胶体金免疫层析技术实验培训ppt课件

胶体金免疫层析技术实验培训胶体金免疫层析技术实验培训ppt课件课件1实验目的实验目的u掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方法及结果的判定法及结果的判定2胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验实验目的掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方法及结果的判定实验目的掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方法及结果的判定2简简 介介 胶胶体体金金试试纸纸条条诊诊断断是是采采用用胶胶体体金金免免疫疫层层析析技技术术研研制制而而成成，该该技技术术是是90年年代代初初在在免免疫疫渗渗滤滤技技术术的的基基础础上上建建立立的的一一种种简简易易快快速速的的免免疫疫学学检检测测技技术术，最最先先用用于于人人绒绒毛毛膜膜促促性性腺腺激激素素（HCG）的的测测定定和和乙乙型型肝肝炎炎病病毒表面抗原（毒表面抗原（HBsAg）等检测。等检测。3胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验简简 介介 胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研3胶胶 体体 金金（Colloidal gold）是是 氯氯 金金 酸酸（HAuCl4）的的水水溶溶胶胶，利利用用HAuCl4在在还还原原剂剂（柠柠檬檬酸酸钠钠）的的作作用用下下，聚聚合合成成特特定定大大小小的的金金颗颗粒粒，形形成成带带负负电电的的疏疏水水胶胶溶溶液液，由由于于静静电电作作用成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金。用成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金。简简 介介4胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验胶体金（胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（）是氯金酸（HAuCl44质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球形，大小均一，无棱角。粒为球形，大小均一，无棱角。质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状各异。形状各异。胶体金的质量判定标准胶体金的质量判定标准简简 介介5胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球形，大小均一，无棱质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球形，大小均一，无棱5胶胶体体金金标标记记的的原原理理：胶胶体体金金在在碱碱性性条条件件下下带带负负电电荷荷，与与蛋蛋白白质质分分子子的的正正电电荷荷基基团团藉藉静静电电吸吸引引而形成牢固结合。而形成牢固结合。胶胶 体体 金金 标标 记记 技技 术术（Immunogold labeling technique）是是以以胶胶体体金金作作为为示示踪踪标标记记物物应应用用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。简简 介介6胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的6胶体金试纸条诊断技术的原理胶体金试纸条诊断技术的原理 以以硝硝酸酸纤纤维维素素膜膜为为载载体体，利利用用了了微微孔孔膜膜的的毛毛细细作作用用，滴滴加加在在膜膜条条一一端端的的液液体体慢慢慢慢向向另另一一端端渗渗移移，通通过过抗抗原原抗抗体体结结合合，并并利利用用胶胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。抗体。最常用的是双抗夹心法检测抗原最常用的是双抗夹心法检测抗原7胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验胶体金试纸条诊断技术的原理胶体金试纸条诊断技术的原理 以硝酸纤维素膜为载体，利用以硝酸纤维素膜为载体，利用7胶体金试纸条示意图胶体金试纸条示意图检测线检测线质检线质检线吸收垫吸收垫样品垫样品垫硝酸纤维素膜硝酸纤维素膜连接垫连接垫（胶体金垫）（胶体金垫）背衬背衬（底板）（底板）8胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验胶体金试纸条示意图检测线质检线吸收垫样品垫硝酸纤维素膜连接垫胶体金试纸条示意图检测线质检线吸收垫样品垫硝酸纤维素膜连接垫8测测定定时时将将试试纸纸条条下下端端浸浸入入液液体体标标本本中中，下下端端吸吸水水材材料料即即吸吸取取液液体体向向上上端端移移动动，流流经经C处处时时使使干干片片上上的的免免疫疫金金复复合合物物复复溶溶，并并带带动动其向膜条渗移。其向膜条渗移。测测 定定9胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验测定时将试纸条下端浸入液体标本中，下端吸水材料即吸取液体向上测定时将试纸条下端浸入液体标本中，下端吸水材料即吸取液体向上9若若标标本本中中有有待待测测特特异异抗抗原原，即即可可与与免免疫疫金金复复合合物物中中的的抗抗体体结结合合，此此抗抗原原抗抗体体复复合合物物流流至至测测试试区区即即被被固固相相抗抗体体捕捕获获，在在膜膜上上显显出出红红色反应线条（色反应线条（T）。）。测测 定定10胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验若标本中有待测特异抗原，即可与免疫金复合物中的抗体结合，此抗若标本中有待测特异抗原，即可与免疫金复合物中的抗体结合，此抗10过过剩剩的的免免疫疫金金复复合合物物继继续续前前行行，至至参参照照区区与与固固相相抗抗小小鼠鼠IgG结结合合（免免疫疫金金复复合合物物中中的的单单克克隆隆抗抗体体为为小小鼠鼠IgG），而而显显出出红红色色质质控控线条（线条（R）。测测 定定11胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验过剩的免疫金复合物继续前行，至参照区与固相抗小鼠过剩的免疫金复合物继续前行，至参照区与固相抗小鼠IgG结合（结合（11阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。测测 定定12胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。测阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。测 定定12胶体金免胶体金免12胶体金快速诊断技术的特点胶体金快速诊断技术的特点 u简简捷捷快快速速：操操作作简简单单，一一般般只只要要5-10min 就就会会出出结结果果，而而其其它它方方法法如如ELISA需需要要1-2h，PCR 需要时间更长。需要时间更长。u结结果果易易于于判判定定：阴阴、阳阳性性呈呈色色很很明明显显，肉肉眼眼很容易判断。很容易判断。u特特异异性性好好：因因为为该该技技术术大大多多用用单单克克隆隆抗抗体体标标记，这决定了它具有很好的特异性。记，这决定了它具有很好的特异性。13胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验胶体金快速诊断技术的特点胶体金快速诊断技术的特点 简捷快速：操作简单，一般只要简捷快速：操作简单，一般只要5-113u病病毒毒性性疾疾病病：传传染染性性法法氏氏囊囊病病、禽禽流流感感、新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。u寄寄生生虫虫疾疾病病：血血吸吸虫虫病病、旋旋毛毛虫虫病病、囊囊虫虫病、恙虫病。病、恙虫病。u细菌性疾病细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。：霍乱弧菌、类鼻疽。胶体金快速诊断技术的应用胶体金快速诊断技术的应用14胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬细小病毒、猪瘟病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬细小病毒、猪瘟14H5亚亚型型AIV尿尿囊液阳性结果囊液阳性结果阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照H5IV细细胞胞毒阳性结果毒阳性结果15胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验H5亚型亚型AIV尿囊液阳性结果阴性对照阴性对照尿囊液阳性结果阴性对照阴性对照H5IV细胞毒细胞毒151.1.瘦肉精试纸条检测的原理？瘦肉精试纸条检测的原理？2.2.早孕试纸条检测的原理？早孕试纸条检测的原理？课课 后后 思思 考考16胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验瘦肉精试纸条检测的原理？课瘦肉精试纸条检测的原理？课 后后 思思 考考16胶体金免疫层析技术胶体金免疫层析技术16