【医学ppt课件】-生物中心主要项目

生物中心主要项目吕成伟吕成伟南方医院生物治疗中心南方医院生物治疗中心生物中心主要项目吕成伟1 1应用项目n nCIK (Cytokine induced killer)n nTIL (Tumor infiltrating lymphocytes)n nDC/CTL (Dendritic cell/Cytotoxic T lymphcytes)n n放免靶向治疗（131I I-McAb）n n肿瘤标志物应用项目CIK (Cytokine induced kil2 2CIKn n1976年Morgan等发现小鼠脾细胞培养上清能刺激胸腺细胞生长的T细胞生长因子；1979年统一命名为IL-2。n n1980年发现IL-2 能诱导自身LAK。n n1983年Taniguchi等从Jurkat白血病细胞成功克隆人IL-2的cDNA，基因工程IL-2问世，推动了基础和临床应用。n n肿瘤、免疫缺陷、感染等IL-2CIK1976年Morgan等发现小鼠脾细胞培养上清能刺激胸3 3【医学ppt课件】-生物中心主要项目4 4【医学ppt课件】-生物中心主要项目5 5CIKCIKn n19801980年年NIHNIH癌症研究所癌症研究所RosenbergRosenberg等首先发现等首先发现LAKLAK细胞细胞(lymphokine activated killer cell):(lymphokine activated killer cell):1.纤维肉瘤纤维肉瘤C57BL/6C57BL/6小鼠脾细胞小鼠脾细胞 IL-2 IL-2 纤维肉瘤细胞（自身正常细胞）纤维肉瘤细胞（自身正常细胞）2.PBL +IL-2 2.PBL +IL-2 自体或同种异体瘤细胞自体或同种异体瘤细胞(MHC(MHC 非限制性）非限制性）3.LAK3.LAK存在于大颗粒淋巴细胞存在于大颗粒淋巴细胞（large granular large granular lymphocytes,LGL)lymphocytes,LGL)中，不同于中，不同于T T、B B细胞和单核细胞细胞和单核细胞LAK细胞CIK1980年NIH癌症研究所Rosenberg等首先发现6 6CIKCIKn n多种细胞因子均可增强LAK活性：GM-CSF、TNF、IL-1、3、5、6 IFN-显著增强LAK活性 Anti-CD3 McAb联合IL-2不仅能比单用IL-2更显著增加LAK数量也使单个和总体LAK细胞活性显著增加。（100400倍/620倍）CIK多种细胞因子均可增强LAK活性：7 7CIKn nLAK体外长期培养:(临床)3 35 5天天 2 23 3周周 数量数量10010010001000倍倍 联合联合PHAPHA或或ConA ConA 数量比单用数量比单用IL-2IL-2高高5 51010倍。初始培养倍。初始培养4848小时内加入小时内加入10ng/ml Anti-CD310ng/ml Anti-CD3扩增更明显，扩增更明显，2121天达天达10001000倍。加入倍。加入IFN-IFN-单个单个LAKLAK细胞抗瘤活性提高几十倍。细胞抗瘤活性提高几十倍。LAK LAK CIK(Cytokine induced CIK(Cytokine induced killer)killer)CIKLAK体外长期培养:(临床)8 8CIKn nCIK的杀瘤机制n n 直接杀瘤：直接杀瘤：识别结合相识别结合相 效靶复合体效靶复合体 杀伤相杀伤相 细胞毒颗粒；穿孔素；细胞毒颗粒；穿孔素；Ca+Ca+裂解相裂解相 间接杀瘤间接杀瘤：IL-2 IL-2、TNF-TNF-、IFN-IFN-、IL-1IL-1等的细胞毒等的细胞毒/抑制抑制作用；相互诱生、协同增强作用；相互诱生、协同增强NKNK、MM杀伤肿瘤细胞。