疟原虫实验室检查讲座培训课件

疟原虫原虫实验室室检查讲座座背景背景n n疟疾在我国古代称为瘴气，国外称malaria，为意大利文mala（不良）与aria（空气）二字合成。本病是由雌按蚊叮咬人体，将其体内寄生的疟原虫传入人体而引起的。疟疾是以周期性冷热发作为最主要特征，脾肿大、贫血以及脑、肝、肾、心、肠、胃等受损引起的各种综合征 2疟原虫实验室检查讲座分类分类n n寄生于人体的疟原虫有4种，即间日疟、恶性疟、三日疟和卵形疟 3疟原虫实验室检查讲座发病机制发病机制n n疟原虫在红细胞中增殖成裂殖子，使红细胞胀大疟原虫在红细胞中增殖成裂殖子，使红细胞胀大破裂时，大量的裂殖子和疟原虫代谢产物进入血破裂时，大量的裂殖子和疟原虫代谢产物进入血流，引起异性蛋白反应，机体肌肉收缩产热，网流，引起异性蛋白反应，机体肌肉收缩产热，网状内皮系统吞噬细胞功能增强，故可引起肝、脾状内皮系统吞噬细胞功能增强，故可引起肝、脾肿大，多次发作可致贫血等。肿大，多次发作可致贫血等。n n疟原虫在红细胞内增殖成熟所需时间不同，间日疟原虫在红细胞内增殖成熟所需时间不同，间日疟和卵形疟为疟和卵形疟为4848小时，三日疟为小时，三日疟为7272小时，恶性疟小时，恶性疟为为24244848小时，故临床上出现周期性发作小时，故临床上出现周期性发作 4疟原虫实验室检查讲座生活史生活史 5疟原虫实验室检查讲座6疟原虫实验室检查讲座抗疟原虫治疗抗疟原虫治疗 n n控制临床发作的药物：氯喹、青蒿素类（青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、双氢青蒿素）。n n防止复发：伯氨喹啉、磷酸哌喹 7疟原虫实验室检查讲座 实验室检查实验室检查 n血片的制作n血片的染色n疟原虫的镜检8疟原虫实验室检查讲座n n载玻片：无油迹、无灰尘，无划痕、清洁n n推片：边缘光滑无缺口n n采血部位：耳垂、手指、足跟n n血液量：薄血膜1-1.5mm3，厚血膜4-5mm3n n推片与载玻片的角度：25-30度n n大小：薄血膜宽1.5-2cm，厚血膜直径0.8-1cm血片制作血片制作9疟原虫实验室检查讲座血片制作血片制作n n位置：通常是将厚、薄血膜涂在一张载片上。方位置：通常是将厚、薄血膜涂在一张载片上。方法是将载片分为法是将载片分为6 6等分，第等分，第1 1、2 2格备贴标签及编格备贴标签及编号用；厚血膜在第号用；厚血膜在第2 2、第、第3 3格的交界处，薄血膜在格的交界处，薄血膜在第第3 3格中央至第格中央至第6 6格中部。作为标本的血片每张玻格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各片涂厚、薄血膜各1 1个。个。n n或将载片分为或将载片分为6 6等分，第等分，第1 1、2 2格备贴标签及编号格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第用；厚血膜涂在第3 3格中央，薄血膜涂在第格中央，薄血膜涂在第4 4格前格前缘至第缘至第6 6格中部。格中部。