中药中黄酮类化学成分的提取分离技术黄酮

山西生物应用职业技术学院山西生物应用职业技术学院 山西生物应用职业技术学院山西生物应用职业技术学院 山西生物应用职业技术学院山西生物应用职业技术学院 山西生物应用职业技术学院山西生物应用职业技术学院中药化学实用技术学习情景二中药中黄酮(Flavonoid)类化学成分的提取分离技术学习情境二学习情境二 中药中黄酮类化学成份的提取分离技术中药中黄酮类化学成份的提取分离技术2掌握掌握黄芩、葛根中黄芩、葛根中黄酮的黄酮的提取分离原提取分离原理及操作技术；理及操作技术；熟悉熟悉银杏叶和槐花银杏叶和槐花中黄酮的中黄酮的提取分离提取分离原理及操作技术；原理及操作技术；了解了解补骨脂和山楂补骨脂和山楂中黄酮中黄酮的提取分离的提取分离原理及操作技术。原理及操作技术。知识要求知识要求3能力要求能力要求学习目标学习目标1掌握中药中黄酮类掌握中药中黄酮类化学成分的提取分化学成分的提取分离原理及操作技术。离原理及操作技术。熟练进行熟练进行黄芩、黄芩、葛根、银杏叶中葛根、银杏叶中黄酮的黄酮的提取分离提取分离操作；操作；能进行能进行补骨脂、补骨脂、槐花中黄酮槐花中黄酮的提的提取分离操作。取分离操作。教学内容教学内容学习学习提示提示黄酮类化学成分的结构、性质黄酮类化学成分的结构、性质及提取分离知识及提取分离知识任务一任务一黄芩中黄酮化合物的提取分离黄芩中黄酮化合物的提取分离技术技术黄芩中黄酮化合物的提取分离黄芩中黄酮化合物的提取分离及检识及检识 学习提示学习提示黄酮的结构与分类黄酮的结构与分类一一二三三 黄酮的理化性质及检识黄酮的理化性质及检识 黄酮类化学成分的提取分离黄酮类化学成分的提取分离 分分 布布生物活性生物活性经典定义经典定义广泛存在于自然界广泛存在于自然界的一大类天然有机的一大类天然有机化合物。由于多呈化合物。由于多呈黄色，黄色，4位也多有位也多有酮基酮基黄酮是广泛存在于黄酮是广泛存在于自然界的一类化合自然界的一类化合物，它们在植物体物，它们在植物体内大部分与糖结合内大部分与糖结合成苷，一部分以游成苷，一部分以游离状态存在。离状态存在。黄酮类化合物的生黄酮类化合物的生理活性强而广，有理活性强而广，有的可降低血脂，有的可降低血脂，有的具有很强的保肝的具有很强的保肝作用，有的还具有作用，有的还具有抗炎和扩冠作用。抗炎和扩冠作用。黄酮黄酮现在认为：黄酮类化合物是由现在认为：黄酮类化合物是由两个苯环（两个苯环（A环与环与B环）通过三环）通过三碳链相互连接成的具有碳链相互连接成的具有6C-3C-6C基本骨架的一系列化合物基本骨架的一系列化合物 黄酮的结构与分类黄酮的结构与分类过去认为：黄酮基本母核过去认为：黄酮基本母核为为 2-2-苯基色原酮苯基色原酮 OO12345678123456O12345678123456ACB主要的天然黄酮类主要的天然黄酮类化合物分为以下几化合物分为以下几类（见下页）类（见下页）类型基本结构类型基本结构黄酮二氢查耳酮黄酮醇花色素二氢黄酮黄烷-3-醇二氢黄酮醇黄烷-3，4-二醇异黄酮双苯吡酮(酮)二氢异黄酮噢哢(橙酮)查耳酮 芹菜素(5，7，4三羟基黄酮)木犀草素(5，7，34-四羟基黄酮)OHHOOHOOOHOHHOOHOOOHOHHOOHOOOHOOOHHOOHOHOHOHOHOOCH3HOCH3OOOHOOCH3OH芸香糖OOROOHOHHOOOglc杨梅素(3，5，7，345-六羟基黄酮)橙皮苷 葛根素(C-苷)山山柰酚(3，5，7，4-四羟基黄酮)杜鹃素 R=H 大豆素 =glc 大豆苷 芸香糖 常常见见黄黄酮酮类类化化合合物物结结构构式式黄酮苷黄酮苷 碱性碱性 物理性状物理性状 溶解性溶解性还还原原反反应应酸碱性酸碱性 显色反应显色反应游离黄酮游离黄酮 金金属属盐盐类类试试剂剂的的络络合合反反应应硼硼酸酸显显色色反反应应 酸性酸性 二 黄酮类化合物的理化性质及检识1.1.物理性状物理性状 多为结晶性固体，多为结晶性固体，少数（如黄酮苷少数（如黄酮苷类）为无定形粉类）为无定形粉末末多呈黄色，且多呈黄色，且颜色与分子中颜色与分子中的交叉共轭体的交叉共轭体系系(发色团发色团)及助及助色团有关色团有关黄酮苷均有旋光性，黄酮苷均有旋光性，且多为左旋。游离的且多为左旋。游离的二氢黄酮、二氢黄酮二氢黄酮、二氢黄酮醇、二氢异黄酮和黄醇、二氢异黄酮和黄烷醇等具有旋光性。烷醇等具有旋光性。其余的游离黄酮则无其余的游离黄酮则无旋光性旋光性在紫外灯光下在紫外灯光下普遍具有荧光普遍具有荧光交叉共轭体系的存在交叉共轭体系的存在:能形成交叉共轭体系的黄酮类化能形成交叉共轭体系的黄酮类化合物，常有明显的黄色，并且共轭程合物，常有明显的黄色，并且共轭程度大小、共轭链的长短决定了颜色的度大小、共轭链的长短决定了颜色的深浅。黄酮本身其色原酮部分并无颜深浅。黄酮本身其色原酮部分并无颜色，但当色，但当2位引入苯基后，即形成交位引入苯基后，即形成交叉共轭体系，且能通过电子的转移和叉共轭体系，且能通过电子的转移和重排使共轭链连续地延长，而呈现出重排使共轭链连续地延长，而呈现出颜色。颜色。