复方鱼腥草颗粒申报资料

复方鱼腥草颗粒申报资料一：药品名称1. 药品名称：中文名称：复方鱼腥草颗粒汉语拼音： Fufang Yuxingcao Keli 命名依据：依据国家药品监督管理局关于复方制剂的命名原则，采用功能 合并加剂型，在药名前加复方行命名。主要用于治疗肺痈吐脓、痰热喘咳、热痢 热淋、痈肿疮毒等病证。2. 立体目的与依据：鱼腥草为三白草科多年生草本植物蕺菜的干燥水上部分。产于我国长江流域 以南各省。鱼腥草出自名医别录唐苏颂说：“生湿地，山谷阴处亦能蔓生， 叶如荞麦而肥，茎紫赤色，江左人好生食，关中谓之。菹菜，叶有鱼腥气，故俗 称鱼草”。归肺经、膀胱、大肠经。性味辛、微寒 , 具有清热解毒、消肿排脓、 利尿通淋的功效，主治肺痈吐脓；痰热喘咳；喉哦；热痢；痈肿疮毒；热淋等。 鱼腥草为药食两用之品, 富含多种营养成分, 挥发油和黄酮类等药用成分, 其中 挥发油约0. 049%, 总黄酮类化合物占0.01%左右。鱼腥草地上部分含挥发油、内 含抗菌有效成分癸酰乙醛(decanoy acetaldehyde)，月桂醛(lauric aldehyde)， a- 蒎烯(a-pinene)和芳樟醇(linlool)，前两者并有特异臭气，具有抗菌抗病毒抗 炎抗肿瘤防辐射，以及提高免疫力等功能。现代药理研究证明鱼腥草具有抗病原 微生物、抗炎解热、利尿、调节免疫、抗过敏、抗肿瘤等作用。临床上广泛应用 于治疗呼吸系统疾病、泌尿系统感染、皮肤病、妇科疾病等。由于临床疗效显著, 对于免疫力低下者, 如老年人和小儿等尤为适用, 并且不易产生耐药性, 所以应 用范围不断扩大。本研究有着充分的理论依据为前提。鱼腥草在临床上应用广泛，疗效优良 ， 颗粒剂作为现代制剂剂型有其独特的优势，因而复方鱼腥草颗粒市场需求广泛。 复方鱼腥草颗粒，根据中药经典方剂设计的颗粒剂型，既保持了汤剂吸收较快、 作用迅速的优点，又克服了汤剂临用时煎煮不便、服用量大、易霉变等缺点，服 用、携带、贮藏上都十分方便。因而具有很好的应用价值和开发价值。3. 药品说明书样稿：【通用名称】复方鱼腥草颗粒【汉语拼音】 Fufang Yuxingcao Keli【剂型】颗粒剂【成分】鱼腥草、黄苓、板蓝根、连翘、金银花。辅料为糊精、0吐不状糊 精、糖粉。【性状】本品为棕色至棕褐色的颗粒；味甜、微苦。【作用类别】本品为耳鼻喉科喉痹类非处方药药品。【功能主治】清热解毒。用于外感风热引起的咽喉疼痛；急性咽炎、扁桃体 炎。【药理作用】 1,抗菌,抗病毒 对耐药金黄色葡萄球菌,白色念珠菌,新型隐球 菌,流感杆菌等多种致病菌有较明显抑制作用;具有体内抗感染作用,能明显抑制 大肠肝菌引起的动物腹膜炎;对钩端螺旋体有抑杀作用，对流感病毒PR3株,PR8株， 京科68-1病毒,埃可病毒和疱疹病毒均有抑制作用;并有,能减轻感染小鼠有肺部 损伤,延长存活时间。2, 解热抗炎具有特异性升高肺和支气管的cAMP水平抑制抗原与IgE结合， 抑制肥大细胞释放组胺而成为较好的抗变态反应剂;可降低毛细血管通透性,拮抗 炎症反应及过敏性浮肿,并能抑制由同种及异种抗体引起的被动变态反应。3, 增强免疫 本品可显著增强二硝基氯苯所致小鼠迟发超敏反应,明显诱导体 内淋巴细胞转化,明显增强小鼠脾细胞的自然杀伤活性。【药物相互作用】如与其他药物同时使用可能会发生药物相互作用，详情请 咨询医师或药师。【用法用量】口服，一次1袋，一日3次。【包装】每袋装6克；铝塑复合膜袋。【有效期】暂定12个月【贮藏】密封。【不良反应】【注意事项】1.忌辛辣、鱼腥食物。2. 不宜在服药期间同时服用温补性中成药。3. 糖尿病患者慎用。4. 扁桃体化脓并全身有高热等症状者应去医院诊治。5. 服药 3 天症状无改善，或出现其他症状，应去医院就诊。6. 按照用法用量服用，儿童应在医师指导下服用。7. 对本品过敏者禁用，过敏体质者慎用。8. 本品性状发生改变时禁止使用。9. 儿童必须在成人监护下使用。10. 请将本品放在儿童不能接触的地方。11. 如正在使用其他药品，使用本品前请咨询医师或药师。4. 起草说明1. 药物名称：本品沿用古方名称并结合剂型，命名为复方鱼腥草颗粒。2. 成分：复方鱼腥草颗粒为中华人民共和国药典（2010 年版）收载的药品。3. 性状：根据多批成品的实际性状描述。4. 功能主治：根据药理实验描述。5. 规格：每袋装 6 克。6. 用量：每服剂量与现有鱼腥草颗粒一样。7. 不良反应：尚不明确。8. 禁忌：尚不明确。9. 注意事项10. 药物相互作用：尚不明确。11. 贮藏：密封。12. 包装：复合膜。13.有效期：暂定 12 个月。参考文献：1.中国药典（2010 版）2 .张登本.中医学基础M.中国中医药出版社，2003年，第一版.3 .赵越.中药学中药基础与应用M.人民卫生出版社，2004年，第一版.4 .张兆旺.中药药剂学M.中国中医药出版社，2007年，第二版.5 .张美玉，李连达.鱼腥草及其制剂研究进展J.中药药理与临床.2010;26( 2):79-85二，药学研究资料8. 药材来源及鉴定依据1.鱼腥草经鉴定为鱼腥草为三白草科多年生草本植物蕺菜的干燥水上部分。生长于沟边、溪边及潮湿的疏林下。夏季茎叶茂盛花穗多时采收，洗净，阴干用或鲜用。 本品符合中国药典2010 版“鱼腥草”项下有关规定。2. 黄芩 经鉴定为唇形科植物黄芩的干燥根。春，秋二季采挖，除去须根及泥沙。晒 后去粗皮，晒干。本品符合中国药典2010 版“黄芩”项下有关规定。3.板蓝根经鉴定为十字花科植物菘篮和草大青的根；或爵床科植物马蓝的根茎及根； 或草大青的干燥根；或十字花科植物移蓝，以根、叶入药。本品符合中国药典2010 版“板蓝根”项下有关规定。4. 连翘经鉴定为木犀科（Oleaceae）连翘属（Forsythia）植物连翘（Forsythia suspensa （Thunb.） Vahl）的干燥果实，果实初熟尚带绿色时采收称为青翘，果实熟透颜 色发黄时采收称为老翘。 秋季果实尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干（青 翘）；果实熟透时采收，除去杂质，晒干（老翘）；采收种子（连翘心）。