抗核抗体ANA检测与临床应用

自身免疫抗体检测及临床意义 电力医院：马林 抗核抗体（ ANA） 检测与临床应用 ANA的靶抗原分布： 细胞核 整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。 ENA：抗可提取核抗原，包括 RNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70和 Jo-1等 六种靶抗原 抗核抗体的定义 传统定义：针对细胞核成分的自身抗体的总称。 广义定义：针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对 ANA的理 解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称 ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、 病情判断和疗效观察的指标 高滴度 ANA则高度提示自身免疫性疾病 在非结缔组织病中也可出现阳性；正常人中（特别是老年人）也可出现阳 性，但滴度低 目前， ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。 ANA检测的临床意义 ANA检测的临床意义 系统性红斑狼疮 活动期 非活动期 药物诱导的红斑狼疮 混合性结缔组织病（ MCTD、 Sharp综合征） 类风湿性关节炎 进行性系统性硬化症 多发性肌炎及皮肌炎 干燥综合征 慢性活动性肝炎 溃疡性结肠炎 其它风湿病 正常人 95 100 80 100 100 100 20 40 20 50 85 95 30 50 70 80 30 40 26 5-10 美国风湿学会 (ACR)立场声明 HEp-2 细胞包含大约 100 至 150 种自身抗原 其它初筛方法仅具有少量自身抗原 大约 35% SLE患者和 IFT-ANA阳性患 者在其它初筛实验中为阴性结果 建议： IIFT-ANA仍然为 ANA检测的金标准 医院或商业诊断所应用其它 ANA检测方法时，必须要求为临床大夫提供足够 的数据证明其它 ANA检测方法与 IFT比较具有同样或更高的敏感度和特异性 实验室在 ANA报告当中必须注明 ANA检测方法 EUROIMMUN ANA筛查 : 间接免疫荧光法 (IFT) 抗原谱完整 (细胞核、细胞浆 ) 检测 ANA的金标准，具有很高的敏感性和特异性 基质组合 : HEp-2细胞 +灵长类肝 HEp-2细胞 : 筛查不同的自身抗体 均质型 核膜型 核点型 核糖体 P蛋白 着丝点型 AMA 核仁型 高尔基体 Scl-70 溶酶体 Sm/RNP 肌动蛋白 SS-A/SS-B 波形蛋白 系统性红斑狼疮 (SLE) ANCA 相关性血管炎 慢性炎症性结缔组织病 (CICTD) 干燥综合征 (SS) Systemischer Lupus Erythematodes (SLE) dsDNA 系统性硬化症 (SSc) Scl -70 and CenpB SS-A and SS-B 慢性炎症性结缔组织病 (CICTD) 多肌炎 /皮肌炎 (PM/DM) Myositis Profile 夏普综合征 (MCTD) RNP Rheumatoide Arthritis (RA) EUROIMMUN 系统性红斑狼疮 (SLE) 红斑狼疮的特点 临床医生 : 容易误诊的一类致死性疾病 免疫学家 : 所有免疫系统的要件均参与致病机理产生过程 临床发病特点 发病率 : 40/100,000(北欧 );200/100,000(黑人 );250,000 (美国 ) 患者寿命 :4年 /50%(1950); 15/80%(当前 ); 20岁诊断 /35岁死亡几率 1:6 以上受累 ;96%) EUROIMMUN SLE 各器官的表现 关节炎 (至少 2个关节 血液系统受累 (贫血等 ; 60%) 狼疮肾炎 (51%) 浆膜炎 (胸膜炎 , 心包炎 ; 77%) 神经系统受累 (30%) 皮肤 (蝴蝶状皮疹 , 盘状狼疮 ; 