丙型肝炎实验诊断研究进展课件

丙型肝炎实验诊断研究进展山东省临床检验中心卢志明丙型肝炎实验诊断研究进展山东省临床检验中心卢志明1、有包膜,属黄病毒科，丙型肝炎属。、单股正链 ()、:小时、每日复制量：兆()病毒颗粒1.2.3.4.,.丙型肝炎病毒、有包膜,属黄病毒科，丙型肝炎属。.2 从非甲非乙型肝炎到丙型肝炎从非甲非乙型肝炎到丙型肝炎:年间、诊断方法相继建立,人们发现还有一种引起输血后肝炎的致病因子.年纽约的对例术后病人随访个月人()发生了输血后肝炎,仅人与有关显然不是输血后肝炎的原因.年月在东京会议上命名此种病毒为丙型肝炎病毒(),由此引发的肝炎称之为丙型肝炎().的病毒命名 从非甲非乙型肝炎到丙型肝炎:年间、诊断方法相继建立,人们发3n为单股正链病毒n区、区为非编码区n与间分结构编码区：区、；非结构编码区：n区最保守，区较保守，有高变区（）基因组结构基因组结构为单股正链病毒基因组结构4丙型肝炎实验诊断研究进展课件5表 表达蛋白的特性和功能基因 氨基酸数目 抗原功能核壳蛋白,高度保守糖膜蛋白,在不同基因中高度变异糖膜蛋白,在不同基因中高度变异金属蛋白酶蛋白酶和螺旋酶不清楚不清楚复制酶依赖的聚合酶表 表达蛋白的特性和功能基 因氨基酸数目抗 原功 6全球丙肝的流行情况、的资料表明、的资料表明,全世界已有约亿丙型肝炎病毒感染者。全世界已有约亿丙型肝炎病毒感染者。、急性感染者中可发展为慢性肝炎、急性感染者中可发展为慢性肝炎,其中约会缓慢进展为肝其中约会缓慢进展为肝硬化。发展为肝癌。硬化。发展为肝癌。、主要经血液和血液制品传播。、主要经血液和血液制品传播。至今还没有预防丙型肝炎的疫苗问世至今还没有预防丙型肝炎的疫苗问世,治疗效果不是十分理治疗效果不是十分理想。因此想。因此,建立一种针对的具有高灵敏度、特异性和稳定性的建立一种针对的具有高灵敏度、特异性和稳定性的检测方法，对于防止传播、感染的早期诊断和治疗具有重要检测方法，对于防止传播、感染的早期诊断和治疗具有重要意义。意义。全球丙肝的流行情况、的资料表明,全世界已有约亿丙型7我国丙型肝炎流行情况我国丙型肝炎流行情况一般人群抗流行率一般人群抗流行率:估计感染人数估计感染人数:万万(全国病毒性肝炎血清流行病学调查全国病毒性肝炎血清流行病学调查 )目前经过血源的管理，丙肝发病率应当有所下降，目前经过血源的管理，丙肝发病率应当有所下降，但有大量病人未被发现和治疗但有大量病人未被发现和治疗我国丙型肝炎流行情况一般人群抗流行率:(全国病毒性肝炎血8(省省)(省省)(省)(省)(省)我国各省市自治区抗体 9我国基因型调查、型是主要的基因型，其检出率达。型是主要的基因型，其检出率达。型是主要的基因型，其检出率达。型是主要的基因型，其检出率达。、型检出率低，占；其余为、型的混合型。型检出率低，占；其余为、型的混合型。型检出率低，占；其余为、型的混合型。型检出率低，占；其余为、型的混合型。、检出率在检出率在检出率在检出率在 岁组分别为、。岁组分别为、。岁组分别为、。岁组分别为、。、在女性感染的比率较高（），男性为，差异在女性感染的比率较高（），男性为，差异在女性感染的比率较高（），男性为，差异在女性感染的比率较高（），男性为，差异有极显著的统计意义有极显著的统计意义有极显著的统计意义有极显著的统计意义()()()(年和年和年和年和 年病人中的检出率分别为年病人中的检出率分别为年病人中的检出率分别为年病人中的检出率分别为和（和（和（和（）。我国基因型调查、型是主要的基因型，其检出率达。