微生物检验-第十二章-真菌课件

真真 菌菌真真 菌菌 有有细细胞壁、典型胞壁、典型细细胞核，不含叶胞核，不含叶绿绿素，不分根、茎、叶素，不分根、茎、叶的真核的真核细细胞型微生物。胞型微生物。细细胞胞质质内有完整的内有完整的细细胞器。胞器。1精选课件原核原核细细胞型微生物与真核胞型微生物与真核细细胞型微生物比胞型微生物比较较 原核原核原核原核细细细细胞型微生物胞型微生物胞型微生物胞型微生物 真核真核真核真核细细细细胞型微生物胞型微生物胞型微生物胞型微生物 细细细细胞核胞核胞核胞核结结结结构构构构 核膜无核膜无核膜无核膜无 有有有有核仁无核仁无核仁无核仁无 有有有有分裂方式分裂方式分裂方式分裂方式 主要以二分裂有主要以二分裂有主要以二分裂有主要以二分裂有丝丝丝丝分裂，减数分裂分裂，减数分裂分裂，减数分裂分裂，减数分裂细细细细胞胞胞胞质结质结质结质结构构构构质质质质膜膜膜膜 常缺乏固醇常有固醇常缺乏固醇常有固醇常缺乏固醇常有固醇常缺乏固醇常有固醇 内膜内膜内膜内膜 较简单较简单较简单较简单，有中介体复，有中介体复，有中介体复，有中介体复杂杂杂杂，有内，有内，有内，有内质质质质网和高网和高网和高网和高尔尔尔尔基体基体基体基体核糖体核糖体核糖体核糖体 70S 80S 70S 80S 呼吸系呼吸系呼吸系呼吸系统统统统 质质质质膜或中介体膜或中介体膜或中介体膜或中介体线线线线粒体粒体粒体粒体 2精选课件Dimorphism（二相性真菌）机体内寄生机体内寄生37UnicellularUnicellularMulticellularMulticellular含含动动物蛋白物蛋白培养基培养基yeast沙保氏培养基沙保氏培养基2525普通培养基普通培养基2525mold3精选课件4精选课件真菌真菌繁殖繁殖结结构构，一条菌，一条菌丝丝可生成可生成多个多个孢孢子子Morphology of Spore孢孢子子芽芽胞胞作用作用真菌繁殖真菌繁殖结结构构细细菌菌休休眠眠结结构构，抵御不良抵御不良环环境境低抗力低抗力 不不强强，加，加热热6070短短时间时间即可死亡即可死亡强强，有有 的的 可可 耐耐100数小数小时时5精选课件Categories of sporesexualspore:sexualspore:asexualasexual sporespore分生分生孢孢子子叶状叶状孢孢子子孢孢子囊子囊孢孢子子芽生芽生孢孢子子厚膜厚膜孢孢子子关关节孢节孢子子大分生大分生孢孢子子小分生小分生孢孢子子6精选课件芽生芽生孢孢子子7精选课件厚膜厚膜孢孢子子8精选课件关关节孢节孢子子9精选课件孢子囊孢子10精选课件标标本本（1）皮肤的角质性物质（2）各种分泌物和排泄物（3）血液和体液（4）脓汁及渗出物（1）采集的标本要适宜 （2）在用药前采集标本（3）采集的标本量要足 （4）严格无菌操作（5）采集的标本立即送检注意注意11精选课件1.镜检真菌形态2.真菌抗原检测3.真菌分离培养与鉴定4.真菌核酸检测5.真菌毒素检测 实验实验室室检验检验12精选课件癣病标本多用KOH湿片检查法 13精选课件意意义义判断某些真菌种的致病性等判断某些真菌种的致病性等判断某些真菌种的致病性等判断某些真菌种的致病性等,如皮肤如皮肤如皮肤如皮肤癣癣癣癣菌、曲霉等。菌、曲霉等。菌、曲霉等。菌、曲霉等。直接直接镜检镜检阳性阳性表示：表示：有有有有诊诊诊诊断意断意断意断意义义义义。看到的就是真菌的形看到的就是真菌的形看到的就是真菌的形看到的就是真菌的形态态态态，可确定某些致病性真菌，可确定某些致病性真菌，可确定某些致病性真菌，可确定某些致病性真菌的属或种。的属或种。的属或种。的属或种。有假阳性有假阳性有假阳性有假阳性结结结结果。果。果。果。局限性：局限性：阴性阴性阴性阴性结结结结果不能排除真菌感染；果不能排除真菌感染；果不能排除真菌感染；果不能排除真菌感染；14精选课件常用的染色方法常用的染色方法常用的染色方法有革常用的染色方法有革兰兰染色、瑞氏染色、染色、瑞氏染色、荧荧光染色，光染色，乳酸酚棉乳酸酚棉蓝蓝染色、染色、还还有墨汁有墨汁负负染色等。染色等。对检测对检测骨髓和外周血中的骨髓和外周血中的荚荚膜膜组织组织胞胞浆浆菌，需作瑞菌，需作瑞氏染色或氏染色或姬姬氏染色后氏染色后镜检镜检。