免疫学检测原理课件

免疫学检测原理免疫学检测原理第二十二章第二十二章免疫学检测原理第二十二章1概述概述抗原抗体的检测技术抗原抗体的检测技术免疫细胞的检测免疫细胞的检测细胞因子及其受体的检测细胞因子及其受体的检测粘附分子的检测粘附分子的检测免疫相关基因的检测免疫相关基因的检测免疫标记技术免疫标记技术细胞凋亡的检测细胞凋亡的检测主主要要内内容容概述主要内容2免疫学检测是应用免疫学理论免疫学检测是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验手段及分胞及其分泌的细胞因子的实验手段及分子生物学技术在免疫学研究中的应用。子生物学技术在免疫学研究中的应用。免疫学技术的应用极为广泛免疫学技术的应用极为广泛,疾疾病的诊断、疗效评价及理论研究等。病的诊断、疗效评价及理论研究等。一、概一、概述述免疫学检测是应用免疫学理论设计的一3概述概述抗原抗体的检测技术抗原抗体的检测技术免疫细胞的检测免疫细胞的检测细胞因子及其受体的检测细胞因子及其受体的检测粘附分子的检测粘附分子的检测免疫相关基因分析免疫相关基因分析免疫标记技术免疫标记技术免疫免疫PCR(IM-PCR)技术技术细胞凋亡的检测细胞凋亡的检测主主要要内内容容概述主要内容4*根据反应的基本原理与表现主根据反应的基本原理与表现主要分为凝集反应、沉淀反应和补体要分为凝集反应、沉淀反应和补体参与的各种反应。参与的各种反应。*根据抗原抗体反应设计的试验根据抗原抗体反应设计的试验还有标记抗原还有标记抗原(或抗体或抗体)检测相应物检测相应物质的标记技术。质的标记技术。二、抗原抗体的检测技术二、抗原抗体的检测技术*根据反应的基本原理与表现主要分为凝集反应、沉5抗原抗原-抗体反应的特点抗体反应的特点抗原抗原-抗体的结合是特异性结合；抗体的结合是特异性结合；抗原抗体反应可分为两个阶段：抗原抗体反应可分为两个阶段：特异性结合阶段特异性结合阶段可见的反应阶段可见的反应阶段抗原和抗体结合是否呈现可见的反应抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象，与两者的分子比例密切相关。现象，与两者的分子比例密切相关。抗原-抗体反应的特点抗原-抗体的结合是特异性结合；6抗原抗体的检测方法抗原抗体的检测方法凝集反应凝集反应沉淀反应沉淀反应补体溶血反应补体溶血反应和补体结合反应和补体结合反应中和反应中和反应用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应抗原抗体的检测方法凝集反应7凝集反应凝集反应(Agglutination)细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集后形成凝集现象，称为凝聚反应。现象，称为凝聚反应。1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。又分为玻片法和试管法。2、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。集现象。凝集反应(Agglutination)细菌、红细胞等8凝集试验凝集试验凝集试验9间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验10沉淀反应沉淀反应（Precipitation)血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，这一类反应称为沉淀反应。沉淀反物，这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，如絮状沉淀。大多应可在液体中进行，如絮状沉淀。