细胞融合单克隆抗体ppt课件

动物组织块动物组织块细胞悬液细胞悬液细胞悬液细胞悬液原代培养（细胞贴壁；接触抑制）原代培养（细胞贴壁；接触抑制）传代培养传代培养胰蛋白酶处理分散成单个细胞胰蛋白酶处理分散成单个细胞幼龄动物的器官组织；动物胚胎幼龄动物的器官组织；动物胚胎加入培养液加入培养液用胰蛋白酶用胰蛋白酶等处理贴壁等处理贴壁细胞；细胞；分瓶分瓶继续培养。继续培养。适宜条件适宜条件动物组织块细胞悬液原代培养（细胞贴壁；接触抑制）传代培养胰蛋11010代细胞代细胞5050代细胞代细胞传代传代培养培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系遗传物遗传物质已改质已改变变遗传物质遗传物质未改变未改变动物胚胎或幼龄动物的组织、器官动物胚胎或幼龄动物的组织、器官配置细胞悬液配置细胞悬液胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理转入培养瓶转入培养瓶单个细胞单个细胞加培养液稀释加培养液稀释分分 瓶瓶原代原代培养培养原代培养特点：原代培养特点：细细胞贴壁、接触抑制胞贴壁、接触抑制动物细胞动物细胞培养的原培养的原理：理：细胞细胞增殖增殖10代细胞50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系遗传物质已改2体体细细胞胞核核移移植植的的过过程程体细胞核移植的过程3供体细胞供体细胞（供核供核）细胞细胞培养培养体细胞体细胞 卵巢卵巢卵母细卵母细胞胞（MM中期中期：供质）供质）去去核核去去核卵核卵母细胞母细胞注入注入细胞细胞融合融合重组重组细胞细胞构建构建重重组胚胎组胚胎胚胎胚胎移植移植代孕代孕母体母体生出与供体奶生出与供体奶牛牛遗传遗传物质物质基基本本相同相同的犊牛的犊牛体细胞核移植的过程体细胞核移植的过程共分成两大阶段：共分成两大阶段：核移植核移植和和胚胎移植胚胎移植体细胞核移植的原理：体细胞核移植的原理：动动物细胞核具有全能性物细胞核具有全能性供体细胞细胞培养体细胞 卵巢卵母细胞（M中期：供质）去核去4学学 习习 目目 标标动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体单克隆抗体制备和应用制备和应用学 习 目 标动物细胞融合单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体5白菜白菜紫甘蓝紫甘蓝白菜白菜-甘蓝甘蓝白菜紫甘蓝白菜-甘蓝6(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图植物体细胞杂交过程示意图(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图7动物细胞可以融合吗？8A A细胞细胞B B细胞细胞人工诱导人工诱导1.1.概念：概念：杂交细胞杂交细胞 动物细胞动物细胞融合（也称融合（也称细胞杂交细胞杂交）：是指：是指两个或多个动两个或多个动物细胞物细胞结合形成一个结合形成一个单核细胞单核细胞的过程。的过程。一、动物细胞融合一、动物细胞融合融合后形成的具有原来融合后形成的具有原来两两个或多个细胞遗传信息个或多个细胞遗传信息的的单核细胞单核细胞称为称为杂交细胞。杂交细胞。A细胞B细胞人工诱导1.概念：杂交细胞 9正在融合的正在融合的淋巴细胞与淋巴细胞与骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 正在融合鸡正在融合鸡血细胞血细胞正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞 正在融合鸡血细胞102.2.动物细胞动物细胞融合过程融合过程灭活病毒灭活病毒（常用仙（常用仙台病毒）台病毒）、（聚乙、（聚乙二醇）二醇）PEGPEG、电激、电激等等诱导的手段？诱导的手段？2.动物细胞融合过程灭活病毒（常用仙台病毒）、（聚乙二醇）P11思考讨论：思考讨论：为什么细胞融合过程中使为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？用的病毒需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上因为灭活的病毒能使细胞膜上的的蛋白质分子和脂质分子重新排布，蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合细胞膜打开，细胞发生融合。不灭活的话会不灭活的话会感染细胞，而不感染细胞，而不能诱导细胞融合。能诱导细胞融合。思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗12细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活病毒、灭活病毒、PEGPEG、电激、电激等等融合后的细胞进行融合后的细胞进行有有丝分裂，丝分裂，形成两个完形成两个完整的整的杂交细胞杂交细胞诱导的手段？诱导的手段？融合后细胞的类型？融合后细胞的类型？AB杂交杂交细胞遗传物细胞遗传物质有什么特点？质有什么特点？三种三种 AA、AB、BB含两种生物的遗传物质含两种生物的遗传物质原理？原理？细胞膜的流动性灭活病毒、PEG、电激等融合后的细胞进行有丝分133.3.动物动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术细胞融合技术突破了有性杂交的突破了有性杂交的局限，局限，使使远缘杂交成为可能。远缘杂交成为可能。