黄金大米中的β

黄金大米中的B胡萝卜素和油中的B胡萝卜素在为儿童提供维生素A方面有相同的作用摘要：背景：黄金大米已被基因工程改造为富含B胡萝卜素的大米，并作为维生素A的一种来 源。目的：目的是比较儿童对黄金大米和菠菜与食用油的B胡萝卜素中所含维生素A的吸收 效果。设计思路：随机指定一些儿童（68人，68岁）食用黄金大米或菠菜（都是生长在含水23的 营养液中）或者是油胶囊。黄金大米和菠菜的B胡萝卜素中高丰度的相对分子质量高的 Mb-C+2H10.富含重氢。油胶囊里的视黄基醋酸被作为一个参考剂量。收集受试者的血清样 本通过天然气色谱电子捕获带负电的化学电离质来测定被标记的具有丰富功能的视黄醇： Mretinol+4 （来源于油中的B胡萝卜素2H8 ）, Mretinol+5 （来自于黄金大米和菠菜中 B胡萝卜素2H10）和and Mretinol+10 （来自于视黄基醋酸13C10）。结果：使用响应剂量视黄醇乙酸酯（0.5毫克）作为参考,我们的实验结果表明，纯的B胡 萝卜素（0.5mg）,黄金大米中的B胡萝卜素（0.6mg），和菠菜中的B胡萝卜素（1.4mg） 转化为视黄醇的量分别为2.0mg,2.3mg,7.5mg。结论：黄金大米和油中的B胡萝卜素在为儿童提供维生素A方面有相同的效果并且比菠菜 更有效。一碗大约10 0到150g煮熟的黄金大米（干重 50g ）能够提供68岁的中国儿童被推荐 的营养摄入量的60%。这个试验被登记在www.clinical trials.go v并被编为N CT00680212。 简介维生素A是促进人体正常生长必不可少的，维持视功能，调节上皮组织的分化，胚胎发 育以及免疫功能。维生素A在预防儿童（36岁）传染性疾病的发病率和死亡率方面也很重 要的作用。长期食用维生素A含量低的食物会出现维生素A缺乏症（VAD）。为了预防临床上的VAD,以化学方法合成的维生素A （每年大约5亿颗胶囊片）已经被定 期地用于治疗危险人群了。增加食物如食用油和糖中维生素A的含量被认为是预防和控制 VAD的一种十分有效的方式。同时，以食物为基础的一些项目计划通过增加富含维生素A原 类胡萝卜素的食物中的可用性来提高对维生素A的吸收被认为是战胜全球性VAD的比较实际 和可持续的替代方式。然而，富含类胡萝卜素的植物性食物在预防VAD的效果已经被证明是 低于此前的希望或预期：维生素A相等的维生素A原类胡萝卜素在含量丰富的不同食物中相 差较大如从2ugB胡萝卜素对lug视黄醇（饮食中的油中的纯B胡萝卜素）到27 ugB 胡萝卜素对lug视黄醇（某些叶菜中的B胡萝卜素）。另外，WHO分别在2009和2012年发表 报告声称在世界范围内有大约1.92.5亿学龄前儿童仍然受到VAD的影响，而提供维生素A补 充剂能够把年龄小于5岁的孩子的死亡率降低24%34%。联合国儿童基金会在2010年的一篇 报告中指出2009年大约有810万5岁以下的儿童死亡。因此，为所有营养不良的儿童提供可 用的维生素A可以避免每年大约190270万的死亡。就致力于提供长期和可持续的预防VAD的 方法来看，主食经生物技术改造的富含维生素A原类胡萝卜素的食物可能是另一种安全且有 效的方法。科学家们已经将维生素A原的生物合成途径整合到水稻胚乳中，从而使1g已磨未煮的黄 金大米含有37ug的维生素A原类胡萝卜素。这种经生物技术改造的作物是专门为以大米为主 食并且患VAD相当严重的人群开发的。尽管一个小规模的黄金大米生物转化的研究在美国成 人身上已经完成，但是一个衡量黄金大米中的B胡萝卜素在儿童体内的生物转化效率也 是必要的。在这里我们报告一个试验来确定在内部被标记的黄金大米中维生素A的含量并与 菠菜以及油中的B胡萝卜素相比，实验对象是处于维生素A缺乏边缘或维生素A摄入量正 常状态的小学生。对象和方法对象这个研究是在中国湖南省的一个素质教育学校的健康小学生身上进行的，他们的年龄 在68岁之间，他们或者从没被寄生虫感染过或已证实感染后经注射400mg阿苯哒锉后未被 感染。大多数当地居民都是本地的中等收入者，农民或工人。这项研究中48%的研究对象在 治愈（没有副作用）后被招募参与了这项研究。这样，所有参与的研究对象都经过测试证 明未被寄生虫感染。当地的年度健康评估在所有的孩子身上进行，同时也进行相关的生物 医学测试（包括白细胞，血红蛋白，血小板，和红细胞的数量，以及血细胞比容）。为了估算研究中样本的量，我们使用之前在美国对菠菜或0-胡萝卜素胶囊的研究和 在中国对深绿色蔬菜的研究数据用于屈光力计算。我们发现为了确定2种类型一一维生素A 摄入量处于边缘和正常状态的不同一一每一种类型我们需要的样本大小为30,为了评估食 物来源（菠菜，黄金大米和0-胡萝卜素胶囊）对基质的影响每组我们需要10个样本。考 虑到研究对象中途撤出这项研究的可能性，我们将研究对象分为维生素A摄入量处于边缘和 正常状态的两组，每组36人，再按每组12人分别对应菠菜组，大米组和0-胡萝卜素胶囊 组。从总的112人中进行筛选，其中72人参与了这项研究，68个研究对象提供了充足的血清 样本使高效液相色谱法和气体色谱/质谱分析法更容易进行。受试者的人体测量数据在中国 关于这一年龄段报告的所有数据范围之内。