检测检测病人病人脑脑脊液脊液标标本中新生本中新生隐隐球菌，需作墨汁球菌，需作墨汁负负染染色后色后检查检查，背景，背景为为黑色，新生黑色，新生隐隐球菌和球菌和荚荚膜不着色膜不着色 15精选课件（二）、真菌抗原检测白假白假丝丝酵母菌甘露聚糖抗原、酵母菌甘露聚糖抗原、隐隐球菌多糖球菌多糖荚荚膜抗原、膜抗原、组织组织胞胞浆浆菌循菌循环环多糖抗原多糖抗原常用的方法有胶乳凝集常用的方法有胶乳凝集试验试验、ELISA、半定、半定量放射免疫法量放射免疫法 16精选课件（三）、真菌的分离培养（三）、真菌的分离培养真菌的培养特点：三低两高真菌培养是目前准确鉴定真菌的可靠方法平皿培养 大试管培养 玻片培养17精选课件菌落性菌落性质质：酵母菌酵母菌还还是霉菌是霉菌菌落大小菌落大小：病原性真菌菌落小，而条件病原性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大致病性真菌菌落大致病性真菌菌落下沉，有致病性真菌菌落下沉，有时时使使培养基开培养基开裂裂；污污染性真菌菌落不下沉染性真菌菌落不下沉,很少引起开裂。很少引起开裂。菌落菌落颜颜色色 病原性真菌病原性真菌颜颜色淡，色淡，污污染真菌染真菌颜颜色深；色深；菌落的性状是菌落的性状是鉴别鉴别真菌的重要特征真菌的重要特征18精选课件真 菌 鉴 定1.1.1.1.糖糖糖糖(醇醇醇醇)类发类发类发类发酵酵酵酵试验试验试验试验2.2.同化碳源同化碳源同化碳源同化碳源试验试验试验试验3.3.同化氮源同化氮源同化氮源同化氮源试验试验试验试验菌种菌种鉴鉴定是一个复定是一个复杂过杂过程，程，仅观仅观察菌落形察菌落形态态是是远远远远不不够够的，的，还还需作生化反需作生化反应应，分子生物学，分子生物学鉴鉴定，必要定，必要时时将菌种送有关将菌种送有关单单位位鉴鉴定。定。19精选课件核酸核酸检测检测毒素的毒素的检测检测动动物物试验试验20精选课件1.多烯类抗生素，如两性霉素B、制霉菌素、曲古霉素等。2.吡咯类，包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑、克霉唑、益康唑等。3.其他类如氟胞嘧啶。抗真菌药物分类-化学结构分类21精选课件临临床床标标本本直接直接检查检查检测检测抗原抗原直接直接镜检镜检固定固定标标本染色本染色墨汁墨汁负负染色法染色法KOH法法毛毛发发指甲指甲皮屑皮屑脑脑脊脊液液分离培养分离培养沙氏培养基沙氏培养基2537观观察菌落察菌落分分子子生生物物学学检检测测动动物物实实验验检检测测抗抗体体病病理理检检查查镜检镜检、生化反、生化反应应22精选课件小结真菌的致病性真菌的基本特性：菌丝、孢子、培养特性标本采集注意事项常用的检查方法：显微镜检查、分离培养、生化实验23精选课件思考思考题题：1.简简述真菌的致病性特点。述真菌的致病性特点。2.真菌真菌标标本采集是有哪些注意事本采集是有哪些注意事项项？3.形形态态学学检查检查和培养在真菌和培养在真菌检查检查中的意中的意义义。24精选课件（一）掌握毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子丝 菌生物学特性、微生物学检验方法及鉴定。（二）熟悉浅部真菌感染的种类目的要求25精选课件皮下皮下组织组织感染真菌感染真菌毛毛癣癣菌属菌属表皮表皮癣癣菌属菌属小小孢孢子菌属子菌属表面感染真菌表面感染真菌皮肤皮肤癣癣真菌真菌糠秕马拉色菌 着色真菌孢子丝菌26精选课件位置：寄居于人体皮肤和毛干的最表层。因不接触组织细胞，很少引起宿主细胞反应。嗜脂性酵母样菌 代表：秕糠马拉色菌(Malasseziafurfur)症状：皮肤表面出现花斑癣（汗斑）27精选课件微生物微生物检验检验1直接直接显显微微镜检查镜检查可采用透明胶可采用透明胶带带粘粘贴贴取材法，将透明胶取材法，将透明胶带带直接直接贴贴于皮肤表面，于皮肤表面，数分数分钟钟后揭下，直接后揭下，直接贴贴于于载载玻片上玻片上镜检镜检或或经经棉棉蓝蓝染色或革染色或革兰兰染色后染色后镜检镜检。可。可见见孢孢子和菌子和菌丝丝。孢孢子子为圆为圆形或卵形，厚壁，形或卵形，厚壁，芽芽颈较宽颈较宽，常成簇分布；菌，常成簇分布；菌丝丝粗短，呈粗短，呈腊腊肠样肠样。2 2分离培养与分离培养与鉴鉴定定28精选课件毛毛 癣癣 菌菌 属属毛癣菌属（Trichophyton）属半知菌亚门丝孢菌目丛梗孢菌科，有20余种，其中14种能引起人和动物的感染。临床上常见的有 红色毛癣菌(trichophyton rubrum)须癣毛癣菌(T.mentagrophytes,又称石膏样毛癣菌)许兰毛癣菌(T.schoenleinii,又称黄癣菌)紫色毛癣菌（T.violaceum）断发毛癣菌（T.tonsurans）29精选课件毛毛癣癣菌：菌落灰白、菌：菌落灰白、红红、橙或棕色、橙或棕色,表面呈表面呈绒绒毛状、粉粒状或蜡毛状、粉粒状或蜡样样。