血清学诊断技术课件

中国农大动物医学院鸡病血清学检验鸡病血清学检验1鸡病血清学检验1中国农大动物医学院 一一 原原 理理 许许多多病病毒毒具具有有凝凝集集动动物物红红细细胞胞的的能能力力,这这种种凝凝集集能能力力可可被被相相应应的的抗抗体体所所抑抑制制,故故可可用用已已知知病病毒毒检检测测相相应应的的血凝抑制抗体血凝抑制抗体.也可以用已知标准抗体对分离的病毒进行鉴定也可以用已知标准抗体对分离的病毒进行鉴定.红细胞凝集抑制试验红细胞凝集抑制试验2一原理红细胞凝集抑制试验2中国农大动物医学院 二二 使用范围使用范围 新城疫、新城疫、禽流感、禽流感、减蛋综合征、减蛋综合征、鸡毒支原体、鸡毒支原体、滑滑液液囊囊支支原原体体等等病病原原微微生生物物感感染染后后的的抗抗体体检检测测；或或相相应应病病原分离后的鉴定原分离后的鉴定 3二使用范围3中国农大动物医学院三三 器材器材1.1.血凝板、血凝板、2.2.微量移液器微量移液器3.3.标准抗原标准抗原 4.1%4.1%红细胞悬浮液红细胞悬浮液 5.5.被检血清被检血清 6.6.稀释液稀释液4三器材4中国农大动物医学院四四 操作程序操作程序（一）（一）0.50.5红细胞的准备红细胞的准备 1.1.阿氏液阿氏液(抗凝剂抗凝剂)的配制的配制 葡萄糖葡萄糖1.8661.866 柠檬酸钠柠檬酸钠0.80.8 柠檬酸柠檬酸0.0550.055 氯化钠氯化钠 0.418g 0.418g 蒸馏水蒸馏水 100ml 100ml 混匀放入混匀放入100 ml100 ml葡萄糖瓶内，葡萄糖瓶内，1010磅磅115115度度1010分钟分钟 高压灭菌。冷却后高压灭菌。冷却后44保存备用。保存备用。5四操作程序5中国农大动物医学院2.2.采血采血 取取健健康康鸡鸡翅翅静静脉脉或或心心脏脏采采血血，(按按阿阿氏氏液液2 2份份，血血液液1 1份）份）注意注意:(1).:(1).两只健康的鸡血混合两只健康的鸡血混合;(2).(2).阿氏液的量要够阿氏液的量要够62.采血6中国农大动物医学院3.3.红细胞悬液的配制：红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经将血液注入离心管中，经30003000转转/分钟，分钟，离心离心5-105-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的细胞加稀释液（生理盐水）白细胞薄膜，将沉淀的细胞加稀释液（生理盐水）洗涤，再用离心机洗涤，再用离心机30003000转转/分钟离心分钟离心5-105-10分钟，充分钟，充去上清液，再加稀释液洗涤，去上清液，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞，按红细胞，按1%1%的稀释度加入稀释液（的稀释度加入稀释液（1 1毫升红细胞毫升红细胞泥加泥加9999毫升稀释液）。毫升稀释液）。73.红细胞悬液的配制：7中国农大动物医学院(二二)被检血清被检血清 将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内（微量法可用孔经注入洁净干燥试管内（微量法可用孔经2-32-3毫米塑料管由毫米塑料管由翅静脉采血），在室温中静置或离心，待血清析出后使用。翅静脉采血），在室温中静置或离心，待血清析出后使用。注意注意:每只鸡应更换一个注射器，严禁交叉使用。每只鸡应更换一个注射器，严禁交叉使用。8(二)被检血清8中国农大动物医学院 (三）三）血凝抗原效价测定血凝抗原效价测定 （操作量（操作量25ul25ul）(1)(1)抗原抗原 一般以鸡新城疫一般以鸡新城疫IIII系或系或LasotaLasota系作为已知抗系作为已知抗原。原。来源来源:1).1).