植物生理学实验培训课件

植物生理学植物生理学实验实验植物生理学实验室规则植物生理学实验室规则 1 1、认真预习实验。明确目的，掌握原、认真预习实验。明确目的，掌握原理，列出步骤，提出问题。理，列出步骤，提出问题。2 2、认真操作，仔细观察，从实记录。、认真操作，仔细观察，从实记录。3 3、正确操作仪器，不乱开仪器。、正确操作仪器，不乱开仪器。4 4、注意安全和清洁卫生（包括值日）。、注意安全和清洁卫生（包括值日）。5 5、正确处理废物。、正确处理废物。上上 饶饶 师师 范范 学学 院院生命科学系生物实验示范中心生命科学系生物实验示范中心2植物生理学实验实验报告要求 实验原理：简明扼要；实验原理：简明扼要；n n材料：用什么？材料：用什么？n n方法：实际操作过程；方法：实际操作过程；n n数据计算：原始数据，计算公式，结果。数据计算：原始数据，计算公式，结果。n n讨论和分析：针对自己的结果进行。讨论和分析：针对自己的结果进行。n n实验报告在下一次实验时上交，但实验原实验报告在下一次实验时上交，但实验原始数据须经指导老师审核后才可离开。始数据须经指导老师审核后才可离开。上上 饶饶 师师 范范 学学 院院生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心3植物生理学实验植物生理学实验评分标准植物生理学实验评分标准n n课上：课上：n n1 1、预习报告、预习报告 n n2 2、认真实验，操作规范，实验结果符合要求、认真实验，操作规范，实验结果符合要求 n n3 3、不迟到，不早退，积极参与卫生清扫、不迟到，不早退，积极参与卫生清扫上上 饶饶 师师 范范 学学 院院生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心4植物生理学实验n n课下：实验报告评分标准课下：实验报告评分标准课下：实验报告评分标准课下：实验报告评分标准 n n1 1 1 1、卷面清洁，字迹工整、卷面清洁，字迹工整、卷面清洁，字迹工整、卷面清洁，字迹工整 10101010分分分分n n2 2 2 2、语句通畅，简明扼要，逻辑性强，表达准确无概念错误、语句通畅，简明扼要，逻辑性强，表达准确无概念错误、语句通畅，简明扼要，逻辑性强，表达准确无概念错误、语句通畅，简明扼要，逻辑性强，表达准确无概念错误 20202020分分分分n n3 3 3 3、预习报告、实验原始记录、实验报告齐全、预习报告、实验原始记录、实验报告齐全、预习报告、实验原始记录、实验报告齐全、预习报告、实验原始记录、实验报告齐全 15151515分分分分n n4 4 4 4、实验报告格式规范，重点突出、实验报告格式规范，重点突出、实验报告格式规范，重点突出、实验报告格式规范，重点突出 15151515分分分分n n5 5 5 5、实验原始记录要如实认真记录实际操作、察及测定结果、实验原始记录要如实认真记录实际操作、察及测定结果、实验原始记录要如实认真记录实际操作、察及测定结果、实验原始记录要如实认真记录实际操作、察及测定结果 20202020分分分分6 6 6 6、对实验结果的讨论要充分有据，论点要正确，与该、对实验结果的讨论要充分有据，论点要正确，与该、对实验结果的讨论要充分有据，论点要正确，与该、对实验结果的讨论要充分有据，论点要正确，与该实验无关的内容不要写入报告中实验无关的内容不要写入报告中实验无关的内容不要写入报告中实验无关的内容不要写入报告中 20202020分分分分n n7 7 7 7、抄袭别人报告者、抄袭别人报告者、抄袭别人报告者、抄袭别人报告者 0 0 0 0分分分分生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院5植物生理学实验本学期实验内容与安排 1 1 1 1、质壁分离法测定植物组织的渗透势质壁分离法测定植物组织的渗透势 2 2 2 2、植物体内硝态氮含量的测定植物体内硝态氮含量的测定 3 3 3 3、叶绿素叶绿素a a、b b含量的测定含量的测定 4 4 4 4、赤霉素对水稻赤霉素对水稻-淀粉酶的诱导形成淀粉酶的诱导形成 5 5 5 5、植物呼吸强度的测定、植物呼吸强度的测定、植物呼吸强度的测定、植物呼吸强度的测定 6 6 6 6、种子活力的快速测定种子活力的快速测定种子活力的快速测定种子活力的快速测定 氯化三苯基四氮唑氯化三苯基四氮唑氯化三苯基四氮唑氯化三苯基四氮唑(TTC)(TTC)(TTC)(TTC)法法法法 及红墨水法及红墨水法及红墨水法及红墨水法 7 7 7 7、丙二醛含量的测定、丙二醛含量的测定、丙二醛含量的测定、丙二醛含量的测定生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院6植物生理学实验实验一实验一 质壁分离法测定植物组织的质壁分离法测定植物组织的渗透势渗透势生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院7 7植物生理学实验植物生理学实验一、实验目的、原理一、实验目的、原理n n 实验目的实验目的实验目的实验目的 n n 观察植物组织在不同浓度溶液中细胞质壁分离的产观察植物组织在不同浓度溶液中细胞质壁分离的产生过程及其用于测定植物组织渗透势的测定生过程及其用于测定植物组织渗透势的测定n n 实验原理实验原理实验原理实验原理 n n 