大分生大分生孢孢子子细长细长棒状薄壁。菌棒状薄壁。菌丝丝有有螺旋状、球拍状、鹿角状和螺旋状、球拍状、鹿角状和结节结节状状30精选课件微生物微生物检验检验1标标本本采采集集采采集集新新发发生生的的皮皮肤肤损损害害边边缘缘皮皮屑屑；指指甲甲近尖端下面甲屑；拔取无光近尖端下面甲屑；拔取无光泽泽病病发发。2直接直接显显微微镜检查镜检查皮屑皮屑10%KOH液；指甲液；指甲25%KOH/25%NaOH处处理理镜检镜检可可见见透明、有隔，常有分支的菌透明、有隔，常有分支的菌丝丝及成及成链链的关的关节孢节孢子。子。31精选课件皮肤皮肤癣癣菌感染的毛菌感染的毛发发 32精选课件三.分离培养 标本 70%乙醇或在青、链霉素混合液内处理5min 生理盐水洗3次 接种沙氏琼脂斜面25培养观察菌落特征。四.其他鉴定试验 毛发穿孔试验 脲酶试验 特殊营养需要试验 33精选课件毛毛发发穿孔穿孔试验试验将头发发剪成lcm长，置于已加入25ml蒸馏水和23滴10酵母浸膏液的平皿内，高压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内，置25孵育四周，每周检查一次，每次取数根毛发置载玻片上，经乳酚棉蓝染色后，置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹者为阳性，否则为阴性。34精选课件药药物敏感物敏感试验试验对对灰黄霉素、伊曲康灰黄霉素、伊曲康唑唑等等药药物敏感。物敏感。35精选课件表表 皮皮 癣癣 菌菌 属属 表皮癣菌属（Epidermophyton）目前只有一个种，即絮状表皮癣菌（E.floccosum）,能引起人类感染。絮状表皮癣菌是一种常见的皮肤癣菌，可引起皮肤感染如股癣、足癣、体癣、手癣和甲癣。36精选课件絮状表皮絮状表皮癣癣菌生物学性状菌生物学性状皮屑和甲屑经+10%KOH液消化 镜检可见分枝断裂的有隔菌丝，少见孢子培养后，菌落初为白色鹅毛状，以后转变为黄色粉末状。镜下可见球拍状菌丝、卵圆形或巨大棒状薄壁大分生孢子，无小分生孢子，在陈旧培养物中可见厚膜孢子。37精选课件表皮表皮癣癣菌：菌落初菌：菌落初为为白色白色鹅鹅毛状毛状,以后以后变变为为黄黄绿绿色粉末状。粗色粉末状。粗棒状薄壁大分生棒状薄壁大分生孢孢子。子。菌菌丝丝球拍状球拍状38精选课件小小 孢孢 子子 菌菌 属属 我国常见的有铁锈色小孢子菌、石膏 样小孢子菌和狗小孢子菌等。小孢子菌属感染皮肤和毛发，很少感 染甲。39精选课件小孢子菌生物学特性皮屑和毛发+10%KOH处理 镜检，皮屑中有分枝断裂菌丝，在毛发中呈现小孢子镶嵌 的鞘包裹着发干。在沙氏培养基中可见白色、棕黄色或黄褐 色、粉末或绒毛状菌落。镜下可见梳状、球 拍状或结节状菌丝，卵圆形小分生孢子、厚 壁梭形（纺锤形）大分生孢子。40精选课件小孢子癣菌：菌落为灰色、橘红色或棕黄色，厚壁大分生孢子，菌丝有结节状、梳状和球拍状41精选课件42精选课件43精选课件毛癣菌属44精选课件表皮癣菌属45精选课件小孢子癣菌属46精选课件皮下组织真菌感染主要有着色真菌和孢子丝菌着色真菌感染发生在暴露部位，称着色真菌病。卡氏枝孢霉和裴氏着色芽生菌。申克孢子丝菌，属腐生性真菌，常因外伤接触带菌的花草等引起感染。此菌可引起孢子丝菌下疳。此菌也可引起深部感染。是一种二相性真菌。47精选课件着色真菌分生分生孢孢子：子：树树枝型、枝型、剑顶剑顶型、型、花瓶型：花瓶型：48精选课件49精选课件多多发发生四肢暴露部位，开始生四肢暴露部位，开始为为小丘疹，表面干燥小丘疹，表面干燥或湿或湿润润，有，有鳞鳞屑或屑或鳞鳞痂，逐痂，逐渐渐形成斑形成斑块结节块结节，呈，呈疣状增殖。疣状增殖。50精选课件直接直接显显微微镜检查镜检查：单单个或成群厚壁个或成群厚壁孢孢子，有横隔子，有横隔或中或中间间十字分隔。十字分隔。培养：培养：沙氏培养基，生沙氏培养基，生长缓长缓慢，菌落从灰黑色至慢，菌落从灰黑色至黑色，有气生菌黑色，有气生菌丝丝。菌落涂片。菌落涂片镜检镜检可可见见三种三种类类型型的分生的分生孢孢子，有子，有鉴鉴定价定价值值。生化反生化反应应：不能水解淀粉，不凝固牛奶，能同化：不能水解淀粉，不凝固牛奶，能同化硝酸硝酸盐盐，需，需维维生素生素B1。对对5-FC、伊曲康、伊曲康唑唑、氟康、氟康唑唑敏感，易敏感，易产产生耐生耐药药性性51精选课件孢孢子子丝丝菌菌申克孢子丝菌传传染源：人和染源：人和动动物物传传播途径：播途径：经经破破损损皮肤接触感染。皮肤接触感染。二相性真菌。二相性真菌。