常用溶液的配制

常用贮液与溶液lmol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。 分装成小份贮存于-20C。lmol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10m 1。分装成 小份贮存于-20 Co10mo1/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L 后，用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白（BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级， 无 DNA 酶）于 9.5ml 水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋 白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定 容到10ml，然后分装成小份贮存于-20C。1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮 存于-20Co或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到 100ml。1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙 酸调溶液的 pH 至 5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L）,混合后形成EDTA 的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES:将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH （6.8-8.2），然 后用水定容至 100ml。1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT （异丙基硫代-卩-D-半乳糖苷）于10ml水中，分 成小份贮存于-20Co1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgC126H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容 到10m l。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20 Co20mg/ml蛋白酶K （proteinase K）:将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇 动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10m l,然后分装成小份贮 存于-20 Co10mg/mlRnase （无 DNase） （DNasefree RNase）：溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA 酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5,于-20C贮存。（配制过程中要戴手套） 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌 器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1Lo10%SDS （十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中， 用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1Lo2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为 100ml。100%三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器 搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5% Xgal （5-溴-4-氯-3-吲哚一卩-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲 基甲酰胺（DMF），用铝箔包裹装液管，贮存于-20C。lOOxDenhardt试剂（Denhardts regent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用 量2%聚蔗糖（Ficoll, 400型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA （组分V）水2g2g2g加水至总体积为 100ml ，依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分 装成小份于-20 C贮存。10x标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分 及 终 浓 度 配 制 10ml 溶 液 各 成 分 的 用 量 0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 贮 液 ，100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L 贮 液 ，100mmol/L DTT:1ml 1mol/L 贮 液 ，2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 贮 液 ，5mmol/L 盐 酸 亚 精 胺 （ 可 选）:50ul 1 mmol/L 贮液,0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选）:0.5ml 10 mg/mL 贮液， 水: 2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20C。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到 100mmol/L纯 dNTPs 贮液,-80C 可贮存至少 6 个月。10mmol/L dNTP 混合液 成分及终浓度 配制 20ul 溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul20%PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水 20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠补足 100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。20xSSC成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）3mol/L氯化钠水 88.2g175.3g补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约 0.9L 水中，加几滴 10N NaOH 溶液调 pH 为7.0，用水补足体积至 1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水加lOOul DEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1 %。在37C温浴至少12h, 然后在15 psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活DEPC会与胺起反应， 不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（ deionized formamide）直接购买或加Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻 搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份， 充氮气于-80C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（ phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠 （双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L的磷酸二氢钠 （NaH2P04H20 ）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二 钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。1mol/L磷酸二氢钠（ml） 1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值TE （用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0， 25C）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）98.8mlTris 缓冲液（ Tris-HCl buffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH （25C下）加一定量的浓 盐酸（11.6N）,用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml） pH二. 电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50xTris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml 的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml 的 0.5 mol/L EDTA （pH 8.0）补足 1L5xTris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0)补足 1L染料1溴酚蓝( bromophenol blue) 加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中，搅拌或涡旋 混合直到完全溶解。1 %二甲苯青FF(xylene cyanole FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml 的溴化乙锭( ethidium bromide)小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全 溶解。用铝箔包裹装液管，于4C贮存。