天然药物化学-强心苷课件

LOGO第八章第八章 强强 心心 苷苷第八章强心苷1知识要求知识要求掌握强心苷的结构与分类、水解性、掌握强心苷的结构与分类、水解性、熟悉强心苷的性状、溶解性、提取分离、色谱熟悉强心苷的性状、溶解性、提取分离、色谱鉴定、实例分析鉴定、实例分析了解强心苷的结构与强心作用的关系了解强心苷的结构与强心作用的关系能力要求能力要求熟练应用强心苷的显色反应区别甲型与乙型强熟练应用强心苷的显色反应区别甲型与乙型强心苷心苷熟练应用强心苷的提取与分离技能。熟练应用强心苷的提取与分离技能。学会强心苷的鉴别方法学会强心苷的鉴别方法知识要求2一、定义强心苷强心苷是存在于植物中具有是存在于植物中具有强心作用强心作用的的甾体苷类化合物，由强心苷元和糖缩合甾体苷类化合物，由强心苷元和糖缩合而产生的一类苷。而产生的一类苷。强心苷是强心苷是治疗室率过快心房颤动的首治疗室率过快心房颤动的首选药和慢性心功能不全选药和慢性心功能不全的主要药物。的主要药物。一、定义3n目前临床应用的有二、三十种，用于治疗目前临床应用的有二、三十种，用于治疗充血性心力衰竭及节律障碍等心脏疾病，充血性心力衰竭及节律障碍等心脏疾病，如西地兰、地高辛、毛地黄毒苷等如西地兰、地高辛、毛地黄毒苷等。n但强心苷类能兴奋延髓催吐化学感受区而但强心苷类能兴奋延髓催吐化学感受区而引起引起恶心、呕吐等胃肠道反应；且有剧毒恶心、呕吐等胃肠道反应；且有剧毒，若超过安全剂量时，可使心脏中毒而停止若超过安全剂量时，可使心脏中毒而停止跳动跳动。n其中某些强心苷对动物肿瘤有效，主要是其中某些强心苷对动物肿瘤有效，主要是细胞毒作用。细胞毒作用。目前临床应用的有二、三十种，用于治疗充血性心力衰竭及节律障碍4n17851785年，国外使用洋地黄叶治疗水肿，到现在已从年，国外使用洋地黄叶治疗水肿，到现在已从十几个科一百多种植物中发现强心苷类，主要有夹十几个科一百多种植物中发现强心苷类，主要有夹竹桃科、玄参科、萝摩科、卫矛科、百合科、大戟竹桃科、玄参科、萝摩科、卫矛科、百合科、大戟科等等。科等等。尤其在玄参科和夹竹桃科植物中最多尤其在玄参科和夹竹桃科植物中最多。n较重要的植物有黄花夹竹桃、紫花洋地黄、毛花洋较重要的植物有黄花夹竹桃、紫花洋地黄、毛花洋地黄、杠柳、铃蓝、海葱、福寿草、羊角拗等。地黄、杠柳、铃蓝、海葱、福寿草、羊角拗等。n动物中尚未发现有强心苷类成分动物中尚未发现有强心苷类成分，蟾蜍中所含的，蟾蜍中所含的蟾蟾毒毒也对心肌有兴奋作用，具强心作用，但其非苷类，也对心肌有兴奋作用，具强心作用，但其非苷类，而属甾类。而属甾类。1785年，国外使用洋地黄叶治疗水肿，到现在已从十几个科一百5常见的含强心苷的天然药物常见的含强心苷的天然药物铃兰、紫花洋地黄铃兰、紫花洋地黄R R为鼠李糖为鼠李糖铃兰毒苷铃兰毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷常见的含强心苷的天然药物铃兰、紫花洋地黄R为鼠李糖洋地黄毒苷6黄花夹竹桃黄花夹竹桃黄夹苷甲黄夹苷甲黄夹苷乙黄夹苷乙黄花夹竹桃黄夹苷甲黄夹苷乙7羊角拗羊角拗R R为为L L夹竹桃糖夹竹桃糖羊角拗苷羊角拗苷羊角拗R为L夹竹桃糖8蟾蜍蟾蜍蟾毒灵蟾毒灵蟾蜍蟾毒灵9第二节第二节、结构和分类、结构和分类一、强心一、强心苷元部分苷元部分1.