多功能酶标仪课件.ppt

酶 标 仪 的 使 用 免 疫 球 蛋 白 的 结 构免 疫 球 蛋 白 都 是 大 分 子 的 物 质 ， 轻 链 和 重 链 ，且 具 有 抗 原 结 合 的 部 位 。 什 么 是 抗 原 ？ 凡 能 刺 激 机 体 产 生 抗 体 ， 并 能 与 抗 体 发生 特 异 性 结 合 的 物 质 称 为 抗 原 。 物 质 所 具 有的 这 种 特 性 称 为 抗 原 性 。 抗 原 的 物 质 可 以 是机 体 自 身 的 成 分 如 蛋 白 、 酶 、 多 肽 或 者 多 糖 。也 有 外 来 的 抗 原 （ 如 病 毒 、 污 染 物 ） 。 A B C D 二 、 酶 标 仪 和 多 功 能 酶 标 仪1.普 通 酶 标 仪2.多 功 能 酶 标 仪 1.普 通 酶 标 仪即 酶 联 免 疫 检 测 仪 (ELISA Reader） Bio-RadModel 5504万 元 光 源 光 电 检 测 器电 信 号 经 前 置 放 大 、 对数 放 大 、 模 数 转 换 等 滤 光 片或 单 色 器 酶 标 仪 结 构 及 原 理 光 源 ： 钨 灯滤 光 片 ： 常 用 的 波 长 范 围 ： 405nm 450nm(四 甲 基 联 苯 胺 ) 490nm(邻 苯 二 胺 ) 630nm单 色 器 ： 可 调 节 波 长 的 光 Thermo公司 全 波 长 多功 能 酶 标 仪50多 万 元 三 、 酶 标 仪 操 作 1. 注 意 事 项 2. 酶 标 板 3. 操 作 要 点 1.注 意 事 项1） 反 复 研 读 试 剂 盒 说 明 ， 熟 悉 操 作 步 骤 。2） 加 样 的 准 确 性 。 操 作 中 须 注 意 显 色 剂 和终 止 的 加 量 准 确 ， 最 好 使 用 加 样 枪 加 液以 保 证 比 色 时 吸 光 度 的 准 确 性 。 枪 头 不要 混 用 。3） 洗 涤 时 间 。 一 般 按 照 说 明 书 要 求 ， 起 码洗 涤 5次 ， 切 要 把 残 液 甩 干 。 4） 观 察 和 判 读 吸 光 度 结 果 应 在 15min 内 完成 ， 否 则 液 体 颜 色 会 减 退 。5） 待 测 生 物 样 品 要 放 在 4 冰 浴 上 。6） 显 色 液 要 现 用 现 配 ， 避 光 低 温 保 存 。7） 注 意 购 买 抗 体 的 保 存 。 2.酶 标 板 酶 标 板 材 料 可 溶 性 抗 原 或 抗 体 吸 附 于 固 相 载 体 而 成为 不 溶 形 式 ， 这 是 进 行 酶 标 记 测 定 的 基本 条 件 。 许 多 物 质 可 作 为 固 相 载 体 ， 如纤 维 素 、 交 联 右 旋 糖 苷 、 琼 脂 糖 珠 、 聚丙 烯 、 聚 苯 乙 烯 、 聚 乙 烯 及 聚 氯 乙 烯 等等 。 但 在 ELISA中 最 常 用 的 是 聚 苯 乙 烯或 聚 氯 乙 烯 微 量 反 应 板 。 由 于 微 量 反 应板 所 用 试 剂 量 少 ， 操 作 方 便 ， 适 合 于 大规 模 应 用 。 酶 标 板 材 料 国 产 聚 苯 乙 烯 微 量 反 应 板 （ 上 海 塑 料 三厂 出 品 ） 目 前 已 大 量 应 用 于 ELISA测 定 ，并 且 获 得 了 满 意 的 结 果 。 但 每 批 微 量 反应 板 对 抗 原 或 抗 体 蛋 白 质 的 吸 附 性 能 是有 显 著 差 别 的 。 实 验 证 明 ， 吸 附 效 果 似乎 与 塑 料 的 类 型 及 其 表 面 性 质 有 关 。 特别 是 塑 料 制 品 在 加 工 过 程 中 因 工 艺 不 同或 受 其 他 因 素 的 影 响 而 造 成 吸 附 性 能 的极 大 差 异 ， 甚 至 完 全 丧 失 吸 附 能 力 。 酶 标 板 鉴 定 对 每 批 制 品 在 使 用 前 ， 必 须 经 过 实 验 室鉴 定 ， 鉴 定 的 方 法 和 标 准 是 对 每 批 购 置 的微 量 反 应 板 抽 样 ， 用 检 测 试 剂 盒 进 行 试 验 ，当 显 色 并 终 止 反 应 后 ， 在 酶 标 比 色 计 中 测定 其 O.D值 。 一 般 认 为 全 板 中 每 两 孔 间 O.D值 的 误 差 不超 过 10%为 合 格 。 如 果 中 间 孔 与 四 周 孔O.D值 相 差 太 大 ， 或 者 反 应 板 的 这 一 边 与另 一 边 凹 孔 的 O.D值 相 差 大 ， 均 不 合 格 。此 外 ， 还 要 检 查 阳 性 和 阴 性 参 考 血 清 O.D值 是 否 有 明 显 差 别 。 一 般 要 求 有 10倍 左右 的 差 异 为 合 格 。 酶 标 仪 单 、 双 波 长 检 测 一 般 的 酶 标 仪 在 测 定 中 均 有 单 波 长 和 双波 长 的 模 式 ， 为 什 么 呢 ？ 