发酵车间消毒培训

发 酵 车 间 消 毒 培 训 一 、 消 毒 与 灭 菌消 毒 与 灭 菌 在 发 酵 工 业 中 均 广 泛 应 用 。1、 消 毒 ： 。 是 指 用 物 理 或 化 学 的 方 法 杀 死物 体 上 的 病 原 微 生 物 ， 一 般 只 能 杀 死 营 养细 胞 而 不 能 杀 死 细 菌 芽 孢 。2、 灭 菌 ： 是 指 用 物 理 或 化 学 的 方 法 杀 灭 或除 掉 传 播 媒 介 上 的 所 有 微 生 物 （ 包 括 芽孢 ） ， 使 之 达 到 无 菌 程 度 。 在 生 产 上 习 惯叫 做 消 毒 但 它 与 消 毒 是 的 严 格 意 义 上 的 区别 。 二 、 灭 菌 方 法 灭 菌 的 方 法 主 要 有 ： 干 热 灭 菌 法 、 湿 热 灭 菌法 、 化 学 药 品 灭 菌 法 、 过 滤 除 菌 法 、 过 滤 除 菌 法 。根 据 灭 菌 的 对 象 和 要 求 选 用 不 同 的 方 法 。1 干 热 灭 菌 法 干 热 灭 菌 法 是 指 在 干 燥 高 温 条 件 下 ， 将 微 生 物杀 死 。 干 热 对 微 生 物 有 氧 化 、 蛋 白 质 变 性 和 电 解质 浓 缩 引 起 中 毒 的 作 用 ， 其 中 氧 化 作 用 是 主 要 的 。干 热 灭 菌 必 须 高 温 ， 工 业 生 产 中 采 用 的 条 件 是 摄氏 160 ， 1h。 主 要 使 用 于 需 要 保 持 干 燥 的 器 械 、容 器 的 灭 菌 。 生 产 实 例 ： 在 接 种 操 作 和 镜 检 涂 片时 用 的 灼 烧 灭 菌 法 就 是 最 简 单 的 干 热 灭 菌 法 ， 在投 罐 前 的 空 消 （ 125 、 30min)也 属 于 干 热 灭 菌 ， 所 以 在 空 消 之 前 必 须 先 把 PH、 溶 氧 电 极 拔 掉 ， 否 则 会 大 大削 减 其 使 用 寿 命 。 湿 热 灭 菌 法 湿 热 灭 菌 是 借 助 蒸 汽 释 放 的 热 能 和 水 的 参 与 ，能 使 微 生 物 细 胞 中 蛋 白 质 、 酶 、 核 酸 分 子 内 部 的 化 学键 （ 特 别 是 氢 键 ） 受 破 坏 ， 特 别 是 蛋 白 质 发 生 不 可 逆的 凝 固 性 变 性 ， 使 微 生 物 死 亡 。 蒸 汽 在 冷 凝 时 释 放 出大 量 潜 热 ， 具 有 强 大 的 穿 透 力 ， 尤 其 适 用 于 大 量 培 养基 及 发 酵 设 备 的 灭 菌 。 温 热 灭 菌 与 干 热 灭 菌 相 比 具 有 以 下 特 点 ：(1)湿 热 灭 菌 时 ， 菌 体 蛋 白 质 吸 收 热 量 容 易 变 性 凝 固 ；(2)湿 热 的 穿 透 力 比 干 热 大 （ 如 表 1所 示 ）(3)蒸 汽 冷 凝 时 放 出 大 量 潜 热 ， 温 度 上 升 快 ；(4)蒸 汽 制 取 简 便 、 成 本 低 、 数 量 大 ， 适 于 工 业 生 产 。 加 热 类 别 温 度 ( ) 加 热时 间 (h) 透 过 布 层 的 温 度 ( ) 结 论20层 40层 100层干 热 130-140 4 85 72 70以 下 不 完 全 灭菌温 热 105.3 3 101 101 101 完 全 灭 菌高 温 灭 菌 也 会 给 培 养 基 带 来 一 些 不 利 影 响 ， 所 以 在 生 产 中 就 要 求我 们 在 实 消 时 一 定 要 严 格 按 工 艺 要 求 来 控 制 实 消 的 温 度 和 时 间 。