购买购买:目前也有用聚乙二醇使目前也有用聚乙二醇使LasotaLasota系病毒液浓缩，作系病毒液浓缩，作 成稳定浓缩抗原，成稳定浓缩抗原，HAHA效价达效价达1 1：50005000以上，以上，44半年半年 不变。不变。9(三）血凝抗原效价测定（操作量25ul）9中国农大动物医学院 2)2)自制自制:A.A.用鸡新城疫用鸡新城疫IIII系或者系或者LasotaLasota系疫苗接种鸡胚制备抗原：系疫苗接种鸡胚制备抗原：B.B.疫疫苗苗用用灭灭菌菌生生理理盐盐水水稀稀释释1010倍倍，以以0.10.1毫毫升升接接种种于于1010日日龄的鸡胚尿囊内龄的鸡胚尿囊内;C.C.凡凡接接种种后后72-12072-120小小时时内内死死亡亡的的鸡鸡胚胚，且且病病变变显显著著者者，分分别别收收获获鸡鸡胚胚尿尿囊囊液液于于消消毒毒试试管管内内，如如有有血血细细胞胞应应离离心心（20002000转转/分钟）分钟）1515分钟，取上清液分钟，取上清液;D.D.作作HAHA试试验验，其其凝凝集集价价在在1 1：640640以以上上的的鸡鸡胚胚鸡鸡，分分装装于于洁净干燥的青霉素瓶中，保存于冰箱备用。洁净干燥的青霉素瓶中，保存于冰箱备用。102)自制:10中国农大动物医学院2.2.抗原血凝价的测定抗原血凝价的测定每种抗原做两排，结果取均值每种抗原做两排，结果取均值 1).1-12 1).1-12孔加生理盐水孔加生理盐水25ul25ul 2).2).第第1 1孔加抗原孔加抗原25ul25ul，反复吹打，反复吹打1010次吸取次吸取25ul25ul到第到第2 2孔，孔，依此类推倍比稀释至第依此类推倍比稀释至第1111孔孔 3).3).最后从第最后从第1111孔吸取孔吸取25ul25ul弃去弃去,第第1212孔做生理盐水对照孔做生理盐水对照 4).4).所有孔加所有孔加25ul 125ul 1红细胞红细胞 5).5).将血凝板振荡将血凝板振荡1 1分钟分钟 112.抗原血凝价的测定11中国农大动物医学院 6 6 新新城城疫疫病病毒毒室室温温（18221822）作作用用 3030分分;禽禽流流感感病病毒毒3737作作用用3030分分.夏夏季季结结果果出出现现快快，冬冬季季较较慢慢 新城疫病毒时间长，温度高易发生洗脱新城疫病毒时间长，温度高易发生洗脱 7 7 结果判定结果判定 1).1).完全凝集孔为终点完全凝集孔为终点 2).2).将血凝板成将血凝板成4545角竖立观察角竖立观察 3).3).红细胞呈泪滴状沉淀为不凝集红细胞呈泪滴状沉淀为不凝集 4).4).孔孔底底没没有有红红细细胞胞沉沉淀淀,红红细细胞胞均均匀匀平平铺铺于于孔孔底底为凝集为凝集,此孔稀释倍数为此孔稀释倍数为1 1个工作单位个工作单位126新城疫病毒室温（1822）作用30分;中国农大动物医学院孔孔 号号1 12 23 34 45 56 67 78 89 91010稀释倍数稀释倍数5 5101020204040808016016032032064064012801280对照对照生理盐水（毫升）生理盐水（毫升）病毒液（毫升）病毒液（毫升）4*4*1 125252525252525252525252525252525252525252525252525252525252525252525(25)(25)弃去弃去生理盐水（毫升）生理盐水（毫升）25252525252525252525252525252525252525250.5%0.5%红细胞液红细胞液（毫升）（毫升）2525252525252525252525252525252525252525作用温度与时间作用温度与时间混合均匀置混合均匀置18221822作用作用45604560分钟，对照管出现结果时判定分钟，对照管出现结果时判定结果（举例）结果（举例）+-鸡新城疫红细胞凝集试验（鸡新城疫红细胞凝集试验（HAHA试验）试验）(过程图过程图)13孔号12345678910稀释倍数510204080中国农大动物医学院注意注意 能使鸡红细胞能使鸡红细胞完全凝集的病毒完全凝集的病毒液的最高稀释倍液的最高稀释倍数，称为该病毒数，称为该病毒液的红细胞凝集液的红细胞凝集效价。