方法学评价解析课件

Add Your Company Slogan P r e s e n t a t i o n Company LogoCompany Logo方法学评价方法学评价方法学评价方法学评价 为了满足临床医疗对实验室检验的不断要求，为了满足临床医疗对实验室检验的不断要求，实验室需不断引入新的方法或改进原有方法。此时实验室需不断引入新的方法或改进原有方法。此时需要对其进行方法性能评价，达到提高分析方法质需要对其进行方法性能评价，达到提高分析方法质量的目的量的目的 目录目录1精密度2检测限 3参考值范围 4可报告范围 v系统误差（系统误差（Systematic errors)v对同一测量的多次测试中，保持或按某种规律变化。它又包括恒定系统对同一测量的多次测试中，保持或按某种规律变化。它又包括恒定系统误差误差(Constant Error)和比例系统误差和比例系统误差(Proportional Error)。v随机误差（随机误差（Random Error）v对同一测量的多次测试中，对同一测量的多次测试中，受偶然因素影响而以不可预知的方式变受偶然因素影响而以不可预知的方式变化。化。 操作步骤操作步骤 结果计算及结果分析结果计算及结果分析v干扰试验：评价及试验方法干扰试验：评价及试验方法 操作步骤操作步骤 结果计算及结果分析结果计算及结果分析v方法学比较试验：评价及试验方法方法学比较试验：评价及试验方法 操作步骤操作步骤 结果计算及结果分析结果计算及结果分析 回收率回收率=回收量回收量/加入浓度加入浓度*100%v结果分析结果分析：v回收率一般要求在回收率一般要求在95%105%95%105%。v试验中加入标准品溶液及生理盐水的体积不得超过血清样本的试验中加入标准品溶液及生理盐水的体积不得超过血清样本的10%，且须测定，且须测定高、中、低不同浓度的回收率，求平均回收率高、中、低不同浓度的回收率，求平均回收率v应对检验结果受基质效应的影响作出评估，回收率越接近应对检验结果受基质效应的影响作出评估，回收率越接近100%，说明受基质效，说明受基质效应影响越小，分析方法对分析物在纯溶液或复制的基质检测环境中反应能力一应影响越小，分析方法对分析物在纯溶液或复制的基质检测环境中反应能力一致性越强致性越强 操作步骤操作步骤 结果计算及结果分析结果计算及结果分析v干扰试验：干扰试验：评价及试验方法评价及试验方法 操作步骤操作步骤 结果计算及结果分析结果计算及结果分析v方法学比较试验：评价及试验方法方法学比较试验：评价及试验方法 操作步骤操作步骤 结果计算及结果分析结果计算及结果分析 允许误差时允许误差时，应进一步探讨其误差的来源是因方法特异性差还，应进一步探讨其误差的来源是因方法特异性差还是干扰。若加入的物质本身和分析试剂反应并产生读数，说明为方法特是干扰。若加入的物质本身和分析试剂反应并产生读数，说明为方法特异性差，否则说明存在干扰异性差，否则说明存在干扰 操作步骤操作步骤 结果计算及结果分析结果计算及结果分析v干扰试验：评价及试验方法干扰试验：评价及试验方法 操作步骤操作步骤 结果计算及结果分析结果计算及结果分析v方法学比较试验：方法学比较试验：评价及试验方法评价及试验方法 操作步骤操作步骤 结果计算及结果分析结果计算及结果分析 X值，值，GOD-PODGOD-POD法测定结果为法测定结果为Y Y值。值。 方法内离群点方法内离群点 以以Y/40Y/40为标准为标准 每一组每一组YY与之相比，若大于与之相比，若大于Y/40Y/40，则为离群点，则为离群点v 方法间离群点 绘制散点图，观察有无离群点，若无可继续处理数据，若有应对XY值进行 离群值筛选及剔除v 若有若有0 0个或个或1 1个离群点，剔除该点并补做一组即可。若离群点数大于个离群点，剔除该点并补做一组即可。若离群点数大于1 1，应停，应停 止实验，查找原因止实验，查找原因v2.2.