本品符合中国药典2010 版“连翘”项下有关规定。5.金银花经鉴定为为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花。 本品符合中国药典2010 版“金银花”项下有关规定。12，生产工艺的研究资料及文献资料，辅料来源及质量标准1. 处方鱼腥草 490g黄芩 126g板蓝根 126g连翘 49g金银花 49g2. 制法取鱼腥草168g，与连翘、金银花粉碎成细粉，剩余鱼腥草与黄芩、板蓝根 加水煎煮二次，每次 1.5 小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入细粉拌 匀，干燥，研细。制粒，干燥，即得。3. 工艺研究3.1. 剂型选择 现代市场上常用的剂型有口服液，片剂，颗粒剂等。运用较广泛的为口 服液和颗粒剂。口服液剂虽口感好，但体积较大，不便携带，而且口服液剂若贮 存不当，容易变质。本品依据鱼腥草颗粒质量标准，根据中药经典方剂设计的颗 粒剂型，既保持了汤剂吸收较快、作用迅速的优点，又克服了汤剂临用时煎煮不 便、服用量大、易霉变等缺点，服用、携带、贮藏上都十分方便，使患者更易接 受。3.2. 工艺研究3.2.1.处方药物性质 鱼腥草：本品全草含挥发油， 其中有效成分为鱼腥草素、月桂醛， 2-十 一烷酮，丁香烯等。具有提高机体的免疫力，抗菌抗病毒，防辐射等作用。黄芩：本品黄芩根含黄酮类化合物，如黄芩素，黄芩新素，即黄芩黄酮 II,黄芩甙，汉黄芩素等。具有清热燥湿，泻火解毒，止血安胎，降血压作用。 板蓝根：本品菘蓝根含靛蓝，靛玉红，蔥醌类、卩-谷甾醇，Y-谷甾醇以及 多种氨基酸，还含有抗革兰氏阳性和阴性细菌的抑菌物质及动力精等。具有抗 菌抗病毒，提高免疫功能等作用。连翘： 本品果实含木脂体类化合物，苯乙烯类衍生物,以及三萜类化合物 等。有抗菌、强心、利尿、镇吐等药理作用。金银花：本品花蕾中含有木犀草素(Luteolin)、肌醇(Inosito 1)和皂甙分 离出绿原酸(Chlorogenic acid)和异绿原酸(Isochlorogenic acid)，它们是金银 花抗菌作用的主要有效成分 具有抗病原微生物，抗病毒抗炎解热等作用。3.2.2 药材的鉴别和处理3.2.2.1 鱼腥草【性状】鱼腥草为三白草科多年生草本植物蕺菜的干燥水上部分。产于我国 长江流域以南各省。【鉴别】1.取该品粉末适量。置小试管中、用玻棒压紧，滴加品红亚硫酸 试液少量至上层粉末湿润，放置片刻，自侧壁观察，湿粉末显粉红色或红紫色。2. 取该品粉末1g,加乙醇10ml，加热回流10min,滤过。取滤液2ml，加镁 粉少量与盐酸3滴，置水浴中加热，显红色。3. 薄层色谱 取粉末1g，加甲醇10ml,浸泡过夜，滤过。滤液浓缩至lml， 作洪试液。另取金丝桃甙少许，甲醇溶解后作对照液。分取供试品及对照品适量 点于同一硅胶G板上，以乙醚-甲醇-水（4.5： 1： 1.5）展开，用1%的三氯化铝 乙醇溶液显色，供试品色谱在与对照品色谱的相应位置上显淡黄色斑点，紫外光 灯下呈暗棕色斑点。取该品粉末2g，加水10ml及8%氢氧化钠8滴，冷浸2h， 不断搅拌，滤过。滤液置于分流漏斗中，加醋酸乙酯10ml, 7%盐酸溶液6滴，振 摇5mi n,静置，分取醋酸乙酯提取液，作供试品溶液。另取癸酸乙醛对照品，加 醋酸乙酯溶解制成每1ml含2mg溶液，作对照液。吸取供试品和对照品溶液各 10,l分别点于同一硅胶G板上，以苯-无水乙醇（7： 2）展开，喷以5%三氯化 铁试液显色。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。【检查】相对密度 应不低于1.05.（中国药典2010版一部）PH:应为4.5-6.0.（中国药典2010版一部）其他：应符合颗粒剂项下有关规定。（中国药典2010版一部）3.2.2.2 黄芩为唇形科植物黄芩，以根入药。有清热燥湿，凉血安胎，解毒功效。春， 秋二季采挖，除去须根及泥沙，晒后撞粗皮晒干。【性状】：本品呈圆锥形，扭曲，长825cm，直径13cm。表面棕黄色或 深黄色，有稀疏的疣状细根痕，上部较粗糙，有扭曲的纵皱或不规则的网纹， 下部有顺纹和细皱。质硬而脆，易折断，断面黄色，中间红棕色，通称子芩， 以清火养阴为主；老根中间呈暗棕色或棕黑色，枯朽状或已成空洞，称枯芩，以清火败毒为主。气微，味苦。【鉴别】(1)本品粉末黄色。韧皮纤维单个散在或数个成束，梭形，长60 250 um，直径933 口 m，壁厚，孔沟细。石细胞类圆形、类方形或长方形，壁 较厚或甚厚。木栓细胞棕黄色，多角形。网纹导管多见，直径2472 um。木纤 维多碎断，直径约12 um，有稀疏斜纹孔。淀粉粒甚多，单粒类球形，直径2 10 um，脐点明显，复粒由23分粒组成。(2)取本品粉末1g，加甲醇20m 1，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干， 残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材1g，同法制成对 照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照 品溶液。照薄层色谱法(附录W B)试验，吸取上述三种溶液各5u1，分别点 于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以 醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂，预平衡30分钟，展开，取出，晾 干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置 上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显一相同的暗绿色斑 点。【含量测定】照高效液相色谱法测定.