助色团对颜色的影响助色团对颜色的影响：助色团（助色团（-OH、-OCH3等）能使颜色加深等）能使颜色加深，但主要指助色团处于，但主要指助色团处于7或或4位时，由于能形成位时，由于能形成p-共轭，可促使电子的转共轭，可促使电子的转移和重排而形成交叉共轭移和重排而形成交叉共轭体系，从而使颜色明显加体系，从而使颜色明显加深，但深，但-OH、-OCH3引入引入其他位置时，对颜色的影其他位置时，对颜色的影响较小。响较小。OOOOOO47+有颜色有颜色 交叉共轭体系交叉共轭体系 无颜色无颜色溶解性溶解性游离黄酮游离黄酮 一般难溶或不溶于水，易一般难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。等有机溶剂及稀碱液中。花色苷元（花青素）类以离子花色苷元（花青素）类以离子形式存在，水溶度较大。黄酮形式存在，水溶度较大。黄酮类甙元分子中羟基数越多，水类甙元分子中羟基数越多，水中的溶解度越大。中的溶解度越大。黄酮苷黄酮苷 游离黄酮的羟基被糖游离黄酮的羟基被糖苷化后，水溶性增加，脂苷化后，水溶性增加，脂溶性降低，一般易溶于热溶性降低，一般易溶于热水、甲醇、乙醇、吡啶及水、甲醇、乙醇、吡啶及稀碱溶液中，而难溶于苯稀碱溶液中，而难溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚等、乙醚、氯仿、石油醚等有机溶剂中。有机溶剂中。游离黄酮游离黄酮 水水 甲醇乙醇甲醇乙醇 乙酸乙酯乙酸乙酯 氯仿氯仿 乙醚乙醚 稀碱水稀碱水 -+（酚羟基（酚羟基)溶解性取决于溶解性取决于 分子的立体结构分子的立体结构 取代基团的性质、数目、连接位置取代基团的性质、数目、连接位置 引入羟基，数目多，引入羟基，数目多，7、4-位，水溶度较大位，水溶度较大 羟基甲基化（羟基甲基化（-OCH3）,水溶度降低水溶度降低 R=H 平面型分子平面型分子 非平面型分子非平面型分子 黄酮黄酮 二氢类（二氢类（C-环半椅式结构）环半椅式结构）黄酮醇黄酮醇 异黄酮（羰基与异黄酮（羰基与B-环立体障碍）环立体障碍）查耳酮查耳酮 分子间排列不紧密，分子间排列不紧密，（交叉共轭）（交叉共轭）水分子易于进入水分子易于进入 水溶度小水溶度小 水溶度大水溶度大 2OOHRH R=H 二氢黄酮二氢黄酮R=OH 二氢黄酮醇二氢黄酮醇 水水 甲醇乙醇甲醇乙醇 乙酸乙酯乙酸乙酯 氯仿氯仿 乙醚乙醚 稀碱稀碱+-+黄酮类化合物溶解性（极性）规律黄酮类化合物溶解性（极性）规律:三糖苷三糖苷 双糖苷双糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元3-O-糖苷糖苷 7-O-糖苷（平面性分子）糖苷（平面性分子）花色素花色素(平面性分子平面性分子,离子型离子型)非平面性分子非平面性分子 平平面性分子面性分子黄酮苷黄酮苷(亲水性亲水性)3.酸碱性酸碱性 7，4-2OH7-或或4-OH一般酚羟基一般酚羟基5-OH 7，4-2OH者，由于者，由于-共轭效应，使酸性增强而溶于碳酸氢钠共轭效应，使酸性增强而溶于碳酸氢钠水溶液。水溶液。7-或或4-OH者，只溶于碳酸钠水溶液，不溶于碳酸氢钠水溶液。者，只溶于碳酸钠水溶液，不溶于碳酸氢钠水溶液。具有一般酚羟基者只溶于氢氧化钠水溶液。具有一般酚羟基者只溶于氢氧化钠水溶液。仅有仅有5-OH者，因可与者，因可与C4=O形成分子内氢键，故酸性最弱。形成分子内氢键，故酸性最弱。因此，可用因此，可用pH梯度萃取法来分离黄酮类化合物。梯度萃取法来分离黄酮类化合物。酸性酸性:黄酮类化合物因分子中具有酚羟基，故显酸性，可溶于碱黄酮类化合物因分子中具有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶和甲酰胺等中性水溶液、吡啶和甲酰胺等中 。其酸性强弱与酚羟基数目的多少和位置有关。其酸性强弱与酚羟基数目的多少和位置有关。3.酸碱性酸碱性碱性碱性:因母核中因母核中-吡喃酮环上的吡喃酮环上的1位氧原子有未共用电位氧原子有未共用电子对，故表现出微弱的碱性。可溶于浓硫酸、浓盐子对，故表现出微弱的碱性。可溶于浓硫酸、浓盐酸等强无机酸生成酸等强无机酸生成 盐，该盐极不稳定，加水后即盐，该盐极不稳定，加水后即分解。分解。还原反应还原反应 4.显色反应显色反应反应类型反应类型 鉴别特征鉴别特征 鉴别意义鉴别意义 备注备注盐酸盐酸-镁粉镁粉 黄酮、二氢黄酮、红黄酮、二氢黄酮、红 紫红紫红 黄酮类特征性黄酮类特征性 假阳性假阳性 反应反应 黄酮醇、二氢黄酮醇黄酮醇、二氢黄酮醇 红红 紫红紫红 鉴别反应鉴别反应 （花色素）（最常用）（花色素）（最常用）查耳酮、橙酮查耳酮、橙酮 （-）儿茶素类、异黄酮儿茶素类、异黄酮 （-）四氢硼钠四氢硼钠 二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮、二氢黄酮醇 红红紫红紫红 二氢黄酮类特有二氢黄酮类特有 还原反应还原反应 其它黄酮类其它黄酮类 （-）钠汞齐反应钠汞齐反应 黄酮、二氢黄酮黄酮、二氢黄酮 红红 异黄酮、二氢异黄酮异黄酮、二氢异黄酮 红红 黄酮醇类黄酮醇类 黄黄淡红色淡红色 二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类 棕黄色棕黄色金属盐类试剂的络合反应金属盐类试剂的络合反应反应类型反应类型 鉴别特征及鉴别意义鉴别特征及鉴别意义 