大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质，沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂扩散故也称免疫扩散。进行琼脂扩散故也称免疫扩散。沉淀反应（Precipitation)血清蛋白质11沉淀反应沉淀反应沉淀反应12单扩与双扩单扩与双扩原理原理单扩与双扩原理13单向琼脂糖单向琼脂糖扩散实验扩散实验单向琼脂糖扩散实验14双扩实验双扩实验结果分析结果分析双扩实验结果分析15火箭电泳火箭电泳火箭电泳16对流免疫电泳对流免疫电泳对流免疫电泳17补体结合试验补体结合试验补体结合试验18Western Blot 检测检测HIVWesternBlot检测HIV19一、概述一、概述二、抗原抗体的检测技术二、抗原抗体的检测技术三、免疫细胞的检测三、免疫细胞的检测四、细胞因子及其受体的检测四、细胞因子及其受体的检测五、粘附分子的检测五、粘附分子的检测六、免疫相关基因分析六、免疫相关基因分析七、免疫标记技术七、免疫标记技术八、免疫八、免疫PCR(IM-PCR)技术技术九、细胞凋亡的检测九、细胞凋亡的检测主主要要内内容容一、概述主要内容20对对机机体体参参与与免免疫疫应应答答的的细细胞胞进进行行鉴鉴定定,计计数及功能测定。数及功能测定。(一一)淋巴细胞及亚群的分离淋巴细胞及亚群的分离三、免疫细胞的检测三、免疫细胞的检测对机体参与免疫应答的细胞进行鉴定,计数及功21(1)抗凝抗凝静脉血静脉血(2)加等加等量量NS(4)密度梯度离心密度梯度离心血浆血浆分离液分离液RBCPBMCPMN(3)混匀后，缓混匀后，缓慢加于分离液上慢加于分离液上(1)抗凝(2)加等量NS(4)密度梯度离心血浆分离22E花环实验花环实验E花环实验23利用表面标志分利用表面标志分离淋巴细胞亚群离淋巴细胞亚群利用表面标志分离淋巴细胞亚群24流式细胞术流式细胞术（FlowCytometry,FCM)FCM是将免疫荧光技术应用于流式是将免疫荧光技术应用于流式细胞仪，对单个细胞的表面标志（抗原细胞仪，对单个细胞的表面标志（抗原或受体）进行快速、精确的分析和自动或受体）进行快速、精确的分析和自动检测，并将不同类型的细胞分选收集。检测，并将不同类型的细胞分选收集。FCM还可对同一细胞的多种参数（如还可对同一细胞的多种参数（如DNA、RNA、蛋白质和细胞体积等）进、蛋白质和细胞体积等）进行多信息分析，为当代生命科学研究领行多信息分析，为当代生命科学研究领域中广泛使用的一项新技术。域中广泛使用的一项新技术。流式细胞术FCM是将免疫荧光技术应用于流式细25流式细胞仪工作原理流式细胞仪工作原理流式细胞仪工作原理26FACS细胞分选细胞分选FACS细胞分选27FACS 技术分析技术分析FACS技术分析28用抗用抗IgM单抗分单抗分离离B细胞克隆细胞克隆用抗IgM单抗分离B细胞克隆29RemovalofTcellsfrommarrowgraft MagnetMagnetic antibodiesRemovalofTcellsfrommarrow30(二二)免疫细胞功能的测定免疫细胞功能的测定1.T细胞功能测定：细胞功能测定：(1)细细胞胞增增殖殖(转转化化)试试验验：可可分分为为非非特特异异性性丝丝裂裂原和特异性抗原两类。原和特异性抗原两类。*丝裂原主要有丝裂原主要有PHA、ConA和和PWM；*抗抗原原刺刺激激物物有有破破伤伤风风类类毒毒素素、PPD和和白白色色念念珠菌等；珠菌等；*同种同种MHC及抗及抗CD3单抗等单抗等*肿瘤细胞肿瘤细胞-自体淋巴细胞混合培养自体淋巴细胞混合培养(二)免疫细胞功能的测定31淋巴细胞转化试验（形态学示意图）淋巴细胞转化试验（形态学示意图）原理：人原理：人T细胞表面有细胞表面有PHA或或ConA受体，受体，T细胞在体外受细胞在体外受PHA或或ConA的刺激后能的刺激后能转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，以此测定分裂的淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。