《沙门氏菌培训》PPT课件.pptx

沙 门 菌 属（ Salmonella） 简 介 沙 门 氏 菌 病 是 公 共 卫 生 学 上 具 有 重 要 意 义的 人 畜 共 患 病 之 一 。 其 病 原 沙 门 氏 菌 属 肠 道 细 菌 科 ， 包 括 引 起食 物 中 毒 ， 导 致 胃 肠 炎 、 伤 寒 和 副 伤 寒 的 细 菌 。 除 可 感 染 人 外 ， 还 可 感 染 很 多 动 物 包 括 哺乳 类 、 鸟 、 爬 行 类 、 鱼 、 两 栖 类 及 昆 虫 。 特 性 沙 门 氏 菌 革 兰 氏 阴 性 、 两 端 钝 圆 的 短 杆 菌（ 比 大 肠 杆 菌 细 ） 。 （ 0.7 1.5m） （ 2 5m）散 在 。 无 荚 膜 和 芽 孢 ， 都 具 有 周 身 鞭 毛 （ 除 鸡 白痢 沙 门 氏 菌 、 鸡 伤 寒 沙 门 氏 菌 外 ） ， 能 运 动 ， 大多 数 具 有 菌 毛 ， 能 吸 附 于 宿 主 细 胞 表 面 或 凝 集 豚鼠 红 细 胞 。 培 养 特 性 A 需 氧 及 兼 性 厌 氧 菌 。 B 在 普 通 琼 脂 培 养 基 上 生 长 良 好 ， 培 养 24h后 ，形 成 中 等 大 小 、 圆 形 、 表 面 光 滑 、 无 色 半 透 明 、 边缘 整 齐 的 菌 落 ， 其 菌 落 特 征 亦 与 大 肠 杆 菌 相 似 （ 无粪 臭 味 ） 。 C 鉴 别 培 养 基 （ 麦 康 凯 、 SS、 伊 红 美 蓝 ） ： 一般 无 色 菌 落 。 D 三 糖 铁 琼 脂 斜 面 ： 斜 面 为 红 色 ， 底 部 变 黑 并产 气 。 生 化 特 性1） 发 酵 葡 萄 糖 ， 麦 芽 糖 ， 甘 露 醇 和 山 梨 醇 产 气 。2） 不 发 酵 乳 糖 、 蔗 糖 和 侧 金 盏 花 醇 。3） 不 产 吲 哚 、 V-P反 应 阴 性 。4） 不 水 解 尿 素 和 对 苯 丙 氨 酸 不 脱 氨 。 伤 寒 沙 门 氏 菌 、 鸡 伤 寒 沙 门 氏 菌 及 一 部 分 鸡 白 痢沙 门 氏 菌 发 酵 糖 不 产 气 ， 大 多 数 鸡 白 痢 沙 门 氏 菌 不发 酵 麦 芽 糖 。 血 清 学 特 性 沙 门 氏 菌 具 有 复 杂 的 抗 原 结 构 。 一 般 沙 门 氏 菌 具 有 菌 体 (O)抗 原 、 鞭 毛 (H)抗 原和 表 面 抗 原 (Vi荚 膜 或 包 膜 抗 原 )三 种 抗 原 。 传 播 途 径 肉 的 污 染 肉 及 其 制 品 的 沙 门 氏 菌 检 出 率 美 国 为 20% 25%、 英 国 为 9.9%、 日 本检 查 进 口 家 禽 的 污 染 率 为 10.3%， 国 内 肉 类 沙 门 氏 菌 检 出 率 在 1.1%39.5%。 蛋 的 污 染 蛋 及 其 制 品 沙 门 氏 菌 检 出 率 为 3.9%-43.7%， 由 于 吃 蛋 引 起 鼠 伤 寒 病 的病 例 报 告 逐 渐 有 增 加 的 趋 势 。 环 境 污 染 食 品 在 加 工 、 运 输 、 出 售 过 程 中 往 往 被 沙 门 氏 菌 污 染 。 沙 门 氏 菌 在粪 便 、 土 壤 、 食 品 、 水 中 可 生 存 5个 月 至 2年 之 久 。 传 播 问 题 恢 复 期 患 者 和 无 症 状 的 带 菌 者 也 是 常 见 的 传 染 源 。 