备备 注注 锆盐锆盐 枸橼酸枸橼酸 锆盐锆盐-枸橼酸枸橼酸 3-OH或或5-二二OH 黄色黄色 黄色不褪黄色不褪 PPC 黄色褪去黄色褪去氨性氯化锶氨性氯化锶(SrCl2)邻二酚羟基邻二酚羟基 绿、棕乃至黑色绿、棕乃至黑色 三氯化铁三氯化铁(FeCl3)酚羟基酚羟基 紫、蓝、绿紫、蓝、绿三氯化铝三氯化铝 3-OH，4-C=O 黄色黄色（AlCl3）5-OH，4-C=O 鲜黄色荧光鲜黄色荧光 PPCTLC 邻二酚羟基邻二酚羟基 （4或或7，4黄酮醇，天蓝色荧光）黄酮醇，天蓝色荧光）硼酸显色反应硼酸显色反应 硼酸硼酸 5-羟基，羟基，4-羰基黄酮羰基黄酮 黄色，绿色荧光（草酸液）黄色，绿色荧光（草酸液）（H3BO3）6-羟基，羟基，4-羰基查耳酮羰基查耳酮 黄色，无荧光（枸橼酸）黄色，无荧光（枸橼酸）三三 黄酮的提取与分离黄酮的提取与分离黄黄酮酮的的提提取取与与分分离离提取提取 分离分离 pH梯度萃取法溶剂萃取法柱色谱法 HPLC色谱法 溶剂提取法检识检识 理化检识 色谱检识（一）提取方法（一）提取方法溶剂法溶剂法 溶剂法溶剂法 关键关键 溶剂的选择溶剂的选择 选择依据选择依据 黄酮类成分的存在状态（游离、苷）及溶解性黄酮类成分的存在状态（游离、苷）及溶解性 溶剂的溶解性能溶剂的溶解性能 提取方法（煎煮法、渗漉法、回流法等）的选择提取方法（煎煮法、渗漉法、回流法等）的选择 溶剂 提取原理 游离黄酮 黄酮苷 备 注 乙醇乙醇 溶解范围广溶解范围广 +（甲醇）（甲醇）苷、苷元均可溶苷、苷元均可溶 （9095%）(60%）甲醇毒性大甲醇毒性大沸水沸水 多糖苷易于水多糖苷易于水 +成本低、安全成本低、安全,水溶性杂质多水溶性杂质多 碱性水或碱性水或 稀氢氧化钠溶出能力强稀氢氧化钠溶出能力强 碱性乙醇碱性乙醇 酚羟基的酸性酚羟基的酸性 +石灰水除杂质效果好石灰水除杂质效果好HPLC色色谱谱（二）分离（二）分离分离依据：分离依据：成分成分(黄黄酮与杂质、酮与杂质、苷与苷元苷与苷元、苷元与苷元苷元与苷元)之间的极性之间的极性（分配系数（分配系数K）差异。）差异。分离依据：分离依据：游离游离黄酮类化黄酮类化合物的酸合物的酸性差异性差异。pHpH梯梯度度萃萃取取法法溶溶剂剂萃萃取取法法柱色柱色谱法谱法 常用聚酰胺和硅胶色谱。常用聚酰胺和硅胶色谱。（1）聚酰胺柱色谱（首选法）聚酰胺柱色谱（首选法）洗脱顺序（含水溶剂：乙醇洗脱顺序（含水溶剂：乙醇-水等）水等）苷元相同：叁糖苷苷元相同：叁糖苷双糖苷双糖苷单糖单糖苷苷苷元（酚羟基比例）苷元（酚羟基比例）母核上羟基越多，洗脱越慢（酚羟母核上羟基越多，洗脱越慢（酚羟基数量）基数量）酚羟基数量相同：邻羟基的酚羟基数量相同：邻羟基的对（对（间）羟基的（酚羟基的位置）间）羟基的（酚羟基的位置）芳香核、共轭双键越多，洗脱越慢芳香核、共轭双键越多，洗脱越慢（酚羟基所处母核的共轭程度）（酚羟基所处母核的共轭程度）不同苷元：不同苷元：异黄酮异黄酮二氢黄酮醇二氢黄酮醇黄酮黄酮黄酮醇黄酮醇 母核共轭程度较后两者小母核共轭程度较后两者小，后者后者比前者多一个羟基。比前者多一个羟基。（2）硅胶柱色谱）硅胶柱色谱 洗脱顺序：羟基越多，极性越大，越后洗脱顺序：羟基越多，极性越大，越后洗出（不分醇羟基、酚羟基）洗出（不分醇羟基、酚羟基）适用于各种适用于各种黄酮类化合物的黄酮类化合物的分离。原理：反分离。原理：反相柱色谱（黄酮相柱色谱（黄酮类化合物极性大类化合物极性大）固定相：固定相：ODS流动相：水流动相：水-乙乙晴不同比例。晴不同比例。任务一任务一 黄芩中黄酮类化合物的提取分离技术黄芩中黄酮类化合物的提取分离技术 学习目标学习目标一一二三三任务导入任务导入 必备知识五四六相关知识链接及拓展课堂互动目标测试一一 学习目标学习目标2掌握掌握黄芩中黄酮黄芩中黄酮类类化合物的提取、分化合物的提取、分离及鉴定技术。离及鉴定技术。熟悉熟悉黄芩中黄酮类黄芩中黄酮类化合物的结构及性化合物的结构及性质。质。了解了解黄芩中黄酮黄芩中黄酮类类化合物的存在及生化合物的存在及生物活性。物活性。知识要求知识要求3能力要求能力要求1掌握黄芩中黄酮类掌握黄芩中黄酮类化学成分的提取分化学成分的提取分离原理及操作技术。离原理及操作技术。熟练进行熟练进行黄芩中黄芩中黄酮类黄酮类化合物的化合物的提取、分离及鉴提取、分离及鉴定操作。定操作。学会学会黄芩中黄酮黄芩中黄酮类类化合物的色谱化合物的色谱鉴定技术鉴定技术。学习目的任务导入：黄芩为唇形科植物黄芩（黄芩为唇形科植物黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）的干）的干燥根。从其中分离出的黄酮类化合物有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、燥根。从其中分离出的黄酮类化合物有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、木蝴蝶素等汉黄芩素、木蝴蝶素等20多种。其中黄芩苷（多种。其中黄芩苷（4.0%5.2%）是主要）是主要有效成分，有抗菌消炎、降低转氨酶等作用。黄芩苷元的磷酸酯钠盐有效成分，有抗菌消炎、降低转氨酶等作用。黄芩苷元的磷酸酯钠盐可用于治疗过敏、哮喘等疾病。