水洗涤。2、血红蛋白的释放：在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放38课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制磁力搅拌器39课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制搅拌器转子40课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制搅拌器正在工作41课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制3、分离血红蛋白溶液：离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。42课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制第第1 1层（最上层）：层（最上层）：（）甲苯层）甲苯层第第2 2层（中上层）：层（中上层）：（）的沉淀层，的沉淀层，（）色薄层固体）色薄层固体第第3 3层（中下层）：层（中下层）：（）的水溶液层的水溶液层 （）的液体）的液体 第第4 4层（最下层）：层（最下层）：其它杂质（其它杂质（）的沉淀层）的沉淀层无色透明无色透明脂溶性物质脂溶性物质白白血红蛋白血红蛋白红色透明红色透明暗红色暗红色43课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制用滤纸过滤，用滤纸过滤，除去红细胞破除去红细胞破碎物沉淀，于碎物沉淀，于分液漏斗中静分液漏斗中静置片刻后，置片刻后，分分出下层的红色出下层的红色透明液体透明液体。44课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制4 4、透析：、透析：装入透析袋并置装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（于磷酸缓冲液中（PHPH为为7.07.0）透析。透析。45课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制46课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制利用透析袋透析47课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制48课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制二、凝胶色谱纯化49课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制2.2.凝胶色谱制作凝胶色谱制作1 1）凝胶色谱柱的制作）凝胶色谱柱的制作取长取长4040厘米，内径厘米，内径1.61.6厘米的玻璃厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。管，两端需用砂纸磨平。底塞的制作：底塞的制作：打孔打孔 挖出凹穴挖出凹穴 安装移液管安装移液管头部头部 覆盖尼龙网覆盖尼龙网，再用，再用100100目尼龙纱包目尼龙纱包好。好。50课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制51课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制2 2）凝胶色谱柱填料的处理）凝胶色谱柱填料的处理（1 1）凝胶的选择：）凝胶的选择：（）（）（G-75G-75）“G G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度表示凝胶的交联程度，膨胀程度 及分离范围。及分离范围。7575表示凝胶的得水值，即每克凝胶表示凝胶的得水值，即每克凝胶 膨胀时吸水膨胀时吸水7.57.5克。克。（2 2）方法：）方法：配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于（的凝胶浸泡于（）中充分溶胀后，）中充分溶胀后，配成（配成（）。）。蒸馏水蒸馏水凝胶悬浮液凝胶悬浮液交联葡聚糖凝胶交联葡聚糖凝胶52课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制固定：将色谱柱处置固定在支架上固定：将色谱柱处置固定在支架上装填：装填：将（将（）一次性的缓慢一次性的缓慢倒入（倒入（）内，装填时轻轻敲动色）内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。谱柱，使凝胶填装均匀。（3）凝胶色谱柱的装填方法）凝胶色谱柱的装填方法凝胶悬浮液凝胶悬浮液色谱柱色谱柱53课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制洗涤平衡洗涤平衡 装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在()()高的操作压下，用高的操作压下，用300ml300ml的的20mmol/l20mmol/l的的磷酸缓冲磷酸缓冲液（液（pHpH为为7.07.0）充分（）充分（）1212小时。小时。洗涤平衡洗涤平衡50cm50cm54课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制55课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制3 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱加样前加样前 打开下端出口，使柱内凝打开下端出口，使柱内凝胶面上的（胶面上的（）缓慢下）缓慢下降到与（降到与（）平齐，）平齐，关闭出口关闭出口缓冲液缓冲液凝胶面凝胶面56课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制加加透析透析样样品品注意正确的加样操作：注意正确的加样操作：不要触及破坏凝胶面不要触及破坏凝胶面 贴壁加样贴壁加样 使吸管管口沿管壁环绕移动使吸管管口沿管壁环绕移动57课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制调整缓冲液面：与凝胶面平齐调整缓冲液面：与凝胶面平齐滴加透析样品：用（滴加透析样品：用（）将）将1ml1ml（）的样品加到色谱柱的（的样品加到色谱柱的（）样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：（）洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱收集：收集：待（待（）接近色谱柱底接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每（端时，用试管收集流出液，每（）收集一试管连续收集收集一试管连续收集吸管吸管透析液透析液顶端顶端样品完全进凝胶层样品完全进凝胶层5ml红色的蛋白质红色的蛋白质58课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制开始进行层析59课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制实验录像61课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。