中药药理学第五章中药药理的研究方法

第 五 章 中 药 药 理 的 研 究 方 法 第 一 节 中 药 药 理 学 研 究 的 思 路 与 方 法一 、 中 药 药 理 学 研 究 的 基 本 知 识1、 研 究 用 样 品 复 方 、 单 味 药 、 有 效 部 位 群 及 有 效 单 体 。 药 理 实 验 前 必须 注 意 中 药 质 量 标 准 化 。2、 实 验 用 动 物 选 择 合 适 的 种 类 及 品 系 的 动 物 是 正 确 评 价 药 物 作 用 的 基础 。 选 用 与 人 体 的 结 构 、 机 能 、 代 谢 、 疾 病 特 点 相 近 似 的实 验 动 物 。小 鼠 和 大 鼠 常 用 动 物 ， 豚 鼠 过 敏 试 验 ， 家 兔 热 源 检查 和 解 热 试 验 ， 猫 、 狗 、 大 鼠 血 压 试 验 ， 鸽 子 、 狗 、 猫 催 吐 试 验 。 3、 剂 量 和 分 组 的 设 定 主 要 药 效 研 究 的 各 种 试 验 至 少 设 3个 剂 量 组 。能 够 测 出的 受 试 药 物 1/10-1/5；制 剂 毒 性 小 ， 测 不 出 -人 用 剂 量 折 算 动 物 用量 。 粗 略 的 等 效 倍 数 为 1（ 人 ） 、 3-4（ 狗 和 猴 ） ， 5-6（ 猫 、 兔 ） ， 6-8（ 大 鼠 、 豚 鼠 ） ， 10-12（ 小 鼠 ） 随 机 、 对 照 和 重 复 是 科 学 实 验 基 本 原 则 。 主 要 药 效试 验 常 需 设 下 列 对 照 组 ： （ 1） 正 常 对 照 组 ， 又 称 ” 空 白 对 照 组 “ 或 ” 阴性 对 照 组 “ ， 即 除 不 用 被 研 究 的 药 物 外 ， 对 照 组 的动 物 要 经 受 同 样 的 处 理 ， 如 给 生 理 盐 水 ， 当 药 物 中若 含 有 特 殊 溶 媒 或 基 质 者 ， 对 照 组 应 接 受 相 同 容 量的 溶 媒 或 基 质 。 （ 2） 阳 性 对 照 组 ， 是 最 常 用 的 一 种 对 照 方 法 ， 也 称 有效 对 照 或 积 极 对 照 。 以 现 行 最 有 效 或 临 床 上 最 常 用 的药 物 或 治 疗 方 法 为 对 照 。 阳 性 对 照 药 设 置 目 的 是 检 查 试 验 体 系 是 否 可 靠 和 比 较所 研 究 药 物 的 作 用 特 点 。 阳 性 药 应 是 国 家 药 典 或部 颁 标 准 ， 或 新 批 准 生 产 的 有 批 号 的 药 物 。 功 效 主 治 、剂 型 、 给 药 途 径 应 与 受 试 药 相 似 ， 两 者 才 有 可 比 性 。 （ 3） 模 型 对 照 组 除 不 用 药 以 外 ， 其 他 处 理 与 给药 组 相 同 。 一 个 药 理 实 验 需 设 5 6个 实 验 组 ， 10 14只 动 物（ 大 鼠 或 小 鼠 ） ,体 重 、 性 别 要 有 随 机 性 ， 需 要 分 批 进行 实 验 时 要 注 意 各 组 动 物 之 间 的 平 行 操 作 。 主 要 药 效 实验 需 要 重 复 。 如 抗 肿 瘤 药 物 ， 其 驱 邪 作 用 要 求 重 复 三 批 ，降 血 糖 实 验 也 要 求 重 复 。 4、 药 效 学 指 标 的 选 择原 则 ： （ 1） 针 对 性 强 ， 要 紧 密 结 合 主 要 病 因 病 机 ，能 够 反 映 临 床 治 疗 意 义 ； （ 2） 敏 感 ， 对 于 病 情 及证 候 的 任 何 变 化 以 及 药 物 的 防 治 作 用 ， 能 敏 感 、准 确 反 映 出 来 ； （ 3） 稳 定 ， 重 现 性 好 ， 结 果 才 可靠 。 