气相色谱定量方法及加标回收率的计算课件

气相色谱的定量方法加标回收率的计算 主讲：白明1精选ppt本节的主要内容n色谱的定量方法n加标回收率的计算色谱的定量依据几种常见的定量方法计算公式适用范围和优缺点加标回收率实验过程计算公式加标回收的意义2精选ppt色谱的定量依据n峰高（峰高（Height）适用条件：峰高定性要求色谱柱效较高的条件下，半峰宽小于一定值或所有峰半峰宽均相等时。n峰面峰面积积（Area）适用条件：峰面积一般不会随着外在条件的改变而改变，所以用峰面积定量在任何条件下都适用。3精选ppt常见的几种定量方法n峰面积百分比法（PERCENT）n校正归一化法（NORM%）n外标法（ESTD）n内标法（ISTD）n外标百分比法（ESTD%）n内标百分比法（ISTD%）4精选ppt峰面峰面积积百分比法（百分比法（PERCENT）n峰面峰面积积百分比法，是指通百分比法，是指通过计过计算某一算某一组组分峰面分峰面积积在所有在所有组组分峰面分峰面积总积总和中所占的比重（比例），来和中所占的比重（比例），来计计算算这这个个组组分含量的方法。分含量的方法。计计算公式如下：算公式如下：Ai组组分峰面分峰面积积；w水水样样品中水的含量品中水的含量，%。A1=600A2=400A3=800A4=200w1=30%w2=20%w3=40%w3=10%5精选ppt峰面积百分比法的适用范围 此定量方法在很多时候都较为粗略，若要获得较为准确的分析数据，需满足以下几点要求：n1.所有所有组组分包括未知分包括未知组组分全部出峰，且全部分离；分全部出峰，且全部分离；n2.杂质杂质峰面峰面积远积远小于小于测测定定组组分峰面分峰面积积，可以完全，可以完全忽略；忽略；n3.杂质组杂质组分物化性分物化性质质与与测测定定组组分物化性分物化性质质相似程相似程度接近，最好是同一度接近，最好是同一类类物物质质。6精选ppt峰面积百分比法优缺点n优点：对进样量无要求无需校准，可根据峰面积直接定量n缺点所有物质都要流出且被检测到定量结果较为粗略峰面积必须准确7精选ppt 本厂成品BDO纯度达99.8%，其中中含有的杂质组分如下：1,4-戊二醇戊二醇0.04%2-甲基甲基-1,4-丁二醇丁二醇0.01%1,4-丁丁烯烯二醇二醇0.05%3-甲基甲基-1,5-戊二醇戊二醇0.02%1,6-己二醇己二醇未未检检出出四四氢呋氢呋喃喃未未检检出出-丁内丁内酯酯未未检检出出马马来酸二丁来酸二丁酯酯0.01%水分水分0.01%其他未知其他未知组组分分0.06%8精选ppt谱图处理及结果计算成品成品BDO纯纯度（度（%）按下式）按下式计计算：算：9精选ppt校正校正归归一化法（一化法（NORM）n校正校正归归一化法，是将所有一化法，是将所有组组分峰面分峰面积积校正后，按各校正后，按各组组分在整体中所占的比例分在整体中所占的比例进进行定量的行定量的结结果。此定量方法果。此定量方法比峰面比峰面积积百分比法百分比法较为较为精确，精确，计计算公式算公式为为：fi组组分校正因子；分校正因子；Ai组组分峰面分峰面积积；w水水样样品中水的含量，品中水的含量，%。w1=22.8%w2=19.6%w3=43.5%w3=14.1%A1=600f1=0.7A2=400f1=0.9A3=800f1=1.0A4=200f1=1.310精选ppt校正归一化法的适用范围要进行校正归一化法进行分析，必须满足以下条件：n1.所有所有组组分包括未知分包括未知组组分全部出峰，且全部分离；分全部出峰，且全部分离；n2.在在实际测实际测定定时时各个各个组组分的含量分的含量变变化范化范围围不能太不能太大，以免影响整体大，以免影响整体测测定定结结果；果；n3.未知未知组组分峰面分峰面积远积远小于已知小于已知组组分峰面分峰面积积，可以，可以完全忽略，若有未知完全忽略，若有未知组组分的峰面分的峰面积过积过大大则则不推荐不推荐使用。使用。11精选ppt校正归一化法优缺点n优点：对进样量要求不严格相比峰面积百分比法，可较准确地进行定量。n缺点所有物质都要流出且被检测到必须校正所有的峰对灵敏度差异比较大的组分，可能在实际测定中会产生较大误差。12精选ppt实例：粗DMO典型色谱图13精选ppt结果计算n粗粗DMO中各中各组组分含量分含量wi(%)用下式用下式计计算：算：fi组组分校正因子；分校正因子；Ai组组分峰面分峰面积积；w水水样样品中水的含量，品中水的含量，%。化合物名称化合物名称相相对对校正因子校正因子fi峰面峰面积积Ai归归一化一化结结果果%实际结实际结果果%ML0.529022.370.1410.141MF1.099229.750.3910.390甲醇甲醇0.5145721.404.4484.443DMC0.899896.601.0411.039DMO1.00007840.6893.97593.879水水-0.10214精选ppt外外标标法（法（ESTD）n外外标标法，是把已知法，是把已知浓浓度的度的标标准准样样品和未知品和未知浓浓度的度的实际样实际样品在相同的条品在相同的条件下件下单单独独进样进样，把得到的峰面，把得到的峰面积进积进行比行比较较以求得待以求得待测组测组分含量的定量分含量的定量方法。