小鼠骨髓细胞微核试验培训ppt课件

小鼠骨髓小鼠骨髓细胞微核胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验1小鼠骨髓细胞微核试验培训ppt课件2微核成因微核成因化学致突变物化学致突变物染色体作用于纺锤丝无着丝点,片或环整条染色体带着丝粒的环和断片于细胞分裂末期细胞质中形成微核3 3小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验微核成因化学致突变物染色体作用于纺锤丝无着丝点,片或环整条染3小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成4 4小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成4小鼠骨髓细胞微核试验4 因此，微核试验用于检测断裂剂和部分非整倍体致突变剂。微核可出现在多种细胞中，但在有核细胞 中较难与正常核的分支相区别，由于红细胞在成熟前最后一次分离后数小时可将主核排出，而仍保留微核于PCE细胞中，因此，通常计数PCE细胞中的微核数。5 5小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验 因此，微核试验用于检测断裂剂和部分非整倍体致突变剂。553 器材与试剂n n3.1 器材 解剖器械，生物显微镜，载玻片等。n n3.2 试剂 甲醇（分析纯）、甘油（分析纯）、小牛血清、生理盐水、Giemsa 储备液、pH 6.8磷酸盐缓冲液n n3.3 阳性对照物 环磷酰胺6 6小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验3 器材与试剂3.1 器材 解剖器械，生物显微镜，载玻64 操作步骤n n4.1 试验动物及处理试验动物及处理n n动物选择动物选择n n小鼠是微核试验的常规动物，通常用712周龄，体重1820g的小鼠。每组10只，雌雄各半。7 7小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验4 操作步骤4.1 试验动物及处理7小鼠骨髓细胞微核试验7n n剂量及分组剂量及分组n n受试物应至少设三个剂量组，最高剂量组原则上为不产生动物死亡的最大毒作用剂量。一般取受试样品1/5、1/10、1/20 LD50 剂量。n n另设溶剂对照组和阳性对照组。阳性对照组可用环磷酰胺腹腔注射1次。阴性对照组使用等体积的溶剂。8 8小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验剂量及分组8小鼠骨髓细胞微核试验8n n染毒途径染毒途径 腹腔注射n n染毒次数及取样时间染毒次数及取样时间n n一般采用两次或多次染毒。两次染毒：第一次染毒后24小时进行第二次染毒，6小时后取样；多次染毒：每天染毒1次，连续5天，末次染毒后24小时取样。9 9小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验染毒途径 腹腔注射9小鼠骨髓细胞微核试验9n n4.2 骨髓液的制备和涂片骨髓液的制备和涂片n n试验动物一次染毒后，按确定的时间用颈椎脱臼或麻醉法将其处死，取胸骨，擦净血污，剔去肌肉，剪去骨骺，用小型止血钳将骨髓挤于有一小滴小牛血清的清洁载玻片上，混合均匀后推片。也可在股骨取骨髓。n n阳性及阴性对照组处理方法同上。1010小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验4.2 骨髓液的制备和涂片10小鼠骨髓细胞微核试验10n n4.3 固定固定n n将推好晾干的骨髓片放入染色缸中，甲醇溶液固定15分钟，取出，晾干。不能及时染色的涂片也应固定好保存。n n4.4 染色染色n n将固定晾干后的涂片，用新鲜配制的Giemsa(Giemsa储备液1份+pH6.8的磷酸盐缓冲液9份)染色1015分钟，冲洗，晾干。1111小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验4.3 固定11小鼠骨髓细胞微核试验114.5 观察计数观察计数n n低倍镜下观察，选择细胞完整、分散均匀，着色适当的区域，再在油镜下观察计数。n n多染红细胞（PCE）呈灰蓝色，正染红细胞（NCE）呈橘黄色。典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色。n n计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计数200个细胞中PCE与NCE的比值。1212小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验4.5 观察计数低倍镜下观察，选择细胞完整、分散均匀，着色适125 结果分析与评价n n本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示。n nPCE/NCE为评价细胞毒性的指标，受试组PCE/NCE值与阴性对照组比较有统计学意义表示受试化学毒物的剂量过大，试验结果不可靠。n n阴性对照和阳性对照组的微核发生率，应与相关文献报道或研究历史数据相一致。1313小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验5 结果分析与评价本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率13MNNCE1414小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验MNNCE14小鼠骨髓细胞微核试验14 红细胞红细胞 电镜电镜1515小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验 15单个微核多个微核1616小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验单个微核多个微核16小鼠骨髓细胞微核试验161717小鼠骨髓细胞微核试验小鼠骨髓细胞微核试验17小鼠骨髓细胞微核试验17