杀伤肿瘤细胞。CIKCIK的杀瘤机制9 9CIKCIKn n只有联合应用只有联合应用IL-2/LAKIL-2/LAK细胞才具有显著的体内细胞才具有显著的体内抗肿瘤作用。抗肿瘤作用。n n19841984年年1111月，月，FDAFDA批准批准NCINCI进行临床试验。进行临床试验。n n19851985年年RosenbergRosenberg等首次报道联合等首次报道联合IL-2/LAKIL-2/LAK细胞治疗细胞治疗2525例各种常规疗法治疗无效的晚期肿例各种常规疗法治疗无效的晚期肿瘤患者的临床疗效。瘤患者的临床疗效。n nIL-2/LAKIL-2/LAK细胞引起世人瞩目，并在基础和临床细胞引起世人瞩目，并在基础和临床得到推广和改进。得到推广和改进。n n肾细胞癌、黑色素瘤、结直肠癌、非何杰金氏淋肾细胞癌、黑色素瘤、结直肠癌、非何杰金氏淋巴瘤等疗效显著。巴瘤等疗效显著。应用CIK只有联合应用IL-2/LAK细胞才具有显著的体内抗肿瘤1010CIKCIK制备流程CIKCIK制备流程1111TILTILn n19861986年发现经年发现经IL-2IL-2诱导的诱导的TILTIL体内抗瘤效果强于体内抗瘤效果强于LAK 50LAK 50100100倍；并可减少倍；并可减少IL-2IL-2用量及副作用。用量及副作用。n n肿瘤间质，肿瘤间质，T T淋巴细胞，淋巴细胞，CD8CD8为主，非活化，拌为主，非活化，拌用少量用少量IL-2IL-2即可发挥明显抗瘤效果，副作用轻。即可发挥明显抗瘤效果，副作用轻。n n新新TILTIL中中T T细胞对细胞对PHAPHA呈低增殖反应，少分泌呈低增殖反应，少分泌IL-2IL-2、IFN-IFN-等。等。n nAnti-CD3 McAbAnti-CD3 McAb联合联合IL-2IL-2不仅能比单用不仅能比单用IL-2IL-2更显更显著增加著增加TILTIL数量也使单个和总体数量也使单个和总体TILTIL细胞活性显著细胞活性显著增加。可减少增加。可减少IL-2IL-2用量。用量。简介TIL1986年发现经IL-2诱导的TIL体内抗瘤效果强于L1212TILTILn nTIL体外抗瘤作用 1.1.经经IL-2IL-2激活后激活后TILTIL才具有显著杀伤活性（才具有显著杀伤活性（7 74040天）。天）。2.TIL 2.TIL杀伤活性具有一定特异性。杀伤活性具有一定特异性。3.IL-4 3.IL-4、TNFTNF、IFN-IFN-等可显著增强等可显著增强TILTIL杀伤作杀伤作用。用。4.4.肿瘤抗原可增强肿瘤抗原可增强TILTIL杀伤活性。（照射肿瘤杀伤活性。（照射肿瘤细胞）细胞）TILTIL体外抗瘤作用1313TIL TIL n nTIL的体内抗肿瘤作用 1.TIL/IL-21.TIL/IL-2输注具有显著的体内抗肿瘤转输注具有显著的体内抗肿瘤转移效果。移效果。2.TIL 2.TIL体内抗肿瘤转移作用有一定特异性。体内抗肿瘤转移作用有一定特异性。3.IFN-3.IFN-可增强可增强TIL/IL-2TIL/IL-2体内抗肿瘤转移体内抗肿瘤转移作用。作用。4.4.环磷酰胺增强环磷酰胺增强TILTIL体内抗肿瘤作用。体内抗肿瘤作用。