间充质干细胞的临床应用心得课件

间充质干细胞的临床应用心得间充质干细胞的临床应用心得1（优选）间充质干细（优选）间充质干细胞的临床应用心得胞的临床应用心得（优选）间充质干细胞的临床应用心得2间充质干细胞间充质干细胞 生物学特性q来源广泛q自我更新、多向分化潜能q易扩增传代能力MSCsIL-6,IL-7,IL-10,IL-11,SCF,SDF-1GM-CSF,M-CSF.adipocyteosteocytechondrocytemyoblastcardiocyteNerve cellhepatocytev可来源于骨髓、胰腺、皮肤、肺脏等多处器官组织 v体外能够传40代，并保持稳定的表型和多向分化的潜能（Mesenchymal Stem Cells，MSCs)间充质干细胞 生物学特性MSCsIL-6,IL-7,I3q免疫调节作用q产生多种细胞因子vv分泌分泌IL-6IL-6、IL-7IL-7、IL-8IL-8、IL-11IL-11、干细胞生长因子（、干细胞生长因子（SCFSCF）、）、粒细胞粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSFGM-CSF）、转化生长因子）、转化生长因子-（TGF-TGF-）等）等 q表达多种细胞表面分子vvCD105CD105、CD73CD73、CD44CD44、CD71CD71、CD90CD90、CD166CD166、基质细胞抗原、基质细胞抗原（STRO-1STRO-1）等q无MHC限制vv不管不管MSCsMSCs或或T T细胞来源种类，细胞来源种类，MSCsMSCs均能对均能对T T细胞增殖产生免细胞增殖产生免疫抑制作用疫抑制作用产生多种细胞因子表达多种细胞表面分子无MHC限制4q狼疮骨髓MSCs（BMSCs）SLE骨髓（P0）MSCs第25d 倒置显微镜观察 100 v人正常人与SLE患者BMSCs形态大小上无差异，均以长梭形为主孙凌云等，中华风湿病学杂志，2005形态观察狼疮骨髓MSCs（BMSCs）SLE骨髓（P0）MSCs第25SLE 组正常对照组原代培养时间267.76 d17 5.46 dP=0.029形态学无区别SLESLE与正常对照组与正常对照组BMSCsBMSCs培养比较培养比较张华勇，孙凌云，中华风湿病学杂志，2006扩增效率 P5代后降低 P10代后降低 SLE 组正常对照组原代培养时间267.76 d17 56q表 达 CD29、CD44 和CD105 q不 表 达 CD14、CD34、CD45、HLA-DR 正常组与狼疮组表型表达并无差异（P0.05)张华勇，孙凌云，中华风湿病学杂志，2006表面标记测定表 达 CD29、CD44 和CD105 张华勇，孙凌云，中7dCell populationq生长曲线呈S形qSLE患者BMSCs总体生长较正常人缓慢 张华勇，孙凌云，中华风湿病学杂志，2006正常人与正常人与SLESLE患者患者BMSCsBMSCs生长曲线比较生长曲线比较dCell population生长曲线呈S形张华勇，孙凌云8对照SLESLEBeta-actinIL-7vSLE中IL-6、IL-7 表达降低（）v而IL-11,M-CSF表达无区别张华勇，孙凌云，中华风湿病学杂志，2006正常人与正常人与SLESLE患者患者BMSCsBMSCs细胞因子表达比较细胞因子表达比较对照SLEBeta-actinIL-7张华勇，孙凌云，中华风9张华勇，孙凌云，中华风湿病学杂志，2006SLESLE患者患者BMSCsBMSCs染色体组型染色体组型 为正常的染色体组型为正常的染色体组型张华勇，孙凌云，中华风湿病学杂志，200610vvv鼠鼠鼠 BALB/c NZBWF1/J （P0）100 q形态上无显著差异 q但狼疮MSCs增殖速度更快、传代时间更短 不同于人？Sun LY,et al.Scand J Rheumatol,2006形态学形态学 BALB/c 11MSCsMSCs与免疫细胞与免疫细胞qMSCsMSCs与与T T细胞细胞vv不活化异基因不活化异基因T T细胞细胞vv抑制抑制T T细胞增殖细胞增殖包括初始和记忆性包括初始和记忆性T T细胞的增殖细胞的增殖包括同种异基因抗原、丝裂原或抗原特异性刺激包括同种异基因抗原、丝裂原或抗原特异性刺激vv对对T T细胞凋亡影响细胞凋亡影响一：不诱导静止期一：不诱导静止期T T细胞凋亡细胞凋亡（Tse WT et al.Tse WT et al.TransplantationTransplantation，20032003，7575：389-397.389-397.）