实验七过氧化物酶的显示

实验7 细胞内过氧化物酶的显示联苯胺反应 【实验目的】l掌握联苯胺反应法显示细胞内过氧化物酶的原理和方法。 过氧化物酶 - 定义 l利用过氧化氢作为电子受体来催化底物氧化作用的酶。 【实验原理】l细胞内的过氧化物酶可以催化过氧化氢氧化联苯胺成蓝色或者棕色产物，蓝色为中间产物联苯胺蓝，很不稳定，可自然转变为棕色的联苯胺腙，通过产物颜色间接显示出细胞内过氧化物酶的分布。 【实验仪器、材料和试剂】l光学显微镜；小白鼠、剪刀、镊子、载玻片、牙签、吸管。l 0.5% CuSO4（0.5克CuSO4溶于100ml蒸馏水中）、联苯胺混合液（0.1克联苯胺在研钵中加少许蒸馏水研成细浆，加入100ml蒸馏水，过滤后加入2滴3%双氧水，放棕色瓶中备用）、1%番红1克番红O（Safranine O）染料溶于100ml蒸馏水中。 【实验步骤】l用颈椎脱臼法处死小鼠，剪开大腿上的皮肤和肌肉，取出股骨；l剪断或者折断股骨，用牙签挑取骨髓，放置于载玻片上制成涂片，晾干；l将涂片上滴加几滴0.5% CuSO4，固定1分钟；l倾去CuSO4溶液，滴加0.1%联苯胺混合液，染色6分钟；l用自来水或蒸馏水冲洗，滴加1%番红染液（染色细胞轮廓），染色1分钟； l用自来水或者蒸馏水冲洗，空气中晾干，显微镜下观察。 颈椎脱臼法处死小鼠 【观察与结果】l骨髓细胞内可以见到蓝色或者棕色的颗粒，即过氧化物酶所在的部位。