原生质层（细胞膜、原生质、液泡膜）具有选择透原生质层（细胞膜、原生质、液泡膜）具有选择透过性，近似于半透膜，一个成熟的植物细胞就是一个完过性，近似于半透膜，一个成熟的植物细胞就是一个完整的渗透装置：当外界溶液浓度大于细胞液浓度时整的渗透装置：当外界溶液浓度大于细胞液浓度时(高渗高渗溶液），细胞失水，发生质壁分离；当外界溶液浓度小溶液），细胞失水，发生质壁分离；当外界溶液浓度小于细胞液浓度时（低渗溶液），细胞吸水；当植物组织于细胞液浓度时（低渗溶液），细胞吸水；当植物组织细胞内的汁液与其周围的某种溶液处于渗透平衡状态，细胞内的汁液与其周围的某种溶液处于渗透平衡状态，当外界溶液浓度等于细胞液浓度时（等渗溶液），植物当外界溶液浓度等于细胞液浓度时（等渗溶液），植物细胞内的压力势为零时，细胞汁液的渗透势就等于该溶细胞内的压力势为零时，细胞汁液的渗透势就等于该溶液的渗透势。细胞水势等于细胞液的渗透势等于外界溶液的渗透势。细胞水势等于细胞液的渗透势等于外界溶液渗透势。液渗透势。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院8植物生理学实验 质壁分离及质壁分离复原质壁分离及质壁分离复原 将植物组织置于对将植物组织置于对其无毒害的一系列不同其无毒害的一系列不同浓度的溶液里处理一定浓度的溶液里处理一定时间，然后镜检发生质时间，然后镜检发生质壁分离的情况，细胞的壁分离的情况，细胞的等渗浓度将界于刚刚引等渗浓度将界于刚刚引起初始质壁分离的浓度起初始质壁分离的浓度和不能引起质壁分离的和不能引起质壁分离的浓度之间。代入公式即浓度之间。代入公式即可计算渗透势。可计算渗透势。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院9植物生理学实验二、二、材料、器材与试剂材料、器材与试剂n n1 1 实验材料实验材料 洋葱表皮洋葱表皮n n2 2 实验仪器实验仪器 显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，刀片，培养皿，记显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，刀片，培养皿，记号笔，滴管。号笔，滴管。n n3 3 实验试剂实验试剂 分别配制分别配制0.500.50、0.450.45、0.40.4、0.350.35、0.300.30、0.250.25、0.200.20、0.150.15、0.10mol/L0.10mol/L的蔗糖溶液，贮的蔗糖溶液，贮9 9个试剂瓶中。称个试剂瓶中。称34.23g34.23g蔗蔗糖用蒸馏水配成糖用蒸馏水配成100ml100ml，其浓度为，其浓度为1mol/L(1mol/L(母液母液)。再配制成下列各种。再配制成下列各种浓度：浓度：n n 0.50mol/L 0.50mol/L：吸母液：吸母液25ml+25ml+水水25ml 25ml n n 0.45mol/L 0.45mol/L：吸母液：吸母液22.5ml+22.5ml+水水27.5ml 27.5ml n n 0.40mol/L 0.40mol/L：吸母液：吸母液20.0ml+20.0ml+水水30.0ml 30.0ml n n 0.35mol/L 0.35mol/L：吸母液：吸母液17.5ml+17.5ml+水水32.5ml 32.5ml n n 0.30mol/L 0.30mol/L：吸母液：吸母液15.0ml+15.0ml+水水35.0ml 35.0ml n n 0.25mol/L 0.25mol/L：吸母液：吸母液12.5ml+12.5ml+水水37.5ml37.5mln n0.20mol/L0.20mol/L：吸母液：吸母液10.0ml+10.0ml+水水40.0ml40.0mln n0.15mol/L0.15mol/L：吸母液：吸母液7.5ml+7.5ml+水水42.5ml42.5mln n0.10mol/L0.10mol/L：吸母液：吸母液5.0ml+5.0ml+水水45.0ml45.0ml生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院10植物生理学实验三、实三、实 验验 步步 骤骤n n1.1.取取6 6套干净清洁的小培养皿，用记号笔编号，将配套干净清洁的小培养皿，用记号笔编号，将配制好的不同浓度的蔗糖溶液按顺序倒入各个培养皿中制好的不同浓度的蔗糖溶液按顺序倒入各个培养皿中使成一薄层，盖好皿盖。使成一薄层，盖好皿盖。n n2.2.选用有色素的洋葱鳞片的外表皮迅速分别投入各种选用有色素的洋葱鳞片的外表皮迅速分别投入各种浓度的蔗糖溶液中，每个培养皿中放材料浓度的蔗糖溶液中，每个培养皿中放材料3 3个左右，个左右，使其完全浸没，浸泡使其完全浸没，浸泡2020分钟左右。分钟左右。n n3.3.到时后，取出表皮，放在载玻片上，滴一滴相同到时后，取出表皮，放在载玻片上，滴一滴相同浓度的蔗糖，盖上盖玻片，在显微镜下观察质壁分离浓度的蔗糖，盖上盖玻片，在显微镜下观察质壁分离的细胞数如果所有的细胞都产生质壁分离现象，则取的细胞数如果所有的细胞都产生质壁分离现象，则取低浓度溶液中的制片做同样的观察，并记录质壁分离低浓度溶液中的制片做同样的观察，并记录质壁分离的相对程度。的相对程度。上上 饶饶 师师 范范 学学 院院生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心11植物生理学实验n n4.