回归及相关分析回归及相关分析v根据直线回归分析法做统计学处理，求出回归方程根据直线回归分析法做统计学处理，求出回归方程Y=a+bxY=a+bx及相关系数及相关系数r.r.v截距截距a a反映恒定系统误差（要求反映恒定系统误差（要求a a接近于接近于0 0），），v斜率斜率b b反映比例系统误差（要求反映比例系统误差（要求b b在在0.971.030.971.03之间），之间），v相关系数相关系数r r反映两种方法相关性的密切程度（要求反映两种方法相关性的密切程度（要求r0.975)r0.975) 根据回归方程的根据回归方程的a、b值，计算候选方法的值，计算候选方法的SE，并与不同医学决定水平，并与不同医学决定水平（Xc）的总的允许误差（）的总的允许误差（TEa)比较，对候选方法系统误差的可接受性比较，对候选方法系统误差的可接受性做出判断，其判断指标为：做出判断，其判断指标为：丨a+bXc）-Xc丨1/2TEa（未考虑精密度）（CLIA88） Y轴轴,标标准溶液的实际值为准溶液的实际值为 X轴。轴。理想结果：理想结果：Y=X最小二最小二乘乘法线性评价方案法线性评价方案 （平均斜率法）（平均斜率法）评价线性实验最常用的统计方法评价线性实验最常用的统计方法,将测定结果将测定结果拟合成为一条直线。拟合成为一条直线。标准溶液的实际值为标准溶液的实际值为 X轴轴,测定值的均值为测定值的均值为 Y轴轴,最小二剩法的本质是计算出测定点与拟合最小二剩法的本质是计算出测定点与拟合直线间的垂直距离为最小。直线间的垂直距离为最小。拟合的直线方程拟合的直线方程:Y=Ax+B。A 为线性的斜率为线性的斜率,B 为线性的在为线性的在 Y轴上的截距。轴上的截距。EP 6-P 指南指南采用最小二乘法回归分析拟合最适直采用最小二乘法回归分析拟合最适直线，统计学方法为线性失拟误差。线，统计学方法为线性失拟误差。TE=LoF+REEP 6-P 指南指南计算出线性失拟误差的大小。计算出线性失拟误差的大小。方差检验：方差检验：G=LoF/REGG0.05，可认为线性关系，否则为非线性。可认为线性关系，否则为非线性。此方案是采用此方案是采用5个不同浓度的标本个不同浓度的标本,随机排列随机排列,每个标本测定每个标本测定 34 次次,标本应有足够的量标本应有足够的量,分分析应在当天完成。步骤析应在当天完成。步骤:(1)离群点检查离群点检查(2)稀释变异实验稀释变异实验,(3)线性失拟检查线性失拟检查;计算计算LOF及及 G值值,再将再将 G与与判断界值判断界值F相比相比,(4)线性回归分析线性回归分析 Y=Ax+B,(5)测定均值的测定均值的 95%可信限计算。若可信限计算。若 G值小于值小于判断界值判断界值 F,表示该拟合缺陷可以接受表示该拟合缺陷可以接受,测定结测定结果拟合是成线性。果拟合是成线性。EP 6-P 指南指南EP 6-A指南指南采用多项式回归作为线性评价方法采用多项式回归作为线性评价方法将纯统计中的非线性数据与临床可接受的相关将纯统计中的非线性数据与临床可接受的相关性有机结合起来性有机结合起来。STEP ONE：判断用非线性多项式拟合数据是：判断用非线性多项式拟合数据是否比线性好否比线性好STEP TWO：当非线性多项式拟合比线性好时，：当非线性多项式拟合比线性好时，判断最适非线性模型与线性拟合之间的差值是判断最适非线性模型与线性拟合之间的差值是否小于预先设定的该法的允许偏差否小于预先设定的该法的允许偏差多项式的具体评多项式的具体评价结果一般共有价结果一般共有四种四种:线性线性 1线性线性 2非线性非线性不精密度不精密度EP 6-A指南指南实验要求实验要求熟悉仪器设备熟悉仪器设备实验时间实验时间实验样本：数量、基质效应、分析范实验样本：数量、基质效应、分析范围、样本准备和浓度计算围、样本准备和浓度计算测量顺序测量顺序数据收集与统计处理：初步数据检查、数据收集与统计处理：初步数据检查、离群值检查、确定分析测量范围、非离群值检查、确定分析测量范围、非线性程度、考虑随机误差线性程度、考虑随机误差检测限检测限（最低）检测限与（最低）定量限的区别（最低）检测限与（最低）定量限的区别检测限是指试样中被测物质能被检测出的最低检测限是指试样中被测物质能被检测出的最低浓度或量。