TIL TIL的体内抗肿瘤作用1414CIK/TILn nCIK/TIL制备流程 无菌条件下抽取外周血无菌条件下抽取外周血/胸腹水（以肝素抗凝）胸腹水（以肝素抗凝）密度梯度离心密度梯度离心 1500-2000rpm 1500-2000rpm，15-2015-20分钟分钟 分离获取外周血单个核细胞（分离获取外周血单个核细胞（PBMNC)PBMNC)600-800rpm 600-800rpm，5 5分钟分钟 纯化纯化PBMNC(PBMNC(去除去除FicollFicoll、血小板及杂质）、血小板及杂质）计数，计数，110e6110e6个细胞个细胞/ml/ml置培养瓶置培养瓶3737，5%CO2 5%CO2，100100湿度湿度 诱导活化诱导活化(IL-2,Human-serum,Anti-CD3,r-IFN,PHA)(IL-2,Human-serum,Anti-CD3,r-IFN,PHA)第第5 57 7天天 高效扩增（高效扩增（IL-2,Human-serum,Anti-CD3)IL-2,Human-serum,Anti-CD3)第第10-1410-14天天 收集收集CIK/TILCIK/TIL，全身，全身/局部回输局部回输CIK/TILCIK/TIL制备流程1515*CIK/TIL临床应用n nCIK每疗程不低于100亿细胞；首次抽血前一周或抽血后即可输注IL-2；首次抽血后79天第一次回输CIK细胞。每周抽血一次，回输细胞两次；56周一疗程，全程拌IL-2治疗。n nTIL细胞经胸腔或腹腔穿刺收集胸腹水200ml以上，分离淋巴细胞培养，721天内分13次胸腹腔输注完毕。同时同时配合配合IL-2 20-50wuIL-2 20-50wu局部应用，局部应用，2-3/2-3/周至积周至积液完全吸收液完全吸收(或疗程结束或疗程结束)。CIK/TIL*CIK/TIL临床应用CIK每疗程不低于100亿细胞；首次1616DC细胞n n1973年Steinman和Cohn等从小鼠脾组织分离n n共同特征：树突状，膜树突状，膜MHC-MHC-、CD80CD80、CD86CD86，活，活化初始化初始T T细胞，激活细胞，激活CD8CTLCD8CTL、CD4ThCD4Th细胞；非成熟细胞；非成熟DCDC摄取、加工、处理抗原，成熟摄取、加工、处理抗原，成熟DCDC递呈抗原能力是递呈抗原能力是B B、MM的的10010001001000倍，体内唯一专职抗原提呈细胞；倍，体内唯一专职抗原提呈细胞；MHCMHC限限制性。制性。n n来源：骨髓、外周血、脐带血。骨髓、外周血、脐带血。DC/CTLDC细胞1973年Steinman和Cohn等从小鼠脾组织分1717肿瘤的发生与DC的功能缺陷通过对肿瘤浸润性的研究发现：肿瘤细胞能自发分泌免疫抑制性细胞因子免疫抑制性细胞因子、-、-10等作用于，使其表面分子的表达发生变化，无法无法提呈外来抗原或提呈抗原的能力低下提呈外来抗原或提呈抗原的能力低下，导致了肿瘤的免疫逃逸。肿瘤的发生与DC的功能缺陷通过对肿瘤浸润性的研究发现：肿1818DC治疗的理论依据n n将机体的提取出来，经体外体外各种免疫调节剂的激活激活，再用各种形式抗原修饰抗原修饰(肿瘤抗原肽、细胞性抗原、或等)，然后回输回输体内，激活细胞,产生强大的抗肿瘤免疫反应，从而解决因功能缺陷造成的肿瘤免疫逃逸。DC治疗的理论依据将机体的提取出来，经体外各种免疫调节剂1919【医学ppt课件】-生物中心主要项目2020【医学ppt课件】-生物中心主要项目2121【医学ppt课件】-生物中心主要项目2222【医学ppt课件】-生物中心主要项目2323【医学ppt课件】-生物中心主要项目2424【医学ppt课件】-生物中心主要项目2525DC/CTL制备DC/CTL制备2626【医学ppt课件】-生物中心主要项目2727DC/CTL/IL-2的实施(1)微量法：抽血200ml/次，2周一次，共4次为一疗程，全程用IL-2 50-200wu 30-40次，或/和加IFN-100wu 20-30次。