可用于治疗过敏、哮喘等疾病。黄芩中黄芩苷的提取工艺流程：黄芩中黄芩苷的提取工艺流程：黄芩苷分子中有羧基，酸性较强，在植物体内多与镁离子成盐，且黄芩苷的镁盐水溶黄芩苷分子中有羧基，酸性较强，在植物体内多与镁离子成盐，且黄芩苷的镁盐水溶性较大，故可用水为溶剂提取。水提取液酸化后，该镁盐又转化为有游离羧基的黄芩苷，性较大，故可用水为溶剂提取。水提取液酸化后，该镁盐又转化为有游离羧基的黄芩苷，因其难溶于酸水而沉淀析出。黄芩苷的提取分离流程如下：因其难溶于酸水而沉淀析出。黄芩苷的提取分离流程如下：加适量水搅匀，加适量水搅匀，加加40%NaOH40%NaOH调至调至pH7pH7，再加入等量乙醇，过滤，再加入等量乙醇，过滤沉淀沉淀沉淀沉淀上清液上清液黄芩粗粉黄芩粗粉黄芩苷黄芩苷水洗，水洗，50%50%乙醇洗涤，再用乙醇洗涤，再用95%95%乙醇洗涤或重结晶乙醇洗涤或重结晶 加加HCLHCL调调pH1pH12 2，充分搅拌，加热至，充分搅拌，加热至8080，保温，保温3030分钟，过滤分钟，过滤滤液滤液药渣药渣滤液滤液分别加分别加1010倍、倍、8 8倍量水煎煮倍量水煎煮2 2次，每次次，每次1 1小时，过滤小时，过滤药渣药渣加加HCLHCL调调pH1pH12 2，8080保温保温3030分钟，静置，离心沉淀分钟，静置，离心沉淀滤液滤液 （二）黄芩中黄酮类成分的提取分离（二）黄芩中黄酮类成分的提取分离（一）黄芩中黄酮类主要有效成分及结构（一）黄芩中黄酮类主要有效成分及结构三三 必备知识必备知识 黄芩苷（黄芩苷（baicalin）黄芩素（黄芩素（baicalein）汉黄芩苷（汉黄芩苷（wogonoside）汉黄芩素（汉黄芩素（wogonin）（一）黄芩中黄酮类主要效成分及结构（一）黄芩中黄酮类主要效成分及结构OOHOHOOOOHOHOHCOOHOHOHOOHOOHOOOOHOHOHCOOHOCH3OOHOHOOCH3O 黄芩中黄芩苷为主要有效成分，黄芩苷为淡黄色针晶，熔点黄芩中黄芩苷为主要有效成分，黄芩苷为淡黄色针晶，熔点223223，几，几乎不溶于水，难溶于甲醇、乙醇、丙酮，可溶于热乙酸，易溶于碱性溶液。乎不溶于水，难溶于甲醇、乙醇、丙酮，可溶于热乙酸，易溶于碱性溶液。黄芩苷经水解能生成苷元黄芩素，黄芩素分子中具有邻三酚羟基，易被氧化黄芩苷经水解能生成苷元黄芩素，黄芩素分子中具有邻三酚羟基，易被氧化为醌类衍生物而显绿色。这是黄芩在放置过程中或处理不当时易变绿的原因。为醌类衍生物而显绿色。这是黄芩在放置过程中或处理不当时易变绿的原因。（二）黄芩中黄酮类化合物的提取分离（二）黄芩中黄酮类化合物的提取分离 黄芩中黄酮类化合物的分离黄芩中黄酮类化合物的分离 方法一：方法一：方法二方法二：（二）黄芩中黄酮类化合物的提取分离（二）黄芩中黄酮类化合物的提取分离四四 知识链接及拓展知识链接及拓展 苷（苷（glycosides）又称糖苷、甙或配糖体，是糖及其衍生物的端基碳原子）又称糖苷、甙或配糖体，是糖及其衍生物的端基碳原子与另一非糖物质（称为苷元或配基）连接而成的化合物。与另一非糖物质（称为苷元或配基）连接而成的化合物。苷糖与苷元连接的化学键称为苷键，形成苷键的原子称为苷键原子。苷糖与苷元连接的化学键称为苷键，形成苷键的原子称为苷键原子。苷类在中药中分布很广泛，且具有多方面的生物活性，是一类重要的中苷类在中药中分布很广泛，且具有多方面的生物活性，是一类重要的中药化学成分。药化学成分。苷的苷的分类分类存在存在状态状态糖链糖链数目数目苷元苷元类型类型苷键苷键原子原子单糖单糖数目数目原原生生苷苷次次生生苷苷单糖单糖链苷链苷二糖二糖链苷链苷单单糖糖苷苷双双糖糖苷苷黄黄酮酮苷苷蒽蒽醌醌苷苷氧苷氧苷氮苷氮苷硫苷硫苷碳苷碳苷氮苷氮苷按照苷键原子进行分类按照苷键原子进行分类氧苷氧苷硫苷硫苷碳苷碳苷红景天苷（醇苷）OOOHOglcCH2OHOOOCH2CH2OHROOOOCHCN 苦杏仁苷（氰苷）山慈姑苷（酯苷）天麻苷（酚苷）OSCN(CH2)2OS3HCHCH SO CH3萝卜苷 NNNNNH2HOOOHOHCH2OHO 巴豆苷 虫草苷芦荟苷NNNNNH2O四四 知识链接及拓展知识链接及拓展 结晶与重结晶的基本原理结晶与重结晶的基本原理 结晶与重结晶法是利用混合物中各成分在不同温度溶剂中溶解度的不同来达到分结晶与重结晶法是利用混合物中各成分在不同温度溶剂中溶解度的不同来达到分离的方法。离的方法。结晶溶剂的选择结晶溶剂的选择 合适的溶剂就是在冷时对所要的成分溶解度小，而热时溶解度又较大的溶剂。合适的溶剂就是在冷时对所要的成分溶解度小，而热时溶解度又较大的溶剂。溶剂的沸点亦不易太高。一般常用甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙酯等。结晶溶剂的沸点亦不易太高。一般常用甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙酯等。结晶溶剂又常会用到混合溶剂。溶剂又常会用到混合溶剂。