方法。计计算公式如下：算公式如下：fi组组分校正因子；分校正因子；Ai组组分分i的峰面的峰面积积；wi,标标标标准准样样品中品中组组分分i的含量，的含量，%；Ai,标标组组分分i的峰面的峰面积积。A1,标标=600A2,标标=400w1,标标=30%w2,标标=16%A1=350A2=450w1=17.5%w2=18%15精选ppt外标法适用范围要用外标法进行定量分析，则需满足以下条件：n1.要求色要求色谱谱的的稳稳定性必定性必须须非常好才行，否非常好才行，否则则会会对对测测定直接定直接产产生影响；生影响；n2.由于外由于外标标法的法的结结果与果与进样进样量的大小是直接相关量的大小是直接相关的，所以只适用于的，所以只适用于测测定定较较低含量的低含量的样样品；品；n3.计计算是按算是按质质量量计计算的，而算的，而进样进样是按体是按体积进样积进样的，的，所以有所以有时时得考得考虑虑密度的影响，尤其是溶密度的影响，尤其是溶剂剂与与组组分分密度的差异比密度的差异比较较大的大的时时候。候。16精选ppt外标法的优缺点n优点：只对欲分析的组分峰做校正即可无需所有组分均流出n缺点：进样量必须准确须定期对峰进行重新校正17精选ppt内内标标法（法（ISTD）内内标标法是将一定重量的法是将一定重量的纯纯物物质质作作为为内内标标物加到一定量物加到一定量的被分析的被分析样样品混合物中，然后品混合物中，然后对对含有内含有内标标物的物的样样品品进进行色行色谱谱分析，分分析，分别测别测定内定内标标物和待物和待测组测组分的峰面分的峰面积积及相及相对对校正校正因子，按公式和方法即可求出被因子，按公式和方法即可求出被测组测组分在分在样样品中的百分含品中的百分含量。量。计计算公式如下：算公式如下：18精选ppt内标法使用要求n当配制校正因子当配制校正因子测测定用的定用的对对照溶液和含有内照溶液和含有内标标物物质质的待的待测测组组分溶液使用同一份内分溶液使用同一份内标标物物质质溶液溶液时时，则则配制内配制内标标物物质质溶溶液不必精密称（量）取。液不必精密称（量）取。n采用内采用内标标法定量法定量时时，内，内标标物的物的选择选择是一是一项项十分重要的工作。十分重要的工作。理想地理想地说说，内，内标标物物应应当是一个能得到当是一个能得到纯样纯样的已知化合物，的已知化合物，这样这样它能以准确、已知的量加到它能以准确、已知的量加到样样品中去，它品中去，它应应当和被分当和被分析的析的样样品品组组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质质(如化学如化学结结构、极性、构、极性、挥发挥发度及在溶度及在溶剂剂中的溶解度等中的溶解度等)、色、色谱谱行行为为和响和响应应特征，最好是被分析物特征，最好是被分析物质质的一个同系物。当的一个同系物。当然，在色然，在色谱谱分析条件下，内分析条件下，内标标物必物必须须能与能与样样品中各品中各组组分充分充分分离。分分离。19精选ppt内标物的选择标准n样样品中不存在品中不存在该该物物质质n物理化学性物理化学性质质与待与待测组测组分相似，最好分相似，最好为为同系物同系物n与待与待测组测组分的相分的相应应灵敏度接近灵敏度接近n不会与不会与样样品品发发生化学反生化学反应应，且与，且与样样品能完全互溶品能完全互溶n在待在待测组测组分附近流出，不得干分附近流出，不得干扰扰到到测测定峰的出峰，定峰的出峰，且不能与且不能与测测定峰的保留定峰的保留时间时间相差太相差太远远n可得到良好的、干可得到良好的、干净净利落的色利落的色谱谱峰峰n其色其色谱谱性性质稳质稳定定20精选ppt内标法的优缺点n优点：进样量要求不严格只对欲分析的组分峰进行校正即可因为内标峰与样品峰是同时流出的，所以比外标法更加准确，且受仪器稳定性影响小n缺点：每次分析都必须加入内标物到样品中分析和计算过程比较复杂，不容易掌握21精选ppt外外标标百分比法（百分比法（ISTD%）和内）和内标标百分比法（百分比法（ESTD%）n外标百分比法和内标百分比法是在外标法和内标法的基础上，由所得化合物的含量除以样品的总含量，得到该化合物的百分含量。计算公式如下：n注意：由于外注意：由于外标标百分比法和内百分比法和内标标百分比法没有校正未知百分比法没有校正未知组组分峰，所以分峰，所以这这两种定量方法只适用于全部由已知化合物两种定量方法只适用于全部由已知化合物组组成的成的样样品的定量，品的定量，若若样样品中存在未知物，品中存在未知物，则该则该定量方法是定量方法是不可靠的不可靠的。