色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水- 磷酸(47:53:0.2)为流动相；检测波长为280n m.理论板数按黄芩苷峰计算应不 低于2500.对照品溶液的制备：精密称取在60C减压干燥4小时的黄芩苦对照 品适量，加甲醇制成每1ml含60mg的溶液，即得.供试品溶液的制备：取本品中粉约0.3g (同时另取本品粉末测定水分)，精 密称定.加70%乙醇40ml,加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶 中，用少量70%乙醇分次洗涤容器扣残渣， 洗液滤入同一量瓶中，加 70%乙醇至 刻度，摇匀.精密量取1ml,置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得.测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相色谱 仪，测定，即得.本品按干燥品计算，含黄芩苷(C21H18O11)不得少于9.0%.3.2.2.3 板蓝根板蓝根分为北板蓝根和南板蓝根，北板蓝根来源为十字花科植物菘蓝(Isatis tinctoria L.)和草大青(I. indigotica Fort.)的根；南板蓝根为爵床科植物 马蓝（Baphicacanthus cusia （Nees） Brem.）的根茎及根。具有清热解毒、凉血消 肿、利咽之功效。【性状】：该品呈圆柱形，稍扭曲，长1020cm，直径0.5lcm。表面淡 灰黄色或淡棕 黄色，有纵皱纹及支根痕，皮孔横长。根头略膨大，可见暗绿色 或暗棕色轮状排列的叶柄残基和密集的疣状突起。体实，质略软，断面皮部黄白 色，木部黄色。气微，味微甜后苦涩。【鉴别】：1该品横切面：木栓层为数列细胞。皮层狭。韧皮部宽广，射线 明显。形成层成环。木质部导管黄色，类圆形，直径约至80“m有木纤维束。 薄壁细胞含淀粉粒。2取该品水煎液，置紫外光灯（365nm）下观察，显蓝色荧光。3取该品粉末0.5g，加稀乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残 渣加稀乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取精氨酸对照品，加稀乙醇制成每 1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录W B）试验，吸取 上述两种溶液各12 口 1,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄 层板上（自然干燥），以正丁醇-冰醋酸-水（19： 5： 5）为展开剂，展开，取出， 热风吹干，喷以茚三酮试液，在105C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在 与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。322.4连翘连翘为木犀科（Oleaceae）连翘属（Forsythia）植物连翘（Forsythia suspensa （Thunb.） Vahl）的干燥果实，果实初熟尚带绿色时采收称为青翘，果 实熟透颜色发黄时采收称为老翘。【性状】：连翘商品呈长卵形或卵形，长1-2.5厘米,直径0.5-1.3厘米，表面 黄棕色，有纵皱纹及多数突起的小斑点，两面各有1条明显的纵沟。顶端锐尖， 基部偶有果柄。果皮硬脆，断面平坦。青翘果实完整，表面绿褐色，大多无疣状 突起，内有多数种子着生，黄绿色，细长，一侧有翅。青翘以干燥、色黑绿、不 裂口者为佳；老翘以色棕黄、壳厚、显光泽者为佳。3.2.2.5 金银花本品为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花。采收最佳 时间是清晨和上午，采后放入条编或竹编的篮子内，集中的时候不可堆成大堆， 应摊开放置，放置时间不可太长，最长不要超过 4h。【性状】： 半常绿多年生藤本；幼枝洁红褐色，密被黄褐色、开展的硬直糙 毛,腺毛和短柔毛，下部常无毛。叶纸质，卵形至矩圆状卵形，有时卵状披针形， 稀圆卵形或倒卵形，极少有 1 至数个钝缺刻，长 3-5（-9.5）厘米，顶端尖或渐 尖，少有钝、圆或微凹缺，基部圆或近心形，有糙缘毛，上面深绿色，下面淡绿 色，小枝上部叶通常两面均密被短糙毛，下部叶常平滑无毛而下面多少带青灰色； 叶柄长 4-8 毫米，密被短柔毛。3.2.3 工艺路线的确定 取鱼腥草适量，与连翘、金银花粉碎成细粉，剩余鱼腥草与黄芩、板蓝 根加水煎煮二次，每次2 小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入细粉拌 匀，在50C下干燥后，干颗粒需过14目筛除去粗大颗粒，然后过100目筛除去 细粉，使颗粒均匀。3.3 前处理工艺条件筛选3.3.1 前处理鱼腥草：清洗去须根, 将鱼腥草的小须根剔去。用干净水清洗, 以去除 表面的泥沙。3.3.2 鱼腥草挥发油工艺条件筛选取处方量的1/10，鱼腥草22.2g,黄芩12.6g，板蓝根12.6g，等量9份药材。 按正交设计安排试验（见表 1），以鱼腥草素总含量和黄芩甘含量作为指标，以加 权法综合评价，优选出第一部分五种药物的最佳提取工艺。正交设计实验见表1表 1 蒸馏法提取鱼腥草挥发油优选因素水平表因素水平A加水量（ml）B浸泡时间（h）C蒸馏时间（h）1500.5421001.0631501.58鱼腥草在本方中为君药，权重系数为0.6,黄芩为臣药，权重系数为0.4。假 设通过SAS统计软件计算，确定该五味药的最佳的提取工艺为：选用8倍的水， 提取 2 次，每次1.5 小时。3.4 制剂成型工艺研究3.4.1 辅料种类考察 水溶性颗粒目前最常用的辅料为糖粉和糊精。糖粉系蔗糖结晶的细粉， 是可溶性颗粒的优良的赋形剂，并具有矫味及黏合的作用。糊精系淀粉水解的产 物。本方法选用蔗糖为辅料。