荧光衍生化反应

荧光衍生化反应 荧光衍生作用是化学衍生作用的一种 ,它应用于色谱分析已有廿多年的历史 ,早 期的工作是 TLC 分离衍生物。荧光分子由两种波长确定其特性,即激发波长和发 射波长,因此对于某一微量的荧光化合物即使同时含有大量各种非荧光化合物也 易于检出。某些情况下,荧光物质相互共存时,如果它们的特性波长有足够差异也 有可能检出。两种波长的利用较一般的分光光度法增加了选择性;荧光分析的另 一个特性是它有很高的灵敏度 ,一般为其它光吸收法 （例如紫外吸收 ）灵敏度的 100 倍。而且荧光强度的线性响应较宽,约为浓度范围的 104。 在液相色谱法中，荧光检测器是一种高灵敏度、高选择性的检测器，比紫外检测 器的灵敏度要高 10到 1000 倍，因此，为了检测痕量非荧光物质，常将它与荧光 衍生化试剂反应，生成荧光物质，然后用荧光检测器检测。 液相色谱中荧光检测器的灵敏度要比紫外检测器高出几个数量级，但是液相色谱 能分离的对象，多数没有荧光，主要依靠荧光衍生化试剂通过衍生化反应在目标 化合物上接上能发出荧光的生色基团，达到荧光检测的目的。衍生物的荧光激发波长范围为350-370nm，发射波长范围为490-540nm,取决于 目标化合物和测量时使用的溶剂。由于荧光衍生物的激发波长和发射波长与荧光 衍生试剂的不同，即使有过量的试剂或有反应副产物存在，也不会干扰荧光衍生 物的检测，因此荧光衍生反应不需要纯化衍生物，可以直接进样。荧光检测器是一种高灵敏度、高选择性的检测器比紫外检测器的灵敏度要高 10-1000倍尤其适合痕量分析。能产生荧光的物质分子结构：长共轭结构如含有芳香环或杂环。用于荧光衍生化反应的衍生化试剂应具备下列条件:1 在温和的条件下能迅速产 生定量的衍生物,能在水或有机溶剂的水溶液中进行的衍生反应尤为理想。 2 为 能使用有机溶剂萃取并进行分离预浓缩,形成的衍生物应具有较低的极性。 3 衍 生试剂对某一功能团的衍生反应具有高选择性。 4过量衍生试剂易从反应产物中 分离,衍生物具有好的色谱分离稳定性。 5衍生物具有高的量子效率,发射波长应 足以避开溶剂的背景荧光吸收且配备高灵敏度的荧光检测器。 6 试剂应具有较大 的摩尔吸光度。 7 形成的衍生物应足以抵挡水分子对它们的裂解。 8 试剂合成方 法简单,原料易得、毒性小。 9 形成的衍生物在甲醇或乙腈溶液中有足够的溶解 度. 10衍生物对光有足够稳定性荧光衍生化试剂的分类：（一）胺的衍生试剂（二）醇、酚的衍生试剂（三）羰基化合物的衍生试剂（四）羧酸类化合物的衍生试剂 衍生化试剂的荧光团一般是具有刚性平面结构的芳香性化合物,以及结构与其类 似的杂环化合物。主要有萘、茚、蒽、菲、芘、芴、联苯、吲哚、苯并恶二唑、 丫啶、占屯、香豆素、喹啉、喹恶啉、喹恶酮、苯并三唑、苯并噻唑、苯并吡咯 酮等等。在这些母体化合物上接上胺基、烷氧基等给电子基团,以进一步增强荧 光强度,改善荧光性质。