诊断学免疫学检查课件

诊断学免疫学断学免疫学检查诊断学免疫学检查诊断学免疫学检查诊断学免疫学检查概述(P41概述概述(P411)(P411)l免疫学（免疫学（immunologyimmunology）是研究机体自我识）是研究机体自我识别和对抗原性异物排斥反应的一门科学别和对抗原性异物排斥反应的一门科学。l临床免疫学检查常用于感染性疾病、自身临床免疫学检查常用于感染性疾病、自身免疫性疾病、变态反应性疾病、免疫缺陷免疫性疾病、变态反应性疾病、免疫缺陷病、肿瘤等疾病的诊断与疗效监测。病、肿瘤等疾病的诊断与疗效监测。2021/4/272概述(P411)免疫学（immunology）是研究机体自我抗原抗原与与抗体抗体2021/4/273抗原与抗体2021/4/273特 异 性 体 液 免 疫絮状沉淀沉淀反应 环状沉淀 免疫浊度补体结合 凝集试验三大标记三大标记技术技术三三大大血血清清反反应应2021/4/274特 异 性 体 液 免 疫三大标记三大血清反应2021/4/传统的免疫标记技术同位素；(125I 3H)RIA IRMA 荧光抗体技术(ANA)荧光标记时间分辩荧光技术 荧光偏振免疫(TDX)酶标记（ELISA)其他标记技术2021/4/275传统的免疫标记技术其他标记技术2021/4/275其他标记技术其他标记技术发光物标记发光物标记 电化学发光金标记技术硒标记技术免疫印迹技术2021/4/276其他标记技术2021/4/276标记2021/4/277标记2021/4/277第一节免疫球蛋白（第一节免疫球蛋白（Ig）的检测）的检测2021/4/278第一节免疫球蛋白（Ig）的检测2021/4/278vIgIg的产生、结构与功能的产生、结构与功能 Ig Ig通常是指具有抗体活性和通常是指具有抗体活性和(或或)抗体样抗体样结构的球蛋白，由浆细胞产生，有特异性识结构的球蛋白，由浆细胞产生，有特异性识别抗原的功能，但必须与抗原结合形成免疫别抗原的功能，但必须与抗原结合形成免疫复合物后才能启动效应功能。复合物后才能启动效应功能。v包括：包括：IgGIgG、A A、M M、D D、E E 2021/4/279Ig的产生、结构与功能2021/4/279一、一、IgGIgGl参考值参考值：7.0-16.6g/L,7.0-16.6g/L,占占70-8070-80l特点：特点：长效长效、能透过胎盘，抗菌、抗病毒、能透过胎盘，抗菌、抗病毒l测定方法：单向免疫扩散（手工）测定方法：单向免疫扩散（手工）速率散射比浊（仪器）速率散射比浊（仪器）l意义：感染、肝病、意义：感染、肝病、SLE SLE、多克隆多克隆 免疫增殖、多发性骨髓瘤单克隆免疫增殖、多发性骨髓瘤单克隆 减低：免疫缺陷、重链病、轻链病、减低：免疫缺陷、重链病、轻链病、肾病、免疫抑制剂肾病、免疫抑制剂等等2021/4/2710一、IgG参考值：7.0-16.6g/L,占70-802二、二、IgAIgAl参考值：参考值：0.7-3.5g/L0.7-3.5g/L，存在于各种分泌物中，存在于各种分泌物中l特点：分泌型特点：分泌型(SIgA(SIgA）:粘膜抵抗力粘膜抵抗力 血清型：单体血清型：单体l方法：同上方法：同上l意义：意义：粘膜抵抗力、粘膜抵抗力、IgAIgA单克隆（单克隆（monoclonalmonoclonal）感染、多克隆增高感染、多克隆增高 反复呼吸道感染反复呼吸道感染 非非IgAIgA单克隆，如单克隆，如SLESLE、免疫缺陷等免疫缺陷等2021/4/2711二、IgA参考值：0.7-3.5g/L，存在于各种分泌物中2三、三、IgMIgMl参考值：参考值：0.5-2.6g/L,0.5-2.6g/L,占占5-105-10l特点：五聚体，大分子特点：五聚体，大分子 如天然凝集素抗如天然凝集素抗A A、抗、抗B Bl意义：意义：早期抗体，出现早早期抗体，出现早，消失快。