基本结构基本结构n强心苷是由强心苷元与糖二部分构成。强心苷是由强心苷元与糖二部分构成。n强心苷强心苷元是由甾元是由甾体母核与体母核与C17取取代的不饱和内酯代的不饱和内酯环组成环组成第二节、结构和分类1.基本结构强心苷元是由甾体母核与C1710（1）苷元母核n n苷元母核A,B,C,D四个环的稠合构象对强心苷的理化及生理活性有一定影响。天然界存在的强心苷元B/C环是反式，C/D环是顺式，A/B环大多数为顺式-洋地黄毒苷元(digitoxigenin)，少数为反式-乌沙苷元(uzarigenin).（1）苷元母核苷元母核A,B,C,D四个环的稠合构象对强心苷11（2）取代基n n苷元母核上的C3,C14位上都有羟基：C3位-OH多为-型-洋地黄毒苷元，少数为-型(命名时冠以“表”字)3-表洋地黄毒苷元(3-epidigitoxigenin)。C14位-OH都是-型(C/D环顺式)。n nC10，C13，C17位有侧链，C10，C13多为-CH3。n nC17位侧链为不饱和内酯环。n nC11,C12和C19位可能连羰基；C4,5、C5,6、C9,11、C16,17可能有双键。（2）取代基苷元母核上的C3,C14位上都有羟基：12天然存在的强心苷元天然存在的强心苷元洋地黄毒苷元洋地黄毒苷元乌沙苷元乌沙苷元夹竹桃苷元夹竹桃苷元绿海葱苷元绿海葱苷元蟾毒素蟾毒素天然存在的强心苷元洋地黄毒苷元乌沙苷元夹竹桃苷元绿海葱苷元蟾132.结构类型结构类型根据根据C17位侧链的不饱和内酯环不同分为：位侧链的不饱和内酯环不同分为：n甲型甲型：C17位侧链为位侧链为五元环五元环的的-内酯内酯n乙型乙型：C17位侧链为位侧链为六元环六元环的的-内酯内酯这两类大都是这两类大都是-构型，个别为构型，个别为-构型，构型，-型无型无强心作用。强心作用。2.结构类型根据C17位侧链的不饱和内酯环不同分为：14甲型强心苷元：nC17位上连位上连五元不饱和内酯环五元不饱和内酯环，即，即-内酯内酯-强心甾烯型。以强心甾烯型。以强心甾强心甾（cardenolide）为母核命名。为母核命名。甲型强心苷元：C17位上连五元不饱和内酯环，即-内15乙型强心苷元乙型强心苷元C17位上连位上连六元不饱和内酯环六元不饱和内酯环，即，即，-双烯双烯-内酯，称为海葱甾二烯或蟾蜍甾二烯。以内酯，称为海葱甾二烯或蟾蜍甾二烯。以海葱甾海葱甾（scillanolide）或蟾蜍甾或蟾蜍甾(bufanolide)为母核命名。为母核命名。乙型强心苷元C17位上连六元不饱和内酯环，即，16二、二、糖部分糖部分n构成强心苷的糖有构成强心苷的糖有20多种，根据多种，根据C2位上有无位上有无-OH分为分为-OH（2-OH）糖及糖及-去氧糖（去氧糖（2-去氧糖）去氧糖）两类。后者主要见于强心苷。两类。后者主要见于强心苷。1.-羟基糖羟基糖除广泛分布于植物界的除广泛分布于植物界的D-葡萄糖、葡萄糖、L-鼠李糖外，鼠李糖外，还有：还有：（1）6-去氧糖如：去氧糖如：L-夫糖、夫糖、D-鸡纳糖等。鸡纳糖等。（2）6-去氧糖甲醚如：去氧糖甲醚如：L-黄夹糖、黄夹糖、D-洋地黄糖等。洋地黄糖等。二、糖部分构成强心苷的糖有20多种，根据C2位上有无-OH分172.-去氧糖去氧糖（1）2,6-二去氧糖如：二去氧糖如：D-洋地黄毒糖等。洋地黄毒糖等。