在实验中确定一个引起半数以上细胞原生质刚刚从细胞壁角隅上分离的最低浓度，和不引起质壁分离的最高浓度。n n5.在找到上述浓度极限时，用新的溶液和新鲜的叶片重复进行几次，直到有把握为止。在此条件下，细胞的渗透势与两个极限溶液浓度之平均值的渗透势相等。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院12植物生理学实验6计算求得C1按下式计算渗透势按=-iRTC1计算水势值。C等渗溶液的质量摩尔浓度，单位是mol/kg；R气体常数（0.008314MPa/L/mol/K）T绝对温度i解离系数（蔗糖1，CaCl22.60）生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院13植物生理学实验【思考题思考题】用质壁分离法测定植物细胞渗透势与用小液流法测定植物组织水势都是以外液的浓度算出的溶质势为根据，他们之间的区别何在。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院14植物生理学实验实验二实验二 植物体内硝态氮含量的测定植物体内硝态氮含量的测定生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院1515植物生理学实验植物生理学实验一、实验目的、原理一、实验目的、原理 实验目的实验目的实验目的实验目的 硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能肥氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。实验原理实验原理实验原理实验原理 在浓酸条件下，在浓酸条件下，NONO3 3-与水杨酸反应，生成硝与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH12PH12）呈黄色，）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。色测定。上上 饶饶 师师 范范 学学 院院生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心16植物生理学实验二、材料、设备仪器及试剂二、材料、设备仪器及试剂（一）材料（一）材料（一）材料（一）材料 白菜叶片白菜叶片（二）仪器设备及试剂（二）仪器设备及试剂（二）仪器设备及试剂（二）仪器设备及试剂n n1 1 实验仪器实验仪器 722722型分光光度计、电子天平。型分光光度计、电子天平。n n2 2 实验试剂实验试剂 （1 1）500ppmNO500ppmNO3 3-标准溶液精确称标准溶液精确称取烘至恒重的取烘至恒重的KNO3 0.7221KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容克溶于无离水中，定容至至200ml200ml。（2 2）5%5%水杨酸一硫酸溶液水杨酸一硫酸溶液 称取称取5 5克克水杨酸溶于水杨酸溶于100ml100ml，浓硫酸中（密度为，浓硫酸中（密度为1.841.84），搅），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。置冰箱保存一周有效。拌溶解后，贮于棕色瓶中。置冰箱保存一周有效。（3 3）8%8%氢氧化纳溶液氢氧化纳溶液 称取称取1010克氢氧化纳溶于克氢氧化纳溶于1 1升无离子水中即可。升无离子水中即可。n n生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院17植物生理学实验三、实验步骤三、实验步骤1.1.标准曲线的制作标准曲线的制作（1 1）吸取）吸取500ppmNO3-500ppmNO3-标准溶液标准溶液1ml.2ml.1ml.2ml.3ml.4ml.6ml.8ml.10ml.12ml3ml.4ml.6ml.8ml.10ml.12ml分别放入分别放入501ml501ml容容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成量瓶中，用无离子定至刻度，使之成1010、2020、3030、4040、6060、8080、100100、120ppm120ppm的系列标准溶液。的系列标准溶液。（2 2）吸收上述系列标准溶液）吸收上述系列标准溶液0.11ml0.11ml，分别，分别放入刻度试管中，以放入刻度试管中，以0.11ml0.11ml无离子水代替标准溶液作无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入空白，再分别加入0.4ml0.4ml水杨酸一硫酸溶液，摇匀，水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置在室温下放置2020分钟后再加入分钟后再加入8%NaOH8%NaOH溶液溶液9.51ml9.51ml摇摇匀冷却至室温，显色液总体积为匀冷却至室温，显色液总体积为101ml101ml。（3 3）以空白作参比，在）以空白作参比，在410nm410nm波长下测定吸波长下测定吸光度。以光度。以NO3-NNO3-N浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。制标准曲线。