如上例，效价。如上例，病毒病的病毒病的HAHA效价效价为为1 1：320320。14注意14中国农大动物医学院（四（四)红细胞凝集抑制试验红细胞凝集抑制试验 1.抗原准备（工作浓度的准备）红细胞凝集抑制试验（红细胞凝集抑制试验（HIHI试验）时，病毒抗试验）时，病毒抗原液原液2525ul内需含内需含4 4个凝集单位，所以，应将原菌抗原个凝集单位，所以，应将原菌抗原毒作成毒作成320/4=80320/4=80倍稀释。倍稀释。15（四)红细胞凝集抑制试验15中国农大动物医学院2 2 操作步骤操作步骤 (1)(1)每孔加每孔加25ul25ul的稀释液的稀释液:(2)(2)第第1 1孔加孔加25ul25ul待检血清，反复吸吹待检血清，反复吸吹1010次次;吸取吸取25ul25ul于第于第(3)(3)2 2孔孔，以以此此类类推推倍倍比比稀稀释释至至第第1111孔孔;最最后后从从第第1111孔孔取取2 2 (4)(4)5ul 5ul弃去弃去,第第1212孔为抗原对照孔为抗原对照;(3)(3)每孔加每孔加4 4单位抗原单位抗原;室温下室温下(18-22)(18-22)作用作用3030分分(4)(4)取取1 1红细胞红细胞25ul25ul加于各孔中加于各孔中(5)(5)将血凝板振荡将血凝板振荡1 1分钟分钟(6)(6)室温作用室温作用30-4530-45分钟（禽流感分钟（禽流感 37 37）观察结果）观察结果(7)(7)结果判定结果判定 将血凝板呈将血凝板呈4545竖起观察竖起观察 完全抑制孔红细胞呈泪滴样下沉完全抑制孔红细胞呈泪滴样下沉,此孔为抑制终点此孔为抑制终点.162操作步骤16中国农大动物医学院鸡鸡新城疫新城疫红细红细胞凝集抑制胞凝集抑制试验试验（H试验试验）(过过程程图图)孔孔 号号1 12 23 34 45 56 67 78 89 91010稀释倍数稀释倍数对照对照生理盐水生理盐水待检血清待检血清25252525252525252525252525252525252525252525252525252525252525252525(25)(25)弃去弃去4 4单位抗原单位抗原25252525252525252525252525252525252525250.5%0.5%红细胞红细胞液（毫升）液（毫升）2525252525252525252525252525252525252525作用温度与作用温度与时间时间混合均匀置混合均匀置18-2218-22作用作用45-6045-60分钟，对照管出现结果时判定分钟，对照管出现结果时判定结果结果放室温作用分钟单位：l17鸡新城疫红细胞凝集抑制试验（H试验）(过程图)孔中国农大动物医学院 3.3.结果报告结果报告(1).(1).鸡的免疫临界水平。鸡的免疫临界水平。(2).(2).鸡群的鸡群的HIHI抗体水平是以抽检样品的抗体水平是以抽检样品的HIHI抗体效价（抗体效价（log2log2）的平均值表示的。的平均值表示的。(3).(3).检样中检样中HIHI抗体效价的最高值与最低值相差太大时，。抗体效价的最高值与最低值相差太大时，。(4).(4).大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于 0.1%-0.5%0.1%-0.5%，小型鸡群，抽样率应有所增加，一般认为，小型鸡群，抽样率应有所增加，一般认为 理想的抽样率应为理想的抽样率应为2%2%。(5(5）.