（2）2,6-二去氧糖甲醚如：二去氧糖甲醚如：L-夹竹桃糖、夹竹桃糖、D-加拿大麻糖等。加拿大麻糖等。2.-去氧糖18构成强心苷的糖对强心构成强心苷的糖对强心作用的影响作用的影响 构成强心苷的糖数目和种类不同，对强心苷活性影响不同。甲型强心苷元及其苷的毒性规律一般为：苷元二糖苷三糖苷 单糖苷的毒性次序为：葡萄糖苷甲氧基糖苷6-去氧糖苷2,6-去氧糖苷构成强心苷的糖对强心作用的影响构成强心苷的糖数19 乙型强心苷元及其苷的毒性规律一般为：苷元单糖苷二糖苷 乙型强心苷元的毒性相应的甲型强心苷元乙型强心苷元及其苷的毒性规律一般为：20三、糖和苷元的连接方式n强心苷中，多数是强心苷中，多数是几种糖结合成几种糖结合成低聚糖形式再与低聚糖形式再与苷元的苷元的C3-OH结合成苷，少数为双糖苷或单糖苷。结合成苷，少数为双糖苷或单糖苷。糖和苷的连接方式有三种：糖和苷的连接方式有三种：型型:苷元苷元-(2,6-去氧糖去氧糖)X-(D-葡萄糖葡萄糖)Y型型:苷元苷元-(6-去氧糖去氧糖)X-(D-葡萄糖葡萄糖)Y型：苷元型：苷元-（D-葡萄糖）葡萄糖）YX=1-3;Y=1-2一般初生苷其末端多为葡萄糖一般初生苷其末端多为葡萄糖。天然存在的强心苷多数属于天然存在的强心苷多数属于型型和和型型，型型较少。较少。三、糖和苷元的连接方式强心苷中，多数是几种糖结合成低聚糖形式21结构举例结构举例结构举例22天然药物化学-强心苷课件23强心苷的生理活性vv强心苷为心脏兴奋剂，主要作用是延长传导时间，兴奋心肌。其强心作用主要取决于苷元部分，但糖部分可增加强心苷对心肌的亲和力，故对强心苷的生理活性也有影响。强心苷的生理活性强心苷为心脏兴奋剂，主要作用是延长传导时间，24苷元结构与强心作用的关系苷元结构与强心作用的关系vv1.强心苷元甾体母核必须具有一定的构强心苷元甾体母核必须具有一定的构象和象和C17位连接的不饱和内酯环及其位连接的不饱和内酯环及其-构构型是不可缺少的，若异构化为型是不可缺少的，若异构化为-型或开环型或开环或不饱和内酯环被氢化或双键位移，强心或不饱和内酯环被氢化或双键位移，强心作用将变得很弱，甚至消失。作用将变得很弱，甚至消失。苷元结构与强心作用的关系25vv2.C/D环必须是顺式稠合才有强心作用。环必须是顺式稠合才有强心作用。vv3.C14位上位上-OH只有是只有是-构型的才有效构型的才有效,C14-OH如与邻近的碳原子上的如与邻近的碳原子上的H脱水脱水形成双键或与形成双键或与C8脱氢成氧桥，均使强心脱氢成氧桥，均使强心作用减低或消失。作用减低或消失。C14-OH可能是保持可能是保持氧的功能和氧的功能和C/D环为顺式构象的重要因素。环为顺式构象的重要因素。2.C/D环必须是顺式稠合才有强心作用。26v4.A/B环顺式的甲型强心苷元，环顺式的甲型强心苷元，C3-OH必须是必须是-构型，构型，-型无活性。型无活性。v5.C10-CH3氧化成羟甲基或醛基或羧酸氧化成羟甲基或醛基或羧酸后，可影响强心作用的强度或毒性，但后，可影响强心作用的强度或毒性，但不是决定因素。不是决定因素。4.A/B环顺式的甲型强心苷元，C3-OH必须是-构型，27vv6.引入引入5、11、12-OH有增强有增强活性作用，而引入活性作用，而引入1、6、16-OH有降低活性作用。有降低活性作用。6.