致泻性大肠杆菌课件

致泻性大肠杆菌检验技术致泻性大肠杆菌检验技术河北省疾病预防控制中心河北省疾病预防控制中心 细菌寄生虫病防治与消毒所细菌寄生虫病防治与消毒所致泻性大肠杆菌检验技术1概概 念念 大肠杆菌的部分血清型可引起肠道感染，称为致泻性大肠杆菌概 念 大肠杆菌的部分血清型可引起肠道感染，称为2致泻性大肠杆菌按照毒力因子、致病机理致泻性大肠杆菌按照毒力因子、致病机理和流行病学特征分为和流行病学特征分为5类类肠致病性大肠杆菌（EPEC）肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）肠产毒性大肠杆菌（ETEC）肠出血性大肠杆菌（EHEC）肠聚集性粘附大肠杆菌（EAggEC）致泻性大肠杆菌按照毒力因子、致病机理和流行病学特征分为5类3生物学性状生物学性状形态形态形态形态 大肠杆菌是革兰氏阴性短杆大肠杆菌是革兰氏阴性短杆菌，大小为菌，大小为1.01.01.51.5mm2.0 2.0 6.06.0mm 多有鞭毛，多有鞭毛，约为约为4 4 6 6根，根，为为周毛菌。没鞭毛的周毛菌。没鞭毛的细细菌也可菌也可使人或使人或动动物致病物致病 大大肠肠杆菌具有菌毛，分杆菌具有菌毛，分为为性性菌毛、普通菌毛和与致病性菌毛、普通菌毛和与致病性有关的菌毛。与有关的菌毛。与细细菌致病性菌致病性有关的菌毛有：有关的菌毛有：K88K88、K99K99、987P987P、CFACFA、F41F41 CFACFA 等等生物学性状形态4培养特性培养特性大肠杆菌在普通营养琼脂上生长良好，最适生长温度为37，42 44 仍能生长。兼性厌氧菌，氧气充足生长较好。最适生长pH为6.8 8.0，低于6.0或高于8.0生长缓慢。培养特性大肠杆菌在普通营养琼脂上生长良好，最适生长温度为375在普通培养基上的菌落形态在普通培养基上的菌落形态光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑，呈灰色，在生理盐水中容易分散。粗造型：菌落扁平，边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。粘液型：常为含有荚膜的菌株。在普通培养基上的菌落形态光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿6生化特征生化特征-1 分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖等多甘露醇、木糖、阿拉伯糖等多种糖类，产酸产气。种糖类，产酸产气。在肠道鉴别培养基上形成有色在肠道鉴别培养基上形成有色菌落。菌落。吲哚试验、甲基红试验阳性；吲哚试验、甲基红试验阳性；V-PV-P试验阴性；不能利用柠檬试验阴性；不能利用柠檬酸盐作为碳源；分解葡萄糖铵酸盐作为碳源；分解葡萄糖铵盐；不分解尿素；明胶液化阴盐；不分解尿素；明胶液化阴性；不分解侧金盏花醇；在氯性；不分解侧金盏花醇；在氯化钾培养基上不生长。化钾培养基上不生长。生化特征-1分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖7生化特征生化特征-2EIECEIEC：不发酵或迟缓发酵乳糖，不产气，除：不发酵或迟缓发酵乳糖，不产气，除O124O124外无动力；乳糖、蔗糖不产酸或产酸，葡萄糖产外无动力；乳糖、蔗糖不产酸或产酸，葡萄糖产酸产气或不产气，酸产气或不产气，H H2 2S S阴性，靛基质阳性，酒石酸阴性，靛基质阳性，酒石酸盐阴性，赖氨酸脱羧酶阴性。盐阴性，赖氨酸脱羧酶阴性。