鸡群接种新城疫疫苗后，经鸡群接种新城疫疫苗后，经2-32-3周测血清中的周测血清中的HIHI抗体效抗体效 价若提高价若提高2 2个滴度以上，表示免疫应答良好，疫苗接种个滴度以上，表示免疫应答良好，疫苗接种 成功；若成功；若HIHI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。抗体效价无明显提高，表示免疫失败。183.结果报告18中国农大动物医学院1919中国农大动物医学院2020中国农大动物医学院琼脂免疫扩散试验（琼脂免疫扩散试验（AGPAGP）21琼脂免疫扩散试验（AGP）21中国农大动物医学院 一一 原理原理 抗抗原原、抗抗体体在在含含有有电电解解质质的的琼琼脂脂凝凝胶胶中中,可可以以向向四四周周扩扩散散,当当抗抗原原抗抗体体扩扩散散到到适适当当比比列列处处相相结结合合,出出现肉眼可见的沉淀线现肉眼可见的沉淀线.常用已知抗原检测相应的抗体常用已知抗原检测相应的抗体22一原理22中国农大动物医学院二二适用范围适用范围(琼脂扩散试验适用琼脂扩散试验适用)禽流感、禽流感、传染性支气管炎传染性支气管炎传染性法氏囊病、传染性法氏囊病、传染性喉气管炎传染性喉气管炎鸡痘、鸡痘、马立克氏病、马立克氏病、传染性脑脊髓炎传染性脑脊髓炎网状内皮组织增生症、网状内皮组织增生症、病毒性关节炎病毒性关节炎多杀性巴氏杆菌病的抗体检测。多杀性巴氏杆菌病的抗体检测。23适用范围23中国农大动物医学院三三器材器材琼脂扩散板（平皿）琼脂扩散板（平皿）;打孔器、打孔器、移液器移液器;0.01M PH 7.2;0.01M PH 7.2 的磷酸缓冲液的磷酸缓冲液;琼脂粉（糖）琼脂粉（糖）24三器材琼脂扩散板（平皿）;打孔器、移液器;0.0中国农大动物医学院四四操作程序操作程序（一）琼脂板制备（一）琼脂板制备1琼脂粉1g磷酸盐缓冲液100ml2加热煮沸，摇动烧瓶使琼脂粉溶解3加入8g氯化钠振荡烧瓶，使氯化钠溶解，4待琼脂稍凉不烫手，倒板厚度为2.53mm5琼脂凝固后，将其倒置湿盒内，4保存备用25四操作程序25中国农大动物医学院（二）（二）打孔打孔1用打孔器按7孔梅花图案打孔孔径为3mm-4mm,孔距为3mm大平皿可打六组梅花孔2打孔后用7#针头挑出孔内琼脂3最后在酒精灯上烧烤封底26（二）打孔26中国农大动物医学院（三）（三）加样加样1中间孔加抗原中间孔加抗原2外周孔加血清外周孔加血清1、4孔加阳性血清孔加阳性血清;其他其他孔加待检血清孔加待检血清;加样至满孔为止加样至满孔为止;3室温下放置室温下放置1020分钟分钟使孔内液体扩散完毕或液面下降使孔内液体扩散完毕或液面下降4将琼脂板倒置于湿盒内将琼脂板倒置于湿盒内37温箱内作用温箱内作用24-72小时观察结果小时观察结果27（三）加样27中国农大动物医学院 五五 结果判定结果判定 （一一）当当 阳阳 性性 血血 清清 与与 抗抗 原原 孔孔 之之 间间 出出 现现 清清 晰晰 沉沉 淀淀 线线 证明实验成立证明实验成立 （二二）如如 果果 被被 检检 血血 清清 与与 抗抗 原原 孔孔 之之 间间 出出 现现 沉沉 淀淀 线线 或或 阳阳 性性血血清清的的沉沉淀淀线线向向邻邻近近被被检检血血清清孔孔内内侧侧偏偏弯弯者者，被被检检血血清清判判为为阳性阳性 （三三）如如果果被被检检血血清清孔孔与与抗抗原原孔孔之之间间没没有有沉沉淀淀线线;而而且且阳阳性性血清孔沉淀线直向被检血清孔则被检血清判为阴性血清孔沉淀线直向被检血清孔则被检血清判为阴性28五结果判定28中国农大动物医学院2929中国农大动物医学院3030中国农大动物医学院3131中国农大动物医学院3232中国农大动物医学院血血清清平平板板凝凝集集试试验验33血清平板凝集试验33中国农大动物医学院一一 原理原理 细细菌菌性性颗颗粒粒抗抗原原与与相相应应的的抗抗体体结结合合,在在适适当当的的电电解解质质参参与与下下,经经过过一一段段时时间间抗抗原原颗颗粒粒相相互互凝凝集集成成肉肉眼可见团快眼可见团快.