结晶的操作技术结晶的操作技术 （一）结晶分离技术的一般操作过程（一）结晶分离技术的一般操作过程1将需结晶物质置于锥形瓶中，加入较需要量略少的溶剂，于水浴上加热至微沸；将需结晶物质置于锥形瓶中，加入较需要量略少的溶剂，于水浴上加热至微沸；2将热溶液趁热抽滤，以除去不溶的杂质；将热溶液趁热抽滤，以除去不溶的杂质；3将滤液冷却，使结晶析出；将滤液冷却，使结晶析出；4滤出结晶，必要时用适宜的溶剂洗涤结晶。滤出结晶，必要时用适宜的溶剂洗涤结晶。（二）结晶条件的控制（二）结晶条件的控制1趁热过滤得到的滤液应长时间静置，逐渐冷却，避免温度骤降使析晶过快带出杂质。趁热过滤得到的滤液应长时间静置，逐渐冷却，避免温度骤降使析晶过快带出杂质。2若滤液久置无结晶析出，可采取的方法有：松动瓶塞；加入少量晶种；玻璃棒摩擦；若滤液久置无结晶析出，可采取的方法有：松动瓶塞；加入少量晶种；玻璃棒摩擦；加有机可溶性盐类盐析。加有机可溶性盐类盐析。五五 课课 堂堂 互互 动动 1聚酰胺柱色谱用于分离黄酮类化合物（苷、苷元）的原聚酰胺柱色谱用于分离黄酮类化合物（苷、苷元）的原理、方法及洗脱规律。理、方法及洗脱规律。2简述黄酮类化合物的酸性规律及在黄酮苷元分离中的应简述黄酮类化合物的酸性规律及在黄酮苷元分离中的应用。用。3何谓交叉共轭体系，它与黄酮类化合物颜色的关系如何？何谓交叉共轭体系，它与黄酮类化合物颜色的关系如何？任务二任务二 葛根中黄酮类化合物的提取分离技术葛根中黄酮类化合物的提取分离技术 学习目标学习目标一一二三三任务导入任务导入 必备知识五四六相关知识链接及拓展课堂互动目标测试一一 学习目标学习目标2掌握葛根大豆掌握葛根大豆苷元苷元的提取、分离及鉴的提取、分离及鉴定技术。定技术。熟悉葛根熟悉葛根中黄酮类中黄酮类化合物的结构及性化合物的结构及性质。氧化铝柱色谱质。氧化铝柱色谱的原理及操作。的原理及操作。了解葛根了解葛根中黄酮中黄酮类类化合物的存在及生化合物的存在及生物活性。物活性。知识要求知识要求3能力要求能力要求1掌握葛根中黄酮类掌握葛根中黄酮类化学成分的提取分化学成分的提取分离原理及操作技术。离原理及操作技术。熟练进行葛根熟练进行葛根中中黄酮类黄酮类化合物的化合物的提取、分离及鉴提取、分离及鉴定操作。定操作。学会葛根学会葛根中黄酮中黄酮类类化合物的色谱化合物的色谱鉴定技术鉴定技术。学习目的任务导入：葛根为豆科植物野葛葛根为豆科植物野葛(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi)或甘葛藤或甘葛藤(Pueraria thomsonii Benth.)的干燥根，甘葛藤习称的干燥根，甘葛藤习称“粉葛粉葛”。具有解肌退热，生津，。具有解肌退热，生津，透疹，升阳止泻的作用。用于治疗外感发热头痛、高血压颈项强痛、冠心病心透疹，升阳止泻的作用。用于治疗外感发热头痛、高血压颈项强痛、冠心病心绞痛、早期突发性耳聋、强直性脊柱炎、泄泻等病症。现代医学研究表明：葛绞痛、早期突发性耳聋、强直性脊柱炎、泄泻等病症。现代医学研究表明：葛根中的异黄酮类化合物葛根素对高血压、高血脂、高血糖和心脑血管疾病有一根中的异黄酮类化合物葛根素对高血压、高血脂、高血糖和心脑血管疾病有一定疗效。定疗效。葛根中大豆苷元、葛根素等的提取工艺流程：葛根中大豆苷元、葛根素等的提取工艺流程：葛根粗粉70%乙醇加热回流提取药渣 醇提液减压浓缩至1:7浓缩液加饱和醋酸铅水溶液，搅拌，静置，过滤沉淀 滤液（杂质）加饱和碱式醋酸铅水溶液，搅拌，静置，过滤沉淀 滤液悬浮于70%乙醇中，通过硫化氢气体，过滤乙醇液硫化铅减压浓缩葛根总黄酮粗粉溶于水饱和的正丁醇，上氧化铝柱色谱，以水饱和的正丁醇展开，紫外灯下可见aj共10个色带，然后用正丁醇-吡啶（10:1）洗脱至e带流出，改用正丁醇-醋酸（10:1），洗脱至各色带均流出abcdefjghi大豆素 大豆苷葛根素（0.13%）（0.13%）（2.3%）流程说明：流程说明：用用70的乙醇回流提取葛根粗的乙醇回流提取葛根粗粉，使黄酮类化合物溶于乙醇粉，使黄酮类化合物溶于乙醇液，然后采用铅盐沉淀法除去液，然后采用铅盐沉淀法除去醇提液中的杂质，得到纯化的醇提液中的杂质，得到纯化的葛根总黄酮类化合物。总黄酮葛根总黄酮类化合物。总黄酮再通过氧化铝柱色谱进行分离再通过氧化铝柱色谱进行分离。最终得到各种异黄酮。最终得到各种异黄酮。（二）葛根中黄酮类成分的提取分离（二）葛根中黄酮类成分的提取分离（一）葛根中黄酮类主要有效成分及结构（一）葛根中黄酮类主要有效成分及结构三三 必备知识必备知识（一）葛根中黄酮类主要效成分及结构（一）葛根中黄酮类主要效成分及结构 葛根中主要含异黄酮类化合物，如葛根素（葛根中主要含异黄酮类化合物，如葛根素（C-苷）、大豆素、大豆苷苷）、大豆素、大豆苷等。等。大豆苷为无色针晶，熔点大豆苷为无色针晶，熔点239240，易溶于乙醇、热水。大豆素为无，易溶于乙醇、热水。大豆素为无色针晶，色针晶，265升华，升华，320分解，易溶于乙醇。葛根素为白色针状结晶，分解，易溶于乙醇。葛根素为白色针状结晶，熔点熔点187（分解），易溶于乙醇。（分解），易溶于乙醇。