O157O157：H7H7大肠杆菌不发酵山梨醇或迟缓发酵，在大肠杆菌不发酵山梨醇或迟缓发酵，在CT-SMACCT-SMAC平板上菌落为白色；绝大多数不具有葡平板上菌落为白色；绝大多数不具有葡萄糖醛酸酶，不能水解萄糖醛酸酶，不能水解4-4-甲基伞形花内酯甲基伞形花内酯-D-D葡葡萄糖酸苷，不能产生荧光；萄糖酸苷，不能产生荧光；绝大多数绝大多数EHECEHEC发酵棉发酵棉子糖、卫矛醇，能够利用鸟氨酸赖氨酸，其他大子糖、卫矛醇，能够利用鸟氨酸赖氨酸，其他大肠杆菌中肠杆菌中20%20%左右发酵棉子糖，左右发酵棉子糖，50%50%左右发酵卫矛左右发酵卫矛醇，有部分大肠杆菌不能利用鸟氨酸赖氨酸。醇，有部分大肠杆菌不能利用鸟氨酸赖氨酸。生化特征-2EIEC：不发酵或迟缓发酵乳糖，不产气，除O128抗原结构抗原结构 大肠杆菌的表面抗原包括菌体大肠杆菌的表面抗原包括菌体抗原（抗原（O O抗原）、鞭毛抗原抗原）、鞭毛抗原（H H抗原）、荚膜抗原（抗原）、荚膜抗原（K K抗抗原）原）O O抗原即细胞壁外膜上的脂多抗原即细胞壁外膜上的脂多糖（糖（LPSLPS），目前已发现），目前已发现O O抗抗原有原有170170多个血清型，多个血清型，H H抗原有抗原有5555种左右。种左右。最初分离的菌株动力往往较差，最初分离的菌株动力往往较差，与与H H抗血清的反映凝集差，需抗血清的反映凝集差，需在半固体培养基上传代以利于在半固体培养基上传代以利于鞭毛的生长。鞭毛的生长。抗原结构 大肠杆菌的表面抗原包括菌体抗原（O抗原）、鞭毛抗原9致病物质与所致疾病致病物质与所致疾病在肠道内一般不致病，但如果移位侵入肠道外的组织或器官可引起肠外感染，以化脓性炎症最为多见。引起泌尿系统感染的大肠杆菌称为泌尿道致病性大肠杆菌（UPEC），引起尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎。一些大肠杆菌还引起腹膜炎、胆囊炎、阑尾炎、手术创口感染等。在婴幼儿、老年人或免疫力极低的病人中可引起败血症。致病物质与所致疾病在肠道内一般不致病，但如果移位侵入肠道外的10 肠产毒性大肠杆菌肠产毒性大肠杆菌ETECETEC是第三世界国家细菌性腹泻和旅游者腹泻的是第三世界国家细菌性腹泻和旅游者腹泻的主要病原之一主要病原之一ETECETEC分泌耐热肠毒素（分泌耐热肠毒素（STST）、不耐热肠毒素）、不耐热肠毒素（LTLT），具有与致病性相关的菌毛等。），具有与致病性相关的菌毛等。ETECETEC通过菌毛粘附在小肠上皮细胞，释放毒素通过菌毛粘附在小肠上皮细胞，释放毒素STST和和LTLT，刺激腺苷环化酶或鸟苷环化酶的生产，刺激腺苷环化酶或鸟苷环化酶的生产，引起肠液分泌和聚积，产生水样腹泻。引起肠液分泌和聚积，产生水样腹泻。肠产毒性大肠杆菌11 肠侵袭性大肠杆菌肠侵袭性大肠杆菌EIECEIEC的毒力因子和致病机制志贺氏菌基本一致，的毒力因子和致病机制志贺氏菌基本一致，临床症状与细菌性痢疾不易区分，主要是发烧、临床症状与细菌性痢疾不易区分，主要是发烧、腹部剧烈疼痛与不适、毒血症、水样腹泻，粪便腹部剧烈疼痛与不适、毒血症、水样腹泻，粪便中有少量粘液和血。中有少量粘液和血。EIECEIEC通常侵犯大肠，使大肠上皮细胞刷状缘发生通常侵犯大肠，使大肠上皮细胞刷状缘发生局部破坏，细菌被摄入细胞内，侵犯并破坏细胞局部破坏，细菌被摄入细胞内，侵犯并破坏细胞基底膜，在细胞内扩散、繁殖，并在细胞间扩散，基底膜，在细胞内扩散、繁殖，并在细胞间扩散，引起细胞的死亡，造成炎症和溃疡。引起细胞的死亡，造成炎症和溃疡。EIECEIEC的侵袭力由的侵袭力由120120140MD140MD的大质粒编码，与的大质粒编码，与编码志贺氏菌侵袭力的大质粒高度同源，丢失了编码志贺氏菌侵袭力的大质粒高度同源，丢失了质粒的菌株也随之丧失。质粒的菌株也随之丧失。