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俄国植物学家茨维特在俄国植物学家茨维特在19061906年运用的安装：年运用的安装：色谱法是一种分别技术。色谱法是一种分别技术。试样混合物的分别过程是试样中各组分在色谱分别试样混合物的分别过程是试样中各组分在色谱分别柱中的两相间不断进展着的分配过程。柱中的两相间不断进展着的分配过程。其中的一相固定不动，称为固定相；其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体气体或液体，称为流动相。体气体或液体，称为流动相。俄国植物学家Tswett于1901年发现：利用吸附原理分别植物色素1903年 发表文章：On a new category of adsorption phenomena and their application to biochemical analysis1906年 Tswett 创建“chromatography“色谱法新名词1907年 在德国生物会议上第一次向世界公开展现显现彩色环带的柱管1930年 R.Kuhn用色谱柱分别出胡萝卜素1935年 Adams and Holmes 发明了离子交换树脂，进一步发明了离子色谱1938年 Izmailov 发明薄层色谱1941年 Martin&Synge 发明了液-液分配色谱1944年 Consden,Gordon&Martin 发明纸色谱1952年 Martin&Synge 发明气-液色谱1953年 Janak发明气-固色谱1954年 Ray发明热导检测器1957年 Martin&Golay 发明毛细管色谱1959年 Porath&Flodin 发明凝胶色谱1960年 液相色谱技术完善超临界流体色谱法超临界流体色谱法 (SFC)用超临界形状的流体作流动相的色谱法。超临界形状的流体不是普通的气体或流体,而是临界压力和临界温度以上高度紧缩的气体,其密度比普通气体大得多而与液体类似,故又称为“高密度气相色谱法 NoImageNoImagemSCCK K 由组分及固定液的热力学性质决议的，只随柱温暖柱压而变化，与色谱柱中气相和液相的体积无关。假设两个组分的分配系数一样，那么它们的色谱峰完全重合；分配系数相差越大，相应的色谱峰相距越远，分别越好。一定温度下，组分的分配系数K越大，出峰越慢；试样一定时，K主要取决于固定相性质；每个组份在各种固定相上的分配系数K不同；选择适宜的固定相可改善分别效果；试样中的各组分具有不同的K值是分别的根底；某组分的K=0时，即不被固定相保管，最先流出。qpk 1分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性 质有关的常数，质有关的常数，随分别柱温度、柱压的改动而变化。随分别柱温度、柱压的改动而变化。2分配系数与分配比都是衡量色谱柱对组分保管才干的参数，数值越分配系数与分配比都是衡量色谱柱对组分保管才干的参数，数值越大，该组分的保管时间越长。大，该组分的保管时间越长。3分配比可以由实验测得。分配比可以由实验测得。k=tR/t0 kqVpVVqVpCCKSmmSmS根本保管方程可表示为：根本保管方程可表示为：tR=t0(1+k)假设载气流量假设载气流量F0恒定，也可用保管体积表示，那么恒定，也可用保管体积表示，那么 VR=Vm+KVs这就是色谱根本保管方程。这就是色谱根本保管方程。上式阐明，色谱柱确定后，上式阐明，色谱柱确定后，Vm和和Vs即为定值。分配即为定值。分配系数不同的各组分具有不同的保管值，因此在色谱图上有系数不同的各组分具有不同的保管值，因此在色谱图上有不同位置的色谱峰。