二 、 中 药 药 理 学 研 究 思 路 与 方 法 学 进 展（ 一 ） 研 究 思 路 1、 提 高 中 药 药 理 基 础 研 究 水 平 以 疗 效 为 核 心 ， 从 中 药 分 子 与 生 命 分 子 的 相 互作 用 找 切 入 点 ， 以 分 子 群 体 的 变 化 来 揭 示 中 药 分 子调 解 规 律 ， 大 力 开 展 中 药 分 子 药 理 学 研 究 。 2、 深 入 进 行 中 药 药 理 作 用 的 物 质 基 础 与 作 用 机制 相 关 性 研 究途 径 之 一 ： 研 究 单 体 有 效 成 分 ， 利 用 各 种 现 代 筛 选 模型 和 筛 选 技 术 ， 以 其 中 一 种 或 几 种 有 效 成 分 作 为 定 性 、定 量 指 标 进 行 研 究 ， 明 确 其 与 药 效 “ 量 效 相 关 ” 的 有效 成 分 。 石 菖 蒲 中 枢 神 经 系 统 血 脑 屏 障 榄 香 素 、细 辛 醚 途 径 之 二 ： 以 单 位 中 药 或 小 复 方 中 药 为 研 究 对 象 ， 采用 各 种 提 取 分 离 及 分 析 技 术 ， 以 选 定 有 效 成 分 为 指 标 ，进 行 研 究 。 大 承 气 汤 游 离 和 结 合 蒽 醌 传 统 煎 法 。 中 药 中 多 种 药 用 部 位 或 一 种 有 效 部 位 中 的 多 种 药 用 成分 ， 同 样 可 以 利 用 各 种 现 代 筛 选 模 型 和 技 术 ， 以 一 种 药理 作 用 为 主 要 因 素 ， 研 究 部 位 间 、 成 分 间 或 部 位 与 成 分之 间 的 相 互 促 进 、 相 互 抑 制 的 协 同 关 系 ， 初 步 阐 明 现 代中 药 不 同 于 西 药 而 发 挥 综 合 治 疗 作 用 的 机 制 。 3、 加 强 与 中 药 功 效 相 关 的 系 统 药 理 作 用 研 究 综 合 运 用 整 体 动 物 疾 病 模 型 、 病 证 结 合 模 型 以 及 利用 多 种 生 物 学 等 方 法 建 立 的 细 胞 模 型 进 行 中 药 功 效 相关 的 系 统 药 理 作 用 研 究 ， 对 全 面 揭 示 中 药 作 用 的 实 质具 有 重 要 意 义 。 （ 二 ） 中 药 药 理 研 究 方 法 学 进 展 1、 中 药 血 清 药 理 学 、 脑 脊 液 药 理 学 中 药 或 中 药 复 方 经 口 给 动 物 灌 服 一 定 时 间 后 采集 动 物 血 清 ， 分 离 血 液 ， 用 含 有 药 物 成 分 的 血 清 进行 体 外 试 验 的 一 种 方 法 。 2、 分 子 生 物 学 与 生 物 芯 片 技 术 基 因 芯 片 技 术 （ 核 酸 杂 交 原 理 ） ： 待 分 析 样 品 通过 与 芯 片 中 已 知 碱 基 序 列 的 片 段 互 补 杂 交 ， 从 而 确 定样 品 中 的 核 算 序 列 和 性 质 ， 对 基 因 表 达 的 量 及 其 特 性进 行 分 析 。 可 将 中 药 作 用 的 所 有 靶 基 因 全 部 显 示 出 来 ，通 过 基 因 表 达 谱 和 表 达 产 物 的 差 比 性 分 析 ， 揭 示 中 药复 方 的 作 用 靶 点 、 作 用 环 节 和 作 用 过 程 。 3、 现 代 智 能 色 谱 、 波 谱 技 术 和 中 药 药 理 研 究结 合 中 药 化 学 、 化 学 分 析 及 中 药 药 理 研 究 结 合 。 高 效 液 相 色 谱 -质 谱 法 、 高 效 液 相 色 谱 -电 喷 雾 离 子化 质 谱 法 、 高 效 液 相 色 谱 -核 磁 共 振 法 、 高 效 毛 细 血 管电 泳 -质 谱 法 及 分 子 生 物 色 谱 技 术 ， 提 高 中 药 复 方 活 性物 质 的 筛 选 率 。 