，消失快。感染初期、巨球蛋白血症感染初期、巨球蛋白血症降低情况同上类似降低情况同上类似方法同上。方法同上。2021/4/2712三、IgM参考值：0.5-2.6g/L,占5-102021四、四、IgDIgD、IgEIgElIgD:IgD:含量低、作用不很明确含量低、作用不很明确lIgEIgE：含量最少，：含量最少，0.1-0.9mg/L0.1-0.9mg/L 变态反应如过敏、寄生虫病有关变态反应如过敏、寄生虫病有关过敏、哮喘、嗜酸性细胞增多症过敏、哮喘、嗜酸性细胞增多症 降低情况与上类似降低情况与上类似ELISAELISA法测定法测定2021/4/2713四、IgD、IgEIgD:含量低、作用不很明确2021/4/五、血清五、血清M M蛋白测定蛋白测定检测方法：血清蛋白电泳、免疫电泳检测方法：血清蛋白电泳、免疫电泳主要疾病及主要疾病及M M蛋白：蛋白：多发性骨髓瘤：多发性骨髓瘤：IgGIgG、IgA IgA、IgE IgE 少见少见IgD IgD 巨球蛋白血症：大量巨球蛋白血症：大量IgMIgM重链病：重链病：Ig Ig重链重链轻链病：轻链病：Ig Ig轻链轻链2021/4/2714五、血清M蛋白测定2021/4/2714M蛋白血症蛋白血症 M：Monoclonal2021/4/2715M蛋白血症M：Monoclonal2021/4/2715第二节补体的测定第二节补体的测定补体是一组具有酶原活性的糖蛋白补体是一组具有酶原活性的糖蛋白一、总补体活性一、总补体活性“CH“CH5050”测定测定 溶血素（抗体）致敏绵羊红细胞溶血素（抗体）致敏绵羊红细胞 补体补体 溶血溶血 总补体活性总补体活性(1/(1/血清量血清量)稀释倍数稀释倍数 正常参考值：正常参考值：50-10050-100u/Lu/L2021/4/2716第二节补体的测定补体是一组具有酶原活性的糖蛋白2021/4总补体活性总补体活性CHCH5050测定测定2021/4/2717总补体活性CH50测定2021/4/2717CHCH5050的临床意义的临床意义补体传统途径的活化程度补体传统途径的活化程度增高：急性感染、组织损伤、恶性肿瘤增高：急性感染、组织损伤、恶性肿瘤降低：免疫复合性疾病（肾炎降低：免疫复合性疾病（肾炎)、SLESLE、肝病，重症营养不良肝病，重症营养不良 2021/4/2718CH50的临床意义2021/4/2718二、二、C3C3与与C4C4测定测定lC3C3含量最高，传统、旁路途径都需含量最高，传统、旁路途径都需C3C3激活激活(是激活的关键是激活的关键)含量含量:C3:0.8-1.5g/L:C3:0.8-1.5g/L C4:0.44-0.66g/L C4:0.44-0.66g/L 方法：单向免疫扩散法（方法：单向免疫扩散法（SRID)SRID)同同IgIg测定测定 速率散射免疫比浊法速率散射免疫比浊法 补体测定的意义：补体测定的意义：炎症、肿瘤：炎症、肿瘤 ：肾炎、自身免疫病：肾炎、自身免疫病2021/4/2719二、C3与C4测定C3含量最高，传统、旁路途径都需C3激活2第三节细胞免疫的测定第三节细胞免疫的测定一、一、T T细胞亚群的测定细胞亚群的测定 1.E 1.E花环（花环（RFC)RFC)原理：原理：T T细胞表面具细胞表面具SRBCSRBC受体受体 正常正常 58-72 58-72左右左右 2.2.淋巴细胞转化试验（淋巴细胞转化试验（LCT)LCT)原理：淋原理：淋T T PHA PHA 淋母细胞淋母细胞 正常：同上正常：同上 意义：意义：T T细胞数量细胞数量免疫缺陷、肿瘤、免疫病免疫缺陷、肿瘤、免疫病2021/4/2720第三节细胞免疫的测定一、T细胞亚群的测定2021/4/23 3淋巴细胞分化抗原测定淋巴细胞分化抗原测定 T T细胞：细胞：CDCD3 3-总总T T标志标志 CD CD4 4-T-TH H标志标志 CD CD8 8-Ts-Ts标志标志 B B细胞：细胞：CD CD1919、CDCD2020、CDCD2222等等细胞的荧光免疫标记技术细胞的荧光免疫标记技术流式细胞仪的应用流式细胞仪的应用2021/4/27213淋巴细胞分化抗原测定2021/4/2721四、细胞因子测定四、细胞因子测定 1.1.