过氧化氢含量测定

过氧化氢含量测定一、实验原理过氧化氢与硫酸钛反应生成过氧化物-钛复合物黄色沉淀，可被硫酸溶解后，在415nm波 长下比色测定。在一定范围内，其颜色深浅与过氧化氢浓度呈线性关系。二、仪器与试剂仪器和用具：研钵；移液管0. 2mlX2支，5mlX 1支；容量瓶10mlX7个，离心管5ml X8支；离心机；分光光度计。试剂：100 口 mol/L H202丙酮试剂：取30%分析纯H202 57 口1,溶于100ml,再稀释100 倍；2mo1/L硫酸；5% (W/V)硫酸钛；丙酮；浓氨水。三、实验方法1, 试剂1234567100umol/L HO2200.10.20.40.60.81.04C下预冷丙酮1.00.90.80.60.40.205%硫酸钛0.10.10.10.10.10.10.1浓氨水0.10.10.10.10.10.10.14000r/min离心5min，弃上清液留沉淀，然后再向每管中加2mo1硫酸5ml，摇匀，待沉淀 溶解后，在415nm波长下比色，测其吸光值，绘制标准曲线。2，样品提取与测定(1) 称取小麦叶片1g左右，剪碎加2ml预冷丙酮和少量石英砂，研磨成匀浆后，转入离 心管中，再用5ml预冷丙酮洗研钵，加入离心管中，4000r/min离心5min，弃上清液即为样 品提取液。(2) 取样品提取液1ml，弃上清液，沉淀用丙酮反复洗(去除绿色)，3-5次，然后加入硫 酸钛和浓氨水，待沉淀形成后4000r/min离心5min，弃上清液留沉淀，加入5ml硫酸，摇匀, 待沉淀溶解后在415nm波长下比色，测其吸光值。3，结果计算植物组织中H O含量(umol/g.FW)二2 2FW .v1c：浓度(umol) vt：总体积ml v1：测定体积ml四、实验结果1，绘制标准曲线2，其他数据FW=1.008gvt=7mlA (样品)=1.4723，计算结果植物组织中HO含量(umol/g.FW) =_也=12.23142 2FW .v1五、实验分析1，本次试验在研磨小麦叶片时，由于丙酮易挥发，所以研磨不充分，而且冲洗研钵时也不完 全，导致样品的损失。2，显色反应时，用丙酮反复冲洗绿色，并不彻底，可能会对结果造成影响。3，离心前要配平。4，样品提取完成获得沉淀后，需要用丙酮将绿色洗涤去除，防止叶绿素对测定结果的影响。5，放置较长时间的 H2O2 标准液，使用前应先进行浓度标定。