这项研究被美国医学中心塔夫茨大学审查委员 会和中国浙江医科大学伦理审查委员会批准。家长和学生都同意参与该项研究。内部被标记的植物体的产品和准备标记的剂量内部的氘被标记的GR谷物和菠菜是通过将植物种植在含重水的植物水培系统中而获得 的，种子填充后不久或者在开始种植之前就引入到生长培养基上，或者在开始种植之前按 照前面所说的做。GR谷物在成熟期收获后，风干3天，然后经去壳，碾磨后储存在-70C的 环境中直至船运到波士顿做饭。菠菜植物收获和包装的新鲜菜叶（和米）第二天被运到波 士顿烹饪，步骤和前面所说的一样。煮熟的GR被分成60g份，在使用之前会将其放在单独的食物容器中并保存在-70匕的 条件下。在要吃饭的时候，保存的米饭在午餐之前被拿出放在室温下短暂加热。已被标记的菠菜煮熟后呈混合的均质化状态，然后将其按30g每一份分装到单独的食物 容器中并保存在-70匕的环境中。准备食用的时候，保存的菠菜在午餐之前被拿出放在室温 下短暂加热。纯的0-胡萝卜素是透明的全反式0-胡萝卜素，是由巴斯夫的科学家人工合成的。 它的化学纯度为91.2%。油胶囊中的0 -胡萝卜素是由使用精确度为0.001mg的梅特勒-托利 多的XP-26微量天平称取质量为0.50mg的0-胡萝卜素，先将它溶解在10uL的纯乙醇中，再 将其与170mg的玉米油混合形成石油溶剂。在这些植物性食物中浓缩的0胡萝卜素连同纯的 0-胡萝卜素一同进行液相色谱-大气压力化学质谱分析，结果如图1所示。把0.5mg化学纯度为98%和同位素纯度为99%的视黄醇乙酸酯作为一个参考剂量，并放在 170mg的玉米油明胶胶囊中，让志愿者在吃早餐时将其服下。这项研究的剂量和POLARPACK 冰砖一起包装并预冷至-70匕船运到在中国的研究基地，那里的剂量在使用之前不久都被保 存在-20C的环境中。研究设计受试者被随机地分配食用菠菜，黄金大米或油胶囊中的0胡萝卜素。整个研究持续 了35天包括一个14天的饮食准备阶段，在这期间孩子们尝试由厨房提供的食物，同时他们 的父母被告知在研究期间对孩子们的饮食限制。完整的研究还包括一个计量天和一个为期21天的对每一个受试者抽取5个血液样本用来研究血液响应曲线。具体细节见图2。在0700-0800天的研究中，孩子们服用一个含视黄醇乙酸酯的油胶囊，和10mL的豆奶, 还有包含米粉，猪肉，半个苹果和一块26g的饼干的标准化早餐。这个食物的总能量630千 焦，其中的20%来自于脂肪。1145年和1230年之间，受试者食用一个标准化的午餐和研究中 的菠菜，油胶囊中的B胡萝卜素或黄金大米。对菠菜或B胡萝卜素胶囊组，通过在饮 食中添加适量的白米饭来确保热量与60gGR组相等。人均每日维生素A摄入量来自于受试者 的日常饮食的大约是240ug，这是以整个组的食物记录为基础的得出的。在3周的研究过程 中，受试者每周有5天是在学校用餐。说明显示当孩子们周末在家里用餐时富含维生素A或 维生素A原的食物被忽略了。周末在家里的饮食记录在一个回家日志里。禁食的血液样本试图对每个受试者的1、3、7、14、21的整个实验周期向前面所说的那 样进行分析。视黄醇等值计算血清视黄醇总量的曲线面积来自于被标记的参考剂量。使用高效液相色谱法测量血液中视黄醇的浓度。这个被标记的视黄醇来自于每一个带 标记的B胡萝卜素或视黄醇乙酸酯，计算式为：丰度X视黄醇浓度X体重X 0.0497，可 以用来确定全身血清总体积。转换系数的计算B-胡萝卜素,维生素A的转换因子被定义为在GR，菠菜或者是有胶囊中带标记的B-胡萝 卜素的量，与维生素A来自于其他剂量相比。因此，油胶囊中B-胡萝卜素，GR，菠菜的B- 胡萝卜素的转换因子对应的维生素A如下：GOLDENRICEISAGOODVITAMINASOURCEFORCHILDREN黄金大米可以为小孩提供一个很好的维生素A源Conversionfactorofb-carotenetoretinolbyweightB-胡萝卜素通过质量转化成维生素a的公式Statisticalanalyses 统计分析 Statisticalanalyseswereperformedtoassessthesignificanceofdifferencesbetween subjectsinthedifferentgroups(eg,basedonanthropometricmeasures,sex,vitaminA status, subjects grouped into serum retinol concentration ,24.9 or.25.0 mg/dL) by usingSASforWindows,version9 2(SASInstituteInc)通过使用SASWindows,版本92(SAS研究公司)进行统计分析来评估在不同团体(如以人体 测量、性别、维生素A的地位为基础以血清视黄醇浓度为24.9或250毫克/dL来将被试者进 行分组)主题之间的差异的意义。