R1R2R3大豆素HHH大豆苷H葡萄糖H葛根素葡萄糖HHOOR1R2OOR3（二）葛根中黄酮类化合物的提取分离（二）葛根中黄酮类化合物的提取分离 葛根中黄酮类化合物的分离葛根中黄酮类化合物的分离 方法一：方法一：葛根粗粉95%乙醇加热回流提取2次，每次8h，合并醇液，滤过药渣醇液减压浓缩成浸膏，用苯脱脂，蒸去残余苯 苯液 脱脂浸膏加浓盐酸在水浴上搅拌回流2h，放冷，滤过酸水不溶物醋酸乙酯萃取34次，合并醋酸乙酯液醋酸乙酯液酸水液蒸馏水洗1次，无水Na2SO4脱水后，减压浓缩至干残留物甲醇重结晶23次灰白色固体（大豆素）（二）葛根中黄酮类化合物的提取分离（二）葛根中黄酮类化合物的提取分离 方法二方法二：葛根粗粉乙醇回流提取4h药渣醇提液回收乙醇至膏状 醇浸膏正丁醇溶解后，以正丁醇饱和的水萃取正丁醇层水层浓缩浓缩液正丁醇萃取正丁醇液合并，减压回收正丁醇沉淀以冰醋酸结晶白色结晶（葛根素）四四 课课 堂堂 互互 动动 1葛根素、大豆苷都是葡萄糖苷，试从结葛根素、大豆苷都是葡萄糖苷，试从结构上分析二者不同在哪里？构上分析二者不同在哪里？2试分析大豆素、大豆苷、葛根素在氧化试分析大豆素、大豆苷、葛根素在氧化铝色谱柱先后被洗脱出的原因。铝色谱柱先后被洗脱出的原因。任务三任务三 银杏叶中黄酮类化合物的提取分离技术银杏叶中黄酮类化合物的提取分离技术 学习目标学习目标一一二三三任务导入任务导入 必备知识五四六相关知识链接及拓展课堂互动目标测试一一 学习目标学习目标2掌握银杏叶中黄酮掌握银杏叶中黄酮类成分的提取、分类成分的提取、分离及鉴定技术。离及鉴定技术。熟悉银杏叶熟悉银杏叶中黄酮中黄酮类类化合物的结构及化合物的结构及性质。性质。了解银杏叶了解银杏叶中黄酮中黄酮类化合物的存在及类化合物的存在及生物活性。生物活性。知识要求知识要求3能力要求能力要求1掌握银杏叶中总黄掌握银杏叶中总黄酮的提取分离原理酮的提取分离原理及操作技术。及操作技术。熟练进行银杏叶熟练进行银杏叶中黄酮类中黄酮类化合物化合物的提取、分离及的提取、分离及鉴定操作。鉴定操作。学会银杏叶学会银杏叶中黄中黄酮类酮类化合物的色化合物的色谱鉴定技术谱鉴定技术。学习目的任务导入：银杏叶为银杏科植物银杏银杏叶为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶。具有敛肺平喘、活的干燥叶。具有敛肺平喘、活血化瘀、止痛的作用。用于治疗肺虚咳喘、血化瘀、止痛的作用。用于治疗肺虚咳喘、冠心病冠心病、心绞痛、心绞痛、高血脂高血脂症等。症等。银杏中总黄酮的提取工艺流程：银杏中总黄酮的提取工艺流程：流程说明：流程说明：用用70的乙醇提取银杏叶粗粉的乙醇提取银杏叶粗粉，使黄酮类化合物溶于醇液。，使黄酮类化合物溶于醇液。提取液浓缩后加水，可沉淀水提取液浓缩后加水，可沉淀水不溶性杂质，滤液上大孔吸附不溶性杂质，滤液上大孔吸附树脂，除去水溶性杂质。树脂，除去水溶性杂质。银杏叶粗粉70%乙醇50提取3次药渣提取液减压浓缩至1:1，加等体积水，冷却，过滤沉淀滤液上D101柱色谱，水洗后70%醇洗脱乙醇洗脱液浓缩至干总黄酮（含25%黄酮苷）（二）银杏中黄酮类成分的提取分离（二）银杏中黄酮类成分的提取分离（一）银杏中黄酮类主要有效成分及结构（一）银杏中黄酮类主要有效成分及结构三三 必备知识必备知识（一）银杏中黄酮类主要效成分及结构（一）银杏中黄酮类主要效成分及结构 银杏叶成分很复杂，以黄酮类化合物为主。主要有黄酮类化合物、二萜内酯银杏叶成分很复杂，以黄酮类化合物为主。主要有黄酮类化合物、二萜内酯衍生物，此外还含多糖类。银杏叶中黄酮类化合物既有单黄酮如山奈素、槲皮素、衍生物，此外还含多糖类。银杏叶中黄酮类化合物既有单黄酮如山奈素、槲皮素、异鼠李素及其苷，亦有双黄酮类如银杏双黄酮（银杏素）、去甲银杏双黄酮、金异鼠李素及其苷，亦有双黄酮类如银杏双黄酮（银杏素）、去甲银杏双黄酮、金松双黄酮、穗花杉双黄酮等以及儿茶素类。松双黄酮、穗花杉双黄酮等以及儿茶素类。OOOHR2OOOOHHOR4OR1OR3R1R2R3R4穗花杉双黄酮HHHH去甲银杏双黄酮CH3HHH银杏双黄酮CH3CH3HH异银杏双黄酮CH3CH3CH3H金松双黄酮CH3HHOCH3（二）银杏中黄酮类化合物的提取分离（二）银杏中黄酮类化合物的提取分离 银杏中黄酮类化合物的提取还可采用以下方法：银杏中黄酮类化合物的提取还可采用以下方法：方法一方法一丙酮提取法丙酮提取法银杏叶粗粉5倍量60%丙酮水溶液提取5h，55放冷抽滤滤液四氯化碳提取3次四氯化碳 丙酮液减压回收丙酮浓缩物50减压干燥粗品（总黄酮）（二）银杏中黄酮类化合物的提取分离（二）银杏中黄酮类化合物的提取分离 方法二方法二乙醇提取法乙醇提取法银杏叶95%乙醇提取3次，提取液过滤滤液回收乙醇提取物悬浮于20%乙醇中溶解过滤 滤液回收溶剂至干提取物（总黄酮）四四 课课 堂堂 互互 动动 1分析银杏叶中黄酮类化学成分在提取工分析银杏叶中黄酮类化学成分在提取工艺中通过何种方式除去水溶性杂质。艺中通过何种方式除去水溶性杂质。任务四任务四 槐米中黄酮类化合物的提取分离技术槐米中黄酮类化合物的提取分离技术 学习目标学习目标一一二三三任务导入任务导入 必备知识五四六相关知识链接及拓展课堂互动目标测试一一 学习目标学习目标2掌握槐米芸香苷的掌握槐米芸香苷的提取、分离及鉴定提取、分离及鉴定技术。技术。熟悉槐米熟悉槐米中黄酮类中黄酮类化合物的结构及性化合物的结构及性质。质。了解槐米了解槐米中黄酮中黄酮类类化合物的提取分离化合物的提取分离新进展。新进展。