超 温 超 时 对 培 养 基 的 破 坏 主 要 有 两 种 情 况 ： 一 造 成 培 养 基 成 分 相互 作 用 ； 二 造 成 热 稳 定 性 差 的 原 材 料 严 重 破 坏 。 前 者 在 降 低 培 养基 质 量 的 同 时 还 会 引 起 培 养 基 褐 变 、 沉 淀 ， 褐 变 反 应 包 括 类 黑 色素 褐 变 （ 主 要 是 氨 基 化 合 物 与 羰 基 化 合 物 在 加 热 条 件 下 生 成 棕 红色 的 色 素 ） ， 焦 糖 化 褐 变 （ 糖 在 没 有 含 氨 基 化 合 物 存 在 下 ， 加 热到 其 熔 点 逐 步 形 成 焦 糖 ） ， 糖 类 破 坏 后 易 和 有 机 氮 源 结 合 ， 产 生 氨 基 糖 ， 对 微 生 物 产 生 一 定 的 毒 性 ， 严 重 时 将 抑 制 微 生 物 的 生长 发 育 破 坏 整 个 发 酵 所 以 在 一 、 二 步 种 子 罐 时 ， 一 旦发 现 料 液 发 黑 会 发 现 其 菌 量 很 少 ， 产 糖 或 产 酸 会 大 受抑 制 甚 至 造 成 代 谢 停 滞 ， 严 重 时 不 得 不 倒 罐 。 沉 淀 主要 是 在 加 热 情 况 下 ， 培 养 基 中 的 钙 铁 离 子 等 成 分 易 与磷 酸 盐 碳 酸 盐 发 生 反 应 生 成 无 机 物 沉 淀 和 无 机 物 如 多肽 类 沉 淀 。 后 者 会 使 玉 米 浆 和 酵 母 膏 中 的 微 量 元 素 、蛋 白 质 及 糖 类 遭 到 破 坏 ， 通 常 解 决 方 案 如 下 ： 分 开灭 菌 。 对 培 养 基 中 糖 类 等 不 耐 高 温 的 成 份 与 培 养 基 其它 成 分 分 开 灭 菌 ， 冷 却 后 再 混 合 比 如 我 们 的 二 步 糖 采取 流 加 而 不 是 放 在 一 起 实 消 ； 将 培 养 基 中 的 钙 铁 等 离子 成 分 与 磷 酸 盐 分 别 灭 菌 可 以 避 免 发 生 沉 淀 反 应 低温 灭 菌 ， 低 温 灭 菌 几 乎 对 培 养 基 中 的 营 养 成 分 没 有 破坏 。 如 我 们 一 步 的 糖 。 培 养 基 在 达 到 完 全 灭 菌 时 ， 灭菌 温 度 和 灭 菌 时 间 对 维 生 素 C培 养 基 养 分 破 坏 的 比 较 ： 灭 菌 温度 (%) 110 110 115 120 130 145 150灭 菌 时间 (min) 400 36 15 4 0.5 0.08 0.01营 养 成分 破 坏率 (%) 99.3 67 50 27 8 2 1 3 化 学 药 品 灭 菌 法 一 些 化 学 药 品 易 与 微 生 物 细 胞 中 的 某 种 成 分 产 生 化 学 反 应 ， 如使 蛋 白 质 变 性 、 酶 类 失 活 ， 破 坏 细 胞 膜 透 性 而 杀 死 微 生 物 。 根 据灭 菌 对 象 不 同 有 浸 泡 、 添 加 、 擦 拭 、 喷 洒 、 气 态 熏 蒸 等 。 如 我 们车 间 环 境 消 毒 用 的 浓 度 为 1%-0.25%的 高 锰 酸 钾 溶 液 或 0.25%的 漂白 粉 ， 发 酵 罐 发 酵 至 终 点 前 加 入 0.25%的 新 洁 尔 灭 和 染 菌 后 加 入0.15%-0.17%的 甲 醛 熏 蒸 、 加 入 5%的 氢 氧 化 钠 浸 泡 ， 进 入 无 菌 室操 作 前 人 双 手 用 75 %的 酒 精 消 毒 。三 投 罐 前 的 几 点 注 意 事 项 发 酵 是 否 成 功 ， 很 大 程 度 上 决 定 于 准 备 工 作 ， 以 下 几 点 须 注 意 ：1、 清 洗 发 酵 罐 ， 特 别 要 注 意 死 角 的 洗 刷 和 与 外 界 接 触 的 零 部 位 的清 洗 ， 清 除 罐 底 上 批 料 的 堆 积 物 。