大规模细胞培养与细胞工厂课件

细胞工厂细胞工厂1内容一动物细胞培养与细胞工厂二生物制品三疫苗四现代生物技术与基因工程五单克隆抗体与抗体药物六干细胞与体细胞治疗内容一动物细胞培养与细胞工厂2我们熟知的细胞培养动物细胞培养我们熟知的细胞培养动物细胞培养3动物细胞培养技术1无菌环境：超净台、平安柜2生长环境：CO2培养箱3营养环境：培养基4贴壁环境：培养瓶皿等、细胞工厂动物细胞培养技术1无菌环境：超净台、平安柜4动物细胞的形态贴壁细胞：细胞的生长必须有可以贴附的支持物外表，依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该外表上生长、增殖，当细胞在该外表生长后，一般形成两种形态，即成纤维样细胞型或上皮样细胞型 悬浮细胞：悬浮状态生长，如淋巴细胞、Namalwa细胞兼性贴壁细胞：中国仓鼠卵巢细胞、小鼠L929细胞 动物细胞的形态贴壁细胞：细胞的生长必须有可以贴附的支持物外表5一贴附型：一贴附型：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞依赖性细胞贴附贴附:是大多数有机体细胞在体内生存是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的根本存在方式和生长发育的根本存在方式结果结果:基于贴附特性，使细胞与细胞之基于贴附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须贴附于一固相外表才能多数细胞必须贴附于一固相外表才能生存和生长。生存和生长。培养时：这些细胞被放到体外环境中培养时：这些细胞被放到体外环境中以后以后,同样需要贴附于某一固相外表才同样需要贴附于某一固相外表才能生存和生长，因而属于贴附型细胞能生存和生长，因而属于贴附型细胞贴附贴附(锚定或锚着锚定或锚着)依赖型依赖型(性性)细胞：细胞：唯有贴附于固相外表才能生存的细胞唯有贴附于固相外表才能生存的细胞一贴附型：6贴附生长型细胞生长型细胞细胞培养常用的培养瓶、细胞培养常用的培养瓶、培养皿、培养皿、6孔板、孔板、96孔板孔板贴附生长型细胞细胞培养常用的培养瓶、培养皿、6孔板、96孔板7细胞贴附材料与外表贴附的固相外表材料：玻璃、塑料聚苯乙烯贴附的固相外表材料：玻璃、塑料聚苯乙烯玻璃：本身具有亲水性，适于细胞贴壁玻璃：本身具有亲水性，适于细胞贴壁塑料：没有亲水性，不能使细胞贴壁，所以必须在塑料：没有亲水性，不能使细胞贴壁，所以必须在 塑料外表进展亲水性接枝等离子处理塑料外表进展亲水性接枝等离子处理细胞贴附材料与外表贴附的固相外表材料：玻璃、塑料聚苯乙烯8二悬浮型：二悬浮型：见于少数特殊的细胞，如某些类型的见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。胞容易大量繁殖。概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长状态生长或以机械方法使保持悬浮状态或以机械方法使保持悬浮状态下生长下生长来源：自血，脾或骨髓，血中白细胞来源：自血，脾或骨髓，血中白细胞癌肿细胞癌肿细胞特点：在悬浮中生长良好细胞圆形，特点：在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团单个或小细胞团优点：生存空间大，提供数量大，传优点：生存空间大，提供数量大，传代方便代方便(不需消化不需消化)，易于收获，可获得稳定状态易于收获，可获得稳定状态缺点：纯化不方便，不能通过离心将缺点：纯化不方便，不能通过离心将死、活细胞别离死、活细胞别离二悬浮型：9悬浮生长型细胞悬浮生长型细胞悬浮生长型细胞10悬浮培养磁力搅拌器悬浮培养磁力搅拌器11大规模细胞培养细胞工厂培养技术在大规模细胞培养中的应用.doc大规模细胞培养细胞工厂培养技术在大规模细胞培养中的应用.do12转瓶培养的缺点转瓶技术为传统的贴壁细胞培养技术，细胞接种在旋转的圆筒形培养器-转瓶中，培养过程中转瓶不断旋转，使细胞交替接触培养液和空气。缺点：劳动强度大，占地空间大，单位体积提供细胞生长的外表积小，细胞生长密度低，瓶间差异较难控制等，因而难以产业化或规模化生产。重要的是：转瓶由于不是静止培养，产品质量经常达不到要求或由于细胞易破碎而存在DNA毒性潜在危险，据称国家准备淘汰转瓶生产技术。转瓶培养的缺点转瓶技术为传统的贴壁细胞培养技术，细胞接种在旋13细胞工厂用于大规模细胞培养与生产细胞工厂用于大规模细胞培养与生产14细胞工厂关键技术：贴壁处理：高真空等离子接枝外表处理know-how:接枝材料与接枝技术材料性能：生物相容性无细胞毒性多层焊接技术：密封性与结实性灭菌技术：Y射线辐照细胞工厂关键技术：15细胞工厂竞争Nunc CorningDHS 细胞工厂竞争Nunc 16DHS 细胞工厂DHS大规模细胞培养系统 单页.pdfDHS 细胞工厂DHS大规模细胞培养系统 单页.pdf17Nunc Cell FactoryNunc Cell Factory18Corning CellSTACK ChamberChoice of traditional surface treatment(TC),new Corning CellBIND Surface for enhanced cell attachment,or Ultra-Low Attachment Surface for reduced cell attachmentCorning CellSTACK ChamberChoic19Corning CellSTACK ChamberCorning CellSTACK Chamber20三种细胞工厂的比较材料：均为PS塑料外表处理：各自的Know-how顶层：DHS同Nunc,便于显微镜观察细胞生长情况焊接工艺：Nunc采用超声焊接，Corning采用特殊胶粘接，Corning的更加结实不易开裂，所以DHS采用Corning的粘接工艺只有DHS是可以定制任意层的细胞工厂三种细胞工厂的比较材料：均为PS塑料21细胞工厂的使用细胞工厂的使用22实验室应用：替代培养瓶及多层培养瓶实验室应用：替代培养瓶及多层培养瓶23细胞培养的评价贴壁率细胞生长密度细胞形态毒力测定细胞培养的评价贴壁率24谢谢！谢谢！25