74%) 系统性红斑狼疮 (SLE) 代表性的抗体 抗 dsDNA 抗体 抗核小体抗体 抗 Sm 抗体 抗核糖体 P 蛋白抗体 30-90% 50-95% 5-10% 5-15% EUROIMMUN EUROIMMUN 核均质型 HEp-2细胞 /猴肝 HEp-2细胞 猴肝 抗 dsDNA 抗体 - 检测方法 : IIFT, Farr-法 (RIA), ELISA or Blot IIFT dsDNA HEp-2细胞 绿蝇短膜虫 高度特异性抗体 ; 70%患者阳性， 0.5%正常人或 RA患者阳性 滴度与疾病活动性相关，但不适用于所有患者 抗体滴度上升但临床症状不明显的患者，抗体检测后 5年内 80%患者进入活动期 抗 dsDNA抗体与 SLE 最新版 “Autoantibodies” 描述 不同实验方法的结果并无可比性： 1、抗原来源不同； 2、抗原展现形式不同； 3、实验体系反应条件不同。 核均质 : 抗核小体抗体 (ANuA) 靶抗原 : dsDNA-组蛋白 -复合物的构象决定簇 方法 : IIFA ELISA, Blot 临床意义 : SLE, 阳性率 50-95% (特异性 100%) EUROIMMUN 抗核小体 ELISA: 敏感性、特异性、疾病活动度 ANuA 与疾病的活动性相关性强 (SLE DAI score) 分组 SLE 干燥综合症 皮肌炎 /多肌炎 系统性硬化症 类风湿 /骨关节炎 强直性脊柱炎 健康对照组 特异性 n 233 41 40 33 60 20 31 225 抗核小体阳性 144 (61.8%) 1 (2.4%) 1 (2.5%) 1 (3.0%) 1 (1.7%) 0 0 98.2% Su et al., Clin Immunol 122: 115-120, 2007 LNTP (%) LN (%) CON (%) ANuA Anti-dsDNA 79 43 18 41 9 33 LNTP = lupus nephritis requiring renal transplantation（狼疮肾炎需要 肾移植） LN = biopsy proven lupus nephritis（肾活检确诊为狼疮肾炎） CON = SLE patients without nephritis（无肾炎 SLE患者） 伴有狼疮肾炎的严重 SLE的生物标记物 ANuA 与狼疮性肾炎 Stinton et al., Lupus 15: 394-400, 2007 狼疮肾炎是 SLE的一种潜在的严重并发症 (高达 50%) 1.2% 需要进行肾移植的患者有狼疮肾炎 EUROIMMUN 抗 U1-nRNP与 Sm抗体 HEp-2细胞 猴肝 HEp-2细胞 抗 U1-nRNP与 Sm抗体 抗 U1-nRNP/Sm抗体 抗 Sm抗体 SLE 抗 U1-nRNP抗体 SLE Sharp综合征 (MCTD) EUROIMMUN 抗 U1-nRNP与 Sm抗体 SLE: 15-40% MCTD: 95-100% SLE: 5-30% EUROIMMUN 抗 U1-RNP抗体 抗 Sm抗体 Function: Pre-mRNA splicing EUROLINE ANA 谱 最多 18种抗原， 增加了 RNP亚单位 自动化 操作 全自动化 结果判读 EUROIMMUN 实验结果的解释（ ANA谱）： 抗 U1-nRNP/Sm和 Sm抗体 抗 nRNP/Sm 抗体 抗 Sm 抗体 结果 解释 - ? + - + + - - + - + U1-nRNP: Sm: - U1-nRNP: Sm: + U1-nRNP: Sm: - 结果不可靠 阴性 SLE SLE 或 MCTD 无 EUROIMMUN 抗核糖体 P蛋白抗体 HEp-2细胞 猴肝 40 S 亚单位 60 S 亚单位 P0 P2 P2 according to: Mahler et al., J Mol Med, 2003 抗原 : 核糖体 60S亚单位的 3个蛋白： P0, P1, P2. 在羧基末端有相同的免疫反应表位。 核糖体 P抗原的五聚体复合物。 