52精选课件微生物检验：(1)直接直接显显微微镜检查镜检查：卵：卵圆圆形的形的孢孢子。子。53精选课件(2)、分离培养与、分离培养与鉴鉴定：将定：将标标本接种于沙本接种于沙氏培养基上氏培养基上25培养，培养，2-3d开始生开始生长长，初初为为白色湿白色湿润润的酵母型菌落，以后的酵母型菌落，以后变为变为淡咖啡色至深褐色。淡咖啡色至深褐色。37培养培养2-3d，可，可形成乳白色或淡褐色酵母型菌落。形成乳白色或淡褐色酵母型菌落。（3）、）、对对碘化碘化钾钾、伊曲康、伊曲康唑唑、特比、特比萘萘芬芬等等药药物敏感。物敏感。54精选课件脚气脚气 脚气是一种常见的真菌感染性皮肤病。多见于趾间,足底及足缘,有深在性水疱,糜烂及鳞屑,伴有瘙痒等症状.多见于成人,夏秋重,冬春轻,足多汗及常穿胶鞋者易患本病主要致病菌为红色毛癣菌、石膏样毛癣菌和絮状表皮癣菌。55精选课件医学上通常将脚气分三型：糜烂型、水疱型、角化型本病是由皮肤癣菌所引起的。足部多汗潮湿或鞋袜不通气等都可诱发本病。皮肤癣菌常通过污染的澡堂、游泳池边的地板、浴巾、公用拖鞋、洗脚盆而传染。56精选课件预防1要保持脚的清洁干燥，勤换鞋袜，鞋子要通气良好。2不要用别人的拖鞋、浴巾、擦布等，不要在澡堂、游泳池旁的污水中行走。3公用澡堂、游泳池要做到污水经常处理，以防相互传染。57精选课件治疗灰黄霉素、伊曲康灰黄霉素、伊曲康唑唑派瑞松:曲安奈德益康唑乳膏 达克宁:硝酸咪康唑软膏58精选课件59精选课件（一）掌握深部感染真菌概念、分类、检验程序；掌握假丝酵母、隐球菌、卡氏肺孢菌微生物学特性、检验方法及鉴定要点。（二）熟悉荚膜组织胞浆菌孢子鉴别要点。（三）了解抗真菌药物分类及临床应用。目的要求目的要求60精选课件（一）假丝酵母菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。（二）隐球菌属；分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。（三）曲霉菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。（四）组织胞浆菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。（五）卡氏肺孢菌：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。教学内容教学内容61精选课件DEFINITION 是指能侵袭深部组织和内脏及全身的真菌，主要有假丝酵母菌、隐球菌、曲霉、毛霉、组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等。组织胞浆菌为二相性真菌，假丝酵母菌、曲霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌等为条件致病性真菌，只有在一定条件下才引起机体致病。62精选课件第一第一节节 假假丝丝酵母菌属酵母菌属假丝酵母菌（Candida），俗称念珠菌，生物学分类为半知菌亚门、半知菌纲、隐球菌目、假丝酵母菌属。本属菌有81个种，其中有11种对人有致病性，其中白假丝酵母菌最为常见。63精选课件(一)白假丝酵母菌条件致病：皮肤粘膜感染鹅口疮，阴道炎内脏感染：肺炎、关节炎、膀胱炎，肾盂肾炎中枢神经感染：脑膜（脑）炎、脑脓肿64精选课件 圆圆形或卵形或卵圆圆形，直径形，直径3-6m3-6m。革。革兰兰阳性，着阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在色不均匀。出芽方式繁殖，在组织组织内可内可见见芽芽生生孢孢子、假菌子、假菌丝丝，在玉米粉培养基中可，在玉米粉培养基中可产产生生假菌假菌丝丝和厚膜和厚膜孢孢子。子。MicrobiologyCharacteristics65精选课件将将标标本接种在沙氏培养基上，本接种在沙氏培养基上，2525或或3737培养培养1 1d d后，可出后，可出现现奶油色奶油色类类酵母型菌酵母型菌落。落。镜检镜检可可见见假菌假菌丝丝和芽生和芽生孢孢子。子。66精选课件1)1)直直直直接接接接显显显显微微微微镜镜镜镜检检检检查查查查：取取取取脓脓脓脓汁汁汁汁、痰痰痰痰和和和和局局局局部部部部炎炎炎炎症症症症性性性性分分分分泌泌泌泌物物物物直直直直接接接接涂涂涂涂片片片片，革革革革兰兰兰兰染染染染色色色色后后后后镜镜镜镜检检检检，显显显显微微微微镜镜镜镜见见见见到到到到革革革革兰兰兰兰阳阳阳阳性性性性(着着着着色色色色不不不不均均均均匀匀匀匀)、圆圆圆圆形形形形或或或或卵卵卵卵圆圆圆圆形形形形菌菌菌菌体体体体或或或或孢孢孢孢子子子子及及及及假菌假菌假菌假菌丝丝丝丝，可确，可确，可确，可确认为认为认为认为假假假假丝丝丝丝酵母菌感染。