酶 标 仪 是 垂 直 光 路 ， 受 被 测 样 本 液 面 是否 水 平 、 酶 标 板 透 光 性 、 孔 底 是 否 平 整等 的 影 响 较 大 。 选 择 630nm为 参 比 波 长 , 测 定 其 吸 光 度 A0;在 测 定 波 长 （ 如 490nm/450nm） 下 测 定样 本 的 吸 光 度 A,双 波 长 测 定 后 ,取 二 者 的差 值 , 测 定 结 果 的 标 准 偏 差 比 单 波 长 下 测定 的 要 小 ,实 验 误 差 小 。 在 ELISA测 定 所 使 用 的 底 物 如 邻 苯 二 胺或 四 甲 基 联 苯 胺 ， 显 色 终 止 后 ， 在 630nm处 的 吸 光 度 值 都 只 有 吸 收 峰 处（ 490nm/450nm） 吸 光 度 值 的 1%以 下 ，因 此 ， 利 用 双 波 长 检 测 ， 不 会 影 响 检 测灵 敏 度 。 一 般 酶 标 仪 比 色 应 该 首 选 双 波 长 。 酶 标 仪 的 工 作 环 境1.仪 器 应 放 置 在 无 强 磁 场 和 干 扰 电 压 的 位 置 。2.仪 器 应 放 置 在 噪 音 低 于 40分 贝 的 环 境 下 。3.为 延 缓 光 学 部 件 的 老 化 ， 应 避 免 阳 光 直 射 。4.操 作 环 境 温 度 应 在 1540 之 间 ， 环 境 湿 度 在15%85%之 间 。5.操 作 时 电 压 应 保 持 稳 定 。6.操 作 环 境 空 气 清 洁 ， 避 免 水 汽 、 烟 尘 。7.保 持 干 燥 、 干 净 、 水 平 的 工 作 台 面 ， 以 及 足 够的 操 作 空 间 。 3.Bio-Rad Model 550酶 标 仪 操 作1.接 通 电 源 ， 打 开 酶 标 仪 开 关 。2.仪 器 开 始 自 检 。 Self disgonsis in progress3.按 箭 头 光 标 到 Mode,设 置 参 数 。 当 仪 器 出现 set analysis mode 时 ， 按 enter确 定 。4.选 择 测 定 波 长 的 类 型 。 按 箭 头 光 标 到 D/S,按 select选 中 ， enter 确 定 。 光 标 出 现在 Dual/ Single， 选 择 双 波 长 ， 按 select选 中 ， enter 确 定 。 5.选 择 滤 光 波 长 ， 此 酶 标 仪 有 四 个 波 长 ： 1：405nm;2:450nm;3:490nm;4:630nm。 按 箭 头 光标 到 Filt,按 select选 中 ， enter 确 定 。 光 标 出现 在 Mes=#X Ref=# Y， 如 按 光 标 选 择 数 字 3，即 490nm的 测 定 波 长 ,enter确 定 。 再 按 Next, 到Ref,按 光 标 选 择 参 考 波 长 ， 如 选 数 字 4.即 为630nm， enter 确 定 。 6.选 择 是 否 混 合 。 按 箭 头 光 标 到 Mix,按 select选 中 ， enter 确 定 。 光 标 出 现 在 yes/ No， 如光 标 选 择 No， 按 select选 中 ,enter 确 定 ， 说 明 样品 不 混 合 。 7.返 回 原 显 示 ， set analysis 的 D/S Filt Mix,按 enter出 现 set analysis的 Mode。说 明 仪 器 已 经 到 达 测 试 状 态 。 8.推 开 测 定 盖 ， 将 酶 标 板 小 心 正 确 放 到 测 定 槽内 ， 合 住 盖 。 9.上 好 酶 标 仪 专 用 的 光 敏 打 印 纸 。 10.按 Start， 开 始 测 量 吸 光 度 ， 并 自 动 打 印 测定 结 果 。 11.测 定 完 成 后 ， 取 出 酶 标 板 ， 合 上 盖 ， 关 仪 器开 关 和 电 源 ， 盖 上 防 尘 罩 。 4.Therm o多 功 能 酶 标 仪 的 操 作 1.开 机 ， 点 击 SkanIt RE for Varioskan flash2.4.3,进 入 分 析 系 统 ； 2. 选 择 new session;name;next； 3.选 择 酶 标 板 ， 如 96孔 版 ； next； 4.选 定 文 件 夹 ； 设 定 测 定 方 法 ， 如 波 长 ； 5.连 接 仪 器 connect； 放 板 （ in） ,save;点 击excute session;开 始 读 板 ， Results,保 存 数 据 ；观 察 结 果 ， 记 录 或 保 存 ； 6.取 板 （ out） ,断 开 连 接 disconnect,关 机 。 思 考 题 普 通 酶 标 仪 测 定 时 为 什 么 选 择 双 波 长测 定 ？ ELISA法 的 原 理 是 什 么 ？ 普 通 酶 标 仪 和 紫 外 分 光 光 度 计 有 什 么区 别 ？