P1 P1 核糖体 P蛋白 核糖体 P 蛋白 ELISA: 敏感性和特异性 (1) 群组 SLE 其他结缔组织病 * 健康献血员 n 360 79 206 抗核糖体 P 蛋白阳性数 34 (9.4%) 0% 0% *系统性硬化症 , 干燥综合症 , 皮肌炎 /多肌炎 对 SLE 100% 特异 EUROIMMUN 核糖体 P 蛋白 ELISA: 敏感性和特异性 (2) 群组 SLE MCTD SS SSc RA HD 特异性 n 185 21 55 66 89 100 310 抗核糖体 P蛋白阳性数 10 (5.4%) 0 0 0 0 0 100% EUROIMMUN EUROIMMUN HEp-2细胞 增殖型细胞核抗原 (PCNA) Hep-2细胞 猴肝 增殖型细胞核抗原 (PCNA) 靶抗原 : 表达为细胞周期依赖性 (S-期 ) 三聚体 (36 kDa)，是 DNA 多聚酶的辅因子并参与 DNA 修复调控 检测 : IIFT, Blot 临床意义 : SLE高特异性 (阳性率 3-7%), 与肾脏和 CNS及血小板减少相关 系统性红斑狼疮 (SLE) ANCA 相关性血管炎 慢性炎症性结缔组织病 (CICTD) 干燥综合症 (SS) Systemischer Lupus Erythematodes (SLE) dsDNA 系统性硬化症 (SSc) Scl -70 and CenpB SS-A and SS-B 慢性炎症性结缔组织病 (CICTD) 多肌炎 /皮肌炎 (PM/DM) Myositis Profile 夏普综合症 (MCTD) RNP Rheumatoide Arthritis (RA) EUROIMMUN 干燥综合征（ Sjgrens Syndrome） 外分泌腺受累的自身免疫疾病 症状 : - 口腔干燥 - 唾液及眼泪减少 - 腮腺肿胀 口腔干燥 - 胰腺外分泌腺分泌不足 腮腺肿胀 EUROIMMUN 干燥综合征 SS-A (60 kDa) SS-B (47 kDa) 40-95% 40-95% 代表性抗体 EUROIMMUN 抗 SS-A/SS-B抗体 HEp-2细胞 猴肝 SS-A 抗原 Boire et al., 1995: - Ro-52抗体不与 SS-A 抗原结合 - 纯化的 SS-A 抗原不包含 Ro-52 RNA + SS-A (60 kDa) + Ro-52 hY-RNA RNA + SS-A (60 kDa) hY-RNA SS-A (Ro-60), Ro-52 and SS-B 干燥综合症 : 40-95% SLE: 20-60% 新生儿狼疮 : 抗 SS-B抗体 干燥综合症 : SLE: 新生儿狼疮 : 40-95% 10-20% 78% 抗 Ro-52 (52 kDa)抗体 非特异 EUROIMMUN 功能 : 调控 RNA翻译 抗 SS-A (60 kDa)抗体 功能 :RNA聚合酶 III辅助蛋白 96% X EUROIMMUN 抗 Ro-52抗体 : 不同组别中均可出现 抗 Ro-52抗体 : 风湿性疾病中的阳性率 疾病 干燥综合症 系统性硬化症 肌炎 SLE MCTD RA n 88 81 26 210 21 165 抗 Ro-52抗体阳性 81 % 28 % 31 % 38 % 19 % 5% 抗 Ro-52抗体 在干燥综合症中阳性率较高，但没有疾病特异性 Meyer, Schlumberger et al., 4th Asian Congress on Autoimmunity, Singapore, Sept. 2009 EUROIMMUN Anti-Ro52: 肝脏疾病中的阳性率 疾病 PBC AIH HBV HCV 献血员 n 100 60 50 50 50 抗 Ro-52抗体 阳性 27 % 35 % 10 % 22 % 0 抗 Ro-52抗体没有疾病特异性 Meyer, Schlumberger et al., 4th Asian Congress on Autoimmunity, Singapore, Sept. 2009 系统性红斑狼疮 (SLE) ANCA 相关性血管炎 慢性炎症性结缔组织病 (CICTD) 干燥综合症 (SS) Systemischer Lupus Erythematodes (SLE) dsDNA 系统性硬化症 (SSc) Scl -70 and CenpB SS-A and SS-B 慢性炎症性结缔组织病 (CICTD) 多肌炎 /皮肌炎 (PM/DM) Myositis Profile 夏普综合症 (MCTD) RNP Rheumatoide Arthritis (RA) EUROIMMUN 系统性硬化症 (SSc) 血管与结缔组织受累的自身免疫疾病 症状 : - 指端硬化 (thin, sclerotic fingers) - 爪型手 - 面具脸 (嘴周边出现皱纹 , 嘴唇变薄 ) - 毛细血管扩张 (表面血管永久性扩张 ) - 表皮钙质沉着 (血管壁与皮肤钙化 ) 指端硬化，爪型手 毛细血管扩张 面具脸 EUROIMMUN 质沉着 皮肤钙 EUROIMMUN 系统性硬化症 实验室结果和临床数据的联合分析，有助于降低疾病诊断的模糊性， 同时为未来研究硬化症提供基础。 系统性硬化症 (SSc) 代表性抗体 抗着丝点抗体 抗 Scl-70抗体 抗原纤维蛋白抗体 抗 RNA多聚酶抗体 抗 PM-Scl抗体 12-43% 18-30% 6-8% 2-23% 1-16% EUROIMMUN EUROIMMUN 抗着丝点抗体 HEp-2细胞 /猴肝 HEp-2细胞 猴肝 EUROIMMUN 抗着丝点抗体 靶抗原 : 着丝点 -DNA 联合蛋白 : 着丝点蛋白 (A, B, C, D) 检测方法 : IIFT, ELISA, Blot 临床意义 : 局限性 硬皮病 (CREST综合症 ): 经常出现在 : 硬皮病 -PBC-重叠综合症 EUROIMMUN 抗 Scl-70抗体 HEp-2细胞 /猴肝 HEp-2细胞 猴肝 细胞核仁 : 抗 Scl-70抗体 靶抗原 : DNA-拓扑异构酶 I (100 kDa) DNA 双螺旋复制和转录 检测方法 : IIFA, ELISA, Blot 临床意义 : 弥散性硬皮病的诊断标志 (50-75%). 预后 : 较着丝点阳性的患者病情更严重。 抗着丝点 B蛋白抗体与 抗 Scl-70抗体 系统性硬化症 n = 295 抗 Scl-70 抗体 阳性 阴性 抗着丝点 B 蛋白抗体 阳性 阴性 1 66 106 122 59% 系统性硬化症患者分别出现抗着丝点抗体或抗 Scl-70抗体阳性 EUROIMMUN EUROIMMUN 抗 RNA聚合酶 I抗体 HEp-2细胞 /猴肝 HEp-2细胞 猴肝 抗原纤维蛋白抗体 HEp-2细胞 /猴肝 HEp-2细胞 猴肝 EUROIMMUN EUROIMMUN 抗 PM-Scl抗体 HEp-2细胞 /猴肝 HEp-2细胞 猴肝 抗 PM-Scl抗体 靶抗原 : PM-Scl: 11 到 16 个多肽复合物 在 rRNA 和一些 U-snRNAs剪接中起作用 (PM-Scl-100, PM-Scl-75) 检测方法 : IIFT, ELISA, Blot 临床意义 : 重叠综合症的诊断标志，表现为肌炎和硬皮病症状 (阳性率 50-70%). EUROLINE 系统性硬化症谱 一个实验膜条包括 13 种高特异性纯化抗原 系统性硬化症 (SSc)血清学诊断 EUROBlotMaster自动化操作 EUROLineScan软件全自动结果判读 患者血清 : 129 份 SSc血清和 202 份对照血清 50 PM/DM, 50 SLE, 42 RA, 60 HD 所有抗原的血清命中率为 : 85.3%. 