引入5、11、12-OH有增强活性作用，而引入28v7.在母核上引入双键，对强心作用的影在母核上引入双键，对强心作用的影响不一致，引入响不一致，引入4（5）与引入与引入5-OH的的影响相似，能增强活性，而引入影响相似，能增强活性，而引入 16（17）则活性消失或显著下降。则活性消失或显著下降。v8.无论在苷元或糖基上增加乙酰基都有无论在苷元或糖基上增加乙酰基都有增强活性的作用。增强活性的作用。7.在母核上引入双键，对强心作用的影响不一致，引入4（529第三节 理化性质一一.性状性状 强心苷多为无色结晶或无定形粉末，强心苷多为无色结晶或无定形粉末，中性物质，有旋光性，中性物质，有旋光性，C C17 17 侧链为侧链为-构型的味苦，构型的味苦，-构型味不苦构型味不苦，但无，但无效。效。对粘膜有刺激性对粘膜有刺激性。第三节理化性质一.性状30二二.溶解溶解性性强心苷的溶解性与所连糖的种类和数目有关强心苷的溶解性与所连糖的种类和数目有关，一般可溶于水、甲醇、乙醇、丙酮等极性溶一般可溶于水、甲醇、乙醇、丙酮等极性溶剂；难溶于乙醚、苯、石油醚等非极性溶剂。剂；难溶于乙醚、苯、石油醚等非极性溶剂。弱亲脂性苷微溶于氯仿弱亲脂性苷微溶于氯仿-乙醇乙醇(2:1)，亲脂性，亲脂性苷微溶于乙酸乙酯、含水氯仿、氯仿苷微溶于乙酸乙酯、含水氯仿、氯仿-乙醇乙醇（3:1）。）。二.溶解性31 一般糖基多的原生苷比次生苷或苷元的亲一般糖基多的原生苷比次生苷或苷元的亲水性强、亲脂性弱，可溶于水等高极性溶剂水性强、亲脂性弱，可溶于水等高极性溶剂而难溶于低极性溶剂，多为无定形粉末。而难溶于低极性溶剂，多为无定形粉末。洋地黄毒苷洋地黄毒苷是一个三糖苷，但是一个三糖苷，但3分子糖都是分子糖都是洋地黄毒糖，整个分子只有洋地黄毒糖，整个分子只有5个羟基，故在个羟基，故在水溶液中溶解度小水溶液中溶解度小(1:100000000)，溶于氯，溶于氯仿（仿（1:40）。）。洋地黄毒苷一般糖基多的原生苷比次生苷或苷元的亲水性强、亲脂性弱，可溶32 当糖基与苷元上的羟基数目相同时，苷元上的当糖基与苷元上的羟基数目相同时，苷元上的羟基不能形成分子内氢键的比能形成分子内氢羟基不能形成分子内氢键的比能形成分子内氢键的水溶性大。键的水溶性大。当糖基与苷元上的羟基数目相同时，苷元上的羟基不能形成分子内33n n但糖基和苷元上羟基数目的多少对溶解性也有一定的影响。如乌本苷是一个单糖苷，却有8个羟基，水溶性很大（1:75），难溶于氯仿。乌本苷但糖基和苷元上羟基数目的多少对溶解性也有一定的影响。如乌本苷34另：另：脱水反应脱水反应强心苷混合强酸（强心苷混合强酸（3%-5%HCl）加热水解时，加热水解时，苷元往往发生脱水反应。苷元往往发生脱水反应。（1）C14-OH最易发生脱水反应生成缩水苷最易发生脱水反应生成缩水苷元。元。（2）同时存在同时存在C14-OH和和C16-OH，也易脱水，也易脱水，得到二缩水苷元。得到二缩水苷元。另：脱水反应35（3）如将C3-OH氧化为酮基，则更使C5叔羟基活化，在温热条件下即可脱水而形成烯酮。同样，C16被氧化为酮基，也能促使C14-叔羟基脱水而形成烯酮。（4）若C4位有双键，可促使C3-OH与C4-H脱水，生成共轭双键。（3）如将C3-OH氧化为酮基，则更使C5叔羟基活化，在温热36三三.