(2)机分法：分离5000ml外周血收集单个核细胞。DC/CTL/IL-2的实施(1)微量法：抽血200ml/2828放射免疫治疗的定义放射免疫治疗的定义 以以以以单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体为载体，以为载体，以为载体，以为载体，以放射性核素放射性核素放射性核素放射性核素为弹为弹为弹为弹头，通过抗体特异性结合抗原表达阳性的头，通过抗体特异性结合抗原表达阳性的头，通过抗体特异性结合抗原表达阳性的头，通过抗体特异性结合抗原表达阳性的肿瘤肿瘤肿瘤肿瘤细胞细胞细胞细胞，将产生，将产生，将产生，将产生 或或或或 射线的放射性核素射线的放射性核素射线的放射性核素射线的放射性核素靶向靶向靶向靶向到肿到肿到肿到肿瘤细胞，并与肿瘤细胞特异性结合，实现对肿瘤细胞，并与肿瘤细胞特异性结合，实现对肿瘤细胞，并与肿瘤细胞特异性结合，实现对肿瘤细胞，并与肿瘤细胞特异性结合，实现对肿瘤的近距离瘤的近距离瘤的近距离瘤的近距离内照射治疗内照射治疗内照射治疗内照射治疗。放射免疫治疗的定义2929单克隆抗体靶向治疗两种作用方式：1.直接作用：通过抗体依赖性细胞介导细胞毒通过抗体依赖性细胞介导细胞毒（ADCCADCC）、补体依赖细胞毒（）、补体依赖细胞毒（CDCCDC）的细胞溶解）的细胞溶解效应杀伤肿瘤细胞。效应杀伤肿瘤细胞。2.间接作用：单抗作为靶向载体，偶联细胞毒药单抗作为靶向载体，偶联细胞毒药物（放射性核素、化疗药物、毒素等）。靶向肿瘤物（放射性核素、化疗药物、毒素等）。靶向肿瘤后利用细胞毒杀伤肿瘤细胞。后利用细胞毒杀伤肿瘤细胞。单克隆抗体靶向治疗两种作用方式：直接作用：通过抗体依赖性细胞3030【医学ppt课件】-生物中心主要项目3131 放射免疫治疗是利用放射性核素的辐射对肿瘤细胞进行杀伤作用。它必须是发射能量较大的射线、粒子，最好是不发射射线对病房的防护较方便。符合上述条件的放射性核素不多。放射免疫治疗是利用放射性核素的辐射对肿瘤细胞进行3232 90Y、186Re、188Re辐射能量大是放射免疫治疗的首选放射性核素，但国内来源较困难，标记技术也较复杂。131I为能量较小，也存在辐射给辐射防护带来不便，但其供应十分方便，因此，是国内放手免疫治疗最常用的核素 90Y、186Re、188Re辐射能量大是放射免疫3333当前低度NHL治疗最有希望的治疗药物之一是能识别肿瘤相关抗原的单克隆抗体，.如今，最有希望的免疫连接物是放射性标记的抗体。2003年Press OW在Seminars in Oncology:当前低度NHL治疗最有希望的治疗药物之一是能识别肿瘤相关抗原3434【医学ppt课件】-生物中心主要项目3535IODO-GEN碘化标记碘化标记IODO-GENIODO-GEN是固相氧化剂，其碘化标记是固相氧化剂，其碘化标记法于法于19781978年由年由FrakerFraker首先报道放射性碘首先报道放射性碘溶液和蛋白质同时放入已用溶液和蛋白质同时放入已用IODO-GENIODO-GEN包被的容器中，包被的容器中，I I被氧化并立即取代蛋被氧化并立即取代蛋白质上酪氨酸残基中的白质上酪氨酸残基中的H H而成为放射性碘而成为放射性碘化标记蛋白。经过数分钟后将标记物从容化标记蛋白。