凝胶上样液( gel loading solutions)6x碱性凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖(400型)0.15%溴甲酚绿0.25%二甲苯青FF 水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.8g15mg25mg补足到 10ml6x聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖(400型)水 1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.5g补足到 10ml6x溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25%溴酚蓝0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖(400型)水 2.5ml 1%溴酚蓝2.5ml 1 %二甲苯青 FF1.5g补足到 10ml6x甘油凝胶上样液(4C贮存)成分及终浓度配制10m 1溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmo1/L EDTA50甘油水 1.5m1 1 溴酚蓝1.5m1 1 二甲苯青 FF100u1 0.5mo1/L EDTA（pH8.0）3m13.9m16x蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10m 1溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmo1/L EDTA40聚蔗糖水 1.5m1 1 溴酚蓝1.5m1 1 二甲苯青 FF100u1 0.5mo1/L EDTA（ pH8.0）4g补足到 10m110x十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10m 1溶液各成分用量0.2溴酚蓝0.2二甲苯青 FF200 mmo1/L EDTA0.1SDS50甘油水 20mg20mg4m1 0.5mo1/L EDTA（pH8.0）100u1 10 SDS5m1 补足到 10m1三. 常用培养基LB 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g如果需要用1N NaOH （lml）调整pH至7.0,再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂 粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/LoSOB 培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 20g酵母提取物 5g氯化钠 0.5g1 mol/L 氯化钾 2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。SOC 培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中 加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水 中，再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。TB 培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 12g酵母提取物 24g甘油 4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60 C，再加100ml灭菌的 170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液(2.31g 的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在 足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。2xYT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 16g酵母提取物 10g氯化钠 4ml如果需要用1N NaOH (1ml)调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂 粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/LoYPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 20g酵母提取物 10g葡萄糖 20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基 添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭 菌前加入20g琼脂粉。四. 常用抗生素氨苄青霉素( ampicillin)( 100mg/ml)溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以 25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素( carbenicillin)( 50mg/ml)溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常 以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林( methicillin)( 100mg/ml)溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10mlo分装成小份于-20C贮存。常以37.5ug/ml 终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素( kanamycin)( 10mg/ml)溶解lOOmg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10m 1。分装成小份于-20C贮存。常以 10ug/m 150ug/m1的终浓度添加于生长培养基。氯霉素(chloramphenicol) (25mg/m1)溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以 12.5ug/m 125ug/m1的终浓度添加于生长培养基。链霉素( streptomycin)( 50mg/ml)溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10m 1。分装成小份于-20C贮存。 常以10ug/m 150ug/m1的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸( na1idixic acid)( 5mg/m1)溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10m1。分装成小份于-20C贮存。常以 15ug/m1 的终浓度添加于生长培养基。四环素( tetracyy1ine)( 10mg/m1)溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10m1。 分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20C贮存。常以10ug/m 150ug/m1的终浓 度添加于生长培养基。几种溶液的配制方法1 、PBS:取ZLI-9061 PBS溶于1000m1的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.27.4之间，若偏离此范 围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。2、TBS：2.1 Tris 缓冲液配方：(0.5 M pH7.6)Tris (三羟甲基氨基甲烷)60.57g1N HCL 约 420m1双蒸水 加至 1000m1Tris缓冲液配制方法：先以少量双蒸水(300500m1)溶解Tris，加入HC1后，用HC1 (1N) 或NaOH (1N)将pH调至7.6，最后双蒸水加至1000m1。此液为储备液，4C冰箱中保存。2.2 TBS 配方：Tris-HCI缓冲液(0.5M pH7.6) 100m1NaCI 8.59g (0.15mo1/L)双蒸水 加至 1000m1TBS配制方法:先以少量双蒸水溶解NaC1，再加入Tris-HC1缓冲液，最后加双蒸水至1000m1， 充分摇匀。3、柠檬酸盐缓冲液(Citrate buffer)：3.1 储存液：A. 0.1M柠檬酸溶液：称取21.01g柠檬酸(C6H8O7H20)溶于1000m1蒸馏水中。B. 0.1M柠檬酸钠溶液：称取29.41g柠檬酸钠(C6H5Na3O72H20)溶于1000m1蒸馏水中。3.2 工作液：0.1取9m1 A液和41m1 B液加入450m1蒸馏水中，溶液pH值应为6.04、胰酶( Trypsin)：4.1 ZLI-9011 胰蛋白酶消化液：常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1 胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合(1:3 稀释)，则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可 以从0.05% (1:10 稀释)至 0.25%(1:1 稀释)。4.2 ZLI-9010胰蛋白酶：取 0.05g 或 0.1g 胰蛋白酶加入到 100ml 0.05%或 0.1% pH7.8 的无水氯化钙水溶液中，溶解 即可。5、胃酶（Pepsin）：4%胃蛋白酶，用O.lmol/L HCL配制。（我公司备有 ZLI-9013 胃蛋白酶消化工作液，不需稀释直接滴加使用，欢迎选购）6 、 DAB：6.l ZLI-9032/9033 DAB Kit：使用前只需将试剂盒提供的 A、B、C 三种试剂各一滴加至 lml 双蒸水中，即可获得 lml DAB 工作液，简单易用。6.l ZLI-9030 DAB：6mgDAB溶于lOmlTBS （0.05M pH7.6）,再加入O.lml浓度为3%的H2O2,过滤掉沉淀物, 即可。7、AEC：4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液（pH5.2）,然后 加入0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。8、RIPA：1xPBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS （此液体可长期保存）。以下抑制剂 以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。l/ml）卩8.1 10mg/ml PMSF异丙醇溶液（用量为10l/ml）卩8.2 Aprotinin（Sigma产品，用量为 308.3 1000mM sodium orthovanadate 冷冻液l/ml）卩（用量为109、Blotto A：常规使用 1xPBS， 5% milk， 0.05% Tween 20。10、Blotto B：与 Phosphotyrosine 抗体共用， 1xPBS， 1% milk， 0.05% Tween 20。部分实验中 milk 可完全 去除，但可能引起背景增高。