不同位置的色谱峰。201exp()22rCt tC拖尾峰：拖尾峰：当当AsAs大于大于1 1时，色谱峰的外形是前半部分时，色谱峰的外形是前半部分信号添加快，后半部分信号减少慢。引起峰拖尾的信号添加快，后半部分信号减少慢。引起峰拖尾的主要缘由是溶质在固定相中存在吸附作用，因此，主要缘由是溶质在固定相中存在吸附作用，因此，拖尾峰也称为吸附峰。拖尾峰也称为吸附峰。伸舌峰：伸舌峰：当当AsAs小于小于1 1时，色谱峰是前半部分信号添时，色谱峰是前半部分信号添加慢，后半部分信号减小快。由于伸舌峰主要是固加慢，后半部分信号减小快。由于伸舌峰主要是固定相不能给溶质提供足够数量适宜的作用位置，使定相不能给溶质提供足够数量适宜的作用位置，使一部分溶质超越了峰的中心，即产生了超载，所以一部分溶质超越了峰的中心，即产生了超载，所以也称超载峰。也称超载峰。色谱流出曲线的意义色谱流出曲线的意义 色谱峰数色谱峰数=样品中单组份的最少个数；样品中单组份的最少个数；色谱保管值色谱保管值定性根据；定性根据；色谱峰高或面积色谱峰高或面积定量根据；定量根据；色谱保管值或区域宽度色谱保管值或区域宽度色谱柱分别效能评价目的；色谱柱分别效能评价目的；色谱峰间距色谱峰间距固定相或流动相选择能否适宜的根据。固定相或流动相选择能否适宜的根据。RtMtRtRVMVRV RtMtuLtMMRRtttRVRcRtFVcFcFMVMcMtFVRV cRMRRFtVVVRVsRKVVMMRMRMRMMRtttttVVVVVk由此可推导：kuLtR1kVVMR1kttMR1BABARRMRMRtttttt标志两个峰在色谱图上的相对位置，可以方便地从色谱图上计算。相对保管值越大，越容易分别。假设 =1，分别不能实现。色谱根本术语色谱根本术语22112,1RRRRtVrtV保管值保管值 定性的根据定性的根据 死时间死时间tm 保管时间保管时间tR 调整保调整保管时间管时间t R死体积死体积Vm 保管体积保管体积VR 调整保调整保管体积管体积V R相对保管值相对保管值选择因子选择因子区域宽度区域宽度峰底宽度峰底宽度 W半峰宽半峰宽 W1/2规范偏向规范偏向 衡量柱效率和反映色谱操作条件的动力学要素衡量柱效率和反映色谱操作条件的动力学要素峰高峰高峰面积峰面积定量分析的根底定量分析的根底 色谱峰间间隔由分配系数决议，即与色谱的色谱峰间间隔由分配系数决议，即与色谱的热力学过程有关；热力学过程有关；色谱峰的宽窄由组分在色谱柱内的传质和分色谱峰的宽窄由组分在色谱柱内的传质和分散行为决议，即与色谱的动力学过程有关。散行为决议，即与色谱的动力学过程有关。色谱实际可分为热力学及动力学实际两方面：色谱实际可分为热力学及动力学实际两方面：热力学实际是由相平衡观念来研讨分别过程热力学实际是由相平衡观念来研讨分别过程 塔板实际；塔板实际；动力学实际是以动力学观念速度来研讨各种动力学实际是以动力学观念速度来研讨各种动力学要素对柱效的影响动力学要素对柱效的影响速率实际。速率实际。把色谱柱比作分馏塔，援用途置分馏过程的概念和实际来解释色谱的分别过程。把色谱柱比作分馏塔，援用途置分馏过程的概念和实际来解释色谱的分别过程。一、塔板实际一、塔板实际半阅历实际：半阅历实际：将色谱分别过程比较作蒸馏过程，将延续的色谱分别过程分将色谱分别过程比较作蒸馏过程，将延续的色谱分别过程分割成多次的平衡过程的反复类似于蒸馏塔塔板上的平衡过程；割成多次的平衡过程的反复类似于蒸馏塔塔板上的平衡过程；在每一个塔板上，被分别组分到达一次分配平衡。在每一个塔板上，被分别组分到达一次分配平衡。