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广东省临床基因扩增检验实验室技术人员理论培训班理论考试卷一， 填空（每题2分，共20分）1. DNA双螺旋中两条链走向是 反向 平行的，即一股链是 53 走向，另一股链为 35 走向；生物合成方向是 53 。2. 在极端的PH值或受热条件下，核酸分子中的 氢键 断裂， 双螺旋 结构解开，即为核酸变性。3. 核酸分子的杂交其实就是DNA 变性 、 复性 原理的应用。4. PCR扩增的三个基本阶段是 变性 、 退火 、 延伸 ，引物与模板的结合发生在 退火 阶段5. 反转录酶催化的DNA合成反应按 53 方向进行，在DNA合成时也需要引物，引物为病毒颗粒中的 mRNA 。6. PCR测定中的“假阳性”的最主要的来源是 PCR产物 的污染。7. 请填出以下各种微量移液器可取溶液的体积范围P10 0.5-10ul P20 2-20ul P100 20-100ul P200 50-200ul 如需吸取100ul液体，则最好使用 P100 加样器。8. 在基因扩增检验中，使用的带滤塞吸头吸加液体，只要是为了 防止标本间交叉污染 。9. TapMan荧光PCR测定原理中的关键点在于利用了Tap酶的 53 的外切酶活性，Ct值指的是 每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数 。10. 个体化医学的全面定义： 分为疾病风险预测（基因检测）和个体化治疗（基因检测）两个方面，基因预测疾病风险是指根据每个人的疾病基因组信息预测疾病的发生风险。个体化治疗是指根据每个人的疾病基因组信息对已发生的疾病进行治疗 。二， 是非题（正确的后面打，错误的后面打，并将错误处划线并改正，每题两分，未改正得1分，共20分）1. DNA双链中，碱基对总是A-T ,C-G配伍，其间以两个氢键相连。（） G-C间以三个氢键相连 2. 使用有防“污染”作用的UNG的PCR试剂盒，PCR实验室就不必严格分区。（） UNG酶只对低浓度的产物污染有效 3. 在全血、骨髓标本的采集时，可使用EDTA、枸缘酸钠或肝素抗凝。（）不能使用肝素抗凝 4. 血清HBeAg的存在是HBV感染及感染程度的确证标志。（）HBeAg是病毒复制的标志 5. 在PCR试剂盒中所使用的UTP与天然RNA分子中的U没什么区别。（）6. 基因扩增检验实验室“可移动紫外灯”的作用主要是便于实验室台面的消毒杀菌。（）7. 定量PCR与定性PCR测定原理的最主要区别点在于前者的测定点在PCR的指数扩增期，而后者多为扩增平台期。（）8. 加样器只要在其量程范围内，其吸液准确度均相同。（）不同规格的加样器之间准确度不同 9. 室内质量控制（IQC）监测和控制的是实验室测定的精密度（重复性），而室间质量评价则通过不同的实验室测定结果的比对而评价实验室测定的准确度。（）10. 临床检验中的系统误差通常表现为质控物测定SD的增大。（）三， 选择题（每题2分，共20分）1. 在核酸提取时，常需使用氯化钠、醋酸钠等盐溶液，其目的是：（A）A 中和核酸的负离子，使其易于沉淀 B 调节PH值 C 保证核酸的完整性 D无特定目的2. 临床上使用核酸扩增方法诊断沙眼衣原体感染，在标本收集上最为关键的是：（B ）A 标本的采取方式 B标本的保存方式 C标本的运送方式 D标本采取的时间3. 之所以要将基因扩增检验实验室的产物分析区设置为负压状态，目的是：（B）A 防止生物传染危险物的逸出 B 防止扩增产物从该区进入上游区域C 防止该区灰尘的逸出 D 无特殊目的4. 核酸探针的标志性特征是：（D）A一小段已知序列的单链核酸 B 一小段未知序列的单链核酸C 一小段已知序列的双链核酸 D 有同位素或非同位素标记物5. 核酸提取纯化中，RNase最主要的潜在污染源是：（D）A 实验室环境 B 实验用品如吸头、离心管等 C实验人员的手 D 以上A和B6. PCR方法检测病原微生物所扩增的区段，一般为：（B）A 整个病原体基因组 B 病原体基因组内的保守区域 C 病原体基因组内的任一区域 D 以上都不是7. 无创产前基因诊断为胎儿做出基因检测，需从孕妇外周血中分离获取及少量的：（B）A 孕妇有核红细胞 B 胎儿有核红细胞 C 白细胞 D 以上均可8. 临床PCR测定的重复性不好的原因如下，但除外：（B）A 试剂盒核酸提取方法对扩增抑制物去除不干净 B标准品浓度不准C 核酸扩增仪空间温度不均 D 加样重复性差9. 有关于动力学定量PCR方法中对扩增效率的测定，下述哪一条是错误的：（B）A 必须在扩增的指数期内测定 B 可在扩增的任何阶段进行C 与扩增产物的测定有关 D 尽可能多选几个测定点10. 临床基因扩增检验的室内质量控制与通常的临床定性免疫测定IQC的最大不同在于：（D）A 弱阳性质控血清的设置 B强阳性质控血清的设置 C阴性质控血清的设置 D 以上均是四， 问答题（40分）1. 有一基因扩增检验实验室在检测临床血清标本HCV RNA时，以HCV扩增片段的cDNA为标准品，检测结果除了试剂盒所带的cDNA标准品为阳性外，所有临床标本及弱阳性质控原血清样本、阳性质控样本均为阳性，并且阳性强度都较为接近。显然该次RT-PCR扩增检测存在问题。那么，你能帮助该实验室分析一下可能的检测失败的原因吗？并设计一个相应的验证试验证实。（20分）2. 今有一传染病医院为监测肝炎病人抗病毒治疗效果，现有一间面积为50平方米的房间，想建立一个临床基因扩增检验实验室开展HBV DNA和HCV RNA检测项目，经向有关专家咨询，专家建议其按卫生部要求将实验室分为三个区(图示如下)，选用荧光PCR方法，仪器设备按要求配备，可选用有SDA批准的荧光PCR试剂盒，你认为该专家的实验室设置有无原则性问题，对临床实际检测工作是否方便？如否，则请指出可能会有那些不方便？要是向你咨询，你会如何建议？（请将你设计的实验时设置画出）（20分）不方面，此设计进入样本制备区一定要通过试剂准备区，容易增加污染的风险，且缓冲间的设计也不合理，违背了PCR实验室设计中“各区独立，方便工作”等原则。我的设计如下：