10 感染：中国 基因型的地理分布HCVHCV基因型在中国的分布以基因型在中国的分布以1b1b型为主，型为主，2a2a型为辅助型为辅助JiamusiJiamusiShenyangShenyangBeijingBeijingHamiHamiLanzhouLanzhouChengduChengduNanningNanningNanjingNanjing佳木斯佳木斯佳木斯佳木斯沈阳沈阳沈阳沈阳北京北京北京北京哈密哈密哈密哈密兰州兰州兰州兰州成都成都成都成都南京南京南京南京南宁南宁南宁南宁II/1bII/1bIII/2aIII/2aII/IIIII/III6 6a a Wang Y,et al.J Med Viral,1993,40:254-260庄辉，等庄辉，等.中华流行病学杂志中华流行病学杂志,2001,22:99-101长沙长沙 感染：中国 基因型的地理分布HCV基因型在中国的分布以111 痊愈痊愈感染的自然史感染的自然史 持续感染持续感染 稳定，慢性，无进展稳定，慢性，无进展 ,.肝脏疾病终末期，肝细肝脏疾病终末期，肝细胞癌，肝脏移植，死亡胞癌，肝脏移植，死亡 呈严重进展呈严重进展 位位 急性感染急性感染 有不同程度进展有不同程度进展 痊愈感染的自然史 持续感染 ,.肝脏疾12丙型肝炎病毒丙型肝炎病毒()()感染危害性不容忽视感染危害性不容忽视全球性流行全球性流行 (亿亿)慢性化的危险性慢性化的危险性 临床诊断病例临床诊断病例 肝硬化的危险性肝硬化的危险性 在感染后年内达在感染后年内达 在感染后年内达在感染后年内达肝硬化患者中肝细胞癌肝硬化患者中肝细胞癌 年年(美国美国)的发生率的发生率 (日本、台湾日本、台湾)失代偿肝硬化年存活率失代偿肝硬化年存活率 肝硬化相关性病死率肝硬化相关性病死率 年年.,()丙型肝炎病毒()感染危害性不容忽视全球性流行 (13的感染人数的感染人数 临床病例？临床病例？n发病隐匿n基层临床医生认识不足n丙肝检测没有纳入常规查体项目n确诊比较难，费用高n抗体的窗口期，的假阴性*n临床诊断病例少的感染人数 临床病例？发病隐匿14 :美国：美国：在年以前，在年以前，临床诊断的临床诊断的成人病例数成人病例数增加倍增加倍中国：中国：挑战？！挑战？！高慢性化率高慢性化率高感染率、低诊断率高感染率、低诊断率无有效疫苗预防无有效疫苗预防认识不足认识不足挑战挑战!问题与挑战 :美国：高慢性化率高感染率、低诊断率无有效疫苗15我 们 如 何 应 对 挑 战？、制定中国丙肝防治指南：规范丙肝的筛查，诊断和治疗。、加强丙肝疾病和诊疗对基层医生的教育。、重视临床一线对丙肝的筛查。、通过各种途径提高公众对丙肝的防范意识：如媒体等。我 们 如 何 应 对 挑 战？、制定中国丙肝防治指南：规范16近年来丙肝研究进展近年来丙肝研究进展n丙肝分型、病毒复制、病毒变异等n慢性化机制、脂肪变性、癌变机理等n抗病毒治疗：型应答率；型应答率n特异性靶向抗病毒治疗（期临床）近年来丙肝研究进展丙肝分型、病毒复制、病毒变异等17实验室诊断进展n多抗原包被的抗体检测（第代抗）n的检测（第代）n抗原抗体联合检测（筛查）n的基因分型n的检测n总之，实验室诊断研究进展？实验室诊断进展多抗原包被的抗体检测（第代抗）18诊断、监测诊断、监测方法方法血清学试验血清学试验检测抗检测抗定性试验、定性试验、定量试验、定量试验、肝纤维化非损伤试验肝纤维化非损伤试验肝活检肝活检基因分型基因分型实验室诊断方法 :血清学试验血清学试验检测抗原检测抗原诊断、监测血清学试验定性试验、定量试验、肝纤维化非损伤试验19常用的检测方法常用的检测方法n酶联免疫吸附试验抗体检测酶联免疫吸附试验抗体检测 n酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验 