二：诱导活化的二：诱导活化的T T细胞凋亡细胞凋亡（Plumas J et al.Leukemia Plumas J et al.Leukemia 2005;19:1597-604.2005;19:1597-604.）MSCs与免疫细胞MSCs与T细胞12q与正常（BALB/c）及狼疮鼠（NZBWF1/J）BMSCs共培养均导致活化的T细胞凋亡下降（P0.（不需细胞间直接接触）Transplantation，2003，76:1208-1213SLE中IL-6、IL-7 表达降低（）MSCs与HSCs共移植的临床研究Spaggiari GM,et al.狼疮鼠BMSCs对T细胞免疫调节功能存在缺陷表 达 CD29、CD44 和CD105慢性GVHD发生率为 12%（对照组 67%,P=0.与正常鼠BMSCs共培养：T-bet，GATA-3 TH1Sethe S,et al.Conded splenocytes+MSC MLRConded splenocytes+MSC MLR Disease No.Source of MSCs/SCT Outcome Ref.Study Patients SettingHematologic 15 Autologous IV No adverse events of 1,Lazarus et al.malignancies infusion 10,and 50 106 cellsBreast cancer 28 Autologous in IV infusion was safe;Ko et al.autologous SCT autologous SCT recovery was rapidInborn errors of 11 HLA-identical No immune response against koc et al.Metabolism from SCT donor donor;improved nerve conductio velocity in metachromatic leukodystrophyOsteogenesis 5 HLA-identical from Gene-marked MSCs engrafted;Horwitz et al.Imperfecta SCT donor new dense bone formation;few fracturesAcute myeloid 1 HLA-haploidentical SCT engraftment with no GVHD Lee et al.Leukemia from SCT donorLeukemia 31 HLA-identical from Rapid platelet engraftment;low rassoni et al.SCT donor incidence of acute GVHDSevere aplastic 1 Allogeneic MSC Engraftment;improved stroma Fouillard et al.anemia Severe acute 1 Haploidentical MSC;Clearance of grade IV acute Le Blanc et al.GVHD unrelated donor SCT GVHD,twice qMSCs与HSCs共移植的临床研究Le Blanc C,et al.Biology of Blood and Marrow Transplantation.2005;11:321-334二：诱导活化的T细胞凋亡（Plumas J et al.Le301.1.血液疾病血液疾病v女，20岁，急性白血病 全身照射+传统化疗5.7 106 CD34+cells/kg+1.5106 MSCs/kg（来自患者父亲）无急性GVHD 或慢性GVHD发生移植后31月血象正常，无病情复发Lee ST,et al.Br J Haematol.2002;118:1128-1131.1.血液疾病Lee ST,et al.Br J Haema312.2.