沙 门 氏 菌 检 测 标 准 GB 4 7 8 9 .4 -2 0 1 0 增 菌 和 选 择 性 培 养 25g样 品 225ml BPW36 818h培 养 1ml BPW增 菌 液+10ml SC TTB增 菌 液 在 42 、SC增 菌 液 在 36各 培 养 18 24小 时1ml BPW增 菌 液+10ml TTB 分 别 从 TTB和 SC增 菌液 中 取 1环 ， 接 种 到BS和 HE琼 脂 上 培养BS琼 脂 在 36 培 养40 48小 时 HE琼 脂 在 36培 养 18 24小 时 分 别 从 BS和 HE琼 脂上 挑 选 可 以 菌 落 进行 TSI初 步 生 化 鉴 定 可 疑 菌 落 判 定 HE琼 脂BS琼 脂 XLD琼 脂 科 玛 嘉 显 色 琼 脂 阴性科 玛 嘉 显 色 琼 脂 阳性 生 化 试 验1、 先 从 BS、 HE或XLD或 显 色 培 养 基上 挑 取 可 疑 菌 落 。 2、 接 种 至 TSI， 先在 斜 面 上 划 线 ，然 后 再 底 层 穿 刺 。 4、 将 TSI和NA至 于 36 ，18 24h培 养3、 将 接 种 TSI完 毕 的 接 种 针 不 要 灭 菌 ，直 接 在 营 养 琼 脂 平板 上 划 线 。 根 据 上 表 中 可 理 解 为 只 有 在 斜 面 和 底 层 产 碱 、 不 产 H2 S、不 产 气 的 情 况 下 可 不 进 行 生 化 鉴 定 ， 直 接 判 定 为 非 沙 门氏 菌 ， 其 余 任 何 情 况 均 需 进 行 生 化 鉴 定 。TSI鉴 定 三 糖 铁 生 化 试 验底 层 产 H 2 S底 层 产 酸斜 面 产 碱斜 面 底 层产 酸 产 碱底 层 产 酸斜 面 产 碱底 层 产 H2 S 产 酸 产 气产 酸 产 气 产 H2 S只 在 TSI产 碱 的情 况 下 可 判 定无 沙 门 氏 菌 ，其 余 任 何 情 况均 需 进 行 生 化鉴 定 生 化 试 验1 、 准 备 一 只 2 ml无 菌 生 理 盐 水 试 管 、 酒 精 灯 、 接 种 环 、 生 化 鉴 定 套 装 。2 、 从 营 养 琼 脂 平 板 上 挑 取 可 疑 菌 落 ， 接 种 至 生 理 盐 水 中 ， 制 成 0 .5 个麦 氏 浊 度 。3 、 依 次 在 各 个 安 瓿 （ bu） 瓶 中 滴 加 菌 悬 液 3 滴 。4 、 在 赖 氨 酸 脱 羧 酶 肉 汤 及 对 照 和 氰 化 钾 及 对 照 中 个 滴 加 无 菌 石 蜡 覆盖 。5 、 在 3 6 培 养 1 8 2 4 h。 菌 悬 液 制 备OR O.5 个 麦 氏 浊度 的 菌 悬 液依 次 在 每 个 安 瓿瓶 中 滴 加 菌 悬 液2 3 滴 。第 一 步 第 二 步 第 三 步 生 化 试 验 准 备 色氨酸 肉汤 赖氨酸脱羧酶肉汤 氨基酸脱羧酶肉汤 尿素酶 氰化钾培养基 氰化钾培养基对照 甘露醇 山梨醇 半乳糖苷 色 氨 酸 肉汤 经 3 6 ，1 8 2 4 h培养 后 滴 加靛 基 质 试剂 ， 片 刻观 察 结 果阳 性 为 玫瑰 红 色 。 色 氨 酸 脱羧 酶 及 对照 和 氰 化钾 及 对 照转 种 结 束后 需 滴 加液 体 石 蜡覆 盖 试 验管 方 可 进行 培 养 。 靛 基 质试 验 +时 补 做甘 露 醇山 梨 醇试 验 ，试 验 阳性 后 进行 血 清学 鉴 定 TSI-时 ，进 行ONPG试 验 ，ONPG阴 性时 进行 血清 学鉴 定 。H2 S+、 靛 基 质 - 、 尿 素 -、 KCN-、 赖 氨 酸 +后 进 行 血 清 学 鉴 定 。