核心抗原检测核心抗原检测n免疫学方法免疫印迹法（）免疫学方法免疫印迹法（）n免疫学方法血清学分型免疫学方法血清学分型n分子生物学方法定量、定性分子生物学方法定量、定性n分子生物学基因分型方法型特异分型法、型特异探针分子生物学基因分型方法型特异分型法、型特异探针杂交法、限制性长度多态性分析法杂交法、限制性长度多态性分析法()、核酸序列分析、核酸序列分析法、酶切分型法、基因芯片等法、酶切分型法、基因芯片等常用的检测方法酶联免疫吸附试验抗体检测 20感染丙肝病毒后各指标检测时间表感染丙肝病毒后各指标检测时间表 Anti-HCV Window=70 days(3rd Gen)=82 days(2nd Gen)100806040200Analyte LevelTimeHCV RNA Window=approximately 1113 daysAnti-HCVHCV-RNAHCV Ag Window=1214 daysHCV-Ag清学分型清学分型感染丙肝病毒后各指标检测时间表 Anti-HCV Wind21感染丙肝病毒后各指标检测时间表感染丙肝病毒后各指标检测时间表 Anti-HCV Window=70 days(3rd Gen)=82 days(2nd Gen)100806040200Analyte LevelTimeHCV RNA Window=approximately 1113 daysAnti-HCVHCV-RNAHCV Ag Window=1214 daysHCV-Ag清学分型清学分型感染丙肝病毒后各指标检测时间表 Anti-HCV Wind22抗体检测应用的不足抗体检测应用的不足n目前国内主要应用抗检测抗体，经抗体筛选后，目前国内主要应用抗检测抗体，经抗体筛选后，临床上仍有少量的输血后丙肝的发生。临床上仍有少量的输血后丙肝的发生。主要原因主要原因窗口期窗口期抗体检测应用的不足目前国内主要应用抗检测抗体，经抗体筛选后，23 丙肝抗体假阴性问题丙肝抗体假阴性问题.窗口期窗口期 .静默感染静默感染 ()().试剂质量试剂质量.其它其它 丙肝抗体假阴性问题.窗口期 24抗体检测应用的不足抗体检测应用的不足、不能用于丙型肝炎的早期诊断。、不能用于丙型肝炎的早期诊断。、临床上不能区分既往感染和现症感染。、临床上不能区分既往感染和现症感染。、抗病毒治疗不一定造成抗阴转，不能用、抗病毒治疗不一定造成抗阴转，不能用于抗病毒疗效的检测。于抗病毒疗效的检测。抗体检测应用的不足、不能用于丙型肝炎的早期诊断。25血清的检测血清的检测n血清的定性检测：血清的定性检测：n 容易产生假阳性或假阴性（产物易产生污染）容易产生假阳性或假阴性（产物易产生污染）n血清的定量检测：血清的定量检测：n 缺点：降解容易出现假阴性缺点：降解容易出现假阴性n 优点：可用于抗病毒治疗的选择与疗效监测优点：可用于抗病毒治疗的选择与疗效监测血清的检测血清的定性检测：26免疫学方法免疫印迹法重组免疫印迹法(，)是批准的抗补充试验主要是解决试验中的假阳性问题。目前广泛使用的一非特异性反应明显减少，敏感度显著提高(）。缺点是在操作上较困难，费时、成本高，因此限制了这项技术在临床上的普遍使用。免疫学方法免疫印迹法 27目前检测方法目前检测方法n抗的检测n不能满足临床早期、准确、可靠的要求。