常用已知细菌性抗原检测相应的凝集抗体常用已知细菌性抗原检测相应的凝集抗体 凝凝集集试试验验包包括括：试试管管凝凝集集反反应应 、平平板板凝凝集集反反应应全全血平板凝集反应、血清平板凝集反应）血平板凝集反应、血清平板凝集反应）.34一原理34中国农大动物医学院二二适用范围适用范围鸡白痢、鸡伤寒鸡毒支原体、滑液囊支原体鸡副嗜血杆菌病（鸡传染性鼻炎）35适用范围35中国农大动物医学院三三器材器材凝集抗原、阳性、阴性血清凝集抗原、阳性、阴性血清被检血清，移液器（被检血清，移液器（550ul）载玻片，载玻片，25灯箱灯箱36三器材36中国农大动物医学院四四操作程序操作程序（一）（一）准备准备试验前试验前20分钟自分钟自4冰箱取出抗原冰箱取出抗原;阴、阳性血清和被检血清阴、阳性血清和被检血清;使其达到室温，并将抗原液振荡均匀使其达到室温，并将抗原液振荡均匀37四操作程序37中国农大动物医学院（二）试验过程（二）试验过程1.取抗原液取抗原液25ul滴于载玻片上滴于载玻片上2.迅速在抗原液上滴加等量的被检血清迅速在抗原液上滴加等量的被检血清3.快速用牙签将血清与抗原混匀快速用牙签将血清与抗原混匀4.并涂布成并涂布成2cm大小的片状大小的片状5.在灯箱附近不断晃动玻片在灯箱附近不断晃动玻片2分钟，观察分钟，观察有无凝集有无凝集38（二）试验过程38中国农大动物医学院五五结果判定结果判定2 2 分分钟钟内内出出现现明明显显凝凝集集（背背景景透透亮亮）为为阳阳性性;背背景景均均匀一致呈混浊样，无凝集者为阴性匀一致呈混浊样，无凝集者为阴性.阴性阳性鸡白痢沙门氏菌鸡白痢沙门氏菌的平板凝集试验的平板凝集试验的观察的观察39五结果判定阴性阳性鸡白痢沙门氏菌的平板凝集试验中国农大动物医学院新城疫病毒、新城疫病毒、禽流感病毒的分离和禽流感病毒的分离和鉴鉴定定40新城疫病毒、禽流感病毒的分离和鉴定40中国农大动物医学院一一病料的采集和处理病料的采集和处理活动物：气管、喉头、呼吸道分泌物（拭子）死动物：肝、脾、肺等内脏用生理盐水（肉汤）（含双抗2000单位/ml）制成12组织匀浆4冰箱作用小时或过夜转分离心分钟取上清液备用41一病料的采集和处理41中国农大动物医学院二鸡胚接种鸡胚接种1取9-11日龄SPF鸡胚，每个样接种5-10个鸡胚2取上述处理的上清液0.2ml接种于鸡胚尿囊腔中337培养4-7天4每天照蛋2次，弃去24小时内死亡鸡胚5收集死胚及培养结束时的活胚放4冰箱中冷却2小时以上（过夜）6收取尿囊液测定其HA活性（效价）阴性者需传代2次42二鸡胚接种42中国农大动物医学院三三病毒鉴定病毒鉴定禽流感病毒与其他血清型的副粘病毒以及某些细菌支原体也具有血凝性可用相应特异阳性血清进行血凝抑制试验或全血平板凝集抑制试验进行鉴定新城疫血凝抑制试验禽流感琼脂扩散试验不同血清型禽流感血凝抑制试验43三病毒鉴定43中国农大动物医学院 四四 新城疫病毒、禽流感病毒的致病力测定新城疫病毒、禽流感病毒的致病力测定（一）（一）鸡胚平均致死时间（鸡胚平均致死时间（MDTMDT）（最小致死量）（最小致死量）1 1 将新鲜感染尿囊液进行将新鲜感染尿囊液进行10101 1-10-109 9稀释稀释 2 2 每个稀释度接种每个稀释度接种5 5枚枚911911天天 SPF SPF鸡鸡0.1ml/0.1ml/胚胚 3 3 置置3737培养。每日照蛋培养。