10疟原虫实验室检查讲座血片的制作血片的制作采血采血11疟原虫实验室检查讲座玻片的执持玻片的执持12疟原虫实验室检查讲座厚血膜的位置：第厚血膜的位置：第2第第3格中央格中央 13疟原虫实验室检查讲座 推片边缘沾取少量血液至玻片中部推片边缘沾取少量血液至玻片中部14疟原虫实验室检查讲座玻片和推片之间角度玻片和推片之间角度25-3025-30度度 15疟原虫实验室检查讲座呈舌状样的薄血膜（2宽）16疟原虫实验室检查讲座血片的染色血片的染色n染色前的处理n薄血膜用甲醇固定n厚血膜进行溶血17疟原虫实验室检查讲座薄血膜用甲醇固定薄血膜用甲醇固定 18疟原虫实验室检查讲座 厚血膜必须当天溶血，一般不宜超过厚血膜必须当天溶血，一般不宜超过厚血膜必须当天溶血，一般不宜超过厚血膜必须当天溶血，一般不宜超过 24 24 24 24 小时小时小时小时19疟原虫实验室检查讲座经甲醇固定、溶血处理后的血片经甲醇固定、溶血处理后的血片20疟原虫实验室检查讲座吉氏染液吉氏染液:吉氏（吉氏（Giemsa Giemsa）染剂粉）染剂粉 0.5 0.5 克克甘油甘油 25 25 毫升毫升甲醇甲醇 25 25 毫升毫升瑞氏染液瑞氏染液:瑞氏染剂粉瑞氏染剂粉 0.2 0.2 克克甲醇甲醇 100 100 毫升毫升甘油甘油 3 3 毫升毫升（染液配制好后要过滤）（染液配制好后要过滤）染液（原液）配方染液（原液）配方21疟原虫实验室检查讲座吉氏染液配制吉氏染液配制n n吉氏染剂粉吉氏染剂粉研钵研钵甘油甘油研磨研磨甲甲醇洗去甘油溶液醇洗去甘油溶液有色玻璃瓶中有色玻璃瓶中每每日用力摇动日用力摇动5min5min，室温室温 一月后应用。一月后应用。（此染液为原液）（此染液为原液）22疟原虫实验室检查讲座23疟原虫实验室检查讲座吉氏染色方法吉氏染色方法n n成批染色：成批染色：3 的吉氏稀释液滴加的吉氏稀释液滴加(或在或在染色缸内染色亦可），染色缸内染色亦可），30 分钟分钟用水用水冲干净，凉干。冲干净，凉干。n n单片染色：单片染色：1毫升蒸馏水加毫升蒸馏水加1滴吉氏原液，滴吉氏原液，染色染色 30-40 分钟；分钟；(或或 10%吉氏稀释液，吉氏稀释液，染色染色 10-15 分钟分钟)。其他同上。其他同上。24疟原虫实验室检查讲座瑞氏染液配制瑞氏染液配制n将瑞氏染剂粉将瑞氏染剂粉1g1g置于研钵内，加入置于研钵内，加入15ml15ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用璃瓶中，再用500ml500ml甲醇洗出研钵甲醇洗出研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后置室温下，每天摇动置室温下，每天摇动5 5分钟，分钟，3 3天后天后即可使用。即可使用。25疟原虫实验室检查讲座瑞氏染色方法瑞氏染色方法n n厚、薄血膜间用蜡笔划一横线。薄血膜不用固厚、薄血膜间用蜡笔划一横线。薄血膜不用固厚、薄血膜间用蜡笔划一横线。薄血膜不用固厚、薄血膜间用蜡笔划一横线。薄血膜不用固定，厚血膜需溶血。定，厚血膜需溶血。定，厚血膜需溶血。定，厚血膜需溶血。n n在薄血膜上滴加瑞氏染液在薄血膜上滴加瑞氏染液在薄血膜上滴加瑞氏染液在薄血膜上滴加瑞氏染液5 5 5 58 8 8 8滴，染色滴，染色滴，染色滴，染色2 2 2 2分钟分钟分钟分钟后，再加与染液等量的水于薄血膜上，用吸管后，再加与染液等量的水于薄血膜上，用吸管后，再加与染液等量的水于薄血膜上，用吸管后，再加与染液等量的水于薄血膜上，用吸管将染液与蒸馏水混合均匀后，把染液引到厚血将染液与蒸馏水混合均匀后，把染液引到厚血将染液与蒸馏水混合均匀后，把染液引到厚血将染液与蒸馏水混合均匀后，把染液引到厚血膜上，使厚血膜再染色膜上，使厚血膜再染色膜上，使厚血膜再染色膜上，使厚血膜再染色10101010分钟。用清水轻轻冲分钟。用清水轻轻冲分钟。用清水轻轻冲分钟。用清水轻轻冲去染液，晾干。去染液，晾干。去染液，晾干。去染液，晾干。