酵母菌感染。酵母菌感染。酵母菌感染。2)2)抗抗抗抗原原原原检检检检测测测测：取取取取病病病病人人人人血血血血清清清清作作作作ELISAELISA、免免免免疫疫疫疫印印印印迹迹迹迹法法法法等等等等检测检测检测检测白假白假白假白假丝丝丝丝酵母菌抗原。酵母菌抗原。酵母菌抗原。酵母菌抗原。3)3)核酸核酸核酸核酸检测检测检测检测：用用用用PCRPCR法将白假法将白假法将白假法将白假丝丝丝丝酵母菌酵母菌酵母菌酵母菌DNADNA分子分子分子分子扩扩扩扩增后以分子探增后以分子探增后以分子探增后以分子探针检测针检测针检测针检测，具有，具有，具有，具有较较较较好的敏性和特异性。好的敏性和特异性。好的敏性和特异性。好的敏性和特异性。MicrobiologyExamination67精选课件将将标标本接种在沙氏培养基上，本接种在沙氏培养基上，2525或或3737培养培养1 1d d后，可出后，可出现现奶油色奶油色类类酵母型菌酵母型菌落。落。镜检镜检可可见见假菌假菌丝丝和芽生和芽生孢孢子。子。68精选课件鉴鉴定定1)芽芽管管形形成成试试验验：将将假假丝丝酵酵母母菌菌接接种种于于0.20.5m|血血清清中中，37孵孵育育1.5h观观察察有有无无芽芽管管形形成成。白白假假丝丝酵酵母母菌菌可可形形成成芽芽管管，其其他他假假丝丝酵母菌不形成芽管。酵母菌不形成芽管。69精选课件将假将假丝丝酵母菌接种于玉米粉培养基酵母菌接种于玉米粉培养基25孵育孵育1-2d后，白假后，白假丝丝酵母菌在菌酵母菌在菌丝顶丝顶端、端、侧缘侧缘或中或中间间形成厚膜形成厚膜孢孢子。子。2)厚膜厚膜孢孢子形成子形成试验试验：70精选课件3)3)糖同化或糖同化或发发酵酵试验试验商品化的商品化的商品化的商品化的产产产产色培养基可快速色培养基可快速色培养基可快速色培养基可快速鉴鉴鉴鉴定白假定白假定白假定白假丝丝丝丝酵母菌和酵母菌和酵母菌和酵母菌和其他假其他假其他假其他假丝丝丝丝酵母菌。酵母菌。酵母菌。酵母菌。71精选课件(4)(4)(4)(4)药药药药物物物物敏敏敏敏感感感感试试试试验验验验：对对对对二二二二性性性性霉霉霉霉素素素素B B B B、5-FC5-FC5-FC5-FC等等等等药药药药物物物物敏敏敏敏感感感感，但但但但对对对对5-FC5-FC5-FC5-FC极易极易极易极易产产产产生耐生耐生耐生耐药药药药性。性。性。性。(5)(5)(5)(5)抗抗抗抗体体体体检检检检测测测测：可可可可用用用用ELlSAELlSAELlSAELlSA夹夹夹夹心心心心法法法法、免免免免疫疫疫疫酶酶酶酶斑斑斑斑点点点点试试试试验验验验，方方方方法法法法简简简简便便便便。也也也也可可可可用用用用乳乳乳乳胶胶胶胶凝凝凝凝集集集集试试试试验验验验和和和和对对对对流流流流免免免免疫疫疫疫电电电电泳泳泳泳试验试验试验试验等等等等检测检测检测检测血清中抗白假血清中抗白假血清中抗白假血清中抗白假丝丝丝丝酵母菌抗体。酵母菌抗体。酵母菌抗体。酵母菌抗体。(6)(6)(6)(6)动动动动物物物物试试试试验验验验：将将将将假假假假丝丝丝丝酵酵酵酵母母母母菌菌菌菌悬悬悬悬液液液液注注注注射射射射1ml1ml1ml1ml于于于于家家家家兔兔兔兔耳耳耳耳静静静静脉脉脉脉或或或或注注注注射射射射0.2ml0.2ml0.2ml0.2ml于于于于小小小小白白白白鼠鼠鼠鼠尾尾尾尾静静静静脉脉脉脉，观观观观察察察察5-75-75-75-7天天天天，有无有无有无有无脏脏脏脏器小器小器小器小脓肿脓肿脓肿脓肿。72精选课件(二)热带假丝酵母菌 广泛分布于自然界，在人体表和外界相通的腔道中也存在。热带假丝酵母菌可引起皮肤、粘膜和内脏假丝酵母菌病。它除可在粘膜细胞上增殖引起感染外，其产生的毒素可引起过敏反应及产生的水解酶类引起组织损伤。74精选课件微生物检验(1)(1)直直接接显显微微镜镜检检查查：将将标标本本作作涂涂片片革革兰兰染染色后色后镜检镜检，观观察察+假假丝丝酵母菌。酵母菌。(2)(2)分离培养与分离培养与鉴鉴定：将定：将标标本接种在沙氏培本接种在沙氏培养基上形成色暗而干燥的菌落养基上形成色暗而干燥的菌落,取菌落作取菌落作TZCTZC反反应应。75精选课件76精选课件TZC反应即在葡萄糖蛋白胨琼脂内加入005gL氯化三苯基四氮唑(TZC)，热带假丝酵母菌在此培养基上生长后使培养基变为深红色或紫色，而白假丝酵母菌不使培养基变色(淡红)。