生 化 试 验 色 氨酸吲 哚试 验阴 性符 合 赖 氨酸阳 性对 照阴 性 0 NPG阴 性尿 素酶阴 性 KCN及对 照阴 性 甘 露醇山 梨醇阳 性符 合 符 合 符 合 符 合 符 合血 清 学 鉴 定 沙 门 氏 菌 的 分 类沙 门 氏 菌 属 分 为 两 个 种 ： 肠 道 沙 门 氏 菌 (种 ) 肠 道 亚 种 、 萨 拉 姆 亚 种 、 亚 利 桑 那 亚 种 、 双 相 亚 利 桑 那 沙 门 氏 菌 、 豪 顿 沙 门 氏 菌 及 因 迪 卡 沙 门 氏 菌 (6个 亚 种 ) 邦 戈 尔 沙 门 氏 菌 (种 ) 沙 门 氏 菌 的 分 类 及 命 名 -沙 门 氏 菌 的 分 类 、 命 名 沙 门 氏 菌 抗 原 O抗 原 也 称 菌 体 抗 原 ， 是 细 胞 壁 的 组 成 成 分Vi抗 原 是 一 种 特 殊 的 菌 体 抗 原 ， 属 于 K抗 原群 （ 如 伤 寒 沙 门 氏 菌 、 丙 型 副 伤 寒 沙 门氏 菌 和 都 柏 林 沙 门 氏 菌 都 含 有 Vi抗 原 ）H抗 原 （ 即 鞭 毛 抗 原 ） H抗 原 与 抗 血 清 的 反 应 成 絮 状 或 绒 状 。 大 部 分 沙 门 氏 菌 H抗 原 都 具 有 两 相 。 第 一 相 被 称 为 特 异 性 相 ， 第 二 相 为 非 特异 性 相 。O、 H、 Vi抗 原 vi抗 原 因 与 毒 力 有 关 而 命 名 为 vi抗 原 。 由 聚 -n-乙 酰 -d-半 乳 糖 胺 糖 醛 酸 组 成 。 不 稳 定 ， 经 60 加 热 、 石 碳 酸 处 理 或 人 工 传 代 培 养 易破 坏 或 丢 失 。 Vi抗 原 存 在 于 细 菌 表 面 ， 可 阻 止 o抗 原 与 其 相 应 抗 体的 反 应 。 vi抗 原 的 抗 原 性 弱 。 当 体 内 菌 存 在 时 可 产 生 一定 量 抗 体 ； 细 菌 被 清 除 后 ， 抗 体 也 随 之 消 失 。 故 测 定 vi抗 体 有 助 于 对 伤 寒 带 菌 者 的 检 出 。 新 从 患 者 标 本 中 分 离 出 的 伤 寒 杆 菌 、 丙 型 副 伤 寒 杆菌 等 有 此 抗 原 。 O抗 原 为 脂 多 糖 ， 性 质 稳 定 。 比 较 耐 热 ， 100 不 被 破 坏 ， 也 不 易 被 酒精 破 坏 ； O抗 原 以 阿 拉 伯 数 字 表 示 ， 从 1排 到 67，但 删 去 了 9个 抗 原 ， 现 在 有 58个 抗 原 ； 凡 含 有 群 特 异 性 共 同 抗 原 的 菌 型 归 类 为一 个 O群 ， 以 主 要 抗 原 来 表 示 ， 某 些 次 要 抗原 可 以 出 现 在 多 个 群 中 。 -H抗 原 H抗 原 存 在 于 鞭 毛 之 中 ， 为 蛋 白 质 。 由 肽 链 中 氨 基 酸 的 排 列 顺 序 及 空 间 构 型 决 定 其 特 异 性 。 不 耐 热 ， 经 加 热 和 用 乙 醇 及 碱 处 理 易 变 性 。 H抗 原 常 有 两 相 的 变 异 。 第 一 相 为 特 异 相 ， 用 小 写 英 文 字 母 表 示 ， 如 ： a、 b、 I、 e、h等 。 第 二 相 为 非 特 异 相 ， 用 阿 拉 伯 数 字 表 示 ， 如 ： 1、 2、 5等 。 但 也 有 少 数 菌 含 有 第 一 相 中 的 抗 原 e、 n、 x等 成 分 。 