上上 饶饶 师师 范范 学学 院院生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心18植物生理学实验三、实验步骤三、实验步骤 2.2.样品中硝酸盐的测定样品中硝酸盐的测定（1 1）样品液的制备，取一定量的植物材料剪碎）样品液的制备，取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取混匀后，精确称取2-32-3克分别放入三支刻度试管中，加入克分别放入三支刻度试管中，加入10ml10ml无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取3030分钟，分钟，到时间后取出，用自来水冷却，将是取液过滤到到时间后取出，用自来水冷却，将是取液过滤到25ml25ml容量容量瓶中，并反复冲洗残渣，最的定容至刻度。瓶中，并反复冲洗残渣，最的定容至刻度。（2 2）样口液的测定）样口液的测定 吸取样品吸取样品0.1 ml0.1 ml分别于三支分别于三支刻度试管中，然后加入刻度试管中，然后加入5%5%水杨酸一硫酸溶液水杨酸一硫酸溶液0.4 ml0.4 ml，混匀，混匀后置室温下后置室温下2020分钟，再慢慢加入分钟，再慢慢加入9.5 ml 8%NaOH9.5 ml 8%NaOH溶液，待溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在冷却至室温后，以空白作参比，在410nm410nm波长下测期吸光波长下测期吸光度。在标准曲线上查得或用回归方程计算出度。在标准曲线上查得或用回归方程计算出NONO3 3-N-N浓度，浓度，再用下公式计算其含量。再用下公式计算其含量。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院19植物生理学实验四、结果计算四、结果计算四氮唑还原强度：四氮唑还原强度：根重（根重（g g）时间时间(h)(h)mg/g(mg/g(根鲜重根鲜重)/h=)/h=四氮唑还原量（四氮唑还原量（mgmg）生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院20植物生理学实验实验三实验三 叶绿素叶绿素a a、b b含量的测定含量的测定生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院2121植物生理学实验植物生理学实验一、实验目的、原理一、实验目的、原理 n n 实验目的实验目的实验目的实验目的 在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素绿素a a和和b b的方法及其计算。的方法及其计算。n n 实验原理实验原理实验原理实验原理 n n如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽然如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽然有明显的差异，但吸收曲线彼此有重叠，在这种情有明显的差异，但吸收曲线彼此有重叠，在这种情况下要分别测定两个组分，可根据朗伯况下要分别测定两个组分，可根据朗伯-比尔比尔（Lambert-BeerLambert-Beer）定律，通过代数方法，计算一种）定律，通过代数方法，计算一种组分由于另一种组分存在时对光密度的影响，最后组分由于另一种组分存在时对光密度的影响，最后分别得到两种组分的含量。分别得到两种组分的含量。n n根据叶绿素根据叶绿素a a和和b b的吸收光谱曲线，叶绿素的吸收光谱曲线，叶绿素a a的最大吸的最大吸收峰在收峰在663nm663nm，叶绿素，叶绿素b b的最大吸收峰在的最大吸收峰在645nm,645nm,吸收吸收曲线彼此又有重叠。曲线彼此又有重叠。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院22植物生理学实验生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院23植物生理学实验生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院24植物生理学实验根据朗伯根据朗伯-比尔定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的比尔定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度混合液，它们的浓度C C与光密度与光密度ODOD之间有如下关系：之间有如下关系：OD1=Caka1+Cbkb1 (1)OD1=Caka1+Cbkb1 (1)OD2=Caka2+Cbkb2 (2)OD2=Caka2+Cbkb2 (2)式中，式中，ka1ka1、ka2 ka2、kb1kb1、kb2kb2分别为组分分别为组分a a、b b在浓在浓度度1g/L1g/L时，对应波长为时，对应波长为11、22时的光密度时的光密度ODOD值，即比值，即比吸收系数。吸收系数。