最主要用途：最主要用途：利用杂交瘤技术，利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。制备单克隆抗体。3.动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术突破了有性杂交的14主要用于制备单克主要用于制备单克隆抗体隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振动、电激）动、电激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁去除细胞壁后诱后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞全能性细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）15抗体：抗体：能够与抗原发生能够与抗原发生特特异性异性结合的结合的免疫球蛋白免疫球蛋白。二、单克隆抗体二、单克隆抗体B B淋巴细胞淋巴细胞效应效应B B淋巴细淋巴细胞胞（浆细胞）（浆细胞）记忆记忆B B淋淋巴细胞巴细胞分化分化能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细浆细胞（即效应胞（即效应B B细胞）。细胞）。强调：强调：效应效应B B淋淋巴细胞是能够产巴细胞是能够产生抗体的生抗体的B B淋巴淋巴细胞，细胞，下文将其下文将其简称为简称为B B淋巴细淋巴细胞胞抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。温故知新二、单克16抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体该法制备抗体的缺点：的缺点：单克隆抗体！单克隆抗体！产量产量低、纯度低、低、纯度低、特异性差、特异性差、灵敏度低。灵敏度低。抗体的传统生产方法抗原 反复注射动物从动物的血清中分离抗体该17单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念单克隆单克隆抗体：抗体：单个单个B B淋巴细胞淋巴细胞增殖增殖形成的细胞群所产生的形成的细胞群所产生的化学性质单一、特异性强、化学性质单一、特异性强、灵敏度高灵敏度高的抗体。的抗体。单克隆抗体的概念单克隆抗体：单个B淋巴细胞增殖形成的细胞群所182.2.哪种细胞是可以无限增殖的？哪种细胞是可以无限增殖的？3.3.有什么方法能使有什么方法能使B B淋巴细胞产生抗体淋巴细胞产生抗体的能力的能力和和肿瘤细胞无限增殖能力肿瘤细胞无限增殖能力同时具备同时具备呢？呢？1.B1.B淋巴细胞在淋巴细胞在体外培养液体外培养液中能否生长增殖？中能否生长增殖？（一）单克隆抗体的制备（一）单克隆抗体的制备B B淋巴细胞在体外不能无限增殖。淋巴细胞在体外不能无限增殖。肿瘤细胞肿瘤细胞B B淋巴细胞与肿瘤细胞融合淋巴细胞与肿瘤细胞融合2.哪种细胞是可以无限增殖的？3.有什么方法能使B淋巴细胞产19科科勒勒米米尔尔斯斯坦坦荣获荣获19841984年诺贝尔生理学或医学奖年诺贝尔生理学或医学奖如果把一种如果把一种B B淋巴细胞淋巴细胞与能在体外与能在体外大量增殖的大量增殖的骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞进行融合，进行融合，所得到的所得到的融合细胞既能大量增殖，融合细胞既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体。又能产生足够数量的特定抗体。科勒米尔斯坦荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖如果把一种B淋20单单克克隆隆抗抗体体的的制制备备过过程程单克隆抗体的制备过程21骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞小鼠小鼠一筛选一筛选已免疫的已免疫的B淋巴细胞淋巴细胞（选择性培养基）（选择性培养基）细胞融合细胞融合多种多种杂交细胞杂交细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞注射抗原注射抗原聚乙二醇、聚乙二醇、灭活的病毒、灭活的病毒、电激等电激等BBBB、B B瘤瘤、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）既能产生既能产生抗体又能抗体又能大量增殖大量增殖 二筛选二筛选二筛选：能产二筛选：能产特异性特异性抗体抗体的杂交瘤细胞的杂交瘤细胞（克隆化培养、（克隆化培养、抗体检测）抗体检测）骨髓瘤细胞小鼠一筛选已免疫的B淋巴细胞（选择性培养基）细胞22阳性孔阳性孔方法方法抗原抗原-抗体杂交法抗体杂交法在单克隆抗体制备过程中，在单克隆抗体制备过程中，两次筛选两次筛选的原理和方法是不相同的。的原理和方法是不相同的。