26疟原虫实验室检查讲座厚薄血膜的标准厚薄血膜的标准n n厚血膜血量适宜，不宜过多或过少厚血膜血量适宜，不宜过多或过少厚血膜血量适宜，不宜过多或过少厚血膜血量适宜，不宜过多或过少 薄薄薄薄血膜平整，无皱折和空泡，红细胞单层排列血膜平整，无皱折和空泡，红细胞单层排列血膜平整，无皱折和空泡，红细胞单层排列血膜平整，无皱折和空泡，红细胞单层排列27疟原虫实验室检查讲座n n血量血量血量血量n n血膜的厚薄血膜的厚薄血膜的厚薄血膜的厚薄n n血膜的固定血膜的固定血膜的固定血膜的固定n n染液（原液）质量、陈旧染液（原液）质量、陈旧染液（原液）质量、陈旧染液（原液）质量、陈旧n n染液浓度、气温及染色时间染液浓度、气温及染色时间染液浓度、气温及染色时间染液浓度、气温及染色时间n n稀释液配制时间稀释液配制时间稀释液配制时间稀释液配制时间n n稀释用水的酸碱度稀释用水的酸碱度稀释用水的酸碱度稀释用水的酸碱度n n镜检技能镜检技能镜检技能镜检技能（滴加镜油，（滴加镜油，（滴加镜油，（滴加镜油，100100倍油镜头检查；自上而倍油镜头检查；自上而倍油镜头检查；自上而倍油镜头检查；自上而 下、自左而右逐个视野顺序检查）下、自左而右逐个视野顺序检查）下、自左而右逐个视野顺序检查）下、自左而右逐个视野顺序检查）n n显微镜质量显微镜质量显微镜质量显微镜质量血片的制作、染色、镜检中应注意的事项血片的制作、染色、镜检中应注意的事项28疟原虫实验室检查讲座29疟原虫实验室检查讲座自动化染片自动化染片30疟原虫实验室检查讲座镜检n n疟原虫三要素疟原虫三要素 核核-鲜红色鲜红色 胞浆胞浆-蓝色蓝色 疟色素疟色素-黄褐色或黑褐色，黄褐色或黑褐色，31疟原虫实验室检查讲座薄血膜中常见的血液成分32疟原虫实验室检查讲座人类四种疟原虫的基本特征间日疟原虫间日疟原虫恶性疟原虫恶性疟原虫三日疟原虫三日疟原虫卵形疟原虫卵形疟原虫环状体环状体滋养体滋养体裂殖体裂殖体配子体配子体33疟原虫实验室检查讲座疟原虫图谱疟原虫图谱 间日疟间日疟间日疟间日疟 三日疟三日疟三日疟三日疟 恶性疟恶性疟恶性疟恶性疟 卵形疟卵形疟卵形疟卵形疟34疟原虫实验室检查讲座间日疟早期滋养体-环状体 约占寄生红细胞的约占寄生红细胞的1/31/3，很少见到一个红细胞寄生，很少见到一个红细胞寄生2 2个环状体和一个环状体有个环状体和一个环状体有2 2个核。个核。35疟原虫实验室检查讲座 间日疟滋养体间日疟滋养体-大滋养体大滋养体n n经经8 81010小时，虫体增大，胞质增多，伸出小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足。伪足。n n出现黄褐色的疟色素。出现黄褐色的疟色素。n n红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的小点，称薛氏小点较多，淡红色的小点，称薛氏小点36疟原虫实验室检查讲座间日疟裂殖体间日疟裂殖体n n2.1 2.1 2.1 2.1 未成熟裂殖体未成熟裂殖体未成熟裂殖体未成熟裂殖体 （immature immature immature immature schizontschizontschizontschizont）n n经经4040小时晚期滋养体发育成熟，小时晚期滋养体发育成熟，虫体变圆，空泡消失虫体变圆，空泡消失n n核开始分裂又称裂殖体前期核开始分裂又称裂殖体前期n n色素聚集成团块色素聚集成团块n n成熟裂殖体约有成熟裂殖体约有12122424个个 细胞核细胞核n n胞浆也随之分裂胞浆也随之分裂n n受染受染RBC RBC 胀大、颜色苍白、虫体几胀大、颜色苍白、虫体几乎充满红细胞乎充满红细胞37疟原虫实验室检查讲座 间日疟原虫雌配子体间日疟原虫雌配子体间日疟原虫雌配子体间日疟原虫雌配子体n n虫体较大，占满胀大的红细胞虫体较大，占满胀大的红细胞n n胞质致密，色深蓝胞质致密，色深蓝n n核小致密，深红色，多位于虫核小致密，深红色，多位于虫体一侧体一侧n n疟色素分散疟色素分散 间日疟原虫雄配子体间日疟原虫雄配子体间日疟原虫雄配子体间日疟原虫雄配子体n n虫体较小，占满胀大的红细胞虫体较小，占满胀大的红细胞n n胞质浅蓝胞质浅蓝n n核大疏松，淡红色，多位于虫体核大疏松，淡红色，多位于虫体的中央。