外标百分比：内标百分比：22精选ppt第二部分加标回收率的计算23精选ppt加标回收率简介n回收率回收率（Recovery rate）是反映待测物在样品分析过程中损失程度的指标，损失越少，回收率越高，它与真实成分和分析的准确度有密切的关系。加标回收率的测定是实验室内经常用以自控的一种质量控制技术。它分为空白加空白加标标回收率回收率和样样品加品加标标回收率回收率两种。n（1）空白加标回收率。在没有被测物质的空白样品基质中加入定量的标准物质，按样品的处理步骤分析，得到的结果与理论值的比值即为空白加标回收率。n（2）样品加标回收率。相同的样品取两份，即两个子样，其中一个加入定量的待测成分标准物质；两个子样同时按相同的分析步骤分析，加标的一个所得结果减去未加标一个所得结果，其差值同加入标准物质的理论值之比即为样品加标回收率。n 目前在目前在实验实验室内室内经经常用常用样样品加品加标标回收来达到准确度回收来达到准确度质质量控量控制的目的。制的目的。24精选ppt加标回收的意义n反映一个方法定量关系的可靠程度n从侧面反映出分析过程的严密程度，即误差（或准确度）的大小n通过进行多次加标回收实验，可以确定一个分析方法的检测范围n通过加标回收实验，可以发现外部条件的变化对测定的影响25精选ppt加标回收率的理论公式样品加标回收率一般有浓度加标计算、物质的量加标计算、吸光度加标计算等多种计算方法，对于加标浓度的计算方法给定了一个理论公式：式中：P 加标回收率，%；c 加标后测定值，%；c0 原始测定值，%；c 加标浓度，%。26精选ppt加标回收率的实验过程n用选定分析方法对原始样品的含量进行测定，得出其初始含量c0；n量取一定体积（或称取一定质量）的原始样品，向其中加入一定量（一般为质量）的待测组分纯物质或含有该组分的物质，计算出加标浓度c；n对加标后的样品用同样的分析方法进行测定，得出加标后的含量c；n用理论公式进行计算，对一般加标回收实验而言，如果方法和操作都没有问题，加标回收率应在98%102%之间。27精选ppt加标浓度c的计算n已知原始样品中待测物质的初始浓度为c0，称取子样品的质量为m0，加入样品中待测纯物质的质量为m，纯物质的纯度为w，则加标浓度c按下式计算：n由于加标质量m非常小（仅为样品1%），所以可完全忽略不计，所以上式化简后近似写成：28精选ppt最终计算公式 把c的计算公式代入理论公式中，得到加标回收率的计算公式为：式中：P 加标回收率，%；c 加标后测定值，%；c0 原始测定值，%；m 加标质量，g；m0 称取子样品质量，g；w 加标物质的纯度。29精选ppt计算公式使用的条件n同一样品的子样取样体积必须相等（若是称取质量，则要保证多次称量尽可能接近）；n各类子样的测定过程必须按相同的操作步骤进行；n加标量不可太大，一般为待测物含量的0.52倍，且加标后的总含量不得超出分析方法的测定上限；n加标物浓度宜较高（纯物质最好），子样取样体积宜较大，加标物的体积应很小，一般以不超过原始试样体积的1%为好。30精选ppt实例：甲醇样品加标回收实验 某一液体样品用气相色谱法分析得出其中甲醇含量为5.32%（m/m），现提供色谱纯甲醇（纯度0.999），要对甲醇进行加标回收实验，该如何进行？31精选ppt甲醇加标回收实验过程分别称取m0/g(约10g)样品于5个20mL小玻璃瓶中，按下表的量分别向5个小瓶中用微量进样器或移液器加入色谱纯甲醇（纯度0.999）m/g，混匀后用同样的色谱方法进样，得出加标后测定值为c，代入计算公式中即可算出加标回收率P(%)。瓶号样品量m0/g加标量mw/g加标测定值c/%加标回收率P/%1#2#3#4#5#10.004510.00329.997810.000210.00930.02480.9990.05750.9990.08670.9990.12040.9990.15990.9995.57045.88316.18296.51976.9144101.1198.0599.6099.7499.9032精选ppt加标回收实验影响因素n原始样品和加标样品不在同一条件下进行分析；n加标物质中的杂质干扰分析测定；n待测物质稳定性差，如易挥发、吸附、水解、热解、光解等；n人为操作问题，如称量误差、移液误差等；n在做吸光度加标回收实验时，加标量太大造成体积误差，此时应该采用定容的方式消除加标造成的影响。33精选ppt用加标回收实验确定检测范围n采用多点加标方式，对空白样品进行不同浓度的加标回收测试，得到加标回收率如下表所示：c/%2510203050708090P/%110.696.398.299.198.7101.4 100.998.391.0n从上表可以看出，当样品中待测组分的含量c小于10%或大于80%时，加标回收率的结果不理想，所以由此可以看出，该方法定量关系的线性范围即检测范围为10%80%。34精选pptThank you!35精选ppt此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！