冠心病患者血浆含量测定论文

冠心病患者血浆含量测定论文【摘要】目的:测定冠心病患者与健康对照者血浆中MBL含量,分析其变化情况,从固有免疫的角度探讨冠心病的可能致病机制。方法:采集100例冠心病(CHD)患者空腹静脉血,健康对照者60例,采用ELISA法对血浆中MBL含量进行检测。结果:100例冠心病人血浆MBL含量的平均值为3900g/L,标准差为3209;60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2056g/L,标准差为1824。冠心病组血浆MBL含量高于健康对照组,经t检验,t=4071,P 【关键词】冠心病;MBL;ELISA;含量 【ABSTRACT】Objective:ThemainpurposeofthisstudyistomeasuretheMBLlevelinplasmawithcoronaryheartdiseaseandtrytoanalyzethepossiblemechanismofCHDsdevelopmentfromtheviewofinnateimmune.Methods:100bloodsamplesofCHDpatientsand60thatofhealthcontrolswerecollectedandtestedbyELISA.Results:TheplasmalevelofMBLwere3900g/L,SD3209incases,while2056g/L,SD1824incontrols.TheplasmalevelofMBLincasesishigherthanthatofcontrols(t=4071,P 【KEYWORDS】CHD;MBL;ELISA;Plasmalevel 冠心病(coronaryheartdisease,CHD)是一种严重危害人类健康的疾病,其发病率和死亡率居首位,尤其在发达国家更为严重,而在我国也呈逐年上升趋势1。其病因和发病机制尚未完全阐明,近年来,冠心病发病的炎症学说越来越得到重视2,对一些炎性因子和急性期蛋白的研究也越来越深入。甘露聚糖结合凝集素(mannanbindinglectin,MBL)是一种兼有调理素和直接激活补体功能的免疫分子,参与构成抗感染的第一道防线3。国外有些学者报道MBL与动脉粥样硬化发生、发展有关47,但国内尚无报道,因此本研究主要测定冠心病患者血浆中MBL含量,并对其变化进行分析,从天然免疫的角度探讨冠心病的可能致病机制,为其辅助诊断和治疗提供资料。 1材料与方法 11实验材料 主要设备:低温冰柜(thermo,美国);酶标仪(Starfax2100,美国);普通高速离心机(TGL168,上海) 主要试剂:MBLELISA试剂盒(北京现代高达生物技术有限责任公司) 12实验方法 121标本的收集:空腹静脉血标本用EDTAK2抗凝管(2ml)收集。 冠心病(CHD)组:共100例,为河北北方学院附属第一医院20049200510月住院的冠心病患者,男51例,女49例;年龄4570岁,平均(60419443)岁。病例均经心电图、心肌酶谱和临床症状等综合诊断,符合WHO冠心病诊断标准。 健康对照组:60例,为来院进行健康体检者,男性32例,女28例,年龄4371岁,平均(60277198)岁,病例无冠心病症状、体征,超声心动图及心电图均正常。冠心病组与健康对照组组间年龄无统计学差异。 122标本的处理 取1ml全血放入15ml离心管中,5000转/min离心5min,分离血浆,-86保存,供测定血浆MBL含量。 123血浆中MBL含量测定 按MBLELISA试剂盒说明书,基本操作如下: 标本及试剂准备:冠心病、健康对照血浆标本从低温冰柜(-86)中取出,溶解并恢复至室温,离心(3500转/min5min)。取上清2l,用标本稀释液对标本进行200倍稀释(加入398l标本稀释液PBS+005%BSA),混匀。所有实验用试剂均在室温平衡后使用。 操作步骤: 取100l稀释标本加入酶标板中,同时做对照,第一孔加100l稀释液作空白,第二孔向后依次加含MBL不同浓度(0,1,2,5,10,25,50,100ng/ml)的标准液各100l,标准孔均作复空; 置37水浴1h; 将板中的液体弃去,每孔加入150l洗板液进行清洗,室温静置3min,弃去洗板液,反复3遍; 清洗后,每孔加入100l酶标记的MBL抗体,371h,使酶标抗体与标本充分结合。 清洗,操作同; 清洗后,每孔加入底物A、B各50l,室温避光15min。每孔加入终止液50l,轻轻混匀20s; 用酶标仪比色测定波长为450nm,参考波长为620nm。在20min内完成。 2结果 用SPSS130软件进行统计分析,冠心病组、健康对照组血浆MBL含量的比较,采用两样本均数比较的t检验。 100例冠心病人血浆MBL含量的平均值为3900g/L,标准差为3209;60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2056g/L,标准差为1824。冠心病组血浆MBL含量高于健康对照组,经t检验,t=4071,P 3讨论 人类血清MBL浓度主要受结构基因外显子1密码子点突变的影响和启动子区多态性的调控811。国外已有一些MBL基因与冠心病的相关性研究46,但对血浆MBL浓度与冠心病的相关性研究很少,只有冰岛的一份前瞻性研究报告7:高浓度的血浆MBL者,尤其是糖尿病病人、高血脂、血沉升高人群患心肌梗死的概率较低,提示MBL可能与清除动脉粥样硬化因素有关。雷克雅未克Landspitali大学的瓦尔迪马森(HelgiValdimarsson)和同事分析了当地的研究资料,共纳入了1967年以后的近2万参试者。在对其中987名70岁参试者的横断面研究中,作者发现,MBL水平高(1000mg/L)与水平低相比,心肌梗塞风险下降36%(P 参考文献 1杨功焕,王俊芳,万霞,等.影响中国人群疾病死亡因素的定量分析J.中华流行病学杂志,2005,26(12):934938 2GranK.Inflammation,Atherosclerosis,andCoronaryArteryDiseaseNJ.EnglJMed,2005,352:16851695 3TakahashiK,EzekowitzRA.TheroleofthemannosebindinglectinininnateimmunityJ.ClinInfectDis,2005,41(7):440444 4AittoniemiJ,FanYM,LaaksonenR,etal.TheeffectofmannanbindinglectinvariantallelesoncoronaryarteryreactivityinhealthyyoungmenJ.IntJCardiol.,2004,97(2):317318 5RobertA,HegeleC.MannosebindingLectinGeneVariationandCardiovascularDiseaseinCanadianInuitJ.ClinChem,1999,45:1283 6FianeAE,UelandT,SimonsenS,etal.Lowmannosebindinglectinandincreasedcomplementactivationcorrelatetoallograftvasculopathy,ischaemia,andrejectionafterhumanhearttransplantationJ.EurHeartJ,2005,26(16):16601665 7SaedisS,OskarOO,ThorA,etal.MannanbindinglectinasanadjuncttoriskassessmentformyocardialinfarctioninindividualswithenhancedriskJ.JExpMed,2005,201:117125 8贾天军,李萍,张庶民,等.汉、蒙古族人MBL基因ExonI54位密码子点突变频率及其血浆含量相关性研究J.中华微生物学和免疫学杂志,2004,24(2):115119 9KilpatrickDC.MannanbindinglectinanditsroleininnateimmunityJ.TransfusMed,2002,12(6):335352 10ToralfB,WillemijnB,NannetteB,etal.FunctionalConsequencesofGeneticVariationacrosstheEntireMBL2Locus:PossibleIdentificationof3SNPsThatCouldModifyCirculatingLevelsofMBLJ.Blood(ASHAnnualMeetingAbstracts),2004,104:133011SteffensenRS,ThielK,VarmingC,etal.Detectionofstructuralgenemutationsandpromoterpolymorphismsinthemannanbindinglectin(MBL)genebypolymerasechainreactionwithsequencespecificprimersJ.JImmunolMethods,2000,241:33424