水解水解性性水解反应是研究强心苷组成的常用方法，水解反应是研究强心苷组成的常用方法，分化学方法和生物方法两大类，化学方分化学方法和生物方法两大类，化学方法主要有酸水解、碱水解和乙酰解；生法主要有酸水解、碱水解和乙酰解；生物方法主要有酶水解。糖部分不同，其物方法主要有酶水解。糖部分不同，其水解产物难易及产物均不同。水解产物难易及产物均不同。三.水解性37（一）（一）酸酸催化催化水解水解1.温和酸水解：温和酸水解：用稀酸用稀酸（0.02-0.05mol/L)的盐酸的盐酸或硫酸在含水醇中经或硫酸在含水醇中经短时间短时间（半小时至半小时至数小时数小时）加热回流，可使）加热回流，可使型强心苷水型强心苷水解成苷元和糖。解成苷元和糖。（一）酸催化水解38主要主要水解苷元和水解苷元和-去氧糖之间去氧糖之间的苷键或的苷键或-去氧糖与去氧糖与-去氧糖之间去氧糖之间的糖苷键。的糖苷键。而而-去氧糖与葡萄糖之间的糖苷键不易断裂。去氧糖与葡萄糖之间的糖苷键不易断裂。对苷元影响较小，对苷元影响较小，不会引起脱水反应不会引起脱水反应。但不适于但不适于16位有甲酰基的洋地黄强心苷类位有甲酰基的洋地黄强心苷类，在此种条件下，在此种条件下，16位甲酰基水解为羟基，得不位甲酰基水解为羟基，得不到原生苷元。到原生苷元。主要水解苷元和-去氧糖之间的苷键或392.强烈酸水解强烈酸水解n用较浓酸（用较浓酸（3%-5%）长时间加热回流或）长时间加热回流或同时加压，可水解同时加压，可水解型和型和型强心苷，得型强心苷，得到定量的葡萄糖。到定量的葡萄糖。可水解可水解-羟基糖羟基糖。因为。因为位的羟基阻碍了苷原子的质子化，使水解位的羟基阻碍了苷原子的质子化，使水解较困难。较困难。但此法常引起苷元失去但此法常引起苷元失去1分子或数分子水分子或数分子水,形成形成脱水苷元脱水苷元。2.强烈酸水解用较浓酸（3%-5%）长时间加热回流或同402.酶水解法酶水解法n酶水解具有反应温和、专一性强的特点酶水解具有反应温和、专一性强的特点n含强心苷的植物中，含强心苷的植物中，有水解葡萄糖的酶，有水解葡萄糖的酶，在在适宜条件下，适宜条件下，能水解糖链末端的葡萄糖能水解糖链末端的葡萄糖。但。但无无水解水解-去氧糖的酶去氧糖的酶，所以能水解除去分子，所以能水解除去分子中的葡萄糖而保留中的葡萄糖而保留-去氧糖。去氧糖。蜗牛酶蜗牛酶（一种混合酶，蜗牛肠管消化液经处（一种混合酶，蜗牛肠管消化液经处理而得）几乎能水解所有的苷键，能将强心理而得）几乎能水解所有的苷键，能将强心苷分子的糖逐步水解，直至获得苷元，常用苷分子的糖逐步水解，直至获得苷元，常用来研究强心苷的结构。来研究强心苷的结构。2.酶水解法酶水解具有反应温和、专一性强的特点41紫花洋地黄苷紫花洋地黄苷A A紫花苷酶紫花苷酶洋地黄毒苷洋地黄毒苷+D-D-葡萄糖葡萄糖紫花洋地黄苷紫花洋地黄苷B B紫花苷酶紫花苷酶羟基洋地黄毒苷羟基洋地黄毒苷+D-D-葡萄糖葡萄糖紫花洋地黄苷A紫花苷酶洋地黄毒苷+D-葡萄糖紫花洋地黄苷B紫423.碱水解法碱水解法n强心苷的苷键为缩醛结构，可被酸或酶水强心苷的苷键为缩醛结构，可被酸或酶水解，而不被碱水解。碱试剂主要解，而不被碱水解。碱试剂主要使分子中使分子中的的酰基酰基水解、内酯环裂开、水解、内酯环裂开、20（22）转位转位及苷元异构化及苷元异构化等。等。3.