塔板实际的假设：塔板实际的假设：1在每一个平衡过程间隔内，平衡可以迅速到达；这在每一个平衡过程间隔内，平衡可以迅速到达；这一小段间隔的柱长称为实际塔板高度。一小段间隔的柱长称为实际塔板高度。2将载气看作成脉动间歇过程；将载气看作成脉动间歇过程；3试样沿色谱柱方向的分散可忽略；试样沿色谱柱方向的分散可忽略；4每次分配的分配系数一样。每次分配的分配系数一样。根据上述假定，在色谱分别过程中，该组分根据上述假定，在色谱分别过程中，该组分的分布可计算如下：的分布可计算如下：开场时，假设有单位质量，即开场时，假设有单位质量，即m=1例例1mg或或1g的该组分加到第的该组分加到第0号塔板上，分配平衡后，号塔板上，分配平衡后，由于由于k=1，即，即ns=nm故故nm=ns=0.5。当一个板体积当一个板体积1V的载气以脉动方式进入的载气以脉动方式进入0号板时，就将气相中含有号板时，就将气相中含有nm部分组分的载气顶到部分组分的载气顶到1号板上，此时号板上，此时0号板液相或固相中号板液相或固相中ns部分组分及部分组分及1号板气相中的号板气相中的nm部分组分，将各自在两相间重新部分组分，将各自在两相间重新分配。故分配。故0号板上所含组分总量为号板上所含组分总量为0.5，其中气液或，其中气液或气固两相各为气固两相各为0.25而而1号板上所含总量同样为号板上所含总量同样为0.5。气液或气固相亦各为气液或气固相亦各为0.25。以后每当一个新的板体积载气以脉动式进入以后每当一个新的板体积载气以脉动式进入色谱柱时，上述过程就反复一次色谱柱时，上述过程就反复一次(见下表见下表)。流出曲线的外形和浓度极大的位置流出曲线的外形和浓度极大的位置按上述分配过程，对于按上述分配过程，对于n=5，k=1，m=1的体系，随着脉的体系，随着脉动进入柱中板体积载气的添加，组分分布在柱内任一板上动进入柱中板体积载气的添加，组分分布在柱内任一板上的总量气液两相中的总质量见上表。的总量气液两相中的总质量见上表。由塔板实际可建立流出曲线方程：由塔板实际可建立流出曲线方程：)1(2exp22rrVVnVmnC m为组分质量，为组分质量，V为恣意流动相体积，为恣意流动相体积，Vr为保管体为保管体积，积，n为实际塔板数。当为实际塔板数。当V=Vr 时，时，C值最大，即值最大，即rVmnC2max 从上两式可以看出，色谱峰宽越小，从上两式可以看出，色谱峰宽越小，n就越大，而就越大，而H就越小，就越小，柱效能越高。因此，柱效能越高。因此，n和和H是描画柱效能的目的。是描画柱效能的目的。通常填充色谱柱的通常填充色谱柱的n103，H1mm。而毛细管。而毛细管105106，H0.5mm222/1)(16)(54.5YtYtnrrnLH 保管时间越长，保管时间越长，W或或W1/2越小，色谱峰越窄，实际塔板数越小，色谱峰越窄，实际塔板数越多，组分在两相间到达分配平衡的次数也越多，分别才干越越多，组分在两相间到达分配平衡的次数也越多，分别才干越强，柱效也就越高。强，柱效也就越高。有效实际塔板高度和有效实际塔板数有效实际塔板高度和有效实际塔板数221/2165.54RRbttnWW有效LHn有效有效n有效Mt有效实际塔板数与容量因子的关系有效实际塔板数与容量因子的关系21kknn有效k有效nnk有效nnk塔板实际塔板实际221654.521WtWtnrreff12225.5416rrttnWWnLH