77精选课件案例分析 主主诉诉：患白血病女童，：患白血病女童，1010岁岁，发热发热2 2天。天。病史：病儿既往健康，病史：病儿既往健康，1 1年前被年前被诊诊断断为为白血病，白血病，经经化化疗疗后有后有缓缓解。入院解。入院前前1 1个月开始出个月开始出现进现进行性疲乏，体重减行性疲乏，体重减轻轻，骨髓象呈，骨髓象呈现现50%50%未成熟未成熟细细胞。胞。曾曾给给予化予化疗疗，并使用甾醇，并使用甾醇类药类药物，物，2 2天前体温升至天前体温升至3939，无特异性定位，无特异性定位体征。体征。查查体：体：T39T39，BP100/60mmHgBP100/60mmHg，P100P100次次/分，分，R20R20次次/分，病人消瘦，分，病人消瘦，呈慢性病面容。皮肤：呈慢性病面容。皮肤：苍苍白，有几白，有几处处瘀斑，未瘀斑，未见见瘀点及黄疸；肺部：无瘀点及黄疸；肺部：无异常。异常。实验实验室室检查检查：血：血：红细红细胞胞压积压积20%20%，WBCWBC：600600；分；分类类：杆状核：杆状核30%30%，淋巴淋巴细细胞胞55%55%，单单核核细细胞胞5%5%。尿无异常。尿无异常。病程病程记录记录：病人静脉注射替卡西林：病人静脉注射替卡西林(ticarcillin)(ticarcillin)、奈夫西林、奈夫西林(nafcillin)(nafcillin)和妥和妥布霉素布霉素(tobramycin)(tobramycin)。入院后。入院后2 2天仍持天仍持续发热续发热，第，第3 3天病人自天病人自诉诉左眼痛，左眼痛，视视力模糊，眼底力模糊，眼底检查检查，在黄斑周，在黄斑周边边区域有白色、絮状病区域有白色、絮状病变变。自。自诉诉喉痛，喉痛，检查发现检查发现咽后壁有几咽后壁有几处处白色、粘附的斑白色、粘附的斑块块。78精选课件 问题问题：1.1.你将采集何种你将采集何种标标本做培养本做培养?2.2.根据上述根据上述结结果，最有可能是哪一果，最有可能是哪一类类的病原体的病原体?3.3.第四天血培养有卵第四天血培养有卵圆圆形、无形、无荚荚膜、革膜、革兰兰阳性病原体生阳性病原体生长长，体体积积是葡萄球菌的是葡萄球菌的2323倍，某些倍，某些细细胞有出芽。胞有出芽。4.4.你如何你如何鉴别该鉴别该病原体的不同种病原体的不同种类类?5.5.该该病原菌的自然定居部位是什么病原菌的自然定居部位是什么?79精选课件第二节 隐 球 菌 属广泛分布于自然界，也存在于人体表、口腔和肠道中，鸽粪中大量存在。人因吸入鸽粪污染的空气而感染，特别是免疫功能低下者主要引起肺脑的急性或亚急性或慢性感染 80精选课件形形形形态态态态：圆圆圆圆形，有肥厚形，有肥厚形，有肥厚形，有肥厚荚荚荚荚膜，出芽繁殖，不形成假菌膜，出芽繁殖，不形成假菌膜，出芽繁殖，不形成假菌膜，出芽繁殖，不形成假菌丝丝丝丝染色：墨汁染色：墨汁染色：墨汁染色：墨汁负负负负染染染染培养特性：沙保或血培养特性：沙保或血培养特性：沙保或血培养特性：沙保或血琼琼琼琼脂培养基，脂培养基，脂培养基，脂培养基，2525和和和和3737酵母型，酵母型，酵母型，酵母型，表面黏稠、表面黏稠、表面黏稠、表面黏稠、浑浊浑浊浑浊浑浊，乳白色菌落，乳白色菌落，乳白色菌落，乳白色菌落生化特性：分解尿素生化特性：分解尿素生化特性：分解尿素生化特性：分解尿素荚荚荚荚膜多糖抗原：膜多糖抗原：膜多糖抗原：膜多糖抗原：A AD4D4个血清型，我国个血清型，我国个血清型，我国个血清型，我国约约约约70%70%属属属属A A型型型型MicrobiologyCharacteristics81精选课件新生新生隐隐球菌（墨汁球菌（墨汁负负染色）染色）82精选课件新生新生隐隐球菌菌落球菌菌落83精选课件微生物检验1 1 1 1、标标标标本直接本直接本直接本直接镜检镜检镜检镜检（1 1 1 1）脑脑脑脑脊液作脊液作脊液作脊液作墨汁墨汁墨汁墨汁负负负负染色染色染色染色(2)(2)抗原抗原抗原抗原检测检测检测检测(3)(3)(3)(3)核酸核酸核酸核酸检测检测检测检测2 2、分离培养分离培养w病原性病原性隐隐球菌在球菌在2525和和3737生生长长，而非病，而非病原性原性隐隐球菌在球菌在3737时时不生不生长长。培养。培养25d25d后后观观察察菌落形菌落形态态特点特点，并取菌落作印度墨汁，并取菌落作印度墨汁负负染色染色镜检镜检。