碱水解法强心苷的苷键为缩醛结构，可被酸或酶水解，而不被43A.酰基的水解n在强心苷的苷元或糖基上常有酰基存在，一在强心苷的苷元或糖基上常有酰基存在，一般可用碱试剂处理使酯键水解脱去酰基。般可用碱试剂处理使酯键水解脱去酰基。NaHCO3,KHCO3-使使-去氧糖上的酰基水去氧糖上的酰基水解，而解，而-羟基糖及苷元上的酰基多不被水解；羟基糖及苷元上的酰基多不被水解；Ca(OH)2,Ba(OH)2-使使-去氧糖、去氧糖、-羟基糖羟基糖及苷元上的酰基水解；及苷元上的酰基水解；NaOH碱性太强，不但使所有酰基水解，还碱性太强，不但使所有酰基水解，还使内酯环开裂，故很少使用。使内酯环开裂，故很少使用。A.酰基的水解在强心苷的苷元或糖基上常有酰基存在，一般可用44 B.内酯环的水解NaOH或或KOH的水溶液使内酯环开裂，的水溶液使内酯环开裂，酸化后又闭环。酸化后又闭环。但在强心苷的醇溶液中但在强心苷的醇溶液中加加NaOH或或KOH内酯环开裂，酸化后不内酯环开裂，酸化后不能闭环。能闭环。B.内酯环的水解NaOH或KOH的水溶液使内酯环开裂45第四节强心苷的检识第四节强心苷的检识46一一化学检识（显色化学检识（显色反应反应）强心苷颜色反应很多，根据颜色反应发生强心苷颜色反应很多，根据颜色反应发生在分子的不同部位可分为三类：在分子的不同部位可分为三类：（一）作用于甾体母核的反应：（一）作用于甾体母核的反应：1.醋酐醋酐-浓硫酸反应浓硫酸反应(Liebermann-burchardrection)2.氯仿氯仿-浓硫酸反应（浓硫酸反应（Salkowskireaction)3.三氯醋酸反应三氯醋酸反应4.三氯化锑或五氯化锑反应三氯化锑或五氯化锑反应一化学检识（显色反应）强心苷颜色反应很多，根据颜色反47（二）作用于（二）作用于,不饱和内酯环的反应：不饱和内酯环的反应：甲型强心苷在碱性醇溶液中，发生双键甲型强心苷在碱性醇溶液中，发生双键转移，生成活性亚甲基，故可与活性亚甲基转移，生成活性亚甲基，故可与活性亚甲基试剂作用而显色。试剂作用而显色。乙型强心苷无此类反应。乙型强心苷无此类反应。（二）作用于,不饱和内酯环的反应：甲型强心苷48 甲型强心苷在醇性甲型强心苷在醇性KOH溶液中，通过内溶液中，通过内酯环的双键转移和质子转移形成酯环的双键转移和质子转移形成C22活性活性亚亚甲基甲基，C14羟基质子对羟基质子对C20的亲电性加成作的亲电性加成作用而生成内酯型异构化苷，再经皂化作用用而生成内酯型异构化苷，再经皂化作用开环而生成开链型异构化苷。开环而生成开链型异构化苷。甲型强心苷在醇性KOH溶液中，通过内酯环的双键转移和质子转49乙型强心苷在醇性乙型强心苷在醇性KOH溶液中，不发生双溶液中，不发生双键转移，但内酯环开裂生成酯，再脱水形键转移，但内酯环开裂生成酯，再脱水形成开链型异构化苷。成开链型异构化苷。乙型强心苷在醇性KOH溶液中，不发生双键转移，但内酯环开裂生501.Kedde反应反应（3,5-二硝基苯甲酸试剂）二硝基苯甲酸试剂）取样品的甲醇或乙醇溶液于试管中，加入取样品的甲醇或乙醇溶液于试管中，加入3,5-二硝基苯甲酸试剂二硝基苯甲酸试剂3-4滴，产生红或紫红色。滴，产生红或紫红色。