H实际塔板高度实际塔板高度实实际际塔塔板板数数n由于实际塔板数由于实际塔板数n不能真实地反映色谱柱的分别效能，不能真实地反映色谱柱的分别效能，故提出用扣除了死时间影响的有效实际塔板数故提出用扣除了死时间影响的有效实际塔板数neff和和有效塔板高度有效塔板高度HeffeffeffnLH色谱柱长度色谱柱长度21kknn有效塔板实际是一种半阅历性的平衡实际塔板实际是一种半阅历性的平衡实际用热力学的观念阐明了溶质在色谱柱中的分配平用热力学的观念阐明了溶质在色谱柱中的分配平衡和分别过程衡和分别过程解释了流出曲线的外形及浓度极大值的位置解释了流出曲线的外形及浓度极大值的位置提出了计算和评价柱效的参数提出了计算和评价柱效的参数奉献奉献缺陷缺陷 不能解释呵斥谱带扩张的缘由和影响板高的各种要不能解释呵斥谱带扩张的缘由和影响板高的各种要素素 不能阐明同一溶质为什么在不同的流速下，可以测不能阐明同一溶质为什么在不同的流速下，可以测得不同的实际塔板数得不同的实际塔板数二、速率实二、速率实际际1、速率方程、速率方程uBHACuu1 1涡流分散项涡流分散项A A A=2dp dp：固定相的平均颗粒直径：固定相的填充不均匀因子 固定相颗粒越小dp，填充的越均匀，A，H，柱效n。表如今涡流分散所引起的色谱峰变宽景象减轻，色谱峰较窄。当色谱柱内同时起步的组分随流动相进入色谱柱朝柱口方向挪动时，假设固定相颗粒大小及填充不均匀，组分分子穿过这些空隙时碰到大小不一的颗粒而必需不断改动流动方向，使组分分子在柱内构成了紊乱的“涡流。不同的组分分子所经过的途径长短不一，组分分子或前或后流出色谱柱，呵斥色谱峰的峰形扩张。采用粒度较细，颗粒均匀的担体，尽量填充均匀可以降低涡流分散项，降低采用粒度较细，颗粒均匀的担体，尽量填充均匀可以降低涡流分散项，降低板高板高H，提高柱效。，提高柱效。2 2分子分散项分子分散项BB B=2 Dg a.分散导致色谱峰变宽，分散导致色谱峰变宽，H(n)，分别变差。，分别变差。b.分子分散项与流速有关，流速分子分散项与流速有关，流速，滞留时间，滞留时间，分散，分散 c.分散系数：分散系数：Dg M载气载气-1/2；M载气载气，B值值Dg组分在流动相中的分散系数组分在流动相中的分散系数cm2/s。弯曲因子，亦称妨碍因子，由于固定相颗粒的存在使分散受阻。弯曲因子，亦称妨碍因子，由于固定相颗粒的存在使分散受阻。当试样分子以当试样分子以“塞子的方式进入色谱柱后，随流动相在柱中前进时，由于存塞子的方式进入色谱柱后，随流动相在柱中前进时，由于存在浓度梯度，组分分子自发地向前和向后分散即沿着色谱柱轴向分散，这种在浓度梯度，组分分子自发地向前和向后分散即沿着色谱柱轴向分散，这种分散称为分散称为“纵向分子分散，结果使色谱峰扩张，板高纵向分子分散，结果使色谱峰扩张，板高H增大。增大。讨论：讨论：Dg 随柱温升高而添加，随柱压降低而减小；随柱温升高而添加，随柱压降低而减小；流动相分子量大，流动相分子量大，Dg 小，即小，即 B 小；小；u 添加，组份停留时间短，纵向分散小；添加，组份停留时间短，纵向分散小；对于液相色谱，因对于液相色谱，因Dm 较小，较小，B 项可忽略。项可忽略。选择选择:球状颗粒；大分子量流动相；适当添加球状颗粒；大分子量流动相；适当添加流速；短柱；低温。流速；短柱；低温。3 3传质阻力项传质阻力项 Cu Cu组分在气相和液相两相间进展反复分配时，遇到阻力产生。组分在气相和液相两相间进展反复分配时，遇到阻力产生。C u=Cm+C su式中式中 Cm流动相传质阻力，指试样组分从流动相分散到流流动相传质阻力，指试样组分从流动相分散到流动相与固定相界面进展质量交换过程中所遭到的阻力；动相与固定相界面进展质量交换过程中所遭到的阻力；Cs固定相传质阻力，为组分从两相界面分散到固定相内固定相传质阻力，为组分从两相界面分散到固定相内部到达分配平衡后又前往到两项界面时遭到的阻力。部到达分配平衡后又前往到两项界面时遭到的阻力。