食品微生物检验的采样方案取样方案有课件

项目十一 微生物检验的工作流程与质量控制1一、微生物检验的工作流程一、微生物检验的工作流程检验前准备检验前准备样品的采集及样品的送检样品的采集及样品的送检样品的预处理方法样品的预处理方法样品的检验样品的检验检验结果的报告检验结果的报告一、微生物检验的工作流程检验前准备2（一）（一）.检验前的准备检验前的准备1.准备好所需的各种仪器。准备好所需的各种仪器。2.按技术要求将各种玻璃仪器进行清洗、烘干、包扎、灭菌，冷按技术要求将各种玻璃仪器进行清洗、烘干、包扎、灭菌，冷却后送无菌室备用。却后送无菌室备用。3.准备好所用的各种试剂，做好普通营养琼脂或其他选择必培养准备好所用的各种试剂，做好普通营养琼脂或其他选择必培养基。基。4.做好无菌室或超净工作台的灭菌工作，提前做好无菌室或超净工作台的灭菌工作，提前1h灭菌灭菌3060min.5.工作衣、鞋、帽、等灭菌后备用。工作衣、鞋、帽、等灭菌后备用。6.工作人员进入无菌室后，实验没有完成之前不得随便出入无菌工作人员进入无菌室后，实验没有完成之前不得随便出入无菌室。室。（一）.检验前的准备准备好所需的各种仪器。3（二）（二）.样品的采集与送检样品的采集与送检（二）.样品的采集与送检41、样品的采集、样品的采集（1）样品的种类）样品的种类 大样大样，就是一整批；中样中样，是从样品中各部分取得的混合样品，一般为200g；小样小样，也称检样，做分析用的，一般为25g。采样用具：采样用具：如探子、铲子、匙、采样器、试管、广口如探子、铲子、匙、采样器、试管、广口瓶、剪子和开罐器等，必须是灭菌的。瓶、剪子和开罐器等，必须是灭菌的。1、样品的采集（1）样品的种类 大样，就是一整批；采样用具5（2）采样的步骤）采样的步骤采样前调查采样前调查现场观察现场观察确定采样方案确定采样方案采样采样 样品封存样品封存 开具采样证明开具采样证明（2）采样的步骤采样前调查现场观察确定采样方案采样 6（3）采样的要求）采样的要求1、严格遵守样品采集的操作规程。、严格遵守样品采集的操作规程。2、所采样品必须具有代表性。、所采样品必须具有代表性。3、采样操作要防止污染，防止变质、损坏、采样操作要防止污染，防止变质、损坏、丢失。丢失。4、不得加入防腐剂、固定剂等。、不得加入防腐剂、固定剂等。5、样品采集和现场测定必须有二人以上参、样品采集和现场测定必须有二人以上参加加。（3）采样的要求1、严格遵守样品采集的操作规程。7（4）食品微生物检验的采样方案）食品微生物检验的采样方案（4）食品微生物检验的采样方案8取样方案有：取样方案有：ICMSF取样方案取样方案(国际食品微生物国际食品微生物学法规委员会学法规委员会)美国美国FDA的取样方案；的取样方案；世界粮农组织（世界粮农组织（FAO）取样方案；）取样方案；我国的随机取样方案。我国的随机取样方案。取样方案有：ICMSF取样方案(国际食品微生物学法规委员会)9食品微生物检验的采样方案取样方案有课件10（5）采样标签的填写）采样标签的填写标签内容主要：标签内容主要：编号、样品名称、生产单位、生产编号、样品名称、生产单位、生产日期、产品批号、产品数量、存放条日期、产品批号、产品数量、存放条件、采样时间、采样人姓名，现场情件、采样时间、采样人姓名，现场情况。况。