84精选课件3、鉴定1 1）酚氧化）酚氧化）酚氧化）酚氧化酶酶酶酶试验试验试验试验：接种：接种：接种：接种L-L-多巴枸多巴枸多巴枸多巴枸橼橼橼橼酸酸酸酸铁铁铁铁和咖和咖和咖和咖啡酸培养基中，啡酸培养基中，啡酸培养基中，啡酸培养基中，经经经经培养，呈培养，呈培养，呈培养，呈棕黑色菌落棕黑色菌落棕黑色菌落棕黑色菌落。2 2）脲脲脲脲酶酶酶酶试验试验试验试验：培养基可由黄色培养基可由黄色培养基可由黄色培养基可由黄色变变变变粉粉粉粉红红红红色色色色，而白假，而白假，而白假，而白假丝丝丝丝酵酵酵酵母菌母菌母菌母菌为为为为阴性。阴性。阴性。阴性。3 3）糖同化及）糖同化及）糖同化及）糖同化及发发发发酵酵酵酵试验试验试验试验：非致病性：非致病性：非致病性：非致病性隐隐隐隐球菌不能同化肌醇。球菌不能同化肌醇。球菌不能同化肌醇。球菌不能同化肌醇。4、药药敏敏对对对对两性霉素两性霉素两性霉素两性霉素B B、5-FC5-FC、氟康、氟康、氟康、氟康唑唑唑唑等敏感，等敏感，等敏感，等敏感，临临临临床床床床应应应应用用用用时时时时常常常常联联联联合合合合应应应应用。用。用。用。85精选课件第三节 曲 霉 菌 曲霉菌是条件致病菌，人体对其有极强免疫 力，只有在人体免疫功能降低时才能致病。曲霉可引起呼吸系统曲霉病；全身性曲霉 病；曲霉可产生毒素引起机体食物中毒；致 癌作用。86精选课件87精选课件直接直接显显微微镜检查镜检查 取痰液等被取痰液等被检检材料涂于材料涂于载载玻片上，玻片上，在在镜镜下可下可见见分枝的菌分枝的菌丝丝、较较粗的分生粗的分生孢孢子子头头，顶顶端膨大形成端膨大形成顶顶囊，囊，顶顶囊上有小梗，小梗上有囊上有小梗，小梗上有许许多多小分生小分生孢孢子。子。抗原抗原检测检测、抗体、抗体检测检测、药药敏敏试验试验、皮肤、皮肤试验试验。分离培养与分离培养与鉴鉴定：定：标标本接种沙氏本接种沙氏琼琼脂，室温培养脂，室温培养后菌落形成快，呈毛状，一般后菌落形成快，呈毛状，一般为为黄黄绿绿色。将菌落色。将菌落涂片涂片镜检镜检可可见见特征性的分子特征性的分子孢孢子子头头和足和足细细胞。根胞。根据不同的据不同的曲霉的形曲霉的形态态和菌落特征和菌落特征确定菌种。确定菌种。88精选课件90精选课件曲曲霉霉菌菌返回返回91精选课件第四节 组织胞浆菌属有两个种：荚膜组织胞浆菌、组织孢浆菌的杜波变种。本菌传染性极大，主要侵犯网状内皮系统，有时也可由血行播散而侵犯全身各脏器。98精选课件MicrobiologyCharacteristicsn n组织组织胞胞浆浆菌是一种双相型真菌，在菌是一种双相型真菌，在2525培养培养时时呈呈典型菌典型菌丝丝体，在体，在3737培养培养时为时为酵母型，位于酵母型，位于细细胞胞内或外。内或外。n n荚荚膜膜组织组织胞胞浆浆菌：菌：孢孢子卵子卵圆圆形，形，2-4m2-4m，芽生，芽生孢孢子，一端子，一端较较尖，芽尖，芽颈较细颈较细，有，有荚荚膜。膜。n n组织孢浆组织孢浆菌的杜波菌的杜波变变种：种：孢孢子卵子卵圆圆形，形，12-15m12-15m，薄壁的芽生，薄壁的芽生孢孢子子99精选课件微生物微生物检验检验1.1.直接直接显显微微镜检查镜检查应应涂片染色后涂片染色后检查检查。痰液等痰液等标标本：涂片后先用甲醇固定本：涂片后先用甲醇固定10min10min，再用，再用姬姬 姆姆萨萨染色染色镜检镜检 。皮皮损损、脓脓液等液等标标本：用本：用20%KOH20%KOH涂片后涂片后镜检镜检 2.2.抗原抗原检测检测、药药物敏感物敏感试验试验、抗体、抗体检测检测 3.3.分离培养与分离培养与鉴鉴定定 标标本本 含抗生素的沙氏培养基含抗生素的沙氏培养基 25 25培培 养，生养，生长缓长缓慢，有慢，有时时需需4646周才开始生周才开始生长长，逐，逐渐渐 形成白色至棕色形成白色至棕色绒绒毛状菌落毛状菌落 。100精选课件 转种于血琼脂培养基上，37培养，很快形成酵母型菌落。培养物显微镜特征：25沙氏培养，可以发现特征性的大分生孢子，但初代培养不典型，继代培养可有典型大分生孢子。鉴定：取可疑菌落涂片染色镜检，并作脲酶试验和明胶液化试验。101精选课件荚荚膜膜组织组织胞胞浆浆菌菌落菌菌落为为棉絮状，棉絮状，镜检镜检可可见细长见细长有有隔菌隔菌丝丝，菌，菌丝侧丝侧面或面或孢孢子柄上子柄上长长有特殊的有特殊的圆圆形大形大分生分生孢孢子，厚壁，四周有棘突，排列如子，厚壁，四周有棘突，排列如齿轮齿轮。血。血液液标标本油本油镜镜下下镜检镜检可可见见在中性粒在中性粒细细胞或胞或单单核核细细胞胞中有卵中有卵圆圆形或形或圆圆形的酵母形的酵母细细胞胞102精选课件第五节 卡氏肺孢菌卡氏肺卡氏肺孢孢菌可寄生于多种菌可寄生于多种动动物，也可寄生于健康物，也可寄生于健康人体。