系统性硬化症相关抗体 Meyer et al., 7th Congress on Autoimmunity in Ljubljana, May 2010 Arthritis Research 与组蛋白乙酰基转移酶和核小体重塑活性有关的主要抗原 (218kDa) 临床意义 : 肌炎 5-15% (主要是皮肌炎 ) EUROIMMUN 抗 Ku抗体 HEp-2细胞 /猴肝 HEp-2细胞 猴肝 细胞核颗粒 : 抗 Ku抗体 (p70/p80) 靶抗原 : DNA结合的非组蛋白和 DNA依赖的蛋白酶异源二聚体 分析方法 : IIFA, Blot 临床意义 : PM/Scl-重叠综合症 30-55% SLE 5-10% EUROIMMUN 其他与肌炎相关的抗体 Anti-SRP Anti-PL-12 HEp-2细胞 HEp-2细胞 EUROLINE 肌炎相关抗原 一个膜条上包括 7 或 11 种高度纯化抗原 (新 : PM- Scl, SRP, EJ, OJ) DM 和 PM及原发性肌炎的血清学诊断 EUROBlotMaster 自动化操作 EUROLineScan全自动化判读结果 153 份肌炎患者血清 50 DM, 89 PM, 4 juvenile DM, 10 IBM 77 份对照血清 26 SjS, 26 SLE, 25 SSc Anti- Mi-2 Ku PM-Scl100 Jo-1 PL-7 PL-12 SRP Prevalence 3% 3% 7% 12 % 2% 0% 5% Specificity 100 % 97 % 100 % 99 % 100 % 100 % 97 % EUROLINE 肌炎相关抗原 患者血清 : 所有抗原的血清学命中率 : 26%. Rnnelid et al., Autoimmun Rev, 2009 EUROIMMUN 患者血清 : 208 份肌炎患者血清 214 份对照血清 50 HD, 65 SLE, 34 SSc, 21 SjS, 13 非自身免疫性肌病 , 23 CTD-相关性肌炎 , 8 关节病 Anti- Prevalence Specificity Mi-2 Ku PM-Scl100 Jo-1 PL-7 or PL-12 4% 5% 4% 21 % 4% 98 % 95 % 100 % 100 % 100 % EUROLINE肌炎相关抗原 所有抗原的血清学命中率 : 37%. Ghirardello et al., Autoimmun Rev, 2009 EUROIMMUN Use of a commercial line blot assay as a screening test for autoantibodies in inflammatory myopathies J. Rnnelid, S. Barbasso Helmers, H. Storfors, K. Grip, L. Rnnblom, K. Franck-Larsson, G. Nordmark, I.E. Lundberg Autoimmunity Reviews 2009 Mar 11 相关参考资料 其他疾病中的抗核抗体 EUROIMMUN 抗线粒体抗体 (AMA) HEp-2细胞 /猴肝 HEp-2细胞 猴肝 胞浆粗颗粒 : 抗线粒体抗体 (AMA) 靶抗原 : M1 M9: M2 (丙酮酸脱氢酶 ), M4 (亚硫酸氧化酶 ), M9 (糖原磷酸化酶 a). 分析方法 : IIFA, ELISA, Blot 临床意义 : PBC 患者出现抗体 M2, M4, M9 M2: PBC标志性抗体 (阳性率 95%) M4 : 阳性率较低或总伴有 M2阳性 M9: PBC早期出现 (82%) 核颗粒型 胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等 分裂期细胞阳性：纺垂体、中间体、中心粒等 细胞核 细胞浆 核糖核蛋白： Sm、 nRNP、 SS-A、 SS-B Ku 细胞周期蛋白： I型（ PCNA）和 II型 ANA 核仁型： Scl-70、 RNA多聚酶、 PM-Scl和原纤维蛋白等 核浆点型：着丝点、核点等 胞浆颗粒型：线粒体、 Jo-1、核糖体等 抗核抗体谱的分类 根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下： 核均质型： DNA、组蛋白和核小体等 核膜型：板层素、 gp210等 谢谢 电力医院马林