白介素白介素2 2（IL-2)IL-2)或或IL-2RIL-2R 2.2.肿瘤坏死因子（肿瘤坏死因子（TNF)TNF)3.3.干扰素（干扰素（IFN)IFN)ELISAELISA法，科研，非特异法，科研，非特异 各组分检测意义不同。各组分检测意义不同。2021/4/2722四、细胞因子测定2021/4/2722第四节第四节 肿瘤标志物检测肿瘤标志物检测（P418）l肿瘤标志物肿瘤标志物（tumor marker)tumor marker)是指在肿瘤发生是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。这类物质可反映细胞恶变各阶段表型物质。这类物质可反映细胞恶变各阶段表型及基因特征性。及基因特征性。l肿瘤标志物检测的意义是：肿瘤普查、辅助肿瘤标志物检测的意义是：肿瘤普查、辅助诊断、观察疗效和判断预后。诊断、观察疗效和判断预后。2021/4/2723第四节 肿瘤标志物检测（P418）肿瘤标志物（tumor一、蛋白质类一、蛋白质类1.AFP1.AFP（甲胎蛋白）（甲胎蛋白）：胎儿早期肝脏合成的糖蛋白，对诊断肝细胞癌有重要胎儿早期肝脏合成的糖蛋白，对诊断肝细胞癌有重要临床意义。临床意义。方法方法：RIARIA；ELISAELISA；化学发光化学发光 参考值参考值：25g/L300g/L300g/L2021/4/2724一、蛋白质类2021/4/27242.CEA2.CEA（癌胚抗原）（癌胚抗原）：方法方法：RIARIA；ELISAELISA；化学发光；化学发光 参考值参考值：5g/L5g/L 临床意义临床意义：非特异性：非特异性-部分恶性肿瘤，部分恶性肿瘤，特别是消化道肿瘤患者中可升高，对肠特别是消化道肿瘤患者中可升高，对肠癌复发、转移有重要意义。癌复发、转移有重要意义。2021/4/27252.CEA（癌胚抗原）：2021/4/27253.组织多肽抗原（略）组织多肽抗原（略）4.4.PSAPSA（前列腺特异抗原）（前列腺特异抗原）存在于前列存在于前列腺管道的上皮细胞中，在腺管道的上皮细胞中，在前列腺癌前列腺癌时血时血清水平明显升高，敏感性、特异性高。清水平明显升高，敏感性、特异性高。游离游离PSAPSA的检测及其的检测及其PSA/fPSAPSA/fPSA比值比值2021/4/27263.组织多肽抗原（略）2021/4/27265.鳞状上皮癌抗原（SCC)参考值：血清1.5g/L 临床意义：鳞状上皮癌，肺、宫颈癌二、糖类抗原肿瘤标志物2021/4/27275.鳞状上皮癌抗原（SCC)2021/4/27271.CA1991.CA199胰腺癌和消化道癌胰腺癌和消化道癌时，患者血清时，患者血清 CA199 CA199水平可明显升高水平可明显升高.2.2.CA125CA125（癌抗原（癌抗原125125）为一种糖蛋白性为一种糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内，肿瘤相关抗原，存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内，对诊断对诊断卵巢癌卵巢癌有较大临床价值。有较大临床价值。