Becauseofthelimitationofobtainingserumsampl esforall5timepointsfromeach child(1 -5sampl eswereobtainedfromeachchil d),thefollowingapproachwasusedto assess the SE for conversion factors from each labeled dose: 1) missing data points wereconsideredtobemissingcompletelyatrand ombecausetherewasnoreasonto thinkthatbeingmissingwasrelatedtoasubjectsdietgrouporhisorherresponse;2) therewereenoughmissingdatatocompromiseourabilitytoestimateindividualAUCs; therefore,theMIXED procedure of SASfor Windows was used toestimate the mean AUCanditsSE;3)thedeltamethod(31)wasusedtoestimatetheSEoftheratioofthe AUC formed from each b-carotene dose to the AUC of the reference dose under the assumptionthatthe2AUCsareuncorrelated(thisisaconservativeapproachthatwill overstatetheSEiftheAUCsarepositivelycorrelated);and4)ratioswerecomparedby calculatingzstatisticsasthedifferenceinratiosdividedbythesquarerootofthesum of their squared SEs; the results were considered significantly different if a 2-sided observedsignificancel evel(Pvalue)was 0 05由于从每个孩子(从每个孩子获得的1-5样本)的5种时间点获取血清样本的限制，下面 的方法被用来评估每一个标记的剂量。1)缺失的数据点被认为是完全随意的缺失，因为没 有理由认为缺失会同一个主题的饮食集团或他或她的反应联系起来；2)有足够的缺失数据 来妥协我们的能力去判断个人AUCs;因此，为Windows的统计分析系统的混合程序被用来评估平均的AUC和它的SE ； 3)三角洲方法(31) 被用来估计AUC (曲线下面积)的比率的SE，其中AUC形成于假设2AUCS是不相关(这是一 个保守的方法，如果AUCs是正相关的，将夸大了SE)的条件下的每个卩-胡萝卜素剂量的参考 剂量。4)通过计算z数据来比较比率当不同的比率除以他们平方SEs的总和的平方根。如果 个双向的观察到的显著水平(P值)是pv005,那么结果被认为是不同寻常的。RESULTS 结果 TheGRandspinachgrownwithheavy-waternutrientsolutionsgeneratedmaterialin whichtheenrichmentprofil esforb-caroteneshowedthemostabundantenrichment peakatmolecularmass+10forGRb-caroteneandspinachb-carotene(Figure1);these labeledmaterialsweresuitableforstudyuse黄金大米和菠菜在重水营养溶剂中生成的物质中对卩-胡萝卜素浓缩峰的简要描述显示黄金 大米中卩-胡萝卜素和菠菜中B-胡萝卜素最大的浓缩峰在分子质量+10(图1)；这些标记物质 适合研究使用。Ourvolunteerswerehealthy,andtheanthropometricmeasuresforeachgroup(atotal of68subjectscontributedsufficientbloodsamplesforanalysis)arelistedinTabl e1. No statistically significant differences in height and weight were observed between boysandgirls,andtheirheightandbodyweightswereinthenormalrangeforthisage groupinChina我们的志愿者都是健康的，每组的人体测量(总共68名受试者贡献足够的血液样本进行分析) 表1中列出。在男孩和女孩之间的身高和体重观察来看，没有明显的统计学差异，并且他 们的身高和体重对于在中国的这个年龄组来说是在正常范围内。