肠侵袭性大肠杆菌12 肠致病性大肠杆菌肠致病性大肠杆菌EPECEPEC是婴幼儿腹泻的主要病原菌，主要临床症状是婴幼儿腹泻的主要病原菌，主要临床症状是发烧、呕吐、腹泻，粪便中含有大量粘液而无是发烧、呕吐、腹泻，粪便中含有大量粘液而无血，症状可持续两周以上，多引起社区的小型暴血，症状可持续两周以上，多引起社区的小型暴发。发。主要毒力因子包括主要毒力因子包括5070KD5070KD大质粒编码的束状菌大质粒编码的束状菌毛介导的粘附作用、噬菌体编码的志贺毒素及毛介导的粘附作用、噬菌体编码的志贺毒素及LEELEE毒力岛介导的毒力岛介导的A/EA/E损伤。损伤。肠致病性大肠杆菌13 肠出血性大肠杆菌肠出血性大肠杆菌EHEC是指能引起出血性肠炎的一群大肠杆菌，包括、026:H11、0111:H8、O125O125：NMNM、O122:H19等血清型的部分菌株。目前认为EHEC的主要毒力因子有志贺毒素、致病性大质粒和LEE毒力岛。肠出血性大肠杆菌14肠聚集性粘附大肠杆菌（肠聚集性粘附大肠杆菌（EAggEC）EAggEC主要与小儿顽固性腹泻有关 EAggEC产生束状菌毛（AFF/）和聚集性粘附大肠杆菌毒素（EAST ）AFF/和EAST 的基因位于60MD质粒上肠聚集性粘附大肠杆菌（EAggEC）15样品的采集与处理样品的采集与处理肠道外感染患者，应根据感染情况采取中段尿、血液、脓液、脑脊液、胆汁等。食品样品采集后应尽快检验，易腐食品在检验之前应予冷藏。粪便标本一般采集13ml水样便或血样便，成形便约25g左右或用棉拭子采样，粪便标本应尽快送检，如运送时间超过2h，标本应放在Cary-Blair运送培养基内，4条件下送检。样品的采集与处理肠道外感染患者，应根据感染情况采取中段尿、血16EPEC：婴幼儿水样或蛋花样便EIEC：细菌性痢疾样便ETEC：霍乱样水样便EHEC：早期为水样便，后为血便EPEC：婴幼儿水样或蛋花样便17检验程序检验程序肠道增菌肉汤检样麦康凯371 18-24h乳糖发酵或不发酵的菌落3-5个、氧化酶，G杆菌TSI、靛基质、pH7.2尿素、KCN、赖氨酸、动力TSI底部+，H2S-，KCN-，尿素-如非左述的反应结果血清学试验进一步鉴定非大肠埃希氏菌报告检验程序肠道增菌肉汤检样麦康凯371 18-2418直接分离培养直接分离培养新鲜粪便标本接种下列培养基新鲜粪便标本接种下列培养基麦康凯（麦康凯（MacMac）或伊红）或伊红-美蓝等弱选择性鉴别培养美蓝等弱选择性鉴别培养基。基。山梨醇山梨醇-麦康凯琼脂或麦康凯琼脂或O157O157显色培养基，肠出血显色培养基，肠出血性大肠杆菌及某些致病性大肠杆菌不发酵或迟缓性大肠杆菌及某些致病性大肠杆菌不发酵或迟缓发酵山梨醇，菌落为无色。发酵山梨醇，菌落为无色。血琼脂平板，用于观察肠致病性大肠杆菌的溶血血琼脂平板，用于观察肠致病性大肠杆菌的溶血及其他菌落的鉴别，及其他菌落的鉴别，3737培养培养18-24h18-24h观察结果。观察结果。直接分离培养新鲜粪便标本接种下列培养基19增菌培养增菌培养 对于怀疑肠出血性大肠杆菌O157:H7感染标本，应无菌称取25g食品或环境采集样品，加入225ml mEC+n（m为modified“改良的”的缩写，n为novobiocin“新生霉素”的缩写）肉汤中，37增菌培养6h，免疫磁珠捕获后转种于改良的O157显色培养基或CT-SMAC，37培养18-24h观察结果。注：注：C C：头孢克肟：头孢克肟0.05mg/L0.05mg/L T T：亚碲酸钾：亚碲酸钾2.5mg/L2.5mg/L n n：新生霉素：新生霉素0.02g/L0.02g/L增菌培养 对于怀疑肠出血性大肠杆菌O20磁珠分离磁珠分离 将将EpEp管按样品和质控菌株进行编号，每个样品使用管按样品和质控菌株进行编号，每个样品使用1 1只只EpEp管，然后插入到磁板架上。