n实验操作复杂、费用较高、推广难目前检测方法抗 的检测28丙肝抗原检测丙肝抗原检测、丙型肝炎早期感染诊断指标、丙型肝炎确诊指标、丙型肝炎治疗评价指标、丙型肝炎筛查指标丙肝抗原检测、丙型肝炎早期感染诊断指标29核心抗原的检测核心抗原的检测抗抗“游离游离”抗原抗原时间时间 感染过程感染过程早期检测早期检测“筛查筛查”“总总”抗原抗原(抗体结合抗体结合)“总总”抗原抗原诊断用诊断用天天年年 总总总总 核心抗原核心抗原核心抗原核心抗原 日日天天核心抗原的检测抗“游离”抗原时间 感染过程早期检测“总”抗原30感染丙肝病毒后各指标检测时间表感染丙肝病毒后各指标检测时间表抗“游离”抗原早期检测“筛查”“总”抗原 ()()总总 核心抗原核心抗原 天天时间灵敏度感染丙肝病毒后各指标检测时间表抗“游离”抗原早期检测“总”抗31检验原理检验原理 通过对血清或血浆样品进行预处理，解离抗原抗体复合物并释放出所有核心抗原，经固相包被特异性抗体捕获后，再与酶标记抗体形成双抗体夹心复合物，最后加入酶底物显色，以产品规定的可见光波长临界值判断抗原检测结果。检验原理 通过对血清或血浆样品进行预处理，解离抗原32抗原基本原理 抗体 抗 原抗抗体抗体抗体 酶 联 板样本处理 抗原基本原理 抗体 抗 原抗抗体抗体 33 不同亚型丙型肝炎病毒核心抗原的序列分析不同亚型丙型肝炎病毒核心抗原的序列分析nnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 不同亚型丙型肝炎病毒核心抗原的序列分析 34四株单抗亚型检定四株单抗亚型检定 号()号()号()号()四株单抗亚型检定 号()号()号()35和检测的比较nn样本储存的条件要求普通特殊n样本的前处理试剂不需要需要n特殊仪器要求无有n实验人员的训练普通专业n实验费用低高根据我国目前的状况根据我国目前的状况 检测更符合我国的国情检测更符合我国的国情,可可以为血液安全以为血液安全,临床诊断提供廉价临床诊断提供廉价,切实可行的检测方法切实可行的检测方法.和检测的比较 根据我36丙肝抗体检测丙肝抗体检测“窗口期窗口期”补充方补充方案案.检测丙肝抗原检测丙肝抗原 .检测丙肝病毒检测丙肝病毒 .联合检测：联合检测：丙肝抗体检测“窗口期”补充方案.检测丙肝抗原 37实验室检测流程实验室检测流程 阴性阴性报告报告阳性比值阳性比值阳性比值阳性比值 或或报告报告报告报告报告报告报告报告报告报告实验室检测流程 阴性报告阳性比值 n对某些透析或严重免疫缺陷患者对某些透析或严重免疫缺陷患者,尽管存在尽管存在 复制复制,但抗但抗(),(),可诊断为感染者或慢性丙肝患者可诊断为感染者或慢性丙肝患者慢性丙型肝炎慢性丙型肝炎慢性丙型肝炎慢性丙型肝炎实验结果临床诊断分析实验结果临床诊断分析慢性丙型肝炎慢性丙型肝炎实验结果临床诊断分析41n献血员或体检群体的筛查献血员或体检群体的筛查n若抗若抗(),(),()(),(),()n 为慢性丙肝或慢性感染者为慢性丙肝或慢性感染者n若抗若抗(),(),()(),(),()n 为为“窗窗 口口 期期”(”(天天)n “静默感染静默感染”()”()n 是引起输血后丙肝的主要原因是引起输血后丙肝的主要原因实验结果临床诊断分析实验结果临床诊断分析献血员或体检群体的筛查实验结果临床诊断分析42总总 结结、丙肝是引起肝硬化、肝癌的主要原因之一，是危害人民、丙肝是引起肝硬化、肝癌的主要原因之一，是危害人民生命健康的严重疾病，应引起临床医生的高度重视。生命健康的严重疾病，应引起临床医生的高度重视。、丙肝抗原的检测是抗窗口期及假阴性的补充，丙肝抗原、丙肝抗原的检测是抗窗口期及假阴性的补充，丙肝抗原的定量检测是抗病毒治疗的评价指标。的定量检测是抗病毒治疗的评价指标。、丙肝无疫苗预防，起病隐匿，丙肝抗原、抗体的联合检、丙肝无疫苗预防，起病隐匿，丙肝抗原、抗体的联合检测应成为常规临床检查项目，及早发现潜在病人。测应成为常规临床检查项目，及早发现潜在病人。、分型、检测是选择抗病毒治疗方案、疗效评价、确定疗、分型、检测是选择抗病毒治疗方案、疗效评价、确定疗程，预后判断的重要指标。程，预后判断的重要指标。总 结、丙肝是引起肝硬化、肝癌的主要原因之一，是危害人43谢谢！44