广泛分布于自然界，如土壤和水等。卡氏人体。广泛分布于自然界，如土壤和水等。卡氏肺肺孢孢菌病的菌病的传传播途径主要是空气播途径主要是空气传传播，在健康人播，在健康人体内，多体内，多为为无症状的无症状的隐隐性感染。当宿主免疫力下性感染。当宿主免疫力下降，如降，如长长期使用免疫抑制期使用免疫抑制剂剂、器官移植、器官移植、肿肿瘤、瘤、艾滋病等，潜伏的卡氏肺艾滋病等，潜伏的卡氏肺孢孢菌在病人肺内大量繁菌在病人肺内大量繁殖殖扩扩散，使肺泡上皮散，使肺泡上皮细细胞受胞受损损，导导致致间质间质性性浆细浆细胞肺炎，又称卡氏肺胞肺炎，又称卡氏肺孢孢菌性肺炎（菌性肺炎（PCPPCP）。）。103精选课件直接显微镜检查从病人痰液、支气管肺泡灌洗液或肺活检组织中检查PC是确诊本病的重要依据。常用的染色方法有姬姆萨染色、果氏环六亚甲基四胺银染色（GMS）和亚甲胺蓝染色。可以检出包囊和滋养体两种形态。抗原检测，核酸检测，抗体检测等。104精选课件毛霉目真菌毛霉目真菌 毛霉目真菌属于接合菌门、接合菌纲，有7个科，主要是毛霉科。本病是一种发病急，进展快、病死率极高的系统性条件致病性真菌感染。105精选课件毛毛霉霉目目真真菌菌毛毛霉霉科科根霉属根霉属犁犁头头霉属霉属毛霉属毛霉属根毛霉属根毛霉属少根根霉少根根霉米根霉米根霉n n毛霉目真菌有无隔菌毛霉目真菌有无隔菌毛霉目真菌有无隔菌毛霉目真菌有无隔菌丝丝丝丝，在一些，在一些，在一些，在一些陈陈陈陈旧培养基中偶旧培养基中偶旧培养基中偶旧培养基中偶见见见见有隔菌有隔菌有隔菌有隔菌丝丝丝丝。形。形。形。形态态态态可可可可见见见见匍匐匍匐匍匐匍匐丝丝丝丝和假根。和假根。和假根。和假根。106精选课件107精选课件毛霉目真菌微生物毛霉目真菌微生物检验检验 直接镜检临床标本 20%KOH 湿片，直接镜检可见折光性强的粗大菌丝，偶见孢子囊及孢子囊梗。分离培养 临床标本接种于不含放线菌酮的麦芽糖培养基、马铃薯培养基及沙氏琼脂培养基，25或37培养。药物敏感试验，抗体检测。鉴定 根据毛霉、根霉与梨头霉的形态特点。108精选课件毛霉毛霉 根霉根霉 梨梨头头霉霉 109精选课件马内菲青霉 二相性，在自然界中以菌丝形式存在，在组织中则可形成小圆形到椭圆形细胞。马内菲青霉可引起马内菲青霉病，引起广泛性播散性感染，主要侵犯人的网状内皮系统。110精选课件马马内菲青霉微生物内菲青霉微生物检验检验 标标本直接本直接检验检验 ：取骨髓涂片、皮肤印片或淋巴取骨髓涂片、皮肤印片或淋巴结结活活体体组织组织瑞氏染色后瑞氏染色后镜检镜检，可，可见见到典型到典型圆圆形或卵形或卵圆圆形形有明有明显显横隔的横隔的细细胞，常在巨噬胞，常在巨噬细细胞内。胞内。分离培养与分离培养与鉴鉴定：定：标标本接种沙氏培养基上，在本接种沙氏培养基上，在2525培养培养为为青霉相青霉相；3737酵母相酵母相 。抗原抗原检测检测鉴别鉴别要点：要点：马马内菲青霉的内菲青霉的孢孢子易与子易与荚荚膜膜组织组织胞胞浆浆菌菌孢孢子相混淆，但前者子相混淆，但前者孢孢子常有横隔，从不出芽。子常有横隔，从不出芽。111精选课件镰镰 刀刀 菌菌 镰刀菌生态适应性强，广泛分布于自然界土壤、植物的地上及地下部分或植物碎片，甚至可存在于沙漠及北极地区。镰刀菌引起人类感染尤其是在免疫缺陷病人正逐年增多，其发病率和病死率仅次于白色假丝酵母菌和曲霉感染。114精选课件镰镰刀菌微生物刀菌微生物检验检验标本直接检验：可见分支、分隔的菌丝，与曲霉的镜下特征相似。培养鉴定：常有培养基有燕麦培养基、马铃薯葡萄糖琼脂、石竹叶琼脂、合成琼脂、KCl培养基和土壤琼脂。PDA 和OA可用以观察菌落形态和色泽，产孢有时较少。KCl培养基可用以观察分生孢子链的形成。土壤培养基有利于快速形成厚壁孢子。115精选课件假丝酵母菌隐球菌曲霉菌组织胞浆菌卡氏肺孢菌毛霉目真菌马内菲青霉菌镰刀菌深深部部感感染染真真菌菌荚膜：24um，芽生孢子杜波：1215um，芽生孢子形态及菌落特点116精选课件棕棕红红色蜡色蜡样样、褶、褶皱皱，白色白色绒绒毛毛样样菌菌丝丝，菌，菌落周落周围围培养基背面培养基背面变变为红为红葡萄酒色葡萄酒色脑脑回回样皱样皱褶，浅灰褐色、褶，浅灰褐色、湿湿润润的菌落的菌落117精选课件复复复复习习习习作作作作业题业题业题业题1.如何如何鉴别鉴别白假白假丝丝酵母菌和酵母菌和热带热带假假丝丝酵母菌酵母菌2.对对人致病的二相型真菌有哪些？人致病的二相型真菌有哪些？3.简简述墨汁述墨汁负负染色的原理及染色的原理及应应用。用。118精选课件