3.4.2 辅料用量考察 辅料的用量，可根据清膏的相对密度、粘性强度适当调整，单用蔗糖作为辅 料，辅料总用量不宜超过清膏量的5倍。根据文献资料，主药与辅料的比例、辅 料的用量、以及乙醇的浓度对颗粒的成型影响较大，故以这3个因素按 L9（34） 正交设计实验见表 2，以颗粒剂外观、溶化性、澄明度、含水量为考察指标进行 综合评分，优选颗粒剂处方。表 2 颗粒制备优选因素水平表因 素水平A主药：辅料（g：g）B蔗糖（g）C乙醇(v/v) (%)12:13.05021:12.07531:21.095规定权重系数：外观 0.3，澄明度 0.3，水分含量 0.4。得分=刀分数X权重系数3.4.3 制软材工艺考察一般清膏与辅料混合均匀后，加入 70左右的乙醇调节湿度。因受天 气、湿度、糖粉的湿度及稠膏的干湿度影响，往往在实际工作中，很难掌握合适 的干湿度。我们的经验是用手把颗粒捏成块后，用手指轻轻压下，团块随即散开 成几块为度，就是俗语讲：“手捏成团，轻按即散。本研究分别取分别取3份相同的清膏30g,分别加入同量的蔗糖120g,不同 浓度乙醇溶液（60%、70%和80%）为润湿剂制软材，过14目筛制湿颗粒，70C 以下烘干,过 100 目筛整粒,考察颗粒成型等工艺效果 。结果表明, 70%的乙 醇制的颗粒均匀，效果最好。3.4.4 制粒工艺考察将制得的软材以挤压的方式通过不同规格的筛网，制成均匀的湿颗粒，湿 颗粒在60C以下烘干，过100目筛整粒后得合格颗粒，称重，计算合格颗粒收 率，结果（见表 3）。表3.不同制湿粒筛网目数对制粒工艺的影响制湿粒筛网/目合格颗粒收率（%）121416结果表明软材通过14目筛网所得的湿颗粒烘干整粒后合格颗粒收率最 高，因此确定 14 目为最佳制湿粒筛网目数。3.4.5 干燥工艺考察 依据干燥的原理，要求烘干的温度先低后高。这样就可以防止由于药物颗粒表层先干,而内部湿气继续外泄，以至造成颗粒迸裂。烘干温度一般掌握在40C 70C范围较为合适，故采用烘箱烘干即可，实验确立最佳干燥工艺为：湿颗粒干 燥时温度逐渐上升，烘干温度掌握在40 C70C，含水量控制在2%以内。3.4.6 整粒工艺考察 湿颗粒干燥后，可能会有部分结块、粘连，因此干颗粒需过14目筛除去粗大颗粒，然后过100目筛除去细粉，使颗粒均匀。3.4.7 包装材料的选择颗粒剂极易吸湿软化，甚至结块，故应选用不易透气、透湿的包装材料，本 制剂采用复合铝塑袋作为包装材料，并应干燥贮藏。3.5 样品的制备取鱼腥草168g，与连翘、金银花粉碎成细粉，剩余鱼腥草与黄芩、板蓝根 加8倍量的水煎煮二次，每次 1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加 入细粉拌匀，在50C下干燥后，干颗粒需过14目筛除去粗大颗粒，然后过100 目筛除去细粉，使颗粒均匀，即得。4 扩大中试4.1 验证工艺处方鱼腥草 490g黄芩 126g板蓝根 126g连翘 49g金银花 49g制备取鱼腥草168g，与连翘、金银花粉碎成细粉，剩余鱼腥草222g与黄芩、 板蓝根加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入细 粉拌匀，在50C下干燥后，干颗粒需过14目筛除去粗大颗粒，然后过100目筛 除去细粉，使颗粒均匀。4.2 投料量及得率 根据优选的制备工艺，中试试验生产所需要的投料量以及最终得率的数据见下面表 4。表 4 中试试验投料量及得率批号复方鱼腥复方鱼腥复方鱼腥项目草颗粒1草颗粒2草颗粒3提取药材总量（kg）清膏或粉末量（kg） 清膏或粉末得率 鱼腥草挥发油量（ ml） 乙醇用量（ l）预计成品量（ kg）实际成品量（ kg） 成品得率（ %）5 辅料质量标准与来源蔗糖 本品符合中国药典2010 年版一部蔗糖项下有关规定。 参考文献1 .国家药典委员会.中华人民共和国药典(2010年版一部)M.化学工 业出版社2 .李晓芳，郭波红，李咏茵.复方鱼腥草分散片的制备及其溶出度测定 J. 中华中医药杂志,2008,23(8):740-742.3 .许杨彪.复方鱼腥草颗粒质量标准研究J.中成药.2003, 25 (2)： 122-124.4 .余虹.药食两用佳品鱼腥草J.中国药业.2010,19(4):60-61.14，质量研究工作的试验资料及文献资料1.性状： 按实际性状描述2.鉴别：2.1 鱼腥草的鉴别取本品15g，研细，加无水乙醇30mL，振摇20min,滤过，滤液蒸干，残渣 加50%乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液.另取鱼腥草对照药材3. 5g，加水煎 煮山，滤过.滤液浓缩至约5mL,加2倍量乙醇，搅匀，静置1h,滤过，滤液蒸 干，残渣加50%乙醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。再取鱼腥草阴性样品15g 按供试品溶液制备方法制成鱼腥草阴性对照液。吸取上述3种溶液各5mL，分别 点于同一以羧甲基纤维索钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯.氯仿丙酮（8： 5： 7）为展开剖，展开，取出.晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试晶色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同颜色的荧光斑点，而阴性对照液色 谱中无相应的斑点。2.2 金银花的鉴别取本品20g，研细.加甲醇40mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣 用适量水溶解，加在大孔吸附树脂柱上，用水100mL洗脱，弃去水洗液，再用30% 己醇50ml。洗脱，收集洗脱液，蒸于，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。 另取金银花对照药材0 5g,加甲醇2mL，浸渍1h,取上清液作为对照药材溶液。