波长波长波长波长/nm/nm/nm/nm叶绿素叶绿素叶绿素叶绿素a a a a叶绿素叶绿素叶绿素叶绿素b b b b66382.049.2764516.7545.6066382.049.2764516.7545.60将将表中数值代入（表中数值代入（1 1）、（）、（2 2）式，并解方程可得：）式，并解方程可得：Ca=0.00127OD663-0.00269OD645 (3)Ca=0.00127OD663-0.00269OD645 (3)Cb=0.0229OD645-0.00468OD663 (4)Cb=0.0229OD645-0.00468OD663 (4)将单位改为将单位改为mg/Lmg/L，于是总叶绿素浓度为，于是总叶绿素浓度为CT=Ca+Cb=8.02 OD663+20.21 OD645 (5)CT=Ca+Cb=8.02 OD663+20.21 OD645 (5)生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院25植物生理学实验1 实验仪器 高级型分光光度计，离心机，天平，剪刀，研钵，漏斗，移液管等。2 实验试剂 丙酮，碳酸钙，石英砂。3 实验材料 大叶黄杨叶片。二、实验材料、仪器与设备二、实验材料、仪器与设备生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院26植物生理学实验 称取新鲜叶片0.5g加纯丙酮5ml研磨成匀浆再加80%丙酮5ml，并转入离心管充分洗涤研钵离心定容至20 ml取上述提取液1ml，加80%丙酮4ml稀释后转入比色杯中，以80%丙酮为对照，测定光密度计算各种浓度（Ca、Cb）。三、实验步骤三、实验步骤生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院27植物生理学实验四、实验结果计算四、实验结果计算n n将测定得到的吸光值代入下面的式子：将测定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95A Ca=13.95A6656656.88A6.88A649649 Cb=24.96A Cb=24.96A6496497.32A7.32A665665 Cr=18.08 A Cr=18.08 A649649+6.63 A+6.63 A665665 （CaCa、CbCb：mg/Lmg/L）n n叶绿素的含量（叶绿素的含量（mg/gmg/g）=叶绿素的浓叶绿素的浓度度提取液体积提取液体积稀释倍数稀释倍数/样品鲜重样品鲜重生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院28植物生理学实验n n1 由于植物叶子中含有水分，故先用纯丙酮进行提取，以使色素提取液中丙酮的最终浓度近似80%。n n2 由于叶绿素a、叶绿素b的吸收峰很陡，仪器波长稍有偏差，就会使结果产生很大的误差。五、注意事项五、注意事项生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院29植物生理学实验六、实验作业六、实验作业n n1、为什么提取色素时先用纯丙酮提取，再用80%丙酮提取？n n2、根据你的实验结果计算出该种植物的叶绿素a、b的比值。n n3、根据你的实验结果，计算出该植物每克鲜重叶片中叶绿素的含量（单位用mgg-1FW表示）生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院30植物生理学实验实验四赤霉素对水稻-淀粉酶的诱导形成生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院3131植物生理学实验植物生理学实验一、实验目的、原理一、实验目的、原理 实验目的实验目的实验目的实验目的 1 1通过实验深入了解赤霉素在种子萌发过程中的调控作通过实验深入了解赤霉素在种子萌发过程中的调控作用。用。2 2掌握测定掌握测定-淀粉酶活的一种简便方法淀粉酶活的一种简便方法 实验原理实验原理实验原理实验原理 淀粉性种子在萌动过程中，胚释放出来的赤霉素能淀粉性种子在萌动过程中，胚释放出来的赤霉素能诱导糊粉层细胞中诱导糊粉层细胞中-淀粉酶基因的表达，引起淀粉酶基因的表达，引起-淀淀粉酶生物合成，并分泌到胚乳中催化淀粉水解为糖。粉酶生物合成，并分泌到胚乳中催化淀粉水解为糖。外源赤霉素能代替胚的分泌作用，诱导外源赤霉素能代替胚的分泌作用，诱导-淀粉酶的形淀粉酶的形成。成。-淀粉酶也能将淀粉水解成还原糖，但淀粉酶也能将淀粉水解成还原糖，但-淀粉淀粉酶不耐热，在高温下易钝化。将酶液在高温下维持一酶不耐热，在高温下易钝化。将酶液在高温下维持一段时间，钝化段时间，钝化-淀粉酶，可准确测定淀粉酶，可准确测定-淀粉酶的活淀粉酶的活性。性。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院32植物生理学实验二、实验二、实验材料材料、仪器、试剂、仪器、试剂n n1 实验材料：水稻种子 2 实验仪器设备：分光光度计、恒温箱、水浴锅、移液管、烧杯、试管、青霉素小瓶、镊子、刀片。3 实验试剂：2mol/LNaOH溶液、1%淀粉溶液、20mg/L赤霉素溶液、0.1mol/L(PH5.6)柠檬酸缓冲液、2，3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院33植物生理学实验三、实验步骤三、实验步骤1.1.水稻种子的选择和预处理水稻种子的选择和预处理 选取大小一致、健康的水稻种子，一份放入盛有适量的20mg/LGA溶液中，另一份放入盛有适量清水的培养皿中处理24h,取出后用清水冲洗，置于培养箱中再陪养1d，处理与培养温度均为30。