2PmmdC uuD采用细颗粒、增大组分在流动相中的分散系数采用细颗粒、增大组分在流动相中的分散系数Dm采用分子量小采用分子量小的流动相，使组分分子在流动相中的分散系数添加、适当降低流的流动相，使组分分子在流动相中的分散系数添加、适当降低流动相线速度等均可使流动相传质阻力减小。动相线速度等均可使流动相传质阻力减小。Csu：组分分子从两相界面分散到固定液内部，在固：组分分子从两相界面分散到固定液内部，在固定液中耗费的时间不同，分配平衡后又前往到两相界定液中耗费的时间不同，分配平衡后又前往到两相界面所需时间不同，使色谱带展宽：面所需时间不同，使色谱带展宽：22(1)fssdqkC uukD Cmu：组分分子进入色谱柱后，从流动相分散到两相界面 需求一定的时间。与分散经过的间隔平方成正比，与组分的Dm成反比；而分散经过的途径决议于固定相颗粒间空隙的大小，即决议于dp的大小。由于组分处在颗粒空隙间的不同位置，因此到达两相界面的时间不同，使谱带展宽。减小液膜厚度减小液膜厚度df，CS下降。但下降。但k又减小。当坚持固定液含量不变时，又减小。当坚持固定液含量不变时，可经过可经过 添加固定液载体的比外表来降低添加固定液载体的比外表来降低df。但比外表过大又会因吸。但比外表过大又会因吸附过强使峰拖尾。附过强使峰拖尾。添加柱温，可添加组分分子在液相中的分散系数添加柱温，可添加组分分子在液相中的分散系数DS，但，但k值值也减小，为坚持适宜也减小，为坚持适宜CS值，应控制柱温。值，应控制柱温。22231flldkCuuDkfd2220.011pggdkC uuDkpdgDlDu22222220.01213 1gpfpglDdk dkHduuDkkDvan Deemter方程的方程的H-u曲线曲线流动相传质阻力项流动相传质阻力项分子分散项分子分散项涡流分散项涡流分散项H-u关系曲线关系曲线optBuCmin2HABC固定相传质阻力项固定相传质阻力项 载气流速高时：传质阻力项是影响柱效的主要要素，流速，柱效。载气流速低时：分子分散项成为影响柱效的主要要素，流速，柱效。由于流速对这两项完全相反的作用，流速对柱效的总影响使得存在着一个由于流速对这两项完全相反的作用，流速对柱效的总影响使得存在着一个最正确流速值，即速率方程式中塔板高度对流速的一阶导数有一极小值。最正确流速值，即速率方程式中塔板高度对流速的一阶导数有一极小值。以塔板高度以塔板高度H对应载气流速对应载气流速u作图，曲线最低点的流速即为最正确流速。作图，曲线最低点的流速即为最正确流速。在某一流速最正确线速度在某一流速最正确线速度下有一板高的极小值最小板下有一板高的极小值最小板高，相应的柱效最高。高，相应的柱效最高。LC的最小板高比的最小板高比GC的小一个的小一个数量级以上，实际上阐明数量级以上，实际上阐明柱效柱效LC比比GC高得多，由于高得多，由于LC的最正确流速很小，假设运用，的最正确流速很小，假设运用，那么分析时间太长，故实践运那么分析时间太长，故实践运用的流速比最正确流速高很多。用的流速比最正确流速高很多。对于一定长度的柱子，实际塔板数越大，板高越小，对于一定长度的柱子，实际塔板数越大，板高越小，柱效越高。柱效越高。粒度越细，板高越小，受线速度影响亦小。在粒度越细，板高越小，受线速度影响亦小。在HPLC分析中采用细粒作固定相的实际根据！分析中采用细粒作固定相的实际根据！但颗粒细导致柱流速慢，当采用高压技术，才干但颗粒细导致柱流速慢，当采用高压技术，才干实现实现HPLC的分析要求。的分析要求。