阳性孔方法抗原-抗体杂交法在单克隆抗体制备过程中，两次筛23骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞免疫小鼠免疫小鼠单克隆抗体单克隆抗体筛选筛选筛选筛选体内培养体内培养体外培养体外培养已免疫的已免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞（选择培养基）（选择培养基）（克隆化培养、抗体检测）（克隆化培养、抗体检测）细胞融合细胞融合杂交细胞杂交细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞注射抗原注射抗原能产特异性抗体能产特异性抗体的杂交瘤细胞的杂交瘤细胞单克隆抗体的特点：单克隆抗体的特点：特特异性强、灵敏度高、产异性强、灵敏度高、产量大、纯度高量大、纯度高腹腹水水培培养养液液体内优点：体内优点：不需特不需特定的培养基；不需定的培养基；不需严格外界环境条件严格外界环境条件骨髓瘤细胞免疫小鼠单克隆抗体筛选筛选体内培养体外培养已免疫的24骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞免疫小鼠免疫小鼠单克隆抗体单克隆抗体筛选筛选筛选筛选体内培养体内培养体外培养体外培养已免疫的已免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞（选择培养基）（选择培养基）（克隆化培养、抗体检测）（克隆化培养、抗体检测）细胞融合细胞融合杂交细胞杂交细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞注射抗原注射抗原能产特异性抗体能产特异性抗体的杂交瘤细胞的杂交瘤细胞动物细胞动物细胞融合技术融合技术动物细胞动物细胞培养技术培养技术骨髓瘤细胞免疫小鼠单克隆抗体筛选筛选体内培养体外培养已免疫的25制备单克隆抗体制备单克隆抗体 利用利用 产生特异性抗体的产生特异性抗体的功能。功能。利用利用 无限增殖的特性。无限增殖的特性。利用利用 技术将两种细胞融技术将两种细胞融合获得合获得杂交瘤细胞杂交瘤细胞。利用利用 技术技术大量大量培养杂培养杂交瘤细胞。交瘤细胞。效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞动物细胞融合动物细胞融合动物细胞培养动物细胞培养制备单克隆抗体 利用 产生特异性抗体的26杂交杂交细胞细胞灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞经免疫经免疫的小鼠的小鼠提取提取杂交瘤杂交瘤细胞细胞第一次筛选第一次筛选用特定的用特定的选选择性培养基择性培养基第二次筛选第二次筛选能产生能产生特定特定抗体、培养条件抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体杂交细胞灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞经免疫的小鼠273.3.为何要进行两次筛选？为何要进行两次筛选？4.4.如何进行第如何进行第2 2次筛选？次筛选？培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。细胞。专一抗体检验呈阳性。专一抗体检验呈阳性。第第1 1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第第2 2次筛次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。1.1.本过程利用了哪些原理？本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2.2.为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅不仅具有具有B B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，的本领，因而可以获得大量单克隆抗体因而可以获得大量单克隆抗体3.为何要进行两次筛选？4.如何进行第2次筛选？培养在多孔培28（1 1）作为诊断试剂）作为诊断试剂最广泛用途最广泛用途 准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速（如（如同位素标记同位素标记单克隆抗体，可单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等疾病）诊断肿瘤、心血管畸形等疾病）（二）单克隆抗体的应用（二）单克隆抗体的应用（1）作为诊断试剂最广泛用途（如同位素标记单克隆抗体，可29细胞融合单克隆抗体ppt课件30 用抗用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体技术人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体技术做成的做成的“早早孕诊断试剂盒早早孕诊断试剂盒”，灵敏度高，在妊娠第，灵敏度高，在妊娠第8 8天就可以做出诊断，比原来的诊断方法提前了天就可以做出诊断，比原来的诊断方法提前了1010天天左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90%90%以上以上。用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体技术做成的“早早孕31（2 2）用于治疗疾病和运载药物）用于治疗疾病和运载药物 主要用于治疗主要用于治疗癌症治疗癌症治疗，单克隆，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形抗体作为载体，运载抗癌药物，形成成“生物导弹生物导弹”，准确杀伤癌变细，准确杀伤癌变细胞。这样胞。这样既不损伤正常细胞，又减既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。少了用药剂量。