2.2.酶的提取酶的提取 取对照和GA3处理培养的种子2g磨成匀浆到入50ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度混匀放置15-20min（每2min震荡一次）离心（4000r/min,15min）生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院34植物生理学实验3.-3.-淀粉酶活性的测定淀粉酶活性的测定 取试管4只编号（清水试验；清水调零；GA3试验；GA3调零）每管中各加入酶液1ml70恒温水浴加热12min各加入1ml柠檬酸缓冲液将试验管置于40恒温水浴15min再迅速加入预热的淀粉溶液2ml40恒温水浴5min加入NaOH溶液0.5ml终止反应；调零管中加入2mol/LNaOH溶液0.5ml混匀加入预热的淀粉溶液2ml.4.4.样品的测定样品的测定 取以上各管中的溶液1ml于15ml刻度试管中加入DNS试剂1ml混匀沸水煮沸5min迅速冷却定容至12ml520nm波长测定OD值。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院35植物生理学实验四、结果计算四、结果计算-淀粉酶活性=（OD520稀释倍数）/样品鲜重/反应时间生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院36植物生理学实验实验五实验五 植物呼吸强度的测定植物呼吸强度的测定生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院3737植物生理学实验植物生理学实验一、原理一、原理 n n利用NaOH溶液滴定呼吸过程中释放的CO2，实验结束后，用草酸溶液滴定残留的NaOH，从空白和样品两者消耗草酸溶液之差，即可计算出呼吸过程中释放的CO2的量。n nC6H12O6+6O26CO2+6H2On n2NaOH+CO2Na2CO3+H2On n2NaOH+C2H2O4(草酸)Na2C2O4(草酸钠)+2H2O生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院38植物生理学实验二、材料、仪器设备及试剂二、材料、仪器设备及试剂n n1.实验仪器锥形瓶，秒表，酸式滴定管，移液管，尼龙网袋2个。n n2.实验试剂1/44mol/L草酸溶液，0.2M NaOH溶液，1%酚酞。n n3.实验材料萌发的水稻种子（48h）。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院39植物生理学实验三、实验步骤三、实验步骤 1.1.称取萌发的水稻种子称取萌发的水稻种子10g10g，装入尼龙小袋内，把，装入尼龙小袋内，把小袋系到锥形瓶塞的小钩上。小袋系到锥形瓶塞的小钩上。2.2.用移液管吸取用移液管吸取20ml NaOH20ml NaOH加入锥形瓶中，塞紧瓶塞加入锥形瓶中，塞紧瓶塞并立即计时。并立即计时。3.3.实验进行实验进行3030分钟，其间每隔数分钟轻轻摇瓶内的碱分钟，其间每隔数分钟轻轻摇瓶内的碱液数次。液数次。4.4.打开锥形瓶塞，滴入酚酞打开锥形瓶塞，滴入酚酞2 2滴，立即用草酸滴定，滴，立即用草酸滴定，滴定至红色突然消失，记下滴定样品消耗草酸滴定至红色突然消失，记下滴定样品消耗草酸的的用量。用量。5.5.另称取萌发的水稻种子另称取萌发的水稻种子10g10g，用沸水煮，用沸水煮5-105-10分钟，分钟，作同样测定，以此为对照。作同样测定，以此为对照。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院40植物生理学实验四、实验结果四、实验结果用对照煮过的种子消耗草酸的量v0 ml减去萌发样品消耗草酸的量v1 ml，按每秒消耗1ml草酸相当于1mgCO2来计算种子在呼吸时放出的CO2mg数。呼吸强度（mgCO2g-1FWs-1）=1 mgCO2(v0-v1)W-1t-1式中，W为样品的质量（克），t为呼吸持续的时间（秒）生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院41植物生理学实验五、实验作业五、实验作业1.影响呼吸强度的因素有哪些？2.为什么用草酸滴定而不用盐酸或硫酸滴定？3.根据你的实验结果，计算出水稻种子的呼吸强度（单位用mgCO2g-1FWh-1表示）生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院42植物生理学实验一、实验目的、原理一、实验目的、原理n n 实验目的实验目的实验目的实验目的 n n 熟悉氯化三苯基四氮唑熟悉氯化三苯基四氮唑(TTC)(TTC)法及红墨水法测定法及红墨水法测定种子活力的方法及其计算种子活力的方法及其计算。n n【实验原理实验原理实验原理实验原理】n n 凡有生活力的种胚在呼吸作用过程中都有氧化凡有生活力的种胚在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。当还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。