2、 检 查 取 样 阀 的 密 闭 性 有 无 关 不 严 或 滑 丝 现 象 ， 罐 体 、 法 兰 、 轴封 、 移 种 阀 、 移 糖 阀 、 视 镜 等 有 无 渗 漏 、 穿 孔 、 堵 塞 、 死 角 等 情 况 ， 并 用 肥 皂 水 或 洗 衣 粉 水 严 格 试 漏 。 隔 膜 阀 更 是 要 定 期 拆检 。 3、 有 机 械 搅 拌 装 置 的 发 酵 罐 一 定 要 擦 干 轴 封 支 承 内 的 积 水 ， 气 升式 发 酵 罐 的 罐 顶 部 和 视 镜 处 要 经 常 保 持 干 燥 清 洁 。4、 检 查 冲 视 镜 管 是 否 畅 通 ， 冲 视 镜 阀 是 否 内 漏 ， 发 现 问 题 要 彻 底处 理 。5、 检 查 罐 上 的 仪 表 指 针 的 灵 敏 度 ， 是 否 归 零 显 示 有 无 偏 差 。6、 检 查 与 罐 上 相 连 接 的 螺 丝 是 否 有 脱 丝 现 象 ， 破 旧 的 及 时 换 新四 消 毒 过 程 中 的 注 意 事 项 1、 首 先 要 结 合 配 料 工 共 同 确 认 本 批 罐 所 用 的 原 料 为 合 格 品 ， 发 现有 结 块 、 变 质 的 原 料 拒 绝 使 用 。 2、 在 用 泵 向 罐 中 打 配 制 好 的 培 养 基 时 要 注 意 保 持 稍 开 些进 气 ， 让 料 翻 腾 ， 以 防 （ 前 期 ） 培 养 基 浓 度 过 大 沉 淀 粘附 在 罐 底 。3、 打 完 料 后 首 先 调 至 适 宜 的 PH， 再 确 认 一 下 所 有 的 培 养基 都 已 加 入 后 封 住 罐 口 ， 开 始 从 进 气 口 、 放 料 口 、 取 样口 等 分 路 进 入 蒸 汽 。 各 路 保 持 均 衡 进 汽 ， 防 止 短 路 和 堵 塞 ， 排 气 要 畅 通 ， 排 汽 量 不 宜 过 大 ， 以 节 约蒸 汽 。4、 在 实 消 过 程 中 要 保 持 压 力 的 稳 定 ， 不 宜 突 然 卸 压 升 压以 防 造 成 大 量 泡 沫 冒 顶 或 逃 料 。5、 在 实 消 控 制 时 原 则 上 以 温 度 为 准 ， 压 力 为 辅 。但 是 在 保 压 时 可 能 出 现 压 力 表 与 温 度 计 不 对 应 的情 况 ， 在 不 能 确 定 到 底 是 温 度 计 还 是 压 力 表 失灵 时 ， 当 压 力 表 显 示 压 力 大 于 等 于 0.1Mpa,而 温 度 不 到 121 时 ， 以 温 度 计 为 准 ； 反 之 ， 则 以 压 力 表 为 准 ，总 之 要 确 保 压 力 与 温 度 都 达 到 灭 菌 要 求 。6、 如 遇 蒸 汽 压 力 突 然 升 高 ， 罐 温 超 过 规 定 ， 可 适 当 缩 短灭 菌 时 间 ； 如 遇 蒸 汽 压 力 突 然 下 跌 ， 一 时 上 不 来 ，温 度 下 降 到 规 定 范 围 以 下 ， 可 适 当 延 长 灭 菌 时 间 ，以 确 保 灭 菌 彻 底 。 严 防 高 温 高 压 闷 罐 ， 否 则 容 易造 成 培 养 基 成 分 破 坏 和 PH值 升 高 。7、 在 实 消 结 束 降 温 时 在 确 定 空 气 过 滤 器 的 压 力 大 于 罐 压时 ， 可 以 先 打 开 空 气 进 气 阀 ， 再 开 冷 却 水 阀 以 防 外 界 空气 倒 吸 进 去 。