是一种限度检验效能指标，表明样浓度或量。是一种限度检验效能指标，表明样品经处理后空白（本底）值得高低。它无需定品经处理后空白（本底）值得高低。它无需定量测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。量即可。而定量限是指样品中被测物质能被定量测定而定量限是指样品中被测物质能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定的准确度和的最低量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。精密度。实验注意事项实验注意事项一般制备两种不同类型的样品，一个是空白样一般制备两种不同类型的样品，一个是空白样品；另一个是检测限样品，即含有低浓度的分品；另一个是检测限样品，即含有低浓度的分析物。析物。通常需要制备几份浓度高于通常需要制备几份浓度高于LLD1-4倍的检测限倍的检测限样品。样品。空白和检测限样品由检测系统作重复检测，计空白和检测限样品由检测系统作重复检测，计算各自的均值和标准差。算各自的均值和标准差。不同的检测限由空白和检测限样品数据作估计。不同的检测限由空白和检测限样品数据作估计。参考区间验证参考区间验证参考区间的转移参考区间的转移使用相同分析系统参考区间的转移使用相同分析系统参考区间的转移使用不同分析系统参考区间的转移使用不同分析系统参考区间的转移（1）在同一实验室进行转移）在同一实验室进行转移（2）从一个实验室转移到另一个实验室：）从一个实验室转移到另一个实验室：1）检验服务的对象来自同一地区和具有相同人）检验服务的对象来自同一地区和具有相同人口统计学意义的群体。口统计学意义的群体。2）检验服务的对象来自不同地区或不同人口统）检验服务的对象来自不同地区或不同人口统计学意义的群体。计学意义的群体。参考区间的转移参考区间的转移要把已存在的参考区间转移到其他实验室必须要把已存在的参考区间转移到其他实验室必须满足一些必要的条件满足一些必要的条件。首先，原始检验项目参考区间的研究要非常系首先，原始检验项目参考区间的研究要非常系统全面，具有可信性统全面，具有可信性;其次，要考虑到检测分析系统的可比性，可按其次，要考虑到检测分析系统的可比性，可按照照CLSI EP9-A2 文件利用患者标本进行方法比文件利用患者标本进行方法比对和偏移评估对和偏移评估;第三，检验服务对象或人群应具有可比性。第三，检验服务对象或人群应具有可比性。另外，参考区间研究的分析前的因素也必须具另外，参考区间研究的分析前的因素也必须具有可比性，如参考个体的分析前准备，标本采有可比性，如参考个体的分析前准备，标本采集和处理程序等。集和处理程序等。参考区间的验证参考区间的验证C28-A3 指南指南 和和IFCC 文件，主要有两种方法文件，主要有两种方法用来评估已存在的或转移的参考区间的可接受用来评估已存在的或转移的参考区间的可接受性。性。1.主观评审：这个方法是通过专家认真地审查主观评审：这个方法是通过专家认真地审查原始参考区间研究的有关因素来主观地评价转原始参考区间研究的有关因素来主观地评价转移的可接受性。移的可接受性。2、用、用20 或或60 个参考值数据进行验证：从健康个参考值数据进行验证：从健康体检人群中抽出体检人群中抽出20 或或60 个有代表性的健康个个有代表性的健康个体，比较小样本参考值和原始参考值之间的可体，比较小样本参考值和原始参考值之间的可比性。比性。Add Your Company Slogan P r e s e n t a t i o n Company LogoCompany LogoThank you