当TTCTTC溶溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶(NADH2(NADH2或或NADPH2)NADPH2)还原时，可产生红色的三苯基甲还原时，可产生红色的三苯基甲(TT(TT)，胚便染成红色。当种胚生活力下降时，呼吸，胚便染成红色。当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。弱。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院44植物生理学实验二、材料、仪器设备及试剂二、材料、仪器设备及试剂1 仪器 培养皿2套；镊子1把；单面刀片1片；垫板(切种子用)1块；烧杯1个；棕色试剂瓶；解剖针1把；搪瓷盘1个；PH试纸。2 试剂 TTC溶液的配制：取3g TTC溶于1L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1的TTC溶液。药液PH应在6.57.5，以PH试纸试之(如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水)。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院45植物生理学实验三、实验步骤三、实验步骤1将水稻新种子、陈种子或死种子，用温水(30)浸泡26H，使种子充分吸胀。2随机取种子2份，每份200粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。3把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。4放入3035的恒温箱内保温30Min。也可在20左右的室温下放置4060Min。5保温后，倾出药液，用自来水冲洗23次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院46植物生理学实验四、注意事项四、注意事项1 1TTCTTC溶液最好现用现配，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，溶液最好现用现配，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。2 2染色温度一般以染色温度一般以25253535为宜。为宜。3 3判断有生活力的种子应具备的特征：胚发育良好、完整、判断有生活力的种子应具备的特征：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶允许有小部分坏死，但其部位整个胚染成鲜红色；子叶允许有小部分坏死，但其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其他部位完好。其他部位完好。4 4判断无生活力的种子应具备的特征：胚全部或大部分不判断无生活力的种子应具备的特征：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过机能的组织超过1 12 2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。受伤以及发育不良的未成熟的种子。5 5对于不同作物种子生活力的测定，所需试剂浓度、浸泡对于不同作物种子生活力的测定，所需试剂浓度、浸泡时间、染色时间不同。时间、染色时间不同。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院47植物生理学实验红墨水染色法红墨水染色法【实验原理实验原理】有生活力的种子其胚细胞的原生质具有半透性，具有选择吸收外界物质的能力，某些染料如红墨水中的酸性大红G不能进入细胞内，胚部不染色。而丧失活力的种子其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力，染料进入细胞内使胚部染色，所以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院48植物生理学实验仪器与试剂仪器与试剂仪器仪器 与TTC法相同试剂试剂 红墨水溶液的配制：取市售红墨水稀释20倍(1份红墨水加19份自来水)作为染色剂。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院49植物生理学实验实验步骤实验步骤1.先将待测种子用水浸泡34H，待充分吸胀后取出一部分种子，在沸水中煮沸35Min，作为死种子。2.取浸好的新种子、陈种子和死种子各50粒，如为小麦和玉米，则用单面刀片沿胚部中线纵切成两半，其中一半用于测定。3.将准备好的种子分别放在培养皿内，加入红墨水溶液，以浸没种子为度。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院50植物生理学实验4.染色1020Min后倾出溶液，用自来水反复冲洗种子，直到所染颜色不再洗出为止。5.对比观察冲洗后的新种子、陈种子和死种子胚部着色情况。凡胚部不着色或略带浅红色者，即具有生活力的种子，若胚部染成与胚乳相同的红色，则为死种子。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院51植物生理学实验思考题思考题 TTC法和红墨水测定种子生活力有何不同？