细胞的功能。PHA刺激刺激4872小时小时淋巴细胞转化试验（形态学示意图）原理：人T细胞表面有PHA或32培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性淋巴细胞增殖试验（淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图掺入法）示意图培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性33靶细胞51Cr洗涤去除游离的51Cr效应细胞测量上清液中释放的51Cr混合培养4-6小时细胞毒试验（细胞毒试验（51Cr释放法）示意图释放法）示意图靶细胞51Cr洗涤去除游离的51Cr效应细胞测量上清液中释放34(3)T(3)T细胞功能的体内检测法细胞功能的体内检测法 *移植物抗宿主反应移植物抗宿主反应(GVHR)(GVHR)*迟发型超敏反应迟发型超敏反应(DTH)(DTH)(3)T细胞功能的体内检测法352.B细胞功能判定细胞功能判定(1)B细胞增殖细胞增殖(转化转化)试验：试验：(2)溶血空斑形成试验溶血空斑形成试验(3)反向溶血空斑试验反向溶血空斑试验(4)酶联免疫斑点法酶联免疫斑点法(ELISPOT):一种可检测抗体分泌细胞，又可测定抗体分泌一种可检测抗体分泌细胞，又可测定抗体分泌量的体外实验方法。量的体外实验方法。2.B细胞功能判定36溶溶血血空空斑斑实实验验溶血空斑实验37ELISPOT实验实验稳定、特异，且抗原用量少；稳定、特异，且抗原用量少；可同时检测不同抗原诱导的可同时检测不同抗原诱导的抗体分泌，并可定量检测抗体分泌，并可定量检测可检测组织切片中分泌抗体的可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞单个细胞ELISPOT实验稳定、特异，且抗原用量少；383.NK细胞活性测定细胞活性测定(1)形态学检查法形态学检查法(2)放射性核素释放法：放射性核素释放法：用放射性核素用放射性核素(51Cr、125IUdR)标记靶细胞。标记靶细胞。(3)酶释放法：酶释放法：测定靶细胞膜受损后从胞浆内释放至介质中的测定靶细胞膜受损后从胞浆内释放至介质中的乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶(LDH)活性。活性。(4)化学发光法化学发光法(5)流式细胞术流式细胞术3.NK细胞活性测定394吞噬细胞功能测定吞噬细胞功能测定(1)中性粒细胞趋化功能测定中性粒细胞趋化功能测定滤膜渗透法滤膜渗透法(Boyden小室法小室法)。(2)中性粒细胞吞噬、杀菌功能测定中性粒细胞吞噬、杀菌功能测定1)显微镜检法显微镜检法2)NBT试验试验3)化学发光测定法化学发光测定法(3)巨噬细胞吞噬功能测定巨噬细胞吞噬功能测定(4)巨噬细胞细胞毒测定巨噬细胞细胞毒测定4吞噬细胞功能测定40一、概述一、概述二、抗原抗体的检测技术二、抗原抗体的检测技术三、免疫细胞的检测三、免疫细胞的检测四、细胞因子及其受体的检测四、细胞因子及其受体的检测五、粘附分子的检测五、粘附分子的检测六、免疫相关基因分析六、免疫相关基因分析七、免疫标记技术七、免疫标记技术八、细胞凋亡的检测八、细胞凋亡的检测主主要要内内容容一、概述主要内容41细胞因子及其受体的检测细胞因子及其受体的检测l免疫学检测法免疫学检测法l生物学测定法生物学测定法l分子生物学测定法分子生物学测定法l细胞因子受体检测的基本技术细胞因子受体检测的基本技术细胞因子及其受体的检测免疫学检测法42免免疫疫学学检检测测的的基基本本原原理理是是将将细细胞胞因因子子作作为为抗抗原原进进行行定定量量检检测测。