在漩涡混合器上轻轻振荡管，然后插入到磁板架上。在漩涡混合器上轻轻振荡E.coliO157E.coliO157免疫磁珠溶液后，用开盖器打开每个免疫磁珠溶液后，用开盖器打开每个EpEp管的盖管的盖子，每管加入子，每管加入20L20LE.coli O157E.coli O157免疫磁珠悬液。免疫磁珠悬液。注意：磁珠在加入前在混旋器上短暂混匀，不可剧烈震荡，避免产生注意：磁珠在加入前在混旋器上短暂混匀，不可剧烈震荡，避免产生泡沫。泡沫。取取mEC+nmEC+n肉汤增菌培养物肉汤增菌培养物1mL1mL，加入到，加入到EpEp管中，盖上盖子，管中，盖上盖子，然后轻微振荡然后轻微振荡10s10s。每个样品更换。每个样品更换1 1只加样吸头，质控菌株只加样吸头，质控菌株必须与样品分开进行，避免交叉污染。必须与样品分开进行，避免交叉污染。注意注意:取样前混匀，避开脂肪层与杂质，必要时使用滤取样前混匀，避开脂肪层与杂质，必要时使用滤网。网。加样后立即混匀。对照同时做。加样后立即混匀。对照同时做。磁珠分离将Ep管按样品和质控菌株进行编号，每个样品使用1只E21结合：结合：结合：结合：在在18183030环境中，将上述环境中，将上述EpEp管连同磁板管连同磁板架放在适合的装置上转动或用手轻微转动架放在适合的装置上转动或用手轻微转动10min10min，使使E.coli O157E.coli O157与免疫磁珠充分接触。与免疫磁珠充分接触。注意：注意：室内温度室内温度 ，保证结合时间。，保证结合时间。结合时不要将磁铁插入到磁板架中。结合时不要将磁铁插入到磁板架中。用手转动时应轻轻颠倒用手转动时应轻轻颠倒EpEp管架，不可剧烈摇动。保证磁珠管架，不可剧烈摇动。保证磁珠与与O157O157的结合。的结合。结合：在1830环境中，将上述Ep管连同磁板架放在适合的22捕获：捕获：捕获：捕获：将磁板插入到磁板架中浓缩磁珠。在将磁板插入到磁板架中浓缩磁珠。在3min3min内不断地倾斜磁板架，确保悬液中和盖子上的免内不断地倾斜磁板架，确保悬液中和盖子上的免疫磁珠全部被收集起来，此时，在疫磁珠全部被收集起来，此时，在EppendorffEppendorff管壁管壁中间明显可见的圆形或椭圆形棕色聚物。中间明显可见的圆形或椭圆形棕色聚物。吸取上清液：吸取上清液：吸取上清液：吸取上清液：取取1 1支灭菌的加长吸管，从免疫磁珠支灭菌的加长吸管，从免疫磁珠聚集物对侧深入液面，轻轻吸走上清液。当吸到聚集物对侧深入液面，轻轻吸走上清液。当吸到液面通过免疫磁珠积聚物时，应放慢速度，以确液面通过免疫磁珠积聚物时，应放慢速度，以确保免疫磁珠不被吸走。如吸取的上清液内含有磁保免疫磁珠不被吸走。如吸取的上清液内含有磁珠，则应将其放回到珠，则应将其放回到EppendorffEppendorff管中，并重复管中，并重复2.42.4步骤。每个样品换用步骤。每个样品换用1 1支加长吸管。支加长吸管。捕获：将磁板插入到磁板架中浓缩磁珠。在3min内不断地倾斜磁23免疫磁珠的滑落：免疫磁珠的滑落：免疫磁珠的滑落：免疫磁珠的滑落：某些样品特别是那些富含脂肪某些样品特别是那些富含脂肪的样品，其磁珠积聚物易于滑落到管底。在吸取的样品，其磁珠积聚物易于滑落到管底。在吸取上清液时，很难做到不丢失磁珠，在这种情况下，上清液时，很难做到不丢失磁珠，在这种情况下，可保留可保留5050100L100L上清液于上清液于EppendorffEppendorff管中。如果管中。如果在后续的洗涤过程中也这样做的话，脂肪的影响在后续的洗涤过程中也这样做的话，脂肪的影响将减小，也可达到充分捕获的目的。将减小，也可达到充分捕获的目的。