生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院52植物生理学实验实验七实验七 丙二醛含量的测定生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院5353植物生理学实验植物生理学实验一、实验目的、原理一、实验目的、原理一、实验目的、原理一、实验目的、原理n n 实验目的实验目的实验目的实验目的 n n 熟悉叶片中丙二醛（熟悉叶片中丙二醛（熟悉叶片中丙二醛（熟悉叶片中丙二醛（MDA MDA MDA MDA）的测定方法及其计算。）的测定方法及其计算。）的测定方法及其计算。）的测定方法及其计算。n n 实验原理实验原理实验原理实验原理 n n 植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛（脂过氧化作用，丙二醛（MDA MDA）是膜脂过氧化作用的最）是膜脂过氧化作用的最终分解产物，其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度。终分解产物，其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度。丙二醛在酸性和高温条件，可以与硫代巴比妥酸（丙二醛在酸性和高温条件，可以与硫代巴比妥酸（TBA TBA）反应生成红棕色的三甲川（）反应生成红棕色的三甲川（3,5,53,5,5三甲基恶唑三甲基恶唑 2,4-2,4-二酮），在二酮），在 532nm 532nm 处有最大光吸收，在处有最大光吸收，在 600nm 600nm 处有最小处有最小光吸收，该复合物的吸光系数为光吸收，该复合物的吸光系数为 155155，可按公式：，可按公式：A532A532A600=155000CL A600=155000CL 算出算出 MDA MDA 浓度浓度 C C（mol/Lmol/L），），进一步算出单位重量鲜组织中进一步算出单位重量鲜组织中 MDA MDA 含量（含量（mol/gmol/g）。式）。式中，中，A 532 A 532 和和 A 600 A 600 分别表示分别表示 532 nm 532 nm 和和 600 nm 600 nm 处的处的吸光度值。吸光度值。L L 为比色杯厚度（为比色杯厚度（cmcm）。）。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院54植物生理学实验n n 需要指出的是，植物组织中糖类物质对 MDA-TBA 反应有干扰作用。为消除这种干扰，经试验，可用下列公式消除由蔗糖引起的误差。n nC（mol/L）=6.45（A532A600）0.56 A450 n n式中：A 450、A 532 和 A 600 分别表示 450 nm、532 nm 和 600 nm 处的吸光度值。算出植物样品提取液中 MDA 的浓度后，可进一步算出其在植物组织中的含量。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院55植物生理学实验二、材料、仪器设备及试剂二、材料、仪器设备及试剂1 实验材料 植物的根或叶片 2 实验试剂 5%三氯乙酸（TCA）0.6%硫代巴比妥酸（TBA）溶液：称取硫代巴比妥酸 0.6g 溶于5TCA溶解并用其定容至l00mL。3 实验仪器 研钵，恒温水浴锅，分光光度计，离心机，天平，刻度试管，移液管 生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院56植物生理学实验三、实验步骤三、实验步骤1.MDA 1.MDA 的提取的提取 称取植物材料称取植物材料 1 g 1 g，剪碎，加入，剪碎，加入 2 2 mL 5%TCA mL 5%TCA 和少量石英砂，研磨至匀浆，再加和少量石英砂，研磨至匀浆，再加 8 mL 8 mL TCA TCA 进一步研磨，匀浆在进一步研磨，匀浆在 4000 r/min 4000 r/min 离心离心 10 min 10 min，上清液为样品提取液。，上清液为样品提取液。2.2.显色反应和测定显色反应和测定 吸取离心的上清液吸取离心的上清液 2 mL 2 mL（对照（对照加加 2 mL 2 mL 蒸馏水），加入蒸馏水），加入 2 mL 0.6%TBA 2 mL 0.6%TBA 溶液，溶液，摇匀。将试管放入沸水浴中煮沸摇匀。将试管放入沸水浴中煮沸 10min 10min（自试管内（自试管内溶液中出现小气泡开始计时）溶液中出现小气泡开始计时），取出试管并冷却，取出试管并冷却，3000 r/min 3000 r/min 离心离心 15 min 15 min，取上清液并量其体积。，取上清液并量其体积。以以 0.60.6 TBA TBA 溶液为空白测定溶液为空白测定 532nm532nm、600nm 600nm 和和 450nm 450nm 处的吸光度值。处的吸光度值。生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院57植物生理学实验实验作业实验作业1、计算：MDA含量(mol/g)=(MDA浓度（umol/L）提取液体积（ml）)/样品鲜重（g）/10002 2、比较衰老叶片与细嫩叶片、比较衰老叶片与细嫩叶片MDAMDA含量有什么含量有什么不同并说明原因？不同并说明原因？生命科学系生物科学实验教学中心生命科学系生物科学实验教学中心上上 饶饶 师师 范范 学学 院院58植物生理学实验