的中央。n n疟色素分散疟色素分散 38疟原虫实验室检查讲座1.红细胞通红细胞通常涨大常涨大 2.薛氏点明薛氏点明显显 3.成熟环状成熟环状体粗大体粗大4.滋养体有滋养体有阿米巴样阿米巴样伪足伪足5.可见不同可见不同发育期的发育期的原虫原虫 间日疟（间日疟（P.vivax）鉴定要点）鉴定要点39疟原虫实验室检查讲座恶性疟原虫恶性疟原虫-环状体环状体n n环纤细环纤细,约为约为RBCRBC直径的直径的1/61/6，RBCRBC不胀大不胀大n n可见数粒，大小不一，红色粗大的茂氏点可见数粒，大小不一，红色粗大的茂氏点n n核核1 1个，但个，但2 2个常见，红细胞常含个常见，红细胞常含2 2个以上原虫个以上原虫n n虫体常位于红细胞的边缘虫体常位于红细胞的边缘 ，呈，呈“飞鸟状飞鸟状”n n不带色素不带色素40疟原虫实验室检查讲座恶性疟原虫恶性疟原虫大滋养体大滋养体 n n一般不出现在外周血一般不出现在外周血n n虫体小结实，圆形，虫体小结实，圆形，不活动不活动n n疟色素集中一团，黑疟色素集中一团，黑褐色褐色n n原虫此时开始集中在原虫此时开始集中在内脏毛细血管内脏毛细血管41疟原虫实验室检查讲座恶性疟成熟裂殖体恶性疟成熟裂殖体 n n裂殖子裂殖子8 83636个，通常个，通常18182424个，排列不规则个，排列不规则n n疟色素集中成一团疟色素集中成一团n n虫体占红细胞体积的虫体占红细胞体积的2/32/3至至3/43/4 42疟原虫实验室检查讲座恶性疟原虫雌配子体恶性疟原虫雌配子体n n新月形，两端较尖n n核致密，深红色，常位于中央n n疟色素黑褐色，分布于核周围43疟原虫实验室检查讲座1.环状体纤细环状体纤细,红细红细胞不涨大胞不涨大2.一个红细胞内可有一个红细胞内可有几个环状体几个环状体 3.环状体内可有环状体内可有2个个核核 4.环状体可贴在红细环状体可贴在红细胞边缘胞边缘 5.血片中没有其他发血片中没有其他发育期，通常只有环育期，通常只有环状体和配子体状体和配子体6.配子体呈新月形或配子体呈新月形或腊肠形腊肠形 7.可出现茂氏点可出现茂氏点恶性疟（恶性疟（P.falciparum）鉴定）鉴定 要点要点45疟原虫实验室检查讲座恶性疟的发育特性恶性疟的发育特性n n 恶性疟原虫由于在发作间歇期，绝大部分疟原虫要进入内脏毛细血管发育，周围血液内仅能发现环状体和配子体。n n恶性疟在发作期为最适宜的查血时间。46疟原虫实验室检查讲座1.环状体可环状体可呈方形呈方形2.带状形是带状形是特点特点 3.成熟裂殖成熟裂殖体呈菊花体呈菊花状状,内含内含612个裂个裂殖子殖子 4.红细胞不红细胞不涨大，略涨大，略缩小缩小5.有时有西有时有西门氏点门氏点 三日疟（三日疟（P.malariae）诊断要点）诊断要点47疟原虫实验室检查讲座48疟原虫实验室检查讲座三日疟原虫三日疟原虫6-126-12个裂殖个裂殖子，排列较子，排列较规则，呈菊规则，呈菊花状，疟色花状，疟色素在虫体中素在虫体中央，寄生的央，寄生的红细胞无变红细胞无变化化三日疟原虫三日疟原虫49疟原虫实验室检查讲座卵形疟（卵形疟（P.ovale）诊断要点）诊断要点1.