离过程非常直观，大大简化了实验操作。思考思考62课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即（）；然后通过凝胶色谱法）；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品的（的（）；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进）；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行（行（）。）。思考思考样品的粗分离样品的粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定63课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制三、纯度鉴定三、纯度鉴定64课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制65课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制3.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳判断（判断（）的蛋白质是否达到要求，）的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质的鉴定。需要进行蛋白质的鉴定。纯化纯化66课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制实验录像67课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制观察你处理的血液样品离心后是否分层观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图（见教科书图5-185-18），如果分层不明显，），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。蛋白的提取纯度。三三 实验结果分析与评价实验结果分析与评价68课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制注意：注意：凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。的洗脱次序，降低分离效果。洗涤平衡洗涤平衡注意液面不要低于凝胶表面，否注意液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。否则重新填装。69课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖色葡聚糖20002000或红色葡聚糖，观察色带移动或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。以消除气泡，消除不了时要重新装柱。70课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。71课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制讨论：如何测定蛋白质的分子量？讨论：如何测定蛋白质的分子量？使用使用SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子量时，的分子量时，可选用一组已知分子量的标准可选用一组已知分子量的标准蛋白同时进行电泳蛋白同时进行电泳，根据已知分子量的标准，根据已知分子量的标准蛋白的电泳区带位置，用蛋白的电泳区带位置，用电泳迁移率和分子电泳迁移率和分子量的对数作标准曲线，量的对数作标准曲线，可以测定未知蛋白质可以测定未知蛋白质的分子量。市场上有高分子量、次高分子量的分子量。市场上有高分子量、次高分子量及低分子量的标准蛋白试剂出售及低分子量的标准蛋白试剂出售72课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制教学反馈教学反馈 1 1凝胶色谱法是根据（凝胶色谱法是根据（）分离蛋白质的有效方法。）分离蛋白质的有效方法。A A分子的大小分子的大小 B B相对分子质量的大小相对分子质量的大小 C C带电荷的多少带电荷的多少 D D溶解度溶解度2 2缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（维持（）基本不变。）基本不变。A A温度温度 B pH CB pH C渗透压渗透压 D D氧气浓度氧气浓度3 3电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（）的电极移动。）的电极移动。A A相同相同 B B相反相反 C C相对相对 D D相向相向4.4.哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（）与氧）与氧气的运输有关。气的运输有关。A A血红蛋白血红蛋白 B B肌红蛋白肌红蛋白 C C肌动蛋白肌动蛋白 D D肌球蛋肌球蛋白白B BB BB BA A73课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制5 5血液由血浆和各种血细胞组成，其中（血液由血浆和各种血细胞组成，其中（）的含量最多。）的含量最多。A A白细胞白细胞 B B血小板血小板 C C红细胞红细胞 D D淋巴细胞淋巴细胞6 6为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（凝血剂（）。）。A.NaCl B.A.NaCl B.甲苯甲苯 C.C.蒸馏水蒸馏水 D.D.柠檬酸钠柠檬酸钠7 7将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为可以明显看到试管中的溶液分为4 4层，层，其中第其中第3 3层是（层是（）A A无色透明的甲苯层无色透明的甲苯层 B B脂溶性物质的沉淀层脂溶性物质的沉淀层 C C血红蛋白的水溶液血红蛋白的水溶液 D D其他杂质的暗红色沉淀物其他杂质的暗红色沉淀物C CD DC C74课题血红蛋白的提取和分离自制课题血红蛋白的提取和分离自制