3.CA1533.CA153（癌抗原（癌抗原153153）对对乳腺癌乳腺癌有重要有重要的辅助诊断作用的辅助诊断作用2021/4/27281.CA199胰腺癌和消化道癌时，患者血清 2021/肿瘤标志物的临床应用肿瘤标志物的临床应用1 1筛查：高危人群筛查：高危人群2 2诊断、良诊断、良/恶鉴别：辅助指标恶鉴别：辅助指标3 3疗效观察：外科疗效观察：外科手术切除手术切除/残瘤残瘤/姑息姑息 保守保守药效、放疗效果药效、放疗效果4 4 预后：病员分群预后：病员分群,标志物标志物:5 5 随访随访2021/4/2729肿瘤标志物的临床应用筛查：高危人群2021/4/2729第五节自身抗体检测第五节自身抗体检测（P423）-自身免疫病自身免疫病是指免疫系统对自身成是指免疫系统对自身成分的免疫耐受性减低或破坏，产生分的免疫耐受性减低或破坏，产生自身抗体损伤含有相应自身抗原的自身抗体损伤含有相应自身抗原的组织器官而造成的疾病。组织器官而造成的疾病。2021/4/2730第五节自身抗体检测（P423）-自身免疫病是指免疫一、类风湿因子（一、类风湿因子（RFRF）是变性是变性IgGIgG刺激机体产生的一种自身抗体刺激机体产生的一种自身抗体 方法：方法：胶乳凝集法；胶乳凝集法；RIARIA；ELISAELISA 临床意义：类风湿性疾病时，临床意义：类风湿性疾病时，RF RF，70-9070-90 其他自身免疫性疾病，其他自身免疫性疾病，RF RF 亦可亦可 2021/4/2731一、类风湿因子（RF）2021/4/2731二、抗核抗体检测二、抗核抗体检测1.ANA:1.ANA:是一种泛指抗各种细胞核成分的自身抗是一种泛指抗各种细胞核成分的自身抗体，是血清中存在的一类和自身组织细胞的细体，是血清中存在的一类和自身组织细胞的细胞核发生反应的胞核发生反应的自身抗体的总称自身抗体的总称。无器官和种属特异性无器官和种属特异性临床意义：阳性多见于未治疗的临床意义：阳性多见于未治疗的SLESLE，阳性率达，阳性率达8080一一100100，亦可见于其他自身免疫性疾病。，亦可见于其他自身免疫性疾病。2021/4/2732二、抗核抗体检测2021/4/27322.2.抗抗ds-DNAds-DNA抗体：抗体：靶抗原是细胞核中靶抗原是细胞核中DNADNA的双螺旋结构的双螺旋结构 方法：免疫荧光法、放射免疫法方法：免疫荧光法、放射免疫法 临床意义临床意义 SLESLE的高特异性试验，但敏的高特异性试验，但敏感性较低，活动期感性较低，活动期SLESLE阳性率阳性率7070-90-902021/4/27332.抗ds-DNA抗体：2021/4/27333.3.可提取性抗原抗体谱（可提取性抗原抗体谱（ENAENA）可提取性核抗原多肽抗体谱包括可提取性核抗原多肽抗体谱包括抗抗SmSm、核糖体、核糖体、ScL70ScL70、JoJo1 1、SSBSSB、SSASSA和和RNPRNP等的抗体。等的抗体。方法方法 免疫印迹免疫印迹 临床意义临床意义 （见（见P424 P424 表表4-8-24-8-2）l 抗抗SmSm抗体抗体：SLESLE的特异性标志之一的特异性标志之一 ，抗，抗dsDNAdsDNA和抗和抗SmSm抗体同时检测，可提高抗体同时检测，可提高SLESLE诊断率。诊断率。l 抗抗SSASSA、SSBSSB抗体抗体干燥综合征干燥综合征 l 抗抗RNPRNP抗体抗体-混合性结缔组织病混合性结缔组织病 2021/4/27343.可提取性抗原抗体谱（ENA）2021/4/2734第六节感染的免疫学检查第六节感染的免疫学检查（P434）一、细菌感染免疫一、细菌感染免疫抗抗“O”“O”抗体测定抗体测定 抗溶血性链球菌抗溶血性链球菌(感染）抗体感染）抗体 溶血法溶血法 胶乳法：胶乳法：500u 500u 速率散射法速率散射法 意义：风湿、风湿性关节炎、风湿性心脏病、意义：风湿、风湿性关节炎、风湿性心脏病、肾炎时肾炎时同时测血沉同时测血沉2021/4/2735第六节感染的免疫学检查2021/4/2735肥达氏反应肥达氏反应：原理：是利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，原理：是利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，检测病人血清中有无相应抗体的一种凝集试验。