红细胞略涨红细胞略涨大或不变大大或不变大 2.红细胞边缘红细胞边缘呈车轮状呈车轮状3.环状体有时环状体有时呈现鱼眼状呈现鱼眼状4.薛氏点明显薛氏点明显 5.成熟裂殖体成熟裂殖体类似三日疟类似三日疟原虫原虫,但更粗但更粗大大6.原虫呈卵圆原虫呈卵圆形形 50疟原虫实验室检查讲座薄血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别薄血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别薄血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别薄血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别51疟原虫实验室检查讲座薄血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别薄血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别薄血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别薄血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别52疟原虫实验室检查讲座厚薄血膜的优缺点厚薄血膜的优缺点薄血膜厚血膜优点优点用血量少，用血量少，红细红细胞及其内疟原虫胞及其内疟原虫的形态保持完整，的形态保持完整，易识别易识别用血量较多，镜检范围小，用血量较多，镜检范围小，阳性检出率比薄血膜高阳性检出率比薄血膜高15-15-2525倍倍缺点缺点耗时多，检出率耗时多，检出率相对较低。不适相对较低。不适用大规模调查用大规模调查溶血后原虫形态变化大（皱溶血后原虫形态变化大（皱缩、断裂）；原虫侧影、重缩、断裂）；原虫侧影、重叠；不能借助被寄生红细胞叠；不能借助被寄生红细胞的变化来帮助鉴别。的变化来帮助鉴别。适用适用范围范围用于原虫虫种鉴用于原虫虫种鉴定定推荐使用，特别是疟原虫数推荐使用，特别是疟原虫数量少、密度低的情况下；适量少、密度低的情况下；适用大规模调查用大规模调查53疟原虫实验室检查讲座厚血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别厚血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别厚血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别厚血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别54疟原虫实验室检查讲座55疟原虫实验室检查讲座56疟原虫实验室检查讲座n n 57疟原虫实验室检查讲座 1.一般提倡查厚血膜，薄血膜作为原虫虫种的鉴定。2.根据疟原虫的三要素来鉴别(核 胞浆 疟色素)。多数情况只要具备疟原虫三要素中的两个就能加以断定，如只看到疟色素也能断定。(薄血膜镜检以血膜尾部为主)3.世界卫生组织建议，门诊血片至少厚血膜镜检 100 个视野，薄血膜 300 个视野。疟原虫鉴别提示疟原虫鉴别提示58疟原虫实验室检查讲座疟原虫抗原检测疟原虫抗原检测59疟原虫实验室检查讲座鉴别诊断鉴别诊断其他血液寄生虫病（丝虫病、锥虫病、巴贝西虫病、附红体病等）60疟原虫实验室检查讲座谢谢！谢谢！61疟原虫实验室检查讲座