再 取绿原酸对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺金 银花阴性样品20g按供试品溶液翻备方法制成金银花阴性对照液。吸取上述4种溶 液各46nL，分别点于同一微晶纤维素薄层板上，以醋酸丁酯一甲酸一水（14： 5： 5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下捡视。供试 品色谱中.分别在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显一个相同颜色 的荧光斑点。而阴性对照液色谱中无相应的斑点。2.3 连翘的鉴别取本品粉末1g，加氯仿30ml，加热回流1小时，滤过，弃去滤液，药渣挥 干,加甲醇40ml，加热加流1小时，滤过，滤液浓缩至约1ml,加于聚酰胺柱（14 30目, 3g,内径11.2cm，用水50ml预洗）上，用水50ml洗脱，弃去水液，再用 乙醇100m l洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，滤过，滤液置分液 漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇lml 使溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄 层色谱法（附录W B）试验，吸取上述两种溶液各21,分别点于同一以含5% 磷酸二氢钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，置以苯一丙酮一 醋酸乙酯甲醇-水（20:25:30:3:3） 为展开剂的展开缸中饱和30分钟，展开，取 出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相 应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以香草醛硫酸试液，加热至斑点显色 清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。3. 检查3.1 粒度参照中国药典2010年版一部附录IC颗粒剂项下测定，不能通过一号筛 与能通过五号筛的总和，不得过15%。3.2 溶化性取供试品一袋，加热水200ml，搅拌5分钟，立即观察，应全部溶化或呈混 悬状。可溶颗粒应全部溶化，允许有轻微浑浊；混悬颗粒应能混悬均匀。3.3 水分测定取本品内容物，照水分测定法（中国药典2010年版一部附录IX H）测定， 要求水分不得过6.0%。3.4 装量差异取本品三批，分别称定每袋内容物的重量，应在10g5%以内。3.5 微生物限度检查照微生物限度检查法（附录XIIIC ）检查，应符合规定。4. 含量测定4.1 黄芩苷 照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇 -水-磷 酸（47:53:0.2）为流动相；检测波长为280n m.理论板数按黄芩苷峰计算应不低 于2500对照品溶液的制备：精密称取在60C减压干燥4小时的黄芩苦对照品适量，加 甲醇制成每1 ml含60mg的溶液，即得.供试品溶液的制备：取本品中粉约0.3g (同时另取本品粉末测定水分)，精密 称定.力加70%乙醇40ml,加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100m 1量瓶中，用少 量70%乙醇分次洗涤容器扣残渣， 洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度， 摇 匀.精密量取1 ml,置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得.测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相色谱仪，测定, 即得.本品按干燥品计算，含黄芩苷(C21H18O11)不得少于9.0%.4.2 HPLC 色谱条件采用Shim-packvp-ODS (4.6mm X 150mm,5 口 m)色谱柱；流动相：甲醇-水-磷酸 (47:53:0.2)；检测波长:315nm；柱温：25C ；灵敏度 0.1AUFS；流速1.0mL/min； 进样量：10 口 L。4.3、阴性对照试验精密吸取对照品，阴性溶液，供试品溶液10UL，分别注入液相色谱仪中测定， 结果表明，阴性无干扰。4.4、线性关系及标准曲线精密称取黄芩苷对照品 适量， 用 70%乙醇分别制成质量浓度为 0.0175,0.03,0.06,0.12,0.30, 0.60mg/mL 系列对照品溶液，分别精密吸取 10 口 L, 注入液相色谱仪，依法测定色谱峰面积，以对照品进样量X(ug)对相应峰面积 积分值 Y 进行线性回归， 得回归方程 Y=3.1317X 106X1.4427X 107,r=0.9997(n=6)。结果表明，黄芩苷进样量在0.1756.0 口 g范围内与峰面积积 分值呈良好的线性关系。4.5 精密度及稳定性试验精密吸取黄芩苷对照品溶液，重复进样 5 次，依法测定峰面积。结果 RSD 为 1.87%(n=5)。表明精密度良好。精密吸取供试品溶液10 口 L，分别于同一天的0,2，6,8,12h进样依法黄芩苷的含 量。结果12h内黄芩苷含量的RSD为1.53%(n=5),表明样品溶液在25C条件下放 置 12h 是稳定的。4.6 重复性试验 按供试品溶液制备方法平行处理同一批的样品6份，依法测定样品中黄芩苷的含 量。结果黄芩苷含量的 RSD 为 2.53%，重复性良好。4.7 加样回收率试验 精密称取已知黄芩苷含量的同一批的样品 6 份，按高、中、低浓度分别精密加入 适量的黄芩苷对照品溶液，按样品测定下的操作，依法测定，计算回收率。 4.8、三批样品含量测定分别量取对照品溶液和供试品溶液适量，用微孔滤膜滤过，各进样10 UL,按上 述色谱条件测定3 批样品，平行测定 5 次。