在其他条件不变的情况下，填料粒度由大变小时，在其他条件不变的情况下，填料粒度由大变小时，涡流分散项涡流分散项A变小，纵向分散项变小，纵向分散项B根本不变，流动根本不变，流动相传质阻力项减小，而当固定液含量不变时，粒相传质阻力项减小，而当固定液含量不变时，粒度变小，外表积增大，液膜厚度变小，固定相传度变小，外表积增大，液膜厚度变小，固定相传质阻力项减小，即质阻力项减小，即C变小，因此变小，因此 可知，可知，最小塔板高度减小，而最小塔板高度减小，而 最正确流速增大最正确流速增大m in2HABC optBuC5速率实际的要点速率实际的要点 (1)组分分子在柱内运转的多途径与涡流分散、浓度梯度所呵组分分子在柱内运转的多途径与涡流分散、浓度梯度所呵斥的分子分散及传质阻力使气液两相间的分配平衡不能瞬间斥的分子分散及传质阻力使气液两相间的分配平衡不能瞬间到达等要素是呵斥色谱峰扩展柱效下降的主要缘由。到达等要素是呵斥色谱峰扩展柱效下降的主要缘由。2经过选择适当的固定相粒度、载气种类、液膜厚度及经过选择适当的固定相粒度、载气种类、液膜厚度及载气流速可提高柱效。载气流速可提高柱效。(3)速率实际为色谱分别和操作条件选择提供了实际指点。阐速率实际为色谱分别和操作条件选择提供了实际指点。阐明了流速和柱温对柱效及分别的影响。明了流速和柱温对柱效及分别的影响。(4)各种要素相互制约，如载气流速增大，分子分散项的影各种要素相互制约，如载气流速增大，分子分散项的影响减小，使柱效提高，但同时传质阻力项的影响增大，又使响减小，使柱效提高，但同时传质阻力项的影响增大，又使柱效下降；柱温升高，有利于传质，但又加剧了分子分散的柱效下降；柱温升高，有利于传质，但又加剧了分子分散的影响，选择最正确条件，才干使柱效到达最高。影响，选择最正确条件，才干使柱效到达最高。2、影响色谱带展宽的其他要素、影响色谱带展宽的其他要素1 非线性色谱非线性色谱 速率实际比较全面地思索了两相中的传质和分散，但仍假定等速率实际比较全面地思索了两相中的传质和分散，但仍假定等温线是线性的。等温线是非线性的。等温线的非线性决议了分温线是线性的。等温线是非线性的。等温线的非线性决议了分配系数不是常数，使谱带的高浓度区域配系数不是常数，使谱带的高浓度区域(中心附近中心附近)和低浓度和低浓度区域区域(前沿和尾部前沿和尾部)的分子的挪动速率不等，使峰展宽。的分子的挪动速率不等，使峰展宽。2活性中心的影响活性中心的影响 由于载体外表不完全惰性，即使涂布少量固定液后，在它外表由于载体外表不完全惰性，即使涂布少量固定液后，在它外表存在的活性中心存在的活性中心(如酸或碱作用中心如酸或碱作用中心)对极性强的组分仍会产生对极性强的组分仍会产生吸附，使这些组分释放的速度慢于其他分子而呵斥拖尾。处理吸附，使这些组分释放的速度慢于其他分子而呵斥拖尾。处理方法是将载体预处置，除去或减少这些活性中心。方法是将载体预处置，除去或减少这些活性中心。3 柱外效应柱外效应 在色谱柱以外的降低柱分别效率的景象称为柱外效应。呵斥柱在色谱柱以外的降低柱分别效率的景象称为柱外效应。呵斥柱外效应的要素有两类：柱前后死体积和与进样有关的技术。外效应的要素有两类：柱前后死体积和与进样有关的技术。后者包括进样速度慢，进样量大及气化温度不够高等。对组分在后者包括进样速度慢，进样量大及气化温度不够高等。对组分在两相中的分配系数不起任何作用，反而呵斥谱带展宽。因此，两相中的分配系数不起任何作用，反而呵斥谱带展宽。因此，必需将柱外效应抑制到最低程度。必需将柱外效应抑制到最低程度。