洗涤：洗涤：洗涤：洗涤：从磁板架上移走磁板，在每个从磁板架上移走磁板，在每个EppendorffEppendorff中中加入加入1mL PBS-Tween201mL PBS-Tween20洗液，转动磁板架洗液，转动磁板架3 3次以上，次以上，洗涤免疫磁珠混合物。重复上述步骤洗涤免疫磁珠混合物。重复上述步骤2.42.42.62.6。免疫磁珠的滑落：某些样品特别是那些富含脂肪的样品，其磁珠积聚24重复上述步骤重复上述步骤重复上述步骤重复上述步骤2.42.42.52.5 注意注意:洗涤共洗涤共3 3次，动作要轻柔。次，动作要轻柔。吸取上清液至磁珠聚集物处时，应放慢速吸取上清液至磁珠聚集物处时，应放慢速 度。上清液的吸取应尽量完全。度。上清液的吸取应尽量完全。使用多块磁珠分离装置时，磁铁与磁铁应使用多块磁珠分离装置时，磁铁与磁铁应 远离放置。远离放置。免疫磁珠悬浮：免疫磁珠悬浮：免疫磁珠悬浮：免疫磁珠悬浮：移走磁板，将免疫磁珠重新悬浮移走磁板，将免疫磁珠重新悬浮在在100L PBS-Tween20100L PBS-Tween20洗液中。洗液中。重复上述步骤2.42.525涂布平板涂布平板涂布平板涂布平板 用漩涡混合器将免疫磁珠混匀，用加样器各取用漩涡混合器将免疫磁珠混匀，用加样器各取50L50L免疫磁珠悬液分别转移至免疫磁珠悬液分别转移至CT-SMACCT-SMAC平板和改平板和改良良CHROMagar O157CHROMagar O157显色琼脂平板一侧，然后用显色琼脂平板一侧，然后用涂布棒将免疫磁珠涂布平板的一半，再用接种环涂布棒将免疫磁珠涂布平板的一半，再用接种环划线接种平板的另一半。待琼脂表面水分完全吸划线接种平板的另一半。待琼脂表面水分完全吸收后，翻转平板，于收后，翻转平板，于361361培养培养181824h24h。注意，。注意，若若CT-SMACCT-SMAC平板和改良平板和改良CHROMagar O157CHROMagar O157显色琼显色琼脂平板表面水分过多时，应在脂平板表面水分过多时，应在3737下干燥下干燥101020min20min，涂布时避免将免疫磁珠涂布到平板的边缘。，涂布时避免将免疫磁珠涂布到平板的边缘。涂布平板26大肠杆菌在选择性琼脂平板上的菌落特征大肠杆菌在选择性琼脂平板上的菌落特征选择选择性性琼琼脂平板脂平板菌落特征菌落特征麦康麦康凯琼凯琼脂脂大大肠肠杆菌杆菌发发酵乳糖，在麦康酵乳糖，在麦康凯琼凯琼脂上呈桃脂上呈桃红红色不透明菌落色不透明菌落伊伊红红美美蓝琼蓝琼脂脂黑紫色或黑紫色或红红紫色，紫色，圆圆形，形，边缘边缘整整齐齐，表面光滑湿，表面光滑湿润润，常具有金属光，常具有金属光泽泽，也有的呈紫黑色，不，也有的呈紫黑色，不带带或略或略带带金属光金属光泽泽，或粉，或粉红红色，中心色，中心较较深深的菌落的菌落O157O157显显色培养基色培养基肠肠出血性大出血性大肠肠杆菌杆菌O157O157：H7H7呈紫呈紫红红色或浅紫色菌落色或浅紫色菌落山梨醇麦康山梨醇麦康凯琼凯琼脂脂肠肠出血性大出血性大肠肠杆菌杆菌O157O157：H7H7呈不呈不发发酵山梨醇的乳白色菌落或酵山梨醇的乳白色菌落或迟缓发迟缓发酵山梨醇的酵山梨醇的红红色菌落色菌落大肠杆菌在选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板菌落特征麦27大肠杆菌在MAC上大肠杆菌在MAC上28生化反应生化反应从鉴别平板上挑取从鉴别平板上挑取5 5个可疑菌落，个可疑菌落，分别接种分别接种KIAKIA或或TSITSI，靛基质试纸，靛基质试纸片，片，37 37培养培养18-24h18-24h。凡分解乳糖、蔗糖产酸，葡萄糖凡分解乳糖、蔗糖产酸，葡萄糖产酸并多数产气，产酸并多数产气，H H2 2S S阴性，靛阴性，靛基质阳性的菌株，可鉴定为大肠基质阳性的菌株，可鉴定为大肠杆菌。