知识要求知识要求3能力要求能力要求1掌握槐米中黄酮类掌握槐米中黄酮类化学成分的提取分化学成分的提取分离原理及操作技术。离原理及操作技术。熟练进行槐米熟练进行槐米中中黄酮类黄酮类化合物的化合物的提取、分离及鉴提取、分离及鉴定操作。定操作。学会槐米学会槐米中黄酮中黄酮类类化合物的色谱化合物的色谱鉴定技术鉴定技术。学习目的任务导入：槐米为豆科植物槐（槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L.）的花蕾。其主要）的花蕾。其主要有效成分为芸香苷（又称芦丁），有维生素有效成分为芸香苷（又称芦丁），有维生素P样作用，能保持和样作用，能保持和恢复毛细血管的正常弹性，临床上常作为治疗高血压的辅助药和恢复毛细血管的正常弹性，临床上常作为治疗高血压的辅助药和毛细血管脆性所致出血的止血药。近代研究显示槐米中芸香苷的毛细血管脆性所致出血的止血药。近代研究显示槐米中芸香苷的含量可高达含量可高达23.5%，但花开放后含量可降低至，但花开放后含量可降低至13%。槐米中芸香苷的提取工艺流程：槐米中芸香苷的提取工艺流程：芸香苷为淡黄色的粉末或细微针状结晶，常含芸香苷为淡黄色的粉末或细微针状结晶，常含3分子结晶水，加热至分子结晶水，加热至185以上熔融以上熔融继而分解。在冷水中溶解度为继而分解。在冷水中溶解度为1:10000，沸水中，沸水中 1:200，冷乙醇中，冷乙醇中1:650，沸乙醇中，沸乙醇中1:60，可溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶和碱性溶液中，不溶于石油醚、苯、氯仿及乙醚中。可溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶和碱性溶液中，不溶于石油醚、苯、氯仿及乙醚中。槐米粉末加约6倍水及硼砂适量，煮沸，在搅拌下加入石灰乳至pH89。在保持该pH条件下，微沸2030min，随时补充失去的水分，趁热抽滤，药渣加4倍量水，同法再提2次。合并提取液在6070下，用浓盐酸调pH5，搅匀，静置，抽滤，水洗至洗液呈中性，60干燥芦丁粗品芦丁热水或乙醇重结晶流程说明：流程说明：本流程利用芸香苷溶于碱水，酸本流程利用芸香苷溶于碱水，酸化后又可析出的性质进行提取。化后又可析出的性质进行提取。芸香苷分子中因含有邻二酚羟基芸香苷分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露在空气中，性质不太稳定，暴露在空气中能缓缓氧化变为暗褐色，在碱性能缓缓氧化变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解。硼酸条件下更容易被氧化分解。硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的，故在碱性溶液中加热护的目的，故在碱性溶液中加热提取芸香苷时，往往加入少量硼提取芸香苷时，往往加入少量硼砂。砂。（二）槐米中黄酮类成分的提取分离（二）槐米中黄酮类成分的提取分离（一）槐米中黄酮类主要有效成分及结构（一）槐米中黄酮类主要有效成分及结构三三 必备知识必备知识（一）槐米中黄酮类主要效成分及结构（一）槐米中黄酮类主要效成分及结构 槐米中主要有效成分为芸香苷，还含有少量皂苷、多糖、粘液质等。槐米中主要有效成分为芸香苷，还含有少量皂苷、多糖、粘液质等。20052005年版年版中中国药典国药典规定，于规定，于6060干燥干燥6 6小时，含芸香苷不得少于小时，含芸香苷不得少于20%20%。当花蕾开放后芸香苷的含量。当花蕾开放后芸香苷的含量大大降低。芸香苷是槐米中止血的有效成分，有大大降低。芸香苷是槐米中止血的有效成分，有VpVp样作用，有助于保持和恢复毛细血管样作用，有助于保持和恢复毛细血管正常弹性，临床上用作高血压的辅助药及毛细血管脆性引起出血的止血药。芸香苷又称正常弹性，临床上用作高血压的辅助药及毛细血管脆性引起出血的止血药。芸香苷又称芦丁，其苷元为槲皮素，它们的结构式如下：芦丁，其苷元为槲皮素，它们的结构式如下：OOOHOHO0OOOHOHOHOHOHHOHO 槲皮素槲皮素 黄色针状结晶（稀乙醇），含黄色针状结晶（稀乙醇），含2分子结晶水，熔点为分子结晶水，熔点为314（分（分解），溶于乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶与冰醋酸等，不溶于水、解），溶于乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶与冰醋酸等，不溶于水、苯、石油醚、乙醚与氯仿等。苯、石油醚、乙醚与氯仿等。芸香苷芸香苷 浅黄色粉末或细针晶，常含三分子结晶水，熔点浅黄色粉末或细针晶，常含三分子结晶水，熔点176178，在冷水中溶解度为在冷水中溶解度为1：8000，热水为，热水为1：200，冷乙醇为，冷乙醇为1：650，热乙醇为，热乙醇为1：60，可溶于吡啶及碱性溶液，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚中。，可溶于吡啶及碱性溶液，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚中。