WhenevaluatedbyusingtheWHOgrowthreferencedataforages5 -19y(32),thez scoresofweight-for-agerangedfromamedianto22forbothgirlsandboys,whereas thezscoresofheight-for-agerangedfrommedianto21forboysandfrommedianto22 for girls. As a population, our subjects baseline serum vitamin A concentrations weremarginal,withameanconcentrationof23.6to25.6mg/dL(Table2),andarange from16.7to40.3mg/dL.当通过使用多年的世卫组织生长参考数据y(32)第519页来评估，按年龄来计重的z数据对 女孩和男孩来说其范围是是从中间到22岁的范围内变化，然而z数据的年龄标准身高对男孩 来说是从中间到21岁，对女孩来说是从中间到22岁。作为一个群体来看，我们的受试者的 基线血清维生素a浓度处于临界的浓度，其平均浓度为236到256mg/dL之间(表2),并且有 一个从167到403mg/dL的范围。Boysintheb-carotenecapsuletreatmentgrouphadasignificantlylowerserumretinol concentration(22.2mg/dL)thandidgirlsintheb-carotenecapsule(P=0.044)andGR (P=0.025)treatmentgroupsbutnotsignificantlylowerthanthatinanyoftheother subgroups. No significant difference in the serum retinol concentration was found betweenthegirlsintheb-carotenecapsul etreatmentgroupandeithersexoftheGRor spinachgroup.男孩在0-胡萝卜素胶囊治疗组中比女孩在B-胡萝卜素胶囊(P=0044)和GR(P=O025)治 疗组中有更低的血清视黄醇浓度(222mg/dL)，但相对其他的组中低得不是非常的显著。在0-胡萝卜素胶囊治疗组中的女孩们和黄金大米及菠菜治疗组中的异性中血清视黄醇浓度 没有显著地发现什么差异。The limitations of this study were that only a few individual subject kinetic curves includingall5blooddrawingtimepointswereobtained.Thus,wechosetoconstructoneAUCforeachgrouping,withSDsaroundthevarious pointsonthecurve因此，依据SDs在图上各个点的情况，为每个分组我们选择构建一个AUC。Thisissimilartothe“super -child”modelthatwasdevelopedbycollectingsamplesat selectedtimesfrommanyindividualstomakeupacompletesampleset.这是类似于通过多次从许多个人那里收集样本而组建起来的样本集所发展起来的“超级儿 童模式。Thesuper-childmodelapproachhasbeenusedinavitaminAstudyofpreschool-agePeruvianchildren(36,37).Inourcurrentstudy,theseresultsgeneratedone conversionfactorforeachdietarygroup,sexgroup,andvitaminAstatusgroup.这个超级儿童模型方法已经用于秘鲁学龄前孩子维生素A的研究。在我们当前的研究，这些 研究结果对于每个饮食集团、性别组和维生素A状态组产生了一个转换因子。Thesesinglegroupcurvesprovideestimationsforconversionefficiencyforagroupas awhole,butindividuallytheyarenotsuitable(becausetheydonotprovidesuitable estimateoftheSE)forthestatisticalanalysisofdifferencesinconversionefficiencies betweenthegroups.这些单一组曲线作为一个整体为一个组的转换效率提供判断，但从单个的角度他们不适合 (因为他们没有提供SE合适的判断)组与组之间转换效率差异的统计分析。