经过数分钟后将标记物从容器中吸出即终止反应。经凝胶柱过滤后即器中吸出即终止反应。经凝胶柱过滤后即可得到碘化标记物纯品。可得到碘化标记物纯品。IODO-GEN碘化标记IODO-GEN是固相氧化剂，其碘化3636【医学ppt课件】-生物中心主要项目3737放射免疫治疗淋巴瘤的优势放射免疫治疗淋巴瘤的优势n n恶性淋巴瘤具有良好的放射敏感性n n治疗效果不受机体免疫功能影响n n射线 穿透力强，可到达肿瘤深部n n疗效可靠，毒副作用少放射免疫治疗淋巴瘤的优势恶性淋巴瘤具有良好的放射敏感性3838病例选择条件n n所有患者均有预后不良因素：如晚期、高危、初所有患者均有预后不良因素：如晚期、高危、初治未达缓解、复发及全身多处淋巴结肿大；治未达缓解、复发及全身多处淋巴结肿大；n n无重要脏器功能不全；无重要脏器功能不全；n nKarnofskyKarnofsky评分评分6060分；分；n n年龄年龄7070岁；岁；n n外周血常规白细胞（外周血常规白细胞（WBCWBC）3.0103.0109 9/L/L，血小，血小板（板（PLTPLT）801080109 9/L/L，血红蛋白，血红蛋白（HGBHGB）90g/L90g/L；n n病理免疫组化提示病理免疫组化提示CD20(+)CD20(+)。病例选择条件所有患者均有预后不良因素：如晚期、高危、初治未达3939治疗模式治疗模式治疗模式 CD20 CD20单抗单抗 131131I I 非清髓剂量非清髓剂量 100-200mg 50-100mci 100-200mg 50-100mci清髓剂量清髓剂量 200-400mg 150-300mci 200-400mg 150-300mci治疗模式治疗模式 CD20单抗 4040131I-抗CD20抗体应用方案n n标记方法：固相氧化剂标记法（标记方法：固相氧化剂标记法（IODOGENIODOGEN）。）。n n甲状腺保护：用药前一周至用药后一周连续口服甲状腺保护：用药前一周至用药后一周连续口服1%1%碘化碘化钾溶液钾溶液1020ml/1020ml/次，每日三次。次，每日三次。n n标记率及用法：每次剂量抗标记率及用法：每次剂量抗CD20CD20抗体抗体 100mg 100mg标标131131I I 50100 mCi50100 mCi，1/31/3局部病灶直接注射，局部病灶直接注射，2/32/3静脉全身使静脉全身使用。每用。每2323个月一次，个月一次，2323次为一疗程。次为一疗程。n n预防过敏反应：用药前预防过敏反应：用药前30603060分钟苯海拉明分钟苯海拉明40mg40mg肌注。肌注。131I-抗CD20抗体应用方案标记方法：固相氧化剂标记法（4141131I-抗CD20抗体的毒副反应和处理n n畏寒发热畏寒发热 普威、非那根普威、非那根n n局部红肿局部红肿 不处理或普威、消炎痛不处理或普威、消炎痛n n重度骨髓抑制重度骨髓抑制 (WBC1.0109/L (WBC1.0109/L，PLT25109/LPLT25109/L，HGB65g/L)HGB65g/L)住无菌层流住无菌层流病房，皮下注射病房，皮下注射G-CSFG-CSF，补充血小板、红细胞，补充血小板、红细胞，预防感染，防止出血预防感染，防止出血131I-抗CD20抗体的毒副反应和处理畏寒发热 4242放射免疫治疗其它肿瘤放射免疫治疗其它肿瘤n n食管癌、胃癌、结直肠癌、卵巢食管癌、胃癌、结直肠癌、卵巢癌肝癌、前列腺癌、乳腺癌等癌肝癌、前列腺癌、乳腺癌等放射免疫治疗其它肿瘤食管癌、胃癌、结直肠癌、卵巢癌肝癌、前列4343感谢！4444