计算各供试品溶液黄芩苷的含量。 4.9、含量测定限度本品含黄芩苷应为标示含量的 96%105%，以每 1g 样品含黄芩苷计，不得少于 2.0mg。15 药品标准草案及起草说明1 药品标准草案复方鱼腥草颗粒fufangyuxingcao Kel【处方】:鱼腥草 490g黄芩 126g 板蓝根 126g连翘 49g 金银花 49g【制法】：取鱼腥草168g,与连翘、金银花粉碎成细粉，剩余鱼腥草222g 与黄芩、板蓝根加水煎煮二次，每次 2 小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏， 加入细粉拌匀，在50C下干燥后，干颗粒需过14目筛除去粗大颗粒，然后过100 目筛除去细粉，使颗粒均匀。【性状】按样品的实际性状描述。【鉴别】（1）取本品15g，研细，加无水乙醇30mL，振摇20min，滤过， 滤液蒸干，残渣加50%乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液.另取鱼腥草对照药 材3. 5g，加水煎煮山，滤过。滤液浓缩至约5mL,加2倍量乙醇，搅匀，静置 1h,滤过，滤液蒸十二，残渣加50%乙醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。再 取缺鱼腥草阴性样品15g按供试品溶液制备方法制成鱼腥草阴性对照液。吸取上 述3种溶液各5p. L，分别点于同一以羧甲基纤维索钠为黏合剂的硅胶G薄层板 上,以甲苯.氯仿丙酮（8： 5： 7）为展开剖，展开，取出.晾干，置紫外光灯（365nm） 下检视。供试晶色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同颜色的荧 光斑点，而阴性对照液色谱中无相应的斑点。（2）取本品6g,研细，加乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干, 残渣用水20ml溶解，用盐酸调节PH值至23,用乙酸乙酯振摇提取2次，每 次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶 液。另取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶 液。照薄层色谱法（附录VI B）实验，吸取上述两种溶液各10UL，分别点于同一以 含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯- 丁酮-甲酸-水（5： 3： 1： 1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%的三氯化铁乙 醇溶液。供试品色谱中，在于对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(3) 取该品粉末0.5g，加稀乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干， 残渣加稀乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取精氨酸对照品，加稀乙醇制成 每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录W B)试验， 吸取上述两种溶液各12 口 1,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上(自然干燥)，以正丁醇-冰醋酸-水(19： 5： 5)为展开剂，展开， 取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105C加热至斑点显色清晰。供试品色谱 中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】应符合颗粒剂项下各项规定(附录IC)【含量测定】黄芩(1) HPLC 色谱条件： 采用 Shim-packvp-ODS (4.6mm X 150mm,5 口 m)色谱 柱;流动相：甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)；检测波长:315nm；柱温：25C；灵敏度： 0.1AUFS；流速:1.0mL/min；进样量：10 口 L。在该色谱条件下，对照品及样品 色谱峰良好,无黄芩阴性对照对测定无干扰。(2) 对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加 70%乙醇制 成每1ml含60ug溶液，即得。(3) 供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，混匀，研细，取3g，精密 称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功 率250W,频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇不足减失的重量， 摇匀，滤过，取续滤液，即得。(4) 测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 ul，注入液相色谱 仪，测定，即得。【功能主治】清热解毒。用于外感风热引起的咽喉疼痛；急性咽炎、扁桃体 炎。【用法与用量】口服，一次1袋，一日3次。【规格】每袋装 6 克。【贮藏】密封。【有效期】暂定 12月。2 起草说明【名称】依据复方制剂的命名原则，采用功能合并加剂型，在药名前加复方 进行命名，因此命名为复方鱼腥草颗粒。【处方】复方鱼腥草颗粒为中华人民共和国药典（2010 年版）收载的药品。 【制法】根据药材中有效成分的性质，通过单因素和正交试验的考察，优选 出切实可行的提取工艺和制剂成型工艺。【性状】根据本品三个月初步稳定性考察的样品的实际性状描述。