8、 在 降 温 过 程 中 严 防 大 开 排 气 阀 使 罐 压 几 乎 跌 零 ， 特 别是 种 子 罐 装 料 系 数 较 大 ， 这 样 做 会 使 料 液 翻 腾 剧 烈 产 生大 量 的 泡 沫 ， 易 出 现 冒 顶 或 逃 料 。9、 在 消 移 种 管 道 时 要 确 保 整 个 管 道 打 气 畅 通 ， 严 防 堵 塞 或 排 气 不 畅 。 在 消 好 后 ， 通 入 无 菌 空 气 （ 即 给 管 道 降 温 又能 使 管 道 内 保 持 正 压 ） 。10、 移 种 结 束 后 要 把 发 酵 罐 调 至 正 常 培 养 状 态 并 交 给 看 罐 工 ， 打 扫完 现 场 卫 生 后 方 可 离 开 。五 、 染 菌 原 因 分 析 发 酵 工 业 自 从 采 用 纯 种 培 养 以 后 ， 产 率 有 了 很 大 提 高 ， 然 而 防止 染 菌 的 要 求 也 更 高 了 。 染 菌 是 发 酵 工 业 的 致 命 伤 ， 轻 者 影响 产 率 、 提 取 收 率 、 产 品 质 量 和 三 肇 废 治 理 ， 严 重 者 造成 倒 罐 ， 浪 费 大 量 原 材 料 ， 造 成 严 重 经 济 损 失 ， 而 且 扰乱 生 产 秩 序 ， 破 坏 生 产 计 划 。在 发 酵 染 菌 之 后 ， 必 须 分 析 染 菌 原 因 ， 总 结 发 酵 染 菌 的 经验 教 训 ， 把 发 酵 染 菌 消 灭 在 发 生 之 前 ， 防 患 于 未 然 ， 是积 极 制 服 发 酵 染 菌 的 最 重 要 措 施 。（ 一 ） 不 同 染 菌 时 间 对 发 酵 的 影 响1、 种 子 培 养 期 染 菌 种 子 培 养 主 要 是 生 长 繁 殖 菌 体 ， 菌 体 浓 度 低 ，培 养 基 营 养 丰 富 ， 比 较 容 易 染 菌 ， 带 进 发 酵 罐 中危 害 极 大 ， 应 严 格 控 制 种 子 污 染 。 当 发 现 种 子 染菌 均 应 灭 菌 后 倒 入 地 沟 ， 并 对 种 子 罐 、 管 道 进 行检 查 和 彻 底 灭 菌 。2、 发 酵 前 期 染 菌 发 酵 前 期 主 要 是 菌 体 生 长 繁 殖 ， 代 谢 产 物 较 少 ， 这 个时 期 容 易 染 菌 ， 一 旦 污 染 杂 菌 会 迅 速 繁 殖 ， 与 生 产 菌 争夺 营 养 成 分 和 氧 分 ， 严 重 干 扰 生 产 菌 的 生 长 繁 殖 和 产 物的 生 成 ， 要 特 别 防 止 发 酵 前 期 染 菌 。 紧 急 处 理 措 施 ：如 果 污 染 危 害 较 大 的 杂 菌 不 能 继 续 运 转 ， 必 须 重新 灭 菌 。 重 灭 前 可 适 当 放 出 部 分 发 酵 液 ， 并 补 入适 量 的 培 养 基 特 别 是 氮 源 使 消 后 的 培 养 基 符 合 发酵 要 求 ， 低 灭 后 调 节 好 PH后 重 新 移 种 或 倒 种 。 如 果 污 染 的 杂 菌 无 大 的 影 响 ， 可 以 继 续 运 转 ， 但 要 密 切 注意 发 酵 过 程 的 代 谢 情 况 和 杂 菌 的 变 化 ， 必 要 时 可 适 当 降低 罐 温 、 空 气 流 量 、 和 控 制 补 料 量 进 行 发 酵 。3、 发 酵 中 期 染 菌发 酵 中 期 染 菌 将 严 重 干 扰 生 产 菌 的 代 谢 ， 影 响 产 物 的 生 成 。有 些 杂 菌 繁 殖 后 产 生 酸 性 或 碱 性 物 质 ， 使 PH值 异常 变 化 加 碱 突 增 或 骤 减 ， 糖 、 氮 消 耗 迅 速 ， 菌 体自 溶 ， 发 酵 液 发 粘 或 浑 浊 ， 产 生 大 量 泡 沫 ， 代 谢产 物 的 积 累 迅 速 减 少 或 停 止 或 下 降 ， 有 的 发 酵 液发 臭 。 