（二）槐米中黄酮类化合物的提取分离（二）槐米中黄酮类化合物的提取分离 槐米中芸香苷的提取分离槐米中芸香苷的提取分离 方法一：方法一：槐米粗粉药渣水提取液放冷，沉淀析出过滤沸水煮沸5-10min，趁热过滤，反复2次粗芸香苷热水或乙醇重结晶精制芸香苷（二）槐米中黄酮类化合物的提取分离（二）槐米中黄酮类化合物的提取分离 方法二方法二：槐米粗粉甲醇热回流2次，每次1h甲醇提取液药渣回收甲醇，放冷，过滤母液结晶乙醚除杂，空气干燥芦丁粗品90%乙醇重结晶精品（浅黄色粉末或针晶）四 知识链接碱溶酸沉法提取芸香苷注意事项 芸香苷分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露在空气中能缓缓氧化变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解。硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的，故在碱性溶液中加热提取芸香苷时，往往加入少量硼砂。用碱溶酸沉法提取纯化时，所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性和加热下，破坏黄酮母核；加酸酸化时，酸性也不宜太强，以免生成盐致使析出的黄酮类化合物又重新溶解，降低收得率。五五 课课 堂堂 互互 动动1依据芸香苷溶解度的性质，说明水提取依据芸香苷溶解度的性质，说明水提取精制之的原理。精制之的原理。2用前面所学的知识，说明用用前面所学的知识，说明用“碱溶酸沉碱溶酸沉法法”从槐米中提取芸香苷的原理及注意事从槐米中提取芸香苷的原理及注意事项。项。学学 习习 小小 结结 黄酮类化合物黄酮类化合物提取、分离提取、分离物理性状、溶解性、酸碱性、显色反应物理性状、溶解性、酸碱性、显色反应按不同的苷元与糖分类按不同的苷元与糖分类 紫外、红外、核磁、质谱紫外、红外、核磁、质谱黄芩、葛根、银杏叶、槐花黄芩、葛根、银杏叶、槐花（一）学习内容（一）学习内容（二）学习方法与体会（二）学习方法与体会 进行本章的学习时应遵循“结构性质”的认知规律，通过分析黄酮类化合物的结构特点，总结出该类成分的理化性质，进而分析其提取分离。六六 目目 标标 检检 测测一、判断题 （）1.黄酮类化合物加ZrOCl2试剂产生黄色，加枸橼酸后黄色不褪，示3位无-OH。（）2.多数黄酮苷元具有旋光性，而黄酮苷则无。（）3.凡是黄类化合物都不能用氧化铝分离。（）4.区别黄酮和黄酮醇可用四氢硼钠反应。（）5.黄酮分子中引入7或4-羟基，促使电子位移重排，使颜色加深。（）6.顾名思义，黄酮类化合物都是黄色的并具有酮基。（）7.一般常用聚酰胺色谱来分离黄酮类化合物。（）8.用葡聚糖凝胶柱色谱分离游离黄酮主要靠分子筛作用，并按分子量由大到小的顺序流出柱体。六六 目目 标标 检检 测测二、A型题 1.聚酰胺对黄酮类化合物发生最强吸附作用时，应在_中。（A.甲酰胺 B.水 C.95乙醇 D.酸水）2.盐酸-镁粉反应为阳性的是_。（A.黄酮醇 B.异黄酮 C.查耳酮 D.橙酮）3.四氢硼钠反应为阳性的是_。（A.黄酮醇 B.异黄酮 C.二氢黄酮 D.橙酮）4.在黄酮类化合物甲醇溶液中加入甲醇钠诊断试剂，所得紫外光谱与其甲醇溶液紫外光谱比较，带红移了4060nm，且强度不变，这说明结构中_。（A.有4-OH,无3-OH B.有4-OH和3-OH C.有4-OH D.无4-OH）5.紫外光谱中，用来判断黄酮类化合物7-OH的诊断试剂是_。（A.甲醇钠 B.醋酸钠 C.三氯化铝 D.醋酸钠/硼酸）六六 目目 标标 检检 测测三、X型题 1.黄酮类化合物的分类主要依据其母核_。（A.三碳链是否成环 B.三碳链的氧化程度 C.B环的连接位置 D.是否连接糖链）2.具有旋光性的游离黄酮有_。（A.黄酮 B.异黄酮 C.黄烷醇 D.二氢黄酮）3.中药槐米的主要有效成分_。（A.芦丁 B.可用水进行重结晶 C.可用碱溶酸沉法提取 D.能发生Molish反应）4.分离黄酮类化合物常用的方法有_。（A.，水蒸气蒸馏法 B.聚酰胺色谱法 C.硅胶色谱法 D.葡聚糖凝胶色谱法）5.5，7，3，4-四羟基二氢黄酮可发生下列反应中的_。（A.HClMg反应 B.四氢硼钠反应 C.氨性氯化锶反应 D.Molish反应）六六 目目 标标 检检 测测三、X型题 6.芦丁可发生下列反应中的_。（A.盐酸-镁粉反应 B.四氢硼钠反应 C.氨性氯化锶反应 D.Molish反应）7.能溶于5Na2CO3 溶液的黄酮可能具有_。（A.3-OH B.5-OH C.7-OH D.4-OH）8.确定黄酮类化合物具有5-OH的方法有_。（A.锆盐-枸橼酸反应 B.硼酸反应 C.氢谱中5-0H的化学位移 D.紫外光谱法，加三氯化铝/盐酸）9.紫外光谱法中，用来判断黄酮（醇）有无邻二酚羟基的诊断试剂是_。（A.甲醇钠 B.醋酸钠 C.三氯化铝/盐酸 D.醋酸钠/硼酸）六六 目目 标标 检检 测测四、用化学方法鉴别下列各组化合物 OOOHOHOHOOOHOHOHOOOHOHOHOHOOOHOHOCH3OHOOOHHOOHOHOOOHOHOHOH A B C A B C1.1.2.2.