电针足三里、三阴交穴治疗大鼠胶原性关节炎及其部分血液流变学机

电针足三里、三阴交穴治疗大鼠胶原性关节炎及其部分血液流变学机 目的观察电针“足三里”、“三阴交”穴对胶原性关节炎（Collageninduced Arthritis，CIA）大鼠的治疗作用及其部分血液流变学机制。方法36只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组和电针治疗组，模型对照组和电针治疗组大鼠采用牛II型胶原在大鼠背部正中线作多点皮内注射诱发CIA模型，选取“足三里”、“三阴交”穴进行电针治疗，观察CIA大鼠足跖肿胀度、痛阈和踝关节的病理变化，检测全血粘度和红细胞聚集指数观察血液流变学变化。结果电针“足三里”、“三阴交”穴可显著减少CIA大鼠关节炎肢体累及数、抑制足跖肿胀、提高痛阈、减少踝关节病理损伤；电针治疗组大鼠全血粘度低切下降显著（P类风湿性关节炎 胶原诱导性关节炎 电针 血液流变学Abstract：Objective To observe the therapeutic effect of electroacupuncture （EA） collageninduced arthritis （CIA ） in rats and explore the partial mechanism via regulating blood rheology.Methods Bovine type II collagen was intradermally injected into the back of anesthetized rats to induce arthritis，the animal model of rheumatoid arthritis.Electroacupuncture （continuous waves，2 Hz，5 mA ） was applied unilaterally and alternatively to Zusanli （ST 36） and Sanyinjiao （SP 6） for 30min，given once a day for 30 days.The paw edema，pain threshold and joint pathological changes in CIA rats were observed.Some indexes in blood rheology such as viscosity and erythrocyte aggregation were also examined.Results EA at point Zuansanli （ST 36） and Sanyinjiao （SP 6） reduced paw swelling and increased pain threshold significantly.Pathological damages of joint in CIA rats were effectively prevented by EA treatment.Meanwhile，the low blood viscosity in EA group were lower obviously than that in control group，and the erythrocyte aggregation indexes were downregulated by EA.Conclusion EA has a pronounced therapeutic effect on collageninduced arthritis in rats.Regulating the blood rheology in CIA rats may be the mechanism of EA.Key words：rheumatoid arthritis；collageninduced arthritis；electroacupuncture；blood rheology类风湿性关节炎属祖国医学“痹证”范畴，是由于风寒湿热等外邪侵袭人体，痹阻经络，气血运行不畅所致，可以出现关节红肿、疼痛，久致畸形。RA患病率高，约为人口的0.3%1%左右1，因而受到医学界的广泛关注。本研究选用针灸临床常用穴足三里和三阴交，采用大鼠胶原诱导性关节炎（CIA）模型，观察电针对实验性类风湿性关节炎的治疗作用，并从血液流变学角度探讨其部分作用机制。1材料与方法1.1实验动物与分组清洁级雄性Wistar大鼠36只，体重9010g，由浙江中医药大学实验动物中心提供。随机分为正常对照组、模型对照组和电针治疗组，每组12只。1.2试剂与仪器牛II型胶原（美国Sigma公司），LH202H韩氏电针仪（北京华卫产业开发公司），ZMN7803型全自动组织包埋机（常州市华利电子有限责任公司），RM2016型徕卡转轮式切片机（上海徕卡仪器有限公司），上海徕卡仪器有限公司（常州市华利电子有限责任公司），YLS7A型足跖容积测量仪（山东省医学科学院设备站）。1.3实验方法1.3.1建立胶原性关节炎模型取适量牛II型胶原溶于0.01M的乙酸中（2mg胶原/ml），在4下过夜溶化，再与等量福氏不完全佐剂在冰浴下充分制成乳剂，除空白对照组外，大鼠在3%戊巴比妥纳（浓度2%，注射量3ml/kg）腹腔麻醉下，每只以0.9ml（含0.9mg胶原）乳剂，在背部正中67点和尾根部12点作皮内注射接种诱发CIA模型。1.3.2治疗方法电针治疗组从造模后第2日开始即进行电针干预治疗。治疗方法：实验人员固定大鼠，取针灸针刺入一侧“足三里”、“三阴交”穴（参照人体穴位，以动物比较学方法定位）后，进针后以韩氏电针仪连接针灸针行电针治疗（两侧穴位交替治疗），刺激参数为：频率2Hz、强度2mA，每次治疗30min，1次/d，连续治疗30d。模型对照组固定方法和时间同电针治疗组，但不予任何治疗。正常对照组大鼠不予任何干预。1.3.3指标检测足跖容积肿胀度测定：以容积测定法测定CIA大鼠足跖肿胀度。各组大鼠分别在造模前、造模后第14天、造模后第30天，测定左、右后足跖的肿胀度，计算平均肿胀度：平均肿胀度=（左后足跖肿胀度+右后足跖肿胀度）/2，单位以ml计。痛阈测定：采用经典的热水甩尾实验测定各组大鼠不同时期的痛阈。以尾部浸入到尾部甩动的时间，作为痛阈时间；以12s作为终止时间，以防尾部组织损伤，大于12s均计为12s，每只大鼠检测3次，每次间隔1min，求其平均值。造模前、造模后14d和造模后30d分别测量记录。踝关节病理形态学观察：治疗30d后，取各大鼠右后足在掌面、踝关节上1cm左右两处剪下，置于5%的硝酸溶液中脱钙17d，以切片刀割骨组织无明显阻力为脱钙成功标志。然后行常规脱水包埋，HE染色。参考Takeshita法2，根据炎症细胞浸润、滑膜炎、软骨和骨质破坏等不同情况，将足爪关节炎分为四级：0级：正常关节病理；1级：轻度滑膜炎；2级：重度滑膜炎；3级：重度滑膜炎并见软骨破坏。计算各实验组列入病理学等级大鼠的例数，并进行统计学处理，观察实验大鼠组织病理学改变情况。血液流变学指标测定：各组大鼠在治疗30d后腹腔麻醉，下腔静脉取血3.5ml，置于抗凝管中，采用全自动血液流变仪检测全血粘度和红细胞聚集指数。1.4统计学处理所有实验数据采用SPSS11.5统计软件处理，以均数标准差（xs）表示，多组计量资料采用单因素方差分析（ANOVA），组间两两比较方差齐性时采用LSD检验，方差不齐性时则采用DunnettsT3检验；计数资料采用卡方检验，有序计数资料选用Gamma检验；均以P