2.Raymond反应（间二硝基苯试剂）反应（间二硝基苯试剂）：取样品约取样品约1mg，以少量的以少量的50%乙醇溶解后加入乙醇溶解后加入0.1ml1%间二硝基苯乙醇溶液，摇匀后再加入间二硝基苯乙醇溶液，摇匀后再加入0.2ml20%NaOH溶液，呈紫红色。溶液，呈紫红色。1.Kedde反应（3,5-二硝基苯甲酸试剂）取样513.Baljet反应（碱性苦味酸试剂）反应（碱性苦味酸试剂）取样品的甲醇或乙醇液于试管中，加入碱取样品的甲醇或乙醇液于试管中，加入碱性苦味酸试剂数滴，呈现橙或橙红色。有时性苦味酸试剂数滴，呈现橙或橙红色。有时需放置需放置15min后显色。后显色。4.Legal反应（亚硝酰铁氰化钠试剂）：反应（亚硝酰铁氰化钠试剂）：取样品取样品1-2mg，溶于溶于2-3滴吡啶中，加一滴吡啶中，加一滴滴3%亚硝酰铁氰化钠溶液和一滴亚硝酰铁氰化钠溶液和一滴2mol/L NaOH溶液，样品液呈深红色并渐渐褪去。溶液，样品液呈深红色并渐渐褪去。3.Baljet反应（碱性苦味酸试剂）取样品的甲醇或52小结小结.不饱和五元内酯环反应不饱和五元内酯环反应小结.不饱和五元内酯环反应53（三）作用于（三）作用于2-去氧糖的反应去氧糖的反应1.Keller-kiliani(K-K)反应反应此反应是此反应是-去氧糖去氧糖(2-去氧糖）的特征反去氧糖）的特征反应，对游离的应，对游离的-去氧糖或在反应条件下能去氧糖或在反应条件下能水解出水解出-去氧糖的强心苷都可显色。取样去氧糖的强心苷都可显色。取样品品1mg溶于溶于5ml冰乙酸中，加一滴冰乙酸中，加一滴20%三氯三氯化铁水溶液，倾斜试管，沿试管壁加入化铁水溶液，倾斜试管，沿试管壁加入5ml浓硫酸，若有浓硫酸，若有-去氧糖存在，乙酸层渐呈去氧糖存在，乙酸层渐呈蓝或蓝绿色。但若不显色，不能说明无蓝或蓝绿色。但若不显色，不能说明无2-去氧糖。去氧糖。（三）作用于2-去氧糖的反应1.Keller-kil542.占吨氢醇反应占吨氢醇反应:取样品加入占吨氢醇试剂，取样品加入占吨氢醇试剂，置沸水浴中置沸水浴中3min，如含如含2-去氧糖显红色。去氧糖显红色。3.过碘酸过碘酸-对硝基苯胺反应：对硝基苯胺反应：含含2-去氧糖样品去氧糖样品反应后呈深黄色斑点，紫外灯下为棕色背底反应后呈深黄色斑点，紫外灯下为棕色背底上出现黄色荧光斑点。上出现黄色荧光斑点。2.占吨氢醇反应:取样品加入占吨氢醇试剂，置沸水浴中3mi554.对对-硝基苯肼反应：硝基苯肼反应：样品反应后呈红色样品反应后呈红色或紫红色。对或紫红色。对-去氧糖和葡萄糖结合的，去氧糖和葡萄糖结合的，K-K反应阴性的也可呈阳性反应。反应阴性的也可呈阳性反应。5.对对-二甲氨基苯甲醛反应：二甲氨基苯甲醛反应：样品反应后样品反应后呈灰呈灰 红色斑点。红色斑点。4.对-硝基苯肼反应：样品反应后呈红色或紫红色。对-去氧糖56第五节提取分离n强心苷强心苷含量很低含量很低，多与，多与糖类、皂苷、色素、糖类、皂苷、色素、鞣质鞣质等共存，这些成分的存在可影响强心苷等共存，这些成分的存在可影响强心苷在溶剂中的溶解度。同时，强心苷的原生苷在溶剂中的溶解度。同时，强心苷的原生苷和次生苷共存，且很多结构相似的苷同存，和次生苷共存，且很多结构相似的苷同存，故故提取分离较难提取分离较难。n因酸碱可使强心苷发生水解、脱水和异构化，因酸碱可使强心苷发生水解、脱水和异构化，故提取分离时应注意控制酸碱性故提取分离时应注意控制酸碱性。