A F群对 应 的 O价 抗 原 沙 门 氏 菌 抗 原 表 中 符 号 意 义 ： _ 指 溶 原 状 态 下 O因 子 可 以 并 存 ， 和 平 共 处 。 指 O因 子 不 相 容 ， 只 能 有 一 种 。 指 O或 H因 子 有 存 在 或 不 存 在 的 可 能 性 。 O1 0 、 O1 5 、 O1 5 ， O3 4价 抗 原 不 相 容 只 存 在 一 种 。 都 柏 林 沙 门 氏 菌 存 在或 不 存 在 表 面 Vi抗 原 。西 翰 普 顿 沙 门 氏 菌 、 都 柏 林 沙 门 氏 菌属 于 单 相 菌 ， H抗 原 只 存 在 第 一 项 。H抗 原 第 二 项 H1 和 H2价 抗 原 存 在 或 不 存 在O1 价 抗 原 与 其 他 抗 原和 平 共 处 ， O5 、 O2 7价 抗 原 存 在 或 不 存 在 。 沙 门 氏 菌 菌 型 的 表 示 方 法 血 清 型 以 数 字 和 字 母 表 示 . 例 如 :查 考 夫 曼 -怀 特 沙 门 氏 菌 属 抗 原 表 . 鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌 : O抗 （ 1， 4， 5， 12） ， 第 相 H抗 原 （ i） 第 相 H抗 原 ( 1,2)。 它 的 血 清 型 应 表 示 为 :鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌 （ 1， 4， 5， 12：i： 1， 2） 沙 门 氏 菌 的 判 定 原 则采 用 血 清 学 的 方 法 ,按 照 考 夫 曼 -怀 特 沙 门 氏 菌属 抗 原 表 解 判 定 菌 型 . 考 夫 曼 -怀 特 沙 门 氏 菌 属 抗 原 表 内 的 O抗 原 可 能 存 在 或 不 存 在 。 内 的 H抗 原 可 能 是 罕 见 的 ， 正 常 情 况 下 一 般 不 存 在 。菌 名 原 名 O抗 原 H抗 原第 1相 第 2相基 桑 加 尼 沙 门 氏 菌 S. kisangani 1,4,5,12 a 1,2维 也 纳 沙 门 氏 菌 S. wien 1,4.12,27 b 1,w埃 森 沙 门 氏 菌 S. essen 4,12 g, m -金 斯 敦 沙 门 氏 菌 S. kingston 1,4,5,12,27 g, s, t 1,2鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌 S. typhimurium 1,4,5,12 i 1,2 印 地 安 纳 沙 门 氏 菌 S. indiana 1,4,12 z 1,7 沙 门 氏 菌 的 血 清 鉴 定 的 方 法 用 O、 H 和 Vi因 子 血 清 与 待 检 的 菌 株 作 玻 片 凝 聚试 验 。1.先 用 O因 子 血 清 确 定 菌 株 所 属 的 O群 及 O抗 原 的各 种 成 分 。2.再 用 H因 子 血 清 检 查 其 第 1相 和 第 2相 的 H抗 原 以确 定 血 清 型 。3.必 要 时 还 要 用 Vi血 清 检 查 (目 前 有 3种 )。 1 . 先 用 AF多 价 O血 清 检 查 ， 确 定 菌 株 是 否 在 AF六 个 O群 的 范 围 内 。2. 再 用 代 表 六 个 O群 的 O因 子 血 清 检 查 ， 即 O2（ A） 、 O4（ B） 、 O7（ C1） 、 O8（ C2） 、 O9（ D） 、O3， 10（ E） 、 O11（ F） 。