（2）用于治疗疾病和运载药物 主要用于治疗癌症治疗，单克隆32“生物导弹生物导弹”抗癌细胞的单克隆抗体抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素放射性同位素+化学药物化学药物或细胞毒素或细胞毒素单克隆抗体单克隆抗体导向，导向，药物药物为弹头为弹头利用单克利用单克隆抗体的隆抗体的特异性特异性“生物导弹”抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或33两个过程两个过程动物细胞融合过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个一个诱导诱导细胞融合的新方法细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个一个新细胞新细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个一个优势优势单克隆抗体单克隆抗体特异性强、特异性强、灵敏度高，并可大量制备的优势灵敏度高，并可大量制备的优势两个过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导34 基因型为基因型为AaAa与基因型为与基因型为BbBb的动物的动物体细胞混合，用灭活的仙台病毒处理体细胞混合，用灭活的仙台病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型的细后，不可能获得下列哪种基因型的细胞胞 ()()AAAaa BAaBb CAabb DBBbb 基因型为Aa与基因型为Bb的动物体细胞混合，用灭活的36【例【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是（）A.离心离心 B.灭活的病毒灭活的病毒 C.电刺激电刺激 D.振动振动【例【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（）A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.能无限增殖能无限增殖 C.可形成新个体可形成新个体 D.培养过程会贴壁培养过程会贴壁【例【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（】动物细胞融合的作用中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新物种培育新物种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞 BBA【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是（）B37【例【例4 4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴淋巴细胞细胞B.B.不经过免疫的不经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.不经过免疫的不经过免疫的B B淋淋巴细胞巴细胞【例【例5 5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （）A.A.B B淋巴细胞淋巴细胞 B BT T淋巴细胞淋巴细胞 C C骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D D杂交瘤细胞杂交瘤细胞AD【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，38【例【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中列实验步骤中错误错误的是（的是（）A A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B B淋巴淋巴细胞细胞B B用纤维素酶处理用纤维素酶处理B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B B淋巴淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D D筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体细胞群，培养后提取单克隆抗体B【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误39谢谢40(1)(1)若若A A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B B细胞是取自小鼠细胞是取自小鼠体内的体内的 细胞，细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射前，应给小鼠注射_类物质。类物质。（2）d过程过程是一个是一个_过程，该过程的过程，该过程的进行常用进行常用_或或_的诱导。的诱导。(3)(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种种类型的类型的C C细胞，因此需用细胞，因此需用_培养基筛选出培养基筛选出D D细胞细胞用于培养，用于培养，D D细胞的名称是细胞的名称是 ，其特点是，其特点是_。效应效应B 抗原抗原 细胞融合细胞融合 聚乙二醇聚乙二醇 灭活的病毒灭活的病毒 选择性选择性 3既能无限增殖又能产生特异性抗体既能无限增殖又能产生特异性抗体 杂交瘤细胞杂交瘤细胞(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的 41(4)(4)在培养时通过在培养时通过_分裂方式大量繁殖。