如如免免疫疫斑斑点点法法、ELISA法法、RIA法法和和免免疫疫印印迹迹法法等等均均已已用用于于细细胞胞因因子子的的检检测测。某某些些细细胞胞因因子子含含量量甚甚微微的的样样品品(如如脑脑脊脊液液)可可 用用 免免 疫疫 聚聚 合合 酶酶 链链 反反 应应(immuno-PCR)进行检测。进行检测。免疫学检测法免疫学检测法免疫学检测的基本原理是将细胞因子作为抗原进行43根根据据细细胞胞因因子子对对特特定定的的生生物物学学活活性性,应应用用相相应应的的指指示示系系统统,同同时时与与标标准准品品对对比比测测定定,从从而而得得知知样样品品中中细细胞胞因因子子的的活活性性水水平平,一一般般以以活活性性单单位位(U/ml)表示。表示。生物学测定法生物学测定法根据细胞因子对特定的生物学活性,应用相应的指441 1、促进细胞增殖和增殖抑制法、促进细胞增殖和增殖抑制法3H-TdR掺入法、掺入法、比色法（比色法（MTT、WST-1）染色法染色法直接计数法直接计数法1、促进细胞增殖和增殖抑制法452 2、细胞毒活性测定法、细胞毒活性测定法51Cr释放释放比色法（比色法（MTT、WST-1）3 3、集落形成法、集落形成法4 4、细胞病变抑制法、细胞病变抑制法5 5、趋化活性测定法、趋化活性测定法2、细胞毒活性测定法46分子生物学测定法分子生物学测定法RNA印迹法、核酸酶保护分析、原印迹法、核酸酶保护分析、原位杂交、位杂交、PCR和和RealTimePCR等。亦等。亦可通过检测细胞内细胞因子的基因组成可通过检测细胞内细胞因子的基因组成或或mRNA量，推算出细胞因子的合成量。量，推算出细胞因子的合成量。分子生物学测定法47CKR检测的基本技术检测的基本技术细胞因子的广泛生物学活性是通细胞因子的广泛生物学活性是通过与各自相应的受体结合而发挥的。过与各自相应的受体结合而发挥的。因此细胞因子受体的检测与细胞因因此细胞因子受体的检测与细胞因子检测一样，已成为基础理论和临子检测一样，已成为基础理论和临床免疫学研究的一个重要内容。床免疫学研究的一个重要内容。CKR检测的基本技术细胞因子的广泛生物学活48一、概述一、概述二、抗原抗体的检测技术二、抗原抗体的检测技术三、免疫细胞的检测三、免疫细胞的检测四、细胞因子及其受体的检测四、细胞因子及其受体的检测五、粘附分子的检测五、粘附分子的检测六、免疫相关基因分析六、免疫相关基因分析七、免疫标记技术七、免疫标记技术八、细胞凋亡的检测八、细胞凋亡的检测主主要要内内容容一、概述主要内容49粘附分子的检测粘附分子的检测某某些些粘粘附附分分子子除除表表达达于于细细胞胞膜膜表表面面外外，还还以以可可溶溶性性形形式式存存在在于于体体液液中中。粘粘附附分分子子的的检检测测方方法法目目前前大大多多采采用用免免疫疫学学技技术术检检查查其其在在细细胞胞膜膜上上的的分分布布和和测定某些样品中的含量。测定某些样品中的含量。粘附分子的检测某些粘附分子除表达于细胞50一、概述一、概述二、抗原抗体的检测技术二、抗原抗体的检测技术三、免疫细胞的检测三、免疫细胞的检测四、细胞因子及其受体的检测四、细胞因子及其受体的检测五、粘附分子的检测五、粘附分子的检测六、免疫相关基因分析六、免疫相关基因分析七、免疫标记技术七、免疫标记技术八、细胞凋亡的检测八、细胞凋亡的检测主主要要内内容容一、概述主要内容51 免疫相关基因分析免疫相关基因分析 *包包括括各各种种类类型型的的杂杂交交技技术术，如如转转印印杂杂交交、斑点杂交、原位杂交等以及斑点杂交、原位杂交等以及PCRPCR技术等。技术等。*杂杂交交技技术术主主要要工工具具是是核核酸酸探探针针，它它是是指指一一段段用用放放射射性性核核素素或或其其他他标标记记物物(生生物物素素、荧荧光光素素、地地高高辛辛等等)标标记记，并并与与目目的的基基因因互互补补的的DNADNA片片段段或或单单链链DNADNA、RNARNA。