3. 确 定 O群 之 后 ， 分 别 用 HA(a、 b、 c、 d、 i、 z10、 z29） HB、 HC、 HD四 种 多 价 H血 清 检 查 。4. 用 3.所 确 定 的 多 价 H血 清 所 包 括 的 所 有 H因 子 血 清 逐 一 检 查 定 为 第 1相 或 第 2相 H抗 原 。5. 检 出 第 1相 H抗 原 而 未 检 出 第 2相 H抗 原 ， 或 检 出 第 2相 H抗 原 而 未 检 出 第 1相 H抗 原 的 ， 要 用 位相 变 异 的 方 法 再 检 查 其 另 一 个 相 。 单 相 菌 不 必 作 位 相 变 异 检 查 。6. 综 合 O和 H因 子 血 清 以 及 Vi因 子 血 清 的 检 查 结 果 ， 按 照 考 夫 曼 -怀 特 沙 门 氏 菌 属 抗 原 表 解 判 定沙 门 氏 菌 的 菌 型 。沙 门 氏 菌 的 血 清 型 鉴 定 步 骤 位 相 变 异 的 解 释 将 一 个 双 相 沙 门 氏 菌 的 菌 株 在 琼 脂 平 板 上 划 线 分 离 ， 所得 的 菌 落 中 ， 有 的 有 第 1相 H抗 原 ， 有 的 则 有 第 2相 H抗 原 。若 任 意 挑 取 一 个 菌 落 在 培 养 基 上 多 次 传 代 ， 其 后 代 又 可出 现 部 分 是 第 1相 而 另 一 部 分 是 第 2相 的 菌 落 。 这 种 两 个相 的 H抗 原 可 以 交 相 产 生 的 现 象 称 为 位 相 变 异 。 双 相 菌 初 次 分 离 时 ， 单 个 菌 落 的 纯 培 养 往 往 只 有 一 个 相H抗 原 ， 鉴 别 时 常 只 能 检 出 一 个 相 ， 而 测 不 出 另 一 相 。此 时 ， 可 用 已 知 相 血 清 诱 导 的 位 相 变 异 试 验 来 获 得 未 知的 另 一 个 相 H抗 原 。 位 相 变 异 试 验 的 方 法 简 易 平 板 法1.配 制 0.70.8%的 半 固 体 琼 脂 培 养 基 。2.在 平 板 内 滴 上 一 滴 已 知 的 第 1相 或 第 2相 血 清 因 子 ， 并 作 好 标 记 。3.然 后 倾 注 平 板 并 烘 干 表 面 水 分 ， 在 标 记 部 位 的 中 间 点 种 已 知 第1相 或 第 2相 的 新 鲜 待 检 菌 株 。4.培 养 后 ， 其 已 知 相 细 菌 的 动 力 受 到 抑 制 ， 解 离 出 另 一 相 的 细 菌 ，并 向 周 围 蔓 延 生 长 ， 形 成 一 个 大 的 菌 落 。5.检 查 其 菌 落 的 边 缘 部 分 ， 即 可 确 定 该 菌 株 的 另 一 相 H抗 原 。6.该 方 法 通 常 13天 内 可 以 有 结 果 。 位 相 变 异 试 验 的 其 余 方 法 U形 管 法 小 玻 管 法 小 套 管 法 软 琼 脂 斜 面法 5 9 种 沙 门 氏 菌 的 血 清 列 表O1 O2 O4 O5 O7 O8 O9 O10 O11 O14O15 O19 O20 O27 O34 O46 O3,19 Ha Hb HcHd Hf Hg Hh Hi Hk Hm Hn Hp HrHs Ht Hu Hv Hw Hx Hy Hz Hz6 Hz10Hz 13 Hz15 Hz28 Hz29 H2 H5 H6 H7 Heh HgpHlv HA HB HC HD Vi A-F群 多价 O A-F群 多价 O Henx H1.2.3.5