【鉴别】（1）鱼腥草的薄层鉴别：取粉末lg,加甲醇10ml，浸泡过夜，滤 过。滤液浓缩至lml,作洪试液。另取金丝桃甙少许，甲醇溶解后作对照液。分 取供试品及对照品适量点于同一硅胶G板上，以乙醚-甲醇-水（4.5： 1： 1.5）展 开，用 1%的三氯化铝乙醇溶液显色，供试品色谱在与对照品色谱的相应位置上 显淡黄色斑点，紫外光灯下呈暗棕色斑点。（2）黄芩的薄层鉴别：黄芩主要有效成分为黄芩苷，以中国药品生物制品 检定所所提供的黄芩苷为对照品，在含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合 剂的硅胶G薄层板上的点样，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5： 3： 1： 1）为展开剂， 1%的三氯化铁乙醇溶液为显色剂，能观察到较好的分离效果。（3）板蓝根的薄层鉴别：取该品粉末0.5g，加稀乙醇20ml，超声处理20 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加稀乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取精氨 酸对照品，加稀乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱 法（附录W B）试验，吸取上述两种溶液各12 口 l,分别点于同一以羧甲基纤 维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上（自然干燥），以正丁醇-冰醋酸-水（19： 5： 5）为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105C加热至斑点 显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】1 粒度照粒度测定法（附录XIB第二法，双筛分法）测定，不能通过一号筛与 能通过五号筛的总和，不得过15%。通过对三批中试试品的观察，三批试品粒度检查结果符合规定。2 水分照水分测定法（附录IXH）测定，不得过6.0%。表 1 水分测定结果批号水分含量（）复方鱼腥草颗粒1复方鱼腥草颗粒 2复方鱼腥草颗粒3通过对三批中试试品的观察，三批试品水分测定结果均符合规定。3 溶化性取供试品1袋（6g）,加热水200ml，搅拌5分钟，立即观察，应全部 溶化。通过对三批中试试品的观察，三批试品溶化性检查结果符合规定。4 装量差异取供试品 10袋，分别称定每袋内容物的重量，每袋重量与标示装量相 比较，超出5%的不得多于2袋，并不得有1袋超出限度1倍。通过对三批中试试品的观察，三批试品装量差异检查结果符合规定。5 微生物限度检查照微生物限度检查法（附录XIIIC）检查，应符合规定。通过对三批中试试品的观察，三批试品微生物限度检查结果符合规定。6 砷盐检查依据中国药典2010年版一部附录IX F砷盐检查法及有关文献方法，对 本品中砷盐进行了分析。6.1 仪器与试药仪器装置 按中国药典2010年版一部附录IX F规定。盐酸、碘化钾为分析纯，锌粒为无砷锌粒。 醋酸铅棉花、酸性氯化亚锡溶液、溴化汞试纸按中国药典规定配制。6.2 方法与结果精密量取三批鱼腥草颗粒样品各1.0g，加水溶解，加入1g氧化钙细粉，搅匀, 加少量水，水浴蒸干，再于上面覆盖1g氧化钙细粉，小火炽灼至完全炭化，于 500C炽灼至完全灰化，取出，放冷，加水5ml润湿灰分后，加盐酸5ml,将溶 液移入验砷瓶中。取与灰化样品同样量的氧化钙，加入砷标准溶液（1 口 g/ml） 2.0ml，同法制备标准对照溶液。结果三批供试品溶液生成的砷斑远比标准砷斑 颜色浅，即样品中含砷量不超过百万分之二，故未列入标准正文。7 重金属检查取本品lg,置干燥的坩埚中缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温，加硫 酸lml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后在500600C炽灼使完全炭化，放 冷至室温，依法检查(取铅标准液2ml,照中国药典2005年版一部附录IX E重 金属检查法第二法)，结果见表 2。表2重金属检査结果批号取样量(g)比色结果重金属含量( ppm)复方鱼腥草颗粒1复方鱼腥草颗粒2复方鱼腥草颗粒3三批供试品溶液的比色结果远比标准的颜色浅，即样品中的重金属含量不超 过所规定的标准，故未列入标准正文。【含量测定】一、黄芩苷含量测定(1) HPLC色谱条件采用Shim-packvp-ODS (4.6mm X 150mm,5 口 m)色谱柱;流动相:甲醇-水-磷酸 (47:53:0.2)；检测波长:315nm；柱温：25C ；灵敏度 0.1AUFS；流速1.0mL/min； 进样量：10 口 L。(2) 溶液的制备2.1 对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含60ug溶液，即 得。2.2 供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，混匀，研细，取3g,精密称定，置具塞锥形瓶中， 精密加入70%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处環功率250W,频率50kHz)30 分钟，放冷，再称定重量，用 70%乙醇不足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液， 即得。2.3 阴性对照溶液的制备取缺少黄芩药材的处方量的 1/10，按供试品的制备方法制备阴性样品溶液。(3) 阴性对照试验精密吸取对照品，阴性溶液，供试品溶液10 L,分别注入液相色谱仪中测 定，结果表明，阴性无干扰。