分分为为cDNAcDNA探探针针、寡寡核苷酸探针、基因组核苷酸探针、基因组DNADNA探针及探针及RNARNA探针等。探针等。免疫相关基因分析*包括各种类型的杂交技术，52一、细胞因子基因组一、细胞因子基因组DNA或或mRNA的检测的检测1.Northern杂交分析杂交分析2.斑斑点点及及狭狭缝缝印印迹迹杂杂交交:将将DNA变变性性后后直直接接点点样样于硝酸纤维膜上再进行杂交于硝酸纤维膜上再进行杂交3.原位杂交法原位杂交法4.PCR扩扩增增产产物物杂杂交交分分析析：将将细细胞胞因因子子的的mRNA经经过过逆逆转转录录为为cDNA，用用特特异异性性细细胞胞因因子子引引物物进进行行PCR扩扩增增，通通过过Southernblot后后，再再用用标标记探针检测特异细胞因子记探针检测特异细胞因子DNA的水平。的水平。5Southern印迹杂交印迹杂交一、细胞因子基因组DNA或mRNA的检测53二、二、BCR及及TCR克隆性基因重排分析克隆性基因重排分析1Southern印迹杂交法：印迹杂交法：仅适用于科研，而不适用于临床诊断。仅适用于科研，而不适用于临床诊断。2.PCR扩增技术扩增技术:二、BCR及TCR克隆性基因重排分析54免免疫疫印印迹迹法法示示意意图图免疫印迹法示意图55PCR扩增技术扩增技术:正常多克隆淋巴细胞群正常多克隆淋巴细胞群DNADNA的的扩增产物含有不同长度的片段，电泳检查呈现扩增产物含有不同长度的片段，电泳检查呈现弥漫涂片状结构或多条带。而单克隆性基因重弥漫涂片状结构或多条带。而单克隆性基因重排经排经PCRPCR扩增后，产生明显相同长度的片段，电扩增后，产生明显相同长度的片段，电泳呈现单一紧密折带状结构。泳呈现单一紧密折带状结构。应用应用PCR扩增技术进行基因诊断具有特异、扩增技术进行基因诊断具有特异、敏感敏感(1/1041/105克隆性细胞克隆性细胞)、快速、快速(24h可完可完成成)等优点。等优点。用于恶性淋巴瘤和白血病等的临床诊断以及用于恶性淋巴瘤和白血病等的临床诊断以及白血病治疗后微小残留病灶的检测白血病治疗后微小残留病灶的检测。PCR扩增技术:正常多克隆淋巴细胞群DNA的扩增56三、三、HLA基因分型技术基因分型技术1序序列列特特异异性性寡寡核核苷苷酸酸探探针针PCR(PCR-SSOP)或或PCR-ASO:应应用用最最多多的的一一种种简简单单、快快速速而而又又精精确确的的HLA-类类抗抗原原分分型型方方法法，能能鉴鉴定定所所有有已已知知序序列列的的HLA-DR、DQ、DP等位基因，精确地分析等位基因，精确地分析DNA的多态性。的多态性。2限限制制性性片片段段长长度度多多态态性性(PCR-RFLP)技技术术：此此项项技技术特别适用于个别标本和小样本的检测。术特别适用于个别标本和小样本的检测。3单单链链构构象象多多态态性性PCR(PCR-SSCP)：藉藉此此可可鉴鉴别别编码编码HLA-类抗原基因的多态性。类抗原基因的多态性。应应用用PCR-SSCP可可以以直直接接比比较较供供、受受体体之之间间HLA-类类基基因因是是否否完完全全一一致致，且且可可精精确确到到1 2个个碱碱基基之之差差，具具有有相相对对简简捷捷而而精精确确的的特特点点。在在异异基基因因骨骨髓髓移移植植的的配配型型中已初步应用于临床。中已初步应用于临床。三、HLA基因分型技术574序序列列特特异异性性引引物物PCR技技术术(PCR-SSP)：该该法法操操作作简简单单、快快速速、实实验验结结果果容容易易判判断断，杂杂合合子子也也很很易易检检出出。不不足足之之处处在在于于，为为检检出出所所有有的的等等位位基基因因必必须须用用多个引物进行扩增。多个引物进行扩增。5指指纹纹图图谱谱(PCR-fingerprinting)技技术术|：进进行行HLA-基基因因分分型型鉴鉴定定时时，将将供供、受受体体的的DNA扩扩增增产产物物混混合合，电电泳泳后后得得出出一一指指纹纹图图，再再与与二二者者各各自自的的PCR指指纹纹图图谱谱进进行行比比较较，从从中中选选择择出出指指纹纹图图一一致致的的供、受体进行移植。