（5）采样标签的填写标签内容主要：11采样单采样单 样品编号：样品编号：产品名称（商品名）产品名称（商品名）_规格型号规格型号_注册商标注册商标_生产生产厂家厂家_通讯地址通讯地址_邮政编码邮政编码 受检地点受检地点_通讯地址通讯地址_邮政编码邮政编码 采样地点采样地点_采样日期采样日期_采样基数采样基数_生产日期生产日期_批号批号_产品依据标准产品依据标准_有效成分及含有效成分及含量量_检验检验目地目地_检测项目检测项目_ 采样人仔细阅读以下句子，然后签字我认真负责地填写了该样品采样单，承认以上填写采样人仔细阅读以下句子，然后签字我认真负责地填写了该样品采样单，承认以上填写的合法性，被该采样单位所证实的样品系按照采样方法取得的，该样品具有代表性、真实性和公的合法性，被该采样单位所证实的样品系按照采样方法取得的，该样品具有代表性、真实性和公正性。正性。代表单位（章）代表单位（章）代表单位（章）代表单位（章）签字签字 签字签字 日期年月日日期年月日 日期日期 年月日年月日 备注备注 采样单122.样品的送检要求样品的送检要求 1）、要快速运送：不要超过）、要快速运送：不要超过3小时；小时；2）、若路途遥远，可在）、若路途遥远，可在15低温下运送；低温下运送；3）、要注意防污染、防散漏、防变质；）、要注意防污染、防散漏、防变质；4）、要填写检验申请单。）、要填写检验申请单。2.样品的送检要求 1）、要快速运送：不要超过3小时；13（三）样品的预处理方法（三）样品的预处理方法1、液体样品、液体样品2、固体样品、固体样品（三）样品的预处理方法1、液体样品141、液体样品的处理、液体样品的处理其开口处用其开口处用75%酒精棉擦拭消毒，混匀后酒精棉擦拭消毒，混匀后直接吸取样品进行稀释和混匀。直接吸取样品进行稀释和混匀。1、液体样品的处理其开口处用75%酒精棉擦拭消毒，混匀后直接152、固体样品的处理、固体样品的处理1)捣碎均质法捣碎均质法2)剪碎振摇法剪碎振摇法3)研磨法研磨法4)拍击均质法（胃蠕动均质法）拍击均质法（胃蠕动均质法）5)棉拭取样法棉拭取样法2、固体样品的处理1)捣碎均质法161）.捣碎均质法捣碎均质法将中样将中样(100g)剪碎或搅拌混匀，剪碎或搅拌混匀，从中取从中取25g放入带放入带225mL稀释液的稀释液的无菌均质杯中，无菌均质杯中，800010000r/min均质均质12min即可。即可。1）.捣碎均质法将中样(100g)剪碎或搅拌混匀，从中取2172）.剪碎振摇法剪碎振摇法将中样将中样(100g)剪碎或搅拌混匀，从剪碎或搅拌混匀，从中取中取25g检样进一步剪碎，放入带检样进一步剪碎，放入带225mL稀释液和直径稀释液和直径5mm左右玻璃左右玻璃珠的稀释瓶中，盖紧瓶盖，用力快速珠的稀释瓶中，盖紧瓶盖，用力快速振摇振摇50次，振幅要大于次，振幅要大于40cm。2）.剪碎振摇法将中样(100g)剪碎或搅拌混匀，从中取2183）.研磨法研磨法 将中样将中样(100g)剪碎或搅拌混匀，从剪碎或搅拌混匀，从中取中取25g检样放入无菌乳钵中充分研磨后，检样放入无菌乳钵中充分研磨后，再放入带有再放入带有225mL无菌稀释液的稀释瓶中，无菌稀释液的稀释瓶中，盖紧盖后充分摇匀。盖紧盖后充分摇匀。3）.研磨法 将中样(100g)剪碎或搅拌混194）.拍击均质法（胃蠕动均质法）拍击均质法（胃蠕动均质法）4）.拍击均质法（胃蠕动均质法）205)棉拭取样法棉拭取样法将经灭菌的内径为将经灭菌的内径为5cm5cm的灭菌规格板的灭菌规格板放在被检物体表面，用放在被检物体表面，用一浸有灭菌生理盐水的一浸有灭菌生理盐水的棉签在其内涂抹，取总棉签在其内涂抹，取总面积为面积为50cm2,然后剪去然后剪去手接触部分棉棒，将棉手接触部分棉棒，将棉签放入含签放入含10mL灭菌生理灭菌生理盐水的采样管内送检。