肿瘤肿瘤vv2828名乳腺癌患者名乳腺癌患者接受高剂量化疗 自体干细胞移植静脉输注12106/kg MSCs 无输注后毒性反应发生治疗后血小板 0.5109/L 的平均时间 9 d(4-19 d)中性粒细胞 0.5109/L 的平均时间8 d(6-11 d)Koc ON,et al.Clin Oncol,2000;18:307-316MSCs 可促进HSCs移植2.肿瘤Koc ON,et al.Clin Oncol,32（移植物抗宿主病）q为为HSCTHSCT常见并发症（常见并发症（20206060）q预防方法预防方法 传统传统vv移植物中除去供者移植物中除去供者T T细胞（体外细胞（体外T T细胞清除）细胞清除）vvT T细胞抗体处理细胞抗体处理(体内体内T T细胞清除）细胞清除）vv免疫抑制药物使用免疫抑制药物使用新策略新策略vMSCs输注vv下调宿主抗原呈递细胞下调宿主抗原呈递细胞（移植物抗宿主病）为HSCT常见并发症（2060）3331名患者接受HLA相匹配的同胞HSCsMSCs移植qMSCs 剂量15106/kgq无MSCs 输注相关毒性反应q急性IIIV GVHD发生率为 15%(对照组 40%,P=0.01)q慢性GVHD发生率为 12%（对照组 67%,P=0.002)q6月存活率88%（对照组 67%)ASCT同时输入MSCs可促进移植，降低 GVHD,提高生存率Frassoni F,et al.Bone Marrow Transplant 2002;29(suppl 2)31名患者接受HLA相匹配的同胞HSCsMSCs移植ASC34MSCsMSCsMSCs治疗急性治疗急性治疗急性GVHDGVHDGVHD一例一例一例男，男，9 9岁，急性淋巴细胞白血病岁，急性淋巴细胞白血病HSCTHSCT后发生后发生型急性型急性GVHDGVHDq症状：腹泻，高胆红素血症，反复细菌、真菌、病毒感染q常规抗GVHD治疗无效q移植后73d予静脉输注2106/kg MSCs（来自患者母亲），第170d予1106/kg MSCsq治疗效果：症状好转至消失，血胆红素正常，急淋缓解q该中心1000例接受异基因HSCT患者中，25例发生急性型GVHD，除此例外，另24例均死亡（移植后月，平均2月）如下图MSCs治疗急性GVHD一例男，9岁，急性淋巴细胞白血病HS35患者移植临床过程Le Blanc K，et al.Lancet.2004;363:143941结论:利用MSCs的免疫抑制作用可治疗急性GVHD患者移植临床过程Le Blanc K，et al.Lanc36MSCsMSCsMSCs治疗激素难控制型急性治疗激素难控制型急性治疗激素难控制型急性GVHD8GVHD8GVHD8例例例治疗组 例数/次数急性GVHD 8慢性GVHD 1MSCs治疗1次 6MSCs治疗2次 3移植后急性GVHD消失 6移植后死亡 3巨细胞病毒胃肠炎 1存活（2月3年）5生存率明显高于同期未接受MSCs输注的GVHD患者（P）Ringden O，et al.Biology Blood Marrow Transplant,2006MSCs治疗激素难控制型急性GVHD8例治疗组 37qMSCs用于自身免疫病治疗的潜能vv自身免疫病为干细胞病自身免疫病为干细胞病,临床上已开展骨髓移植治疗自身免临床上已开展骨髓移植治疗自身免疫病疫病vvMSCsMSCs在异基因骨髓移植中可降低在异基因骨髓移植中可降低GVHDGVHD的发生和严重性的发生和严重性vv自身免疫病动物实验显示，全骨髓移植自身免疫病动物实验显示，全骨髓移植(含含MSCsMSCs）可延长生）可延长生存期限存期限,降低疾病复发降低疾病复发4.4.自身免疫病自身免疫病MSCs用于自身免疫病治疗的潜能4.自身免疫病38qKushida T等用照射胫骨内注射全骨髓（IBMBMT）治疗狼疮（MRL/lpr），1年以上生存率达100 结论qMSCs的输注可延长狼疮鼠生存期限q输注途径影响动物实验动物实验q2000年，Kushida T等用全身照射门静脉内注射（PV）尾静脉注射（IV）治疗狼疮（MRL/lpr），1年生存率达100，高于（照射PV）及（照射IV）组SLE在延长生存率上，PVIVPVIVIBMBMT可减少照射剂量，并无需追加IVKushida T等用照射胫骨内注射全骨髓（IBMBMT39MRL/lpr鼠肾小球病理改变Kushida T，et al.Blood.2001;97:3292-3299MRL/lpr鼠肾小球病理改变Kushida T，et al40NanjingUniversityBONE MARROW MSCs谢谢观看！谢谢观看！谢谢观看！41