供、受体进行移植。*PCR指指纹纹图图谱谱在在选选择择非非亲亲缘缘关关系系的的供供、受受体体进进行骨髓和器官移植配型时，可以节省大量时间。行骨髓和器官移植配型时，可以节省大量时间。6.SNP(单个核苷酸多态性单个核苷酸多态性)分析分析4序列特异性引物PCR技术(PCR-SSP)：该法操作简单58一、概述一、概述二、抗原抗体的检测技术二、抗原抗体的检测技术三、免疫细胞的检测三、免疫细胞的检测四、细胞因子及其受体的检测四、细胞因子及其受体的检测五、粘附分子的检测五、粘附分子的检测六、免疫相关基因分析六、免疫相关基因分析七、免疫标记技术七、免疫标记技术八、细胞凋亡的检测八、细胞凋亡的检测主主要要内内容容一、概述主要内容59免疫标记技术免疫标记技术 l 免疫荧光技术免疫荧光技术 l 放射免疫分析法放射免疫分析法 l 酶免疫技术酶免疫技术l 发光免疫测定发光免疫测定免疫标记技术免疫荧光技术60标记技术检测抗原标记技术检测抗原标记技术检测抗原61免免疫疫标标记记技技术术检检测测抗抗体体免疫标记技术检测抗体62免疫荧光实验免疫荧光实验免疫荧光实验63直接与间接免疫荧光实验直接与间接免疫荧光实验直接与间接免疫荧光实验64ELISA实验实验ELISA实验65免疫学检测原理课件66抗抗原原竞竞争争抑抑制制实实验验验验抗原竞争抑制实验验67 Ag*Ab Ag 标记抗原 特异性抗体 待测抗原(Ag*-Ab)+(Ag-Ab)抗原抗体复合物分离Ag*-Ab 和游离Ag*从标准曲线上读知含量测定Ag*-Ab和/或游离Ag*放射性 放射免疫测定法放射免疫测定法(RIA)示意图示意图Ag*Ab68一、概述一、概述二、抗原抗体的检测技术二、抗原抗体的检测技术三、免疫细胞的检测三、免疫细胞的检测四、细胞因子及其受体的检测四、细胞因子及其受体的检测五、粘附分子的检测五、粘附分子的检测六、免疫相关基因分析六、免疫相关基因分析七、免疫标记技术七、免疫标记技术八、细胞凋亡的检测八、细胞凋亡的检测主主要要内内容容一、概述主要内容69l形态学方法形态学方法l普通光学显微镜检测法普通光学显微镜检测法l荧光显微镜检测法荧光显微镜检测法 材料：材料：石蜡切片石蜡切片;冰冻切片冰冻切片;细胞学涂细胞学涂 方法方法:电镜观察凋亡小体电镜观察凋亡小体l生化学方法生化学方法l免疫学方法免疫学方法l末端标记法末端标记法形态学方法70形态学方法：形态学方法：PI染染液液：碘碘化化丙丙啶啶(propidiumiodide,PI)；核红色核红色DAPI染液；染液；核蓝白色核蓝白色AO染液：染液：核黄绿色核黄绿色*凋亡细胞呈现核浓缩凋亡细胞呈现核浓缩,染色加深染色加深,凋亡小体。凋亡小体。形态学方法：71凋亡的形态学检测凋亡的形态学检测U937 Cell（DAP1染色）染色）大鼠结肠组织大鼠结肠组织（AZON染色）染色）凋亡的形态学检测U937Cell（DAP1染色）大鼠结肠组72生化学方法电泳法生化学方法电泳法DNALadder电泳图谱电泳图谱生化学方法电泳法73原位末端转移酶标记技术原位末端转移酶标记技术(TdT或或TUNEL)凋凋亡亡细细胞胞由由于于内内源源性性核核酸酸内内切切酶酶的的激激活活,核核DNADNA被被切切割割成成许许多多双双链链DNADNA片片段段以以及及高高分分子子量量DNADNA单单链链断断裂裂点点(缺缺口口),),暴暴露露出出大大量量33羟羟基基末末端端,如如用用(TdT)(TdT)将将标标记记的的-dUTP-dUTP进进行行缺缺口口末端标记末端标记,则可原位特异地显示出凋亡细胞。则可原位特异地显示出凋亡细胞。(一一)荧光标记法荧光标记法(二二)酶标记法酶标记法原位末端转移酶标记技术74检测原理及方案检测原理及方案U937细胞（荧光素染色）细胞（荧光素染色）检测原理及方案U937细胞（荧光素染色）75