盐水的采样管内送检。5)棉拭取样法将经灭菌的内径为5cm5cm的灭菌规格板放在21(四四).样品的检验样品的检验1、收样：收到样品后逐一核对验收，登记编号；立即将样品放在冰箱或冰盒中，并积极做立即将样品放在冰箱或冰盒中，并积极做好准备工作。好准备工作。(四).样品的检验1、收样：222、检验、检验 1）、选择检验方法：）、选择检验方法：国内：国家标准国内：国家标准国外：国外：国际标准：如国际标准：如FAO标准、标准、WHO标准；标准；每个进口国的标准：如美国每个进口国的标准：如美国FDA标准、日本标准、日本厚生省标准、欧共体标准等厚生省标准、欧共体标准等2、检验 232）、检验要求）、检验要求（1 1）按照标准操作规程进行检验操作，边工作边做原始记录。）按照标准操作规程进行检验操作，边工作边做原始记录。（2 2）检测结束，连同结果一起交技术人员复核。复核过程中）检测结束，连同结果一起交技术人员复核。复核过程中发现错误，复核人应通知检测人更正，然后重新复核。发现错误，复核人应通知检测人更正，然后重新复核。（3 3）检测人和复核人在原始记录上签名，并编写）检测人和复核人在原始记录上签名，并编写“检测报告检测报告底稿底稿”。（4 4）所有检测项目完成后，检测人员将原始记录、样品卡、）所有检测项目完成后，检测人员将原始记录、样品卡、报告书底稿交科主任作全面校核。报告书底稿交科主任作全面校核。2）、检验要求（1）按照标准操作规程进行检验操作，边工作边做243、样品的保留、样品的保留阴性样品：在发出报告可及时处理；阳性样品：在发出报告以后3天才能处理样品；进口样品的阳性样品：要保留6个月才能处理。3、样品的保留25（五）、检验结果的报告（五）、检验结果的报告检验完后，检验人员应及时填写报告单，检验完后，检验人员应及时填写报告单，签名后，送主管人员核实签字，加盖单位签名后，送主管人员核实签字，加盖单位印章，以示生效，立即交食品卫生监督人印章，以示生效，立即交食品卫生监督人员处理。员处理。（五）、检验结果的报告检验完后，检验人员应及时填写报告单，签26二、微生物检测的质量控制（一）实验室要求（一）实验室要求 房屋要求：足够宽敞、通风、有良好的照明。房屋要求：足够宽敞、通风、有良好的照明。房屋内墙面及地等应采用易于清洁的材料。房屋内墙面及地等应采用易于清洁的材料。房间的设置应根据工作内容加以分用，设立专房间的设置应根据工作内容加以分用，设立专用房间。用房间。二、微生物检测的质量控制（一）实验室要求 27微生物学检验室要求布局合理，操作区域微生物学检验室要求布局合理，操作区域与办公区域分开。与办公区域分开。洗涤室、培养室、消毒间、无菌室应分开。洗涤室、培养室、消毒间、无菌室应分开。无菌室要设有套间或缓冲间。微生物检验无菌室要设有套间或缓冲间。微生物检验室应备有自动或脚踩式洗手池和固定的消室应备有自动或脚踩式洗手池和固定的消毒设施。毒设施。微生物学检验室要求布局合理，操作区域与办公区域分开。28专用房间的温湿度控制与记录（样品存放室）专用房间的温湿度控制与记录（样品存放室）特殊环境的微生物指标控制与记录（无菌室等）特殊环境的微生物指标控制与记录（无菌室等）专用工作室的标准操作规程和定期的检测校准专用工作室的标准操作规程和定期的检测校准程序。（洁净室等）程序。（洁净室等）特殊环境中的专用设施质量控制应符合有关要特殊环境中的专用设施质量控制应符合有关要求（净化工作台）求（净化工作台）净化室、净化工作区域、洁净环境按国家及部净化室、净化工作区域、洁净环境按国家及部颁标准进行检测。