发 酵 中 期 染 菌 ， 由 于 营 养 成 分 大 量 消 耗 ，一 般 挽 救 处 理 困 难 ， 危 害 性 很 大 常 用 的 方 法 有 ：降 低 罐 温 ， 控 制 残 糖 量 ， 降 低 空 气 流 量 或 冷 置 待放 。 对 于 这 种 罐 批 在 核 算 提 取 成 本 和 一 定 滤 速（ 一 般 不 低 于 5ml/5min)时 放 罐 ， 否 则 难 以 过 滤 ， 增 大提 取 工 作 量 甚 至 无 法 过 滤 而 放 弃 。 如 果 中 期 染 的 某 些 杂 菌 不 太 严 重 情 况 ， 可 以 采 取 补 加 抑 菌 剂 的 办 法控 制 杂 菌 的 生 长 繁 殖 ， 如 二 步 发 酵 染 酵 母 菌 可 加4-5.6kg的 硫 酸 铜 抑 止 酵 母 生 长 ， 革 兰 氏 阳 性 菌对 青 霉 素 和 磺 胺 类 抗 生 素 敏 感 而 阴 性 菌 则 不 敏 感 ，革 兰 氏 阴 性 菌 对 链 霉 素 、 氯 霉 素 和 四 环 素 等 敏 感而 阳 性 菌 则 不 敏 感 。 霉 菌 发 酵 中 染 细 菌 可 加 入 适量 的 青 霉 素 来 杀 灭 细 菌 。4、 发 酵 后 期 染 菌 发 酵 后 期 产 物 积 累 较 多 ， 糖 等 营 养 物 质 接 近 耗 尽 ， 如 果染 菌 不 太 多 ， 可 继 续 进 行 发 酵 ； 如 污 染 严 重 ， 破 坏 性较 大 ， 可 以 采 取 提 前 放 罐 。 （ 二 ） 不 同 染 菌 规 模 的 原 因 分 析1、 当 发 酵 出 现 连 续 染 菌 或 大 面 积 染 菌 ， 一 般 是 公 用 系 统 有问 题 ， 特 别 是 空 气 系 统 。 总 空 过 滤 器 失 效 可 效 率 下降 ， 新 装 的 空 过 要 避 免 因 为 介 质 移 位 或 翻 动 而 造成 空 气 走 短 路 。 接 种 和 中 间 补 糖 设 备 系 统 有 渗 漏 和 死 角 ， 也 会造 成 大 面 积 染 菌 因 此 要 按 时 检 查 维 修 相 关 设 备 。2、 部 分 发 酵 罐 染 菌 ， 发 生 在 前 期 可 能 是 灭 菌 不 彻 底 或 种 子罐 带 菌 所 致 ， 同 时 也 与 公 用 接 种 设 备 系 统 有 关 ； 染 菌 发生 在 中 后 期 ， 一 般 与 补 料 、 加 碱 有 关 。 3、 个 别 罐 连 续 染 菌 时 要 检 查 该 罐 设 备 的 各 个 部 件 ， 查 找有 无 渗 漏 和 死 角 ， 如 降 温 盘 管 穿 孔 是 造 成 染 菌 的 多 见 原因 之 一 。 个 别 罐 批 偶 尔 染 菌 ， 原 因 比 较 复 杂 ， 要 针 对 具体 情 况 ， 视 染 菌 时 间 和 染 菌 类 型 ， 从 操 作 到 设 备 作 具 体分 析 。 （ 三 ） 从 染 菌 类 别 上 分 析 原 因1、 染 革 兰 氏 阳 性 杆 菌 、 酵 母 菌 等 其 它 杂 菌 多 是 由 空 气 系 统中 带 入 而 造 成 污 染 也 有 可 能 是 种 子 带 菌2、 染 革 兰 氏 阴 性 杆 菌 、 特 别 是 球 菌 大 多 数 因 设 备 渗 漏 所 致 ，带 菌 的 冷 却 水 或 污 水 ， 从 冷 却 盘 管 、 连 接 法 兰 、 衬 里 焊缝 中 渗 漏 进 入 发 酵 罐 培 养 基 中 。