(4) 标准曲线的绘制精密称取黄芩苷对照品适量， 用 70%乙醇分别制成质量浓度为 0.0175,0.03,0.06,0.12,0.30, 0.60mg/mL 系列对照品溶液，分别精密吸取 10 口 L, 注入液相色谱仪，依法测定色谱峰面积，以对照品进样量X(ug)对相应峰面积 积分值 Y进行线性回归，得回归方程 Y=3.1317 X 106X + 1.4427 X 107,r=0.9997(n=6)。结果表明，黄芩苷进样量在0.1756.0 口 g范围内与峰面积积 分值呈良好的线性关系。(5) 稳定性试验精密吸取供试品溶液10 口 L，分别于同一天的0,2，6,8,12h进样依法黄芩苷 的含量。结果12h内黄芩苷含量的RSD为1.53%(n=5),表明样品溶液在25C条件 下放置12h是稳定的。(6) 重复性试验 按供试品溶液制备方法平行处理同一批的样品6份，依法测定样品中黄芩苷的含量。结果黄芩苷含量的 RSD 为 2.53%，重复性良好。(7) 精密度实验精密吸取黄芩苷对照品溶液，重复进样 5 次，依法测定峰面积。结果 RSD 为1.87%(n=5)。表明精密度良好。(8) 加样回收率实验精密称取已知黄芩苷含量的同一批的样品 6份，按高、中、低浓度分别精密 加入适量的黄芩苷对照品溶液，按样品测定下的操作，依法测定，计算回收率。(9) 耐用性试验取批号为复方鱼腥草 01 的样品, 按供试品溶液制备法制备，按拟订方法测 定黄芩苷含量，考察流动相的组成比例、流速、不同品牌的色谱柱对测定结果的 影响。9.1 流速的影响精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 UL,注入液相色谱仪，流速分别设 定为0.9ml min-1、1.0ml min-1、1.1ml min-1，其它条件按上述条件进行测 定。9.2 不同流动相比例的影响精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 口 l ,注入液相色谱仪，流动相比例 分别设定为甲醇-水-磷酸(45:55:0.2),(47:53:0.2),( 49:51:0.2)，其他条件按上述 条件进行测定。9.3 不同色谱柱的影响精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 口 l ,注入液相色谱仪，通过不同色 谱柱进行测定，其它条件按上述条件进行测定。(10) 样品含量测定分别量取对照品溶液和供试品溶液适量，用微孔滤膜滤过，各进样10 ul, 按上述色谱条件测定3批样品，平行测定5次。按外标法以峰面积计算供试品溶 液黄芩苷的含量。本品含黄芪甲苷应为标示含量的95%105%，以每1g样品中 含黄芩苷计，不得少于 0.2mg。【功能与主治】本品功能与主治与现有复方鱼腥草颗粒的功能与主治一样。【用法用量】依据现有复方鱼腥草颗粒的用量，开水冲服，一次12 袋，一 日3 次。【规格】每袋装 6g。【贮藏】由于本剂型为颗粒剂，容易吸潮，所以要密封贮藏。 【有效期】暂定一年.3 药品标准物质的有关资料供试品：自制复方鱼腥草颗粒 1 批、复方鱼腥草颗粒 2批、复方鱼腥草颗粒3 批。黄芩苷对照品，黄芩对照药材由中国药品生物制品检定所提供。 参考文献1 .国家药典委员会.中华人民共和国药典(2010年版一部)M.化学工 业出版社2 .陈志明，陆伟根，王大林分散片制备技术中国医药工业志，2004， 35(6)： 371373.王雪珍，王巧荣阿普唑仑片溶出度测定方法的研究J,药物分析杂志, 2000， 20(1)： 534 .刘彬果，杨本明，吕丽君等 . 复方鱼腥草配方合煎对黄芩苷和绿原酸成 分溶出量的影响J,药学实践杂志，2008, 26:208.5 .雷鹏，刘韶，李新中等. 黄连解毒汤传统汤剂与配方颗粒汤剂主要活性 成分含量比较J 中药新药与临床药理，2005, (5) :13.17药物稳定性研究的试验资料及文献资料药品的稳定性是其质量的重要评价指标之一，是核定新药使用期的重要依 据。为了保证新药的质量，保证用药安全，我们按照新药稳定性试验要求，在临 床试验用包装条件下，采用室温留样观察法对复方鱼腥草颗粒三批样品进行了稳 定性试验。1. 考察方法 根据国家药品监督管理局新药审批办法以及中药新药研究的技术 要求，对三批供试品（复方鱼腥草 01、02、03）进行了稳定性试验。2. 长期稳定性试验取供试品3批，按市售包装（10g每袋），置温度25C2C、相对湿度 60%10%条件下放置，分别于0个月、1 个月、2个月、3个月、6个月末分别 取样一次，检查颗粒剂的外观性状、药材鉴别、水分、粒度、鱼腥草挥发油含量 测定、微生物限度。结果见表 1。表 1 复方鱼腥草颗粒长期稳定性试验结果样品名称：复方鱼腥草颗粒批号：XXX鉴别水 分（ %）粒 度（ %）鱼腥草挥发油含量（ mg/ml）微生物限度按上表格式，记录三批供试品的长期稳定性试验结果。3 加速试验取供试品3批，按市售包装（10g每袋），置温度37C40C,相对湿度75% 条件下放置6个月，分别于试验期间当月、 1 个月、 2个月、 3个月、 6个月末各 取样一次。检查颗粒剂的外观性状、药材鉴别、水分、粒度、鱼腥草挥发油含量 测定、微生物限度。结果见表 2。表 2 复方鱼腥草颗粒加速试验试验结果样 品名 称 ：复 方鱼腥 草 颗粒批 号 ： XXX鉴别水分（ %）粒度（ %）鱼腥草挥发油含量（mg/ml）微生物限度按上表格式，记录三批供试品的加速试验结果。4. 结论 本品三批按三个月恒温加速试验考察及六个月常温考察，其外观、性状、 微生物限度及内在质量均未发生变化，各项指标均符合规定。证明本质量标准草 案可用于复方鱼腥草颗粒的质量控制，复方鱼腥草颗粒是比较稳定的，故暂定其 有效期为 1 年。参考文献1 .国家药典委员会.中华人民共和国药典（2005年版一部）M.化学工 业出版社2 .张兆旺，中药药剂学M.中国中医药出版社，2007年，第二版.3 .李松林，宋景政，徐宏喜.中药配方颗粒研究浅析J，中草药，2009, 40（ S1） :1.4 .曹郡双C秦荣和.鱼腥草的药理作用及临床应用J.现代中西医结合杂 志，2001，10（6）:572-573.