颁标准进行检测。空气洁净度指标：检测频率一次空气洁净度指标：检测频率一次/月；空气细菌月；空气细菌检测（沉降法）。检测（沉降法）。专用房间的温湿度控制与记录（样品存放室）29（二）人员（二）人员个人的技能、经验个人的技能、经验 微生物学的专业知识水平微生物学的专业知识水平 严谨的工作态度严谨的工作态度（二）人员30培养箱的温差要求，一般显示值与实测值培养箱的温差要求，一般显示值与实测值相差不大于相差不大于1，箱体内各点温差（内部，箱体内各点温差（内部的温度均衡性）以及温度波动同样不大于的温度均衡性）以及温度波动同样不大于1。高压灭菌锅压力表校准周期一般在半年。高压灭菌锅压力表校准周期一般在半年。培养箱的温差要求，一般显示值与实测值相差不大于1，箱体内31净化工作台的控制净化工作台的控制 水平流净化工作台工作区域，要求洁净度水平流净化工作台工作区域，要求洁净度为为100级。空气沉降级。空气沉降30min，细菌数，细菌数1个个/皿。垂直流净化工作台，细菌数皿。垂直流净化工作台，细菌数0.49个个/皿皿.净化工作台运行检查频次：净化工作台运行检查频次：1次次/月，采月，采用细菌沉降检测。用细菌沉降检测。净化工作台高效过滤膜一般为一年更换一净化工作台高效过滤膜一般为一年更换一次，并同时进行粒子与细菌沉降检测。次，并同时进行粒子与细菌沉降检测。净化工作台的控制 32干燥灭菌箱校准周期一般为一年。干燥灭菌箱校准周期一般为一年。天平的管理天平的管理 天平放置要求：无振动、无气流影响及水天平放置要求：无振动、无气流影响及水平台面上。平台面上。天平要有使用记录。天平要有使用记录。天平作为计量仪器是列入国家强制检定的天平作为计量仪器是列入国家强制检定的范围，一般范围，一般1次次/年年进行检定。进行检定。干燥灭菌箱校准周期一般为一年。33培养基和试剂的购买，要有供货商的三证培养基和试剂的购买，要有供货商的三证每一批新制或新购的培养基，使用前均须每一批新制或新购的培养基，使用前均须取标准菌株试验取标准菌株试验.培养基的试验结果需要加以记录，项目包培养基的试验结果需要加以记录，项目包括试验日期、试验结果以及实验者的签名括试验日期、试验结果以及实验者的签名等。等。每批配好的培养基每批配好的培养基须进行无菌行无菌试验 培养基和试剂的购买，要有供货商的三证34练一练洁净室的通风形式应为洁净室的通风形式应为洁净室的吊顶和隔墙应采用洁净室的吊顶和隔墙应采用洁净室的地面应采用洁净室的地面应采用 处理处理无菌室等特殊环境应对无菌室等特殊环境应对 指标进行控指标进行控制并记录制并记录样品保存室、培养室，应每天对样品保存室、培养室，应每天对进行监控并记录。进行监控并记录。封闭过滤除菌封闭过滤除菌彩钢板彩钢板环氧树脂自流平环氧树脂自流平微生物微生物温度湿度温度湿度练一练洁净室的通风形式应为封闭过滤除菌彩钢板环氧树脂自流平微35判断对错培养箱的温差要求，一般显示值与实测值培养箱的温差要求，一般显示值与实测值相差不大于相差不大于2.净化工作台高效过滤膜一般为一年更换一净化工作台高效过滤膜一般为一年更换一次，并同时进行粒子与细菌沉降检测。次，并同时进行粒子与细菌沉降检测。高压灭菌锅压力表校准周期一般为高压灭菌锅压力表校准周期一般为1年年.天平作为计量仪器是一般天平作为计量仪器是一般2次次/年进行检定，年进行检定，不必强制检定。不必强制检定。温度计应每半年进行一次校准和检定温度计应每半年进行一次校准和检定判断对错培养箱的温差要求，一般显示值与实测值相差不大于236