检测病人血清中有无相应抗体的一种凝集试验。伤寒第三周后阳性率达伤寒第三周后阳性率达80%80%，初期阴性，初期阴性方法：直接凝集法方法：直接凝集法 H1:160 H1:160 鞭毛抗原鞭毛抗原 记忆反应记忆反应 O1:80 O1:80 甲甲1:801:80 乙乙1:80 1:80 副伤寒副伤寒 丙丙1:801:802021/4/2736肥达氏反应：2021/4/2736二、病毒感染的免疫学检测二、病毒感染的免疫学检测（一）（一）TORCH弓型虫、风疹、巨细胞病毒、单纯泡疹（三）性传播疾病的免疫学检测（STD)支原体、衣原体（金标法）梅毒初筛RPR、确诊T-PHAHIV 初筛ELISA、蛋白印迹试验2021/4/2737二、病毒感染的免疫学检测2021/4/2737（一）梅毒感染检测（一）梅毒感染检测 1.筛选试验：筛选试验：RPRRPR快速血浆反应素试验快速血浆反应素试验 2.确诊试验：确诊试验：TPHATPHA梅毒螺旋体血凝试验梅毒螺旋体血凝试验（二）（二）HIVHIV感染检测感染检测 1.筛选试验：筛选试验：ELISAELISA法测法测HIVHIV抗体抗体 2.确诊试验：蛋白印迹试验或确诊试验：蛋白印迹试验或RT-PCRRT-PCR测测HIV-RNAHIV-RNA2021/4/2738（一）梅毒感染检测2021/4/2738第九章第九章（P452）第四节第四节 肝炎血清标志物测定肝炎血清标志物测定一、甲型肝炎一、甲型肝炎 IgM IgM抗体（抗体（ELISAELISA法测定）：现实感染，诊法测定）：现实感染，诊断意义断意义 IgG IgG抗体（抗体（ELISAELISA法）法）：流行病学意义：流行病学意义2021/4/2739第九章（P452）第四节 肝炎血清标志物测定一二、乙型肝炎二、乙型肝炎 1.1.最常用的检测项目（两对半最常用的检测项目（两对半-见表见表4-5-44-5-4）方法：方法：ELISAELISA、放射免疫法（、放射免疫法（RIARIA），发光），发光免疫法免疫法 2.2.乙肝乙肝DNADNA定量定量PCRPCR检测：病毒复制的指标检测：病毒复制的指标 正常：正常：PCR(-)PCR(-)或或1010-3-3 Copy/mlCopy/ml 拉米夫定拉米夫定(贺普丁）、干扰素治疗效果主要贺普丁）、干扰素治疗效果主要指标。指标。2021/4/2740二、乙型肝炎2021/4/2740乙肝常见的检验标志物分析乙肝常见的检验标志物分析 状态状态项目项目大三阳大三阳小三阳小三阳二阳二阳正常正常免疫免疫现感现感双抗双抗HBsAgHBsAg+-+抗抗HBsHBs-+HBeAgHBeAg+-+抗抗HBeHBe-+-+抗抗HBcHBc+-+抗抗HBc-IgMHBc-IgM-+2021/4/2741乙肝常见的检验标志物分析 状态项目大三阳小三阳二阳正三、丙肝病毒标志物三、丙肝病毒标志物 RNA RNA病毒病毒 含量低含量低 1.RNA-RT-PCR 1.RNA-RT-PCR （方法学评价优）（方法学评价优）2.2.抗抗HCV-IgM HCV-IgM 近期感染指标近期感染指标 3.3.抗抗HCV-IgG HCV-IgG 感染史感染史l其它其它 戊肝与甲肝类似戊肝与甲肝类似 丁肝为缺陷病毒，需有丁肝为缺陷病毒，需有HBVHBV的存在方能复制和传播的存在方能复制和传播2021/4/2742三、丙肝病毒标志物 RNA病毒 含量低2021/42021/4/2743本章内容完2021/4/2743谢谢观赏谢谢观赏谢谢观赏