杆菌。如果靛基质阴性，且如果靛基质阴性，且V-PV-P试验阴试验阴性，在西蒙式枸橼酸盐琼脂上不性，在西蒙式枸橼酸盐琼脂上不生长，才可证实为大肠杆菌。生长，才可证实为大肠杆菌。肠侵袭性大肠杆菌常不分解乳糖。肠侵袭性大肠杆菌常不分解乳糖。生化反应从鉴别平板上挑取5个可疑菌落，分别接种KIA或TSI29血清学试验血清学试验挑取生化反应符合的菌落与大肠杆菌多价血清作玻片凝集试验，阳性者再以该多价血清包含的单价血清进一步鉴定。并作盐水对照。血清学试验挑取生化反应符合的菌落与大肠杆菌多价血清作玻片凝集30EPECEPEC诊断血清包含三组多价血清及相应的单价血清诊断血清包含三组多价血清及相应的单价血清诊断血清包含三组多价血清及相应的单价血清诊断血清包含三组多价血清及相应的单价血清多价多价1 1：O55O55、O86O86、O111O111、O127O127多价多价2 2：O26O26、O125 O125、O126O126、O128O128多价多价3 3：O44 O44、O112 O112、O119O119、O124O124EIECEIEC诊断血清包含两组多价血清及相应的单价血清诊断血清包含两组多价血清及相应的单价血清诊断血清包含两组多价血清及相应的单价血清诊断血清包含两组多价血清及相应的单价血清多价多价1 1：O28O28、O29O29、O112O112、O124O124多价多价2 2：O136O136、O143 O143、O144O144、O152O152、O164 O164大肠杆菌诊断血清包含七组多价血清及相应的单价血清，可供大肠杆菌诊断血清包含七组多价血清及相应的单价血清，可供大肠杆菌诊断血清包含七组多价血清及相应的单价血清，可供大肠杆菌诊断血清包含七组多价血清及相应的单价血清，可供EPECEPEC、EIECEIEC、ETECETEC的诊断用的诊断用的诊断用的诊断用多价多价1 1：O86O86、O111O111、O127O127多价多价2 2：O26O26、O44 O44、O114O114、O126O126、O142 O142多价多价3 3：O55 O55、O119 O119、O125 O125、O146O146多价多价4 4：O6 O6、O8 O8、O20 O20、O25O25多价多价5 5：O1 O1、O27 O27、O78 O78、O128O128、O148 O148、O149O149多价多价6 6：O28 O28、O112 O112、O124 O124、O136O136、O143O143、O144 O144多价多价7 7：O63 O63、O152 O152、O158 O158、O159O159 其中，多价其中，多价1 1，2 2，3 3包含包含EPECEPEC的的O O因子；多价因子；多价4 4，5 5包含包含ETECETEC的的O O因因 子；多价子；多价6 6包含包含EIECEIEC的的O O因子。因子。EPEC诊断血清包含三组多价血清及相应的单价血清31致泻性大肠杆菌课件32p经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量pStudyConstantly,AndYouWillKnowEverything.TheMoreYouKnow,TheMorePowerfulYouWillBe写在最后经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量写33感谢聆听不足之处请大家批评指导Please Criticize And Guide The Shortcomings结束语讲师：XXXXXX XX年XX月XX日 感谢聆听结束语讲师：XXXXXX 34