分裂方式大量繁殖。D D细细胞体外培养需要注意的条件是（要求答胞体外培养需要注意的条件是（要求答5 5项）项）_。（5 5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是与常规抗体相比，其特点是_。特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 有丝有丝有丝有丝无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pHpH；适宜的气体环境适宜的气体环境 (4)在培养时通过_分裂方式大量繁殖。D细胞体421515、（1）单克隆抗体是指）单克隆抗体是指 。（2 2）制备单克隆抗体的步骤：）制备单克隆抗体的步骤：将将_注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少胞，其中至少1 1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。将步骤将步骤获得的获得的B B淋巴细胞与步骤淋巴细胞与步骤培养的骨髓瘤细胞培养的骨髓瘤细胞在在_的诱导下融合。的诱导下融合。将诱导后产生的多种细胞，放在将诱导后产生的多种细胞，放在_培养基的多孔培养基的多孔培养板上培养，筛选。培养板上培养，筛选。这样获得的杂交瘤细胞既具有这样获得的杂交瘤细胞既具有B B淋巴细胞淋巴细胞_的能力，又具有的能力，又具有_的本领。的本领。检测和分离带有抗检测和分离带有抗X X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。一个细胞进行培养。将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。隆抗体。化学性质单一，特异性强的抗体化学性质单一，特异性强的抗体 抗原抗原 聚乙二醇聚乙二醇选择性选择性 无限增殖无限增殖 产生专一抗体产生专一抗体15、（1）单克隆抗体是指 43（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：体外培养法，可获得体外培养法，可获得10 g/mL的抗体；的抗体；动物体内动物体内诱生法可获得诱生法可获得520mmg/mL的抗体。你选择的方法及原的抗体。你选择的方法及原因是因是 。（4 4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的为它是用小鼠的_细胞制备的，其化学本质是细胞制备的，其化学本质是_，应用于人体，会作为，应用于人体，会作为 产生产生 ，解决这个问题的方法是，解决这个问题的方法是_。大量生产选大量生产选，小规模生产选，小规模生产选效应效应B蛋白质蛋白质异物异物免疫反应免疫反应采用人的效应采用人的效应B细胞制备细胞制备（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：（4）用本法制备出4415、右图为某同学根据杂交瘤技术、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗）该方案能达到预期效果吗？。原因是。原因是_。（2）图中）图中为为 过程，过程，常用常用 作为诱导剂。该细作为诱导剂。该细胞继承了胞继承了_ ，因此不仅能分泌，因此不仅能分泌_，还有，还有 本领。本领。不能不能 没有将抗原注入小鼠体内，无法获得没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生专一抗体的产生专一抗体的B淋巴细胞淋巴细胞 细胞融合细胞融合 灭活病毒灭活病毒 双亲细胞的遗传物质双亲细胞的遗传物质 特异性抗体特异性抗体 大量增殖大量增殖制备单克隆抗体制备单克隆抗体（3）该方案的目的是）该方案的目的是_。15、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌45细胞融合单克隆抗体ppt课件46例题例题例题例题1 1 1 1：1975197519751975年，英国剑桥大学分子生物学年，英国剑桥大学分子生物学年，英国剑桥大学分子生物学年，英国剑桥大学分子生物学实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细胞，实现在体外大量生产抗体的目胞，实现在体外大量生产抗体的目胞，实现在体外大量生产抗体的目胞，实现在体外大量生产抗体的目的。实验过程如图所示。的。实验过程如图所示。的。实验过程如图所示。的。实验过程如图所示。(1)(1)(1)(1)淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能“融合融合融合融合”在一起，说明细胞膜在一起，说明细胞膜在一起，说明细胞膜在一起，说明细胞膜 。(2)(2)(2)(2)单克隆抗体的准确定义应为单克隆抗体的准确定义应为单克隆抗体的准确定义应为单克隆抗体的准确定义应为 ()()()()A A A A一类特殊抗体一类特殊抗体一类特殊抗体一类特殊抗体 B B B B无性繁殖系无性繁殖系无性繁殖系无性繁殖系 C C C C单一抗体细胞的无性繁殖第产生的抗体单一抗体细胞的无性繁殖第产生的抗体单一抗体细胞的无性繁殖第产生的抗体单一抗体细胞的无性繁殖第产生的抗体 D D D D单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体(3)(3)(3)(3)杂交瘤细胞繁殖进行的是杂交瘤细胞繁殖进行的是杂交瘤细胞繁殖进行的是杂交瘤细胞繁殖进行的是_分裂，其遗传性状分裂，其遗传性状分裂，其遗传性状分裂，其遗传性状_。