第五节提取分离强心苷含量很低，多与糖类、皂苷、色素、鞣质57注意的问题：注意的问题：1.1.共存物质：糖类、皂苷、色素、鞣质共存物质：糖类、皂苷、色素、鞣质 2.2.原生苷水解问题原生苷水解问题（一）（一）原生苷：抑制酶的活性原生苷：抑制酶的活性新鲜药材，采后低温速干新鲜药材，采后低温速干直接沸水或直接沸水或6070水提取水提取7080%乙醇或甲醇提取乙醇或甲醇提取(4)药材加中性盐如硫酸铵等，再提取药材加中性盐如硫酸铵等，再提取注意的问题：58 （二）（二）次生苷：利用酶的活性次生苷：利用酶的活性药材药材+水水2540发酵发酵12h以上，醇提取以上，醇提取（二）次生苷：利用酶的活性59天然药物化学-强心苷课件60天然药物化学-强心苷课件61 1.溶剂法：溶剂法：种子药材：种子药材：脱脂，再醇提取脱脂，再醇提取醇提浓缩液，石油醚萃取油脂醇提浓缩液，石油醚萃取油脂（氯氯仿仿:甲甲醇醇)萃萃取取苷苷茎叶药材：茎叶药材：去脂溶性色素的方法去脂溶性色素的方法醇提浓缩，冷置析胶（叶绿素析出胶状物醇提浓缩，冷置析胶（叶绿素析出胶状物醇提浓缩，石油醚萃取色素醇提浓缩，石油醚萃取色素醇提浓缩，醇提浓缩，NaOH，叶绿素被皂化，叶绿素被皂化醇提取液，活性炭脱色醇提取液，活性炭脱色二、纯化二、纯化1.溶剂法：二、纯化622.铅盐法铅盐法：醋酸铅沉淀醇提取液中：醋酸铅沉淀醇提取液中：酸、酚酸、皂苷类酸、酚酸、皂苷类强心苷易被沉淀吸附强心苷易被沉淀吸附3.吸附法：吸附法：活性炭短柱吸附：活性炭短柱吸附：醇提液中叶绿素等脂溶性色素醇提液中叶绿素等脂溶性色素氧化铝短柱吸附：氧化铝短柱吸附：醇提液中糖、水溶性色素、皂苷被吸附醇提液中糖、水溶性色素、皂苷被吸附强心苷易被沉淀吸附损失强心苷易被沉淀吸附损失2.铅盐法：63 三、分离三、分离（一）两相溶剂萃取法：（一）两相溶剂萃取法：依据上面溶解度如何进行萃取法分离依据上面溶解度如何进行萃取法分离A、B、C？三、分离依据上面溶解度如何进行萃取法分离64 （二）逆流分配法（二）逆流分配法（CCDCCD）：）：如：流动相：如：流动相：如：流动相：如：流动相：CHClCHCl33，固定相：水固定相：水固定相：水固定相：水n=3n=3时，时，时，时，得到得到得到得到3 3个流动相个流动相个流动相个流动相CHClCHCl3 3（亲脂性成分）（亲脂性成分）（亲脂性成分）（亲脂性成分）33个固定相水相（亲水性成分）个固定相水相（亲水性成分）个固定相水相（亲水性成分）个固定相水相（亲水性成分）（二）逆流分配法（CCD）：如：流动相：CHC65分离因子分离因子较小，简单萃取几次效果不佳较小，简单萃取几次效果不佳所以采取多次、连续的萃取分离过程。所以采取多次、连续的萃取分离过程。例如：黄花夹竹桃苷例如：黄花夹竹桃苷A、B的分离的分离9次次CCD氯仿层氯仿层67管：苷管：苷A水层水层25管：苷管：苷B天然药物化学-强心苷课件66（三）色谱分离法：（三）色谱分离法：吸附色谱：苷元、次级苷、单糖苷吸附色谱：苷元、次级苷、单糖苷分配色谱：弱亲脂性苷类分配色谱：弱亲脂性苷类液滴逆流色谱（液滴逆流色谱（DCCC）：）：高速逆流色谱（高速逆流色谱（HSCCC）：）：后后二二者者克克服服固固体体载载体体的的不不可可逆逆吸吸附附、样样品品峰拖尾等弊端。峰拖尾等弊端。（三）色谱分离法：67