3、 染 耐 热 的 芽 孢 杆 菌 ， 可 能 是 培 养 基 或 设 备 灭 菌 不 彻 底 但并 不 是 绝 对 的 ， 空 气 带 菌 也 常 引 起 染 芽 孢 杆 菌 ；4、 染 霉 菌 ， 一 般 是 无 菌 室 灭 菌 不 彻 底 或 操 作 问 题六 、 染 菌 的 途 径 和 防 治（ 一 ） 种 子 带 菌 及 其 防 治种 子 带 菌 的 原 因 ：1、 培 养 基 及 用 具 灭 菌 不 彻 底菌 种 培 养 基 及 用 具 灭 菌 均 在 灭 菌 锅 中 进 行 ， 造 成 灭 菌 不 彻底 主 要 是 灭 菌 时 锅 内 空 气 排 放 不 完 全 ， 造 成 假 压 ， 使 灭 菌 时 温 度 还 达 不 到 要 求 。 2、 菌 种 在 移 种 过 程 中 受 污 染菌 种 的 移 接 工 作 是 在 无 菌 室 中 ， 按 无 菌 操 作 进 行 的 。 当 菌种 移 接 操 作 不 当 或 管 理 不 严 ， 就 可 能 引 起 污 染 。3、 菌 种 在 培 养 过 程 或 保 藏 过 程 中 受 污 染菌 种 在 培 养 过 程 和 保 藏 过 程 中 ， 由 于 外 界 空 气 进 入 ，也 使 杂 菌 进 入 而 受 污 染 。 为 了 防 止 污 染 ， 试 管 的棉 花 塞 应 有 一 定 的 紧 密 度 ， 不 宜 太 松 ， 且 有 一 定的 长 度 ， 培 养 和 保 藏 温 度 不 宜 变 化 太 大 。 在 放 入摇 床 后 要 经 常 去 检 查 种 母 摇 瓶 的 状 况 。（ 二 ） 无 菌 空 气 带 菌 及 防 止空 气 净 化 系 统 失 效 或 空 气 精 过 、 预 过 减 效 是 发 酵 染菌 的 主 要 原 因 之 一 。 具 体 防 止 措 施 ： 定 期 更 新 主空 气 系 统 的 过 滤 介 质 ， 加 强 平 时 系 统 的 排 污 除 水 特 别 是 在 多 雨 或 潮 湿 的 天 气 。 确 保 进 入 车 间 之 前 的空 气 升 温 至 35-45 ， 使 相 对 湿 度 下 降 ， 定 时 拆检 空 气 精 过 、 预 过 。（ 三 ） 培 养 基 和 设 备 灭 菌 不 彻 底 带 菌 及 防 止培 养 基 和 设 备 灭 菌 不 彻 底 的 原 因 ， 主 要 与 以 下 几 个方 面 有 关1、 原 料 形 状 一 般 稀 薄 的 培 养 基 容 易 灭 菌 彻 底 ， 而 含 有 固 体 颗粒 或 粘 稠 状 物 料 时 容 易 由 于 灭 菌 不 彻 底 而 造 成 染菌 。 这 就 要 求 在 投 料 时 确 保 搅 拌 混 合 均 匀 。2、 实 消 时 未 充 分 扣 除 罐 内 空 气实 消 时 罐 内 空 气 未 完 全 排 除 造 成 假 压 ， 使 罐 顶 空 间局 部 温 度 达 不 到 灭 菌 要 求 ， 导 致 灭 菌 不 彻 底 而 污染 。 因 此 在 实 消 升 温 时 ， 应 打 开 排 气 阀 门 及 有 关 连 接 管 的 边 阀 、 罐 顶 部 的 接 管 边 阀 ， 使 蒸 汽 通 过 达到 彻 底 灭 菌 。3、 设 备 管 道 存 在 死 角 染 菌 及 防 止由 于 操 作 、 设 备 结 构 、 安 装 或 人 为 造 成 的 屏 障 等 原因 ， 引 起 蒸 汽 不 能 到 达 预 定 部 位 ， 这 就 是 死 角 。所 以 发 酵 罐 要 合 理 简 化 安 装 管 、 阀 。 凡 不 合 理 的管 、 阀 、 开 孔 都 要 坚 决 去 掉 ， 遗 留 的 孔 眼 要 焊 平 ，消 除 隐 患 。 管 道 之 间 尽 可 能 用 焊 接 来 代 替 法 兰 ，不 能 用 直 角 弯 头 ， 要 保 持 管 道 畅 通 、 光 滑 、 密 封 。主 要 阀 门 及 其 垫 应 经 常 检 查 更 换 。