(4)(4)(4)(4)单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原(病原体或癌变细胞等病原体或癌变细胞等病原体或癌变细胞等病原体或癌变细胞等)并并并并与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为“生物导弹生物导弹生物导弹生物导弹”这是利用了这是利用了这是利用了这是利用了 _ _ _ _ 。具有一定的流动性具有一定的流动性具有一定的流动性具有一定的流动性C C C C有丝有丝有丝有丝不变不变不变不变抗体能与抗原发生特异性结合的特点抗体能与抗原发生特异性结合的特点抗体能与抗原发生特异性结合的特点抗体能与抗原发生特异性结合的特点例题1：(1)淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞47 例题例题例题例题22（1 1）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，将抗原注射到小鼠体内，可获得将抗原注射到小鼠体内，可获得将抗原注射到小鼠体内，可获得将抗原注射到小鼠体内，可获得(多选多选多选多选)（）A AT T淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞 B B效应效应效应效应B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞 C C抗体抗体抗体抗体 D D记忆细胞记忆细胞记忆细胞记忆细胞（2 2）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，正确的是正确的是正确的是正确的是 (多选多选多选多选)（）A AB B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台 病毒或聚乙二醇诱导病毒或聚乙二醇诱导病毒或聚乙二醇诱导病毒或聚乙二醇诱导 B B融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克 隆抗体隆抗体隆抗体隆抗体 C C体外培养时，一个体外培养时，一个体外培养时，一个体外培养时，一个B B淋巴细胞可以产生一种抗体，但不淋巴细胞可以产生一种抗体，但不淋巴细胞可以产生一种抗体，但不淋巴细胞可以产生一种抗体，但不 能无限增殖能无限增殖能无限增殖能无限增殖 D D单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，优越性明显优越性明显优越性明显优越性明显 BCDBCD ACDACD 例题2 BCD ACD48已知细胞已知细胞已知细胞已知细胞合成合成合成合成DNADNA有有有有D D和和和和S S两条途径两条途径两条途径两条途径，其中，其中，其中，其中D D途径能被途径能被途径能被途径能被氨基嘌呤氨基嘌呤氨基嘌呤氨基嘌呤阻断。阻断。阻断。阻断。人淋巴细胞中有这两种人淋巴细胞中有这两种人淋巴细胞中有这两种人淋巴细胞中有这两种DNADNA的合成途径，但一般不分裂增殖。的合成途径，但一般不分裂增殖。的合成途径，但一般不分裂增殖。的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨鼠骨鼠骨鼠骨髓瘤细胞中尽管没有髓瘤细胞中尽管没有髓瘤细胞中尽管没有髓瘤细胞中尽管没有S S途径途径途径途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：（1 1）试管中除融合的杂种细胞外，还有）试管中除融合的杂种细胞外，还有）试管中除融合的杂种细胞外，还有）试管中除融合的杂种细胞外，还有 种融合细胞。种融合细胞。种融合细胞。种融合细胞。（2 2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出 杂种细胞，并说原理。杂种细胞，并说原理。杂种细胞，并说原理。杂种细胞，并说原理。方法：方法：方法：方法：。原理：原理：原理：原理：培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞加入氨基嘌呤后加入氨基嘌呤后加入氨基嘌呤后加入氨基嘌呤后,使使使使D D合成的途径阻断合成的途径阻断合成的途径阻断合成的途径阻断,所以仅所以仅所以仅所以仅D D合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不能增殖能增殖能增殖能增殖,但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的S S途径合成途径合成途径合成途径合成DNADNA而增殖而增殖而增殖而增殖已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻49B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌单克隆抗体的实验方案风杆菌单克隆抗体的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50例例3 3：B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到AC 50下列过程与细胞培养无关的是下列过程与细胞培养无关的是 （）A.A.检测有毒物质检测有毒物质 B.B.生产单克隆抗体生产单克隆抗体 C.C.筛选抗癌药物筛选抗癌药物 D.D.杂交育种杂交育种D下列过程与细胞培养无关的是 （）D51