However,byusingtheMIXEDprocedureofSAStoestimatethemeanAUCanditsSE foreach interventiongroup,includingthesubgroupsinsexandvitaminAstatus(.or,25 mg/dL)andforthereferencedose,theratiosandtheirSEscouldbeestimatedandz statisticscalculated. vitaminA(16,17).However,onthebasisofourcurrentfindings,维他命A(16,17)。然而，在我们当下主要发现的来看，a single 50-g dry-weight serving of GR (a bowl ofw100 to 150 g cooked weight) can providew1mgb-carotene,每50g黄金大米提供的干重(一碗100150g煮熟的重量)能提供1mg的0-胡萝卜素 whichwoul dthenbeconvertedto435ugretinol.Thiswoul drepresent60%ofthe ChinesevitaminARecommendedNutrientIntake(700ug)fora7-y-ol dchild.然后被转化成435ug的视黄醇。这将取代中国7岁儿童推荐的营养摄取量(700ug)的60%。Thelimitationsofthisstudywerethatonlyafewindividual subjectkineticcurvesincludingall5blooddrawingtimepointswereobtained. 这篇调查的局限性在于只是通过少数个别主题动力学曲线包括5个抽血时间点所获得的 Thus,wechosetoconstructoneAUCforeachgrouping,withSDsaroundthevarious pointsonthecurve.因此我们选择为每一组建设一个AUC对比与周围各点上的差。Thisissi milartothe“super -child”modelthatwasd evelopedbycollectingsampl esat selectedtimesfrommanyindividualstomakeupacompletesampleset.这类似于从许多个体所选定的时间来收集案例从而建立超子模型使其成为一个完整的样本 集Thesuper-chil dmodelapproachhasbeenusedinavitaminAstudy ofpreschool-age Peruvianchildren(36,37).项关于秘鲁学龄前儿童维他命A (36,37)的调査采用了这种超子模型In our current study, these results generated one conversion factor for each dietary group,sexgroup,andvitaminAstatusgroup.在我们目前的调查中，这些结果为每个饮食组，性别组和维他命状态组生成了种转换 因子Thesesingl egroupcurvesprovid eestimationsforconversionefficiencyforagroupas awhole,这些单一组曲线作为一个整体为集团提供评估转换效率butindividuallythey are not suitable (because they do not provide suitable estimate of the SE) for the statisticalanalysisofdifferencesinconversionefficienciesbetweenthegroups. 但是如 果单独看的话，他们(因为他们没有对SE提供合适的估计)对在两组之间转换效率的差异的数 据统计分析是不适合的However,byusingtheMIXEDprocedureofSAStoestimatethemeanAUCanditsSEfor eachinterventiongroup,includingthesubgroupsinsexand vitaminAstatus(.or,25 mg/dL)andforthereferenced ose,theratiosandtheirSEscouldbeestimatedandz statistics calculated.但是，通过使用混合过程的SAS去为eachintervention组估计平均AUC及其SE,包括在性和维生素A的状态的子组(。或者,25mg/dL)和参考的剂量，其中的比率 和他们的SEs可以被估计和z统计计算Theresults showedatrendoftheconversionfactorfortheboysgroupto begreaterthanthatforthegirlsgroupbutnotstatisticallydifferent.结果显示了转换效率对于男孩组而言大于女孩组但无统计学差异的趋势。