4、 设 备 渗 漏 引 起 染 菌 及 防 止发 酵 设 备 、 管 道 、 阀 门 的 长 期 使 用 ， 由 于 腐 蚀 、 摩擦 、 振 动 或 憋 压 等 原 因 ， 往 往 会 造 成 渗 漏 。 例 如 ： 设 备 的 表 面 或 焊 缝 处 有 砂 眼 ， 由 于 腐 蚀 逐 渐 加 深 ，最 终 导 致 穿 孔 ； 冷 却 管 受 搅 拌 器 作 用 ， 长 期 磨 损 ，焊 缝 处 受 冷 热 和 振 动 产 生 裂 缝 而 渗 漏 。 防 止 措 施 ：要 选 用 优 质 材 料 并 经 常 检 查 ， 小 渗 漏 不 易 发 现 时 可压 入 碱 性 水 ， 在 可 疑 的 地 方 用 浸 湿 的 酚 酞 指 示 剂 的白 布 擦 ， 如 有 渗 漏 时 白 布 显 红 色 。5、 操 作 问 题在 发 酵 过 程 中 如 操 作 不 当 也 引 起 染 菌 ， 如 移 种 时 或发 酵 培 养 时 罐 内 压 力 跌 零 ， 使 外 界 空 气 进 入 而 染 菌 ；泡 沫 冒 顶 而 造 成 染 菌 ； 压 缩 空 气 压 力 突 然 下 降 使 发酵 液 倒 流 入 空 气 过 滤 器 而 造 成 染 菌 等 等 ； 防 止 措 施 ：加 强 对 一 线 操 作 人 员 的 无 菌 操 作 培 训 和 始 终 贯 彻 无菌 操 作 制 度 及 责 任 心 教 育 ， 加 强 管 理 措 施 。 （ 四 ） 、 环 境 卫 生发 酵 车 间 和 菌 种 室 的 内 外 环 境 ， 必 须 保 持 干 净 整 洁 ， 定 期清 扫 和 消 毒 ， 车 间 周 围 不 得 堆 放 废 弃 物 ， 不 允 许 有 活 菌排 放 ， 有 异 味 或 易 飞 扬 的 物 料 的 贮 存 ， 应 远 离 发 酵 车 间和 菌 种 室 。七 、 染 菌 的 检 查（ 一 ） 感 官 检 查1、 大 部 分 染 菌 的 发 酵 液 可 以 从 发 酵 的 异 常 情 况 来 检 出 ， 如色 泽 、 异 味 、 变 稠 或 变 稀 、 加 碱 速 率 、 菌 丝 变 形 产 酸 不正 常 或 不 产 酸 或 倒 酸 而 糖 却 消 耗 很 快 。2、 借 助 显 微 镜 ， 常 用 梅 兰 染 色 、 结 晶 紫 染 色 和 革 兰 氏 染 色来 判 断 。（ 二 ） 、 无 菌 平 皿 划 线 检 查平 板 检 查 法 既 可 检 查 出 杂 菌 污 染 ， 又 可 以 检 查 出 有 无 噬 菌体 污 染 。 检 查 杂 菌 时 ， 先 将 灭 菌 后 的 培 养 基 倒 入 已 经 灭 菌 的 培 养 皿 内 ， 冷 却 后 置 于 37 恒 温 箱 内 培 养 24小 时 ， 进 行 镜 检 。 或 者 将 待 检 样 品 置 于 37 培 养6小 时 ， 使 细 菌 生 长 ， 增 加 数 量 ， 然 后 再 划 线 接种 培 养 。 这 样 可 以 提 高 平 板 法 的 灵 敏 度 。（ 三 ） 肉 汤 培 养 检 查 法主 要 用 于 空 气 系 统 和 培 养 基 染 菌 的 检 查 。 具 体 的 做法 是 将 培 养 液 装 在 吸 所 瓶 中 ， 灭 菌 30分 钟 后 ， 置于 37 培 养 24小 时 ， 如 无 混 浊 即 可 用 于 上 述 两项 的 检 查 。 将 无 菌 空 气 或 灭 菌 后 的 培 养 基 引 入 后保 温 培 养 ， 观 察 有 无 混 浊 现 象 发 生 ， 如 呈 现 浑 浊说 明 染 菌八 、 染 菌 的 后 续 处 理染 菌 查 找 到 原 因 后 ， 对 罐 彻 底 清 洗 干 净 ， 加 入 甲 醛 空 消