第 二 节 中 药 复 方 药 理 学 研 究一 、 中 药 复 方 配 伍 研 究 方 法（ 一 ） 拆 方 研 究 有 助 于 中 药 复 方 配 伍 合 理 性 的 阐 明 1、 单 味 研 究 法 十 全 大 补 汤 提 高 免 疫 力 ， 拆 方 实 验 地 黄 2、 药 对 研 究 法 六 味 地 黄 汤 （ 五 个 药 对 ） ： 一 补 一 泻 （ 地 黄 + 泽 泻 、 山 茱 萸 +丹 皮 、 山 药 +茯 苓 ） ； 三 补 三 泻 （ 地黄 +山 茱 萸 +山 药 、 泽 泻 +丹 皮 +茯 苓 ） 。 3、 药 物 组 间 关 系 研 究 法 四 物 汤 补 血 ， 四 君 子 汤 补 气 ， 二 者 合 用 ，四 君 子 汤 抗 贫 血 作 用 增 强 。 补 气 药 可 增 强 补 血 药 的补 血 效 能 ， 中 医 “ 补 气 生 血 ” 理 论 。 4、 撤 药 分 析 法 黄 芩 汤 （ 黄 芩 、 芍 药 、 甘 草 、 大 枣 ） 5、 聚 类 分 析 法 以 性 味 归 经 为 特 征 ， 数 学 模 型 ， 统 计 分 析 。 半 夏泻 心 汤 。 6、 正 交 设 计 法 正 交 设 计 表 将 一 个 方 剂 中 的 药 物 （ 因 素 ） 和 剂量 （ 水 平 ） 按 一 定 规 律 设 置 。 7、 均 匀 设 计 法 均 匀 设 计 表 。 （ 二 ） 与 中 医 证 候 研 究 结 合 探 索 中 药 复 方 药 效 的 优 势 四 君 子 汤 脾 虚 型 便 秘 及 腹 泻 （ 临 床 ） 胃 肠 运 动 双 向 调 节 作 用（ 三 ） 与 中 药 复 方 组 合 化 学 结 合 开 展 药 理 学 研 究 以 中 药 复 方 为 天 然 组 合 化 学 库 ， 在 中 医 药 理 论 的 指导 下 确 定 能 反 映 该 方 剂 主 治 病 证 的 药 理 学 指 标 ， 通 过组 分 或 单 体 成 分 的 组 合 筛 选 ， 找 出 其 活 性 最 强 的 组 分构 件 ， 确 定 方 剂 “ 有 用 分 子 的 构 成 ”。 二 、 复 方 药 效 系 统 评 价 研 究1、 与 临 床 研 究 相 结 合 进 行 复 方 整 体 药 效 的 评 价 从 整 体 功 效 入 手 ， 与 临 床 研 究 相 结 合 ， 探 讨 中 药 复方 多 途 径 、 多 靶 点 的 作 用 环 节 。2、 合 理 利 用 动 物 模 型 ， 客 观 揭 示 中 药 复 方 的 作 用 机 制 中 医 的 “ 证 ” 涉 及 多 系 统 、 多 脏 器 、 多 种 组 织 的病 变 ， 中 药 复 方 是 对 证 治 疗 ， 和 化 学 药 物 治 病 原 理 不同 。 但 目 前 大 多 借 鉴 西 医 学 现 有 的 动 物 模 型 ， 其 特 色及 优 势 在 动 物 实 验 中 难 以 得 到 体 现 和 发 挥 。 证的动物模型的缺陷v动物模型少v研究难度很大v认同度差 人和动物在生理生化机能等方面尽管有许多相同之处，在形体、语言、反应等有很大差别。 甲 状 腺 激 素 处 理 -阴 虚 模 型 动 物 （ 体 重 减 轻 、体 温 升 高 、 心 率 加 快 ， 饮 水 与 耗 氧 增 加 ） ；皮 下 注 射 肾 上 腺 素 合 并 冰 水 浸 泡 -急 性 血 瘀（ 全 血 黏 度 和 血 浆 黏 度 增 高 、 红 细 胞 聚 集 性 增加 、 红 细 胞 变 形 减 弱 ） 。大 黄 -脾 虚 模 型 。 3、 体 外 实 验 有 助 于 中 药 复 方 细 胞 水 平 作 用 的 评 价 血 清 药 理 学 ： 含 苦 参 的 血 清 抗 肿 瘤 ； 桂 枝 煎 剂 本身 不 抗 副 流 感 病 毒 ， 含 药 血 清 则 作 用 明 显 。4、 利 用 基 因 组 学 和 蛋 白 质 组 学 研 究 方 法 ， 从 分 子 水 平进 行 复 方 药 效 学 的 评 价