Boththeb-caroteneandspinachgroupsshowedatrend (notstatisticallysignificant)ofbetterconversionfactorforthe ,24.9mg/dLsubgroupbutnotthesametrendwiththevitaminA statussubgroupsassociatedwiththeGol denRicegroup,where thenvaluewassmall er(Table2). B-胡萝卜素和菠菜团体都显示出(没有统计学意义)对于小于24.9ug/dL子群有更好的转换效率、但与黄金大米相关的n值 较小的维生素A状态子组不相同的趋势（表2）Previousdatahaveshownthattheconversionefficiencyofspinachb-carotenetovitaminAislow(26)之前的数据显示，菠菜0-胡萝卜素的转换效率比维生素 A 的低(26)Inastudyconducted inUSadults,theconversionfactorofspinachcontaining11mg b-carotene(300gcookedspinach)was21to1byweightandthat ofb-caroteneinoilcapsulecontaining6mgb-carotenewas9to1byweight. 有一项在美国成年人中进行的研究,菠菜的转换效率在含有11毫克卩-胡萝卜素(300g煮熟的菠菜)是21比1 (按重量)，在油胶囊中的卩-胡萝卜素含有6毫克， 转换效率为9比1Otherstudies(16,38)thatevaluatedtheleafyvegetable b-carotene conversion efficiency also showed the conversionfactors from 10:1(Indianspinach)to26:1(mixeddarkgreenleafyvegetables) 其他的研究(16,38),通过对绿叶蔬菜中 0-胡萝卜素转换效率的评估同样显示了转换比率从10比1(印度菠菜)到26比1(混合 暗绿色绿叶蔬菜)。的变化ToensurethatthevitaminAformedfromthespinachd osewouldbedetectable,wegaveaspinachdose containing1.4mgb-carotene(30gcookedspinach),whichisstill a physiologic (dietary) dose为确保菠菜剂量中形成的维生素A会被探测到,我们给一个菠 菜剂量含有14毫克卩-胡萝卜素(30g煮熟的菠菜)，它仍然是一个生理(饮食)剂量Theaveragetotalserumresponsetothespinachd ose(1.4mgb-carotene)reached1.9mmolonday1 andwashigher(butnotsignificantlyso)thantheserumresponse totheoil(0.5mgb-carotene)orGR(0.6mgb-carotene)d oses (1.5and1.6mmol,respectively),butthesewerenotproportional withthecontentsoftheb-caroteneineachofthedoses.对菠菜剂量(1.4毫克 0-胡萝卜素)的平均血清总响应在第一天中达到1.9毫摩尔并且比在石油(0.5毫克 0-胡萝卜素)或黄金大米(0.6毫克 0-胡萝卜素)(分别1.5和1.6毫摩尔,)高血清反应高(但不明显)但这些都不是每个剂量中所含0-胡萝卜素的比例。其他的研究评价说多叶的蔬菜B胡萝卜素的转化效率也显示了转化因子从10:1 （印度菠菜） 到26:1（混合暗绿多叶蔬菜）。为了确保维生素a在菠菜中的形成能被探测到，我们给了一 个含有14mgp胡萝卜素的菠菜（30g煮熟的菠菜），这仍然是一个生理饮食剂量。对菠菜剂 量（14mgB胡萝卜素）的平均总血清反应在第一天达到19umol而且高于（但是不显著）油 胶囊或黄金大米的剂量的血清反应。但是这每个剂量中都不是与B胡萝卜素的含量成正比。 此外，与美国成年人比较，中国儿童把B胡萝卜素转化为维生素a的效率更高。这可能与 以下的一种或两种可能性相关：两个人群中个体的年龄差异或者维生素 a 的含量因为这些 儿童相对于美国成年人来说维生素a含量更低。总之，黄金大米由B胡萝卜素到维生素a 的高效转化表明这种大米可以作为维生素a的来源。黄金大米可能作为合成维生素a的来 源像来自维生素a胶囊，鸡蛋，或牛奶一样来克服大米消费人群的维生素a的缺乏。意识 到维生素a的等价植食性食物而去提供一个科学的食物营养需求从而改善世界上一些 维生素a缺乏的地区的情况。我们感谢所有这次参加研究的中国湖南的志愿者和厨师，护士员工以及湖南省疾病控制防 御中心。实验人员的职责如下；设计一个方法实施现场试验，监督数据分析，写手稿；YH；协调和 监督研究；SY；研究和收集样本；YW；回顾研究设计并监督；GED；监督和实施统计分 析MAG;生产大米和菠菜RMR；设计这项研究并作为此研究的医生。所有的实验者回顾了 原稿，没有一个和这项试验有利益冲突。