每日照蛋2 2次次 4 4 连续观察连续观察7 7天，记录每个鸡胚死亡时间天，记录每个鸡胚死亡时间 最小致死量为引起所有鸡胚死亡最大稀释度最小致死量为引起所有鸡胚死亡最大稀释度 MDT MDT最小致死量引起鸡胚死亡平均时间最小致死量引起鸡胚死亡平均时间 强强 毒毒6060小时小时 中等毒力中等毒力61-9061-90小时小时 低等毒力低等毒力9090小时小时44四新城疫病毒、禽流感病毒的致病力测定44中国农大动物医学院（二）（二）脑内致病指数（脑内致病指数（IICP）1、取取凝凝集集价价在在24以以上上的的新新鲜鲜感感染染尿尿囊囊液液用用生生理理盐盐水水10倍稀释；倍稀释；2、脑脑内内接接种种1日日龄龄雏雏鸡鸡（24-40小小时时）10只只，每只每只0.05ml；3、每每24小时观察一次，共观察小时观察一次，共观察8天；天；4、每每天天观观察察给给鸡鸡打打分分，正正常常鸡鸡为为0分分；病病鸡鸡为为1分；死鸡为分；死鸡为2分；鸡每天观察仍记录分；鸡每天观察仍记录2分）分）IICP是是每每只只鸡鸡8天天所所有有观观察察数数值值的的平平均均数数强强毒毒力力病病毒毒ICPI为为2，温和毒数为，温和毒数为045（二）脑内致病指数（IICP）45中国农大动物医学院(三）三）静脉致病指数（静脉致病指数（IVPI）1将将HA高高于于24的的新新鲜鲜感感染染尿尿囊囊液液用用生生理理盐盐水水做做10倍稀释倍稀释2给给10只只6周龄周龄SPF鸡静脉接种鸡静脉接种0.1ml3每每天天观观察察一一次次，共共10天天，每每次次观观察察记记录录正正常常鸡鸡为为0，病病鸡鸡1，瘫瘫痪痪鸡鸡、有有神神经经症症状状者者为为2，死鸡记作死鸡记作3（死鸡以后每天仍记（死鸡以后每天仍记3）IVPI指指每每只只鸡鸡10天天内内观观察察值值的的平平均均数数，温温和和型型和中等毒力者和中等毒力者IVPI为为0，强毒株为，强毒株为346(三）静脉致病指数（IVPI）46中国农大动物医学院禽禽脑脑脊髓炎病毒脊髓炎病毒的分离和的分离和鉴鉴定定47禽脑脊髓炎病毒的分离和鉴定47中国农大动物医学院一一采样采样（一）（一）取发病典型的雏鸡脑组织取发病典型的雏鸡脑组织（发病早期，不超过（发病早期，不超过23天）天）加含双抗的生理盐水制成加含双抗的生理盐水制成1020悬液悬液（二）（二）4作用作用24小时，小时，（三）（三）1500转离心转离心30分钟，取上清液备用。分钟，取上清液备用。4848中国农大动物医学院二二鸡胚接种鸡胚接种1取取5-7日龄日龄SPF鸡胚鸡胚5-10枚枚2卵黄接种卵黄接种将鸡胚垂直放于蛋托上将鸡胚垂直放于蛋托上3在气室中央打孔，在气室中央打孔，用用7#针头垂直插入剩下针头垂直插入剩下1cm左右左右4接种接种0.2ml病毒液，封蜡病毒液，封蜡537继续孵化继续孵化11天天12天，观察结果天，观察结果49二鸡胚接种49中国农大动物医学院三三结果判定结果判定1自然感染的野毒不易使自然感染的野毒不易使SPF鸡胚出现病变鸡胚出现病变需要传需要传34代才能适应鸡胚出现病变代才能适应鸡胚出现病变.2取半数鸡胚打开观察鸡胚观察取半数鸡胚打开观察鸡胚观察肌肉营养不良，腿肌运动性降低肌肉营养不良，腿肌运动性降低脚趾弯曲等变化脚趾弯曲等变化3另一半鸡胚继续孵化另一半鸡胚继续孵化出壳后出壳后10天内便可见到典型天内便可见到典型AE症状出现症状出现50三结果判定50中国农大动物医学院四四病毒鉴定病毒鉴定1将出现病变的鸡胚（脑、胃肠道、胰腺）通过一定的方法制备成琼扩抗原2用已知的阳性血清与之做琼脂试验检测病料（脑，胰脉，胃肠）中的AEV51四病毒鉴定51中国农大动物医学院五五鸡胚敏感试验鸡胚敏感试验方法同鸡胚AEV分离目的是检测鸡群的免疫效果取待检鸡群种蛋（鸡胚）20枚接种鸡胚适应毒株VanRoeckl100EID每只鸡胚0.2ml100EID52五鸡胚敏感试验52中国农大动物医学院六六结果判定结果判定1所有鸡胚均出现特征病变待检鸡群为敏感鸡群没有免疫力270100%鸡胚无病变鸡群对AE具有很强的免疫力350%以内的鸡胚无病变鸡群部分鸡易感，应加强免疫53六结果判定53中国农大动物医学院酶联免疫吸附实验酶联免疫吸附实验54酶联免疫吸附实验54