改善柱效率的要素：改善柱效率的要素：选择颗粒较小的均匀填料选择颗粒较小的均匀填料选用较低的柱温操作选用较低的柱温操作降低担体外表液层的厚度降低担体外表液层的厚度选用适宜的载气及载气流速：流速较小时，分子分散项选用适宜的载气及载气流速：流速较小时，分子分散项成为色谱峰扩张的主要要素，宜用相对分子质量较大的载气；成为色谱峰扩张的主要要素，宜用相对分子质量较大的载气；流速较大时，传质项为控制要素，宜用相对分子质量较小的载流速较大时，传质项为控制要素，宜用相对分子质量较小的载气。气。AbBbARBRsWWttR211sR 1.5sR 4466sR1 22bWW 1/21/2R BR AsBAttRWW14 14141BABBABsBBBBn kkkkkknnRkkkk2111222nRLnRL0.8sR 1.0sR 1.25sR n222212212116()()1rknRrkksR/1kk（）ksRk/1kk（）sRkksRkk由 图看出：当k10时，随容量因子增大，分别度的增长是微乎其微的。普通取k为110最宜。对于GC，经过提高温度，可选择适宜的k值，以改良分别度。而对于LC，只需改动流动相的组成，就能有效地控制k值。它对LC的分别能起到立竿见影的效果假设设Q=n/4 -1/，那么：R =Q k/1+k 当 ，时，不能实现分别。但 值的微小变化都对 有很大影响，因此增大 值是改善分别度最有力的手段。10sR sR2212212141nrkRrk1组分的分配系数大小直接由组分的自在能决议固定相一定，受柱温控制对柱温的变化敏感，因此气相色谱柱必需置于恒温箱中操作，以排除环境温度变化而引起的干扰；在液相色谱中，分配系数对柱温的变化不敏感，可在室温下操作。为什么气相色谱柱必需置于恒温箱中操作，液相色谱可在室温下操作？某商品色谱柱有关阐明书内容为“SE-54 GC 柱，柱效2500，这种表示方法正确吗？为什么？不正确。该阐明书虽给出了所用何种固定相，并标明是气相色谱柱，但是对于柱效的描画是不完好的。根据范氏方程，影响柱效的要素有分散系数、液膜厚度、组分分配比等，特别是不同组分在同一根柱子上的柱效是不一样的。因此，在采用塔板数评价一根色谱柱的柱效时，必需指明组分、固定相及其含量、流动相及操作条件柱温、流速等。这样，也有利于购买者按条件反复实验，来验证此柱能否到达该柱效。例1：假设柱长L2为1m时，分别度为0.8，要实现完全分别(R1.5)，色谱柱Ll至少应有多长?2221218051 .RRLL(m).52352321 LL46241171621 minminncm0.06494624cm300 H2311114117.min)(min)(,si1611170 minmin)(tRtk1154161161231123115116222 .nm0.75cm75cm0.06491154 2L0.1683cmisRii sRstKrtK得一色谱图。峰高的添加的组分即能够为得一色谱图。峰高的添加的组分即能够为这种知物。这种知物。保管指数retention index 又称柯瓦指数。它表示物质在固定液上的保管值行为，是国际上公认的定性指针。重现性好、规范一致及温度系数小。保管指数的物理意义在于：它是与被测物质具有一样调整保管时间的假想的正构烷烃的碳数乘以100。保管指数仅与固定相的性质、柱温有关，与其它实验条件无关。其准确度和重现性都很好。()()()()lglg100lglgRXRZXRZnRZttIzntt09()nC010()nC09()nC010()nC09()nC09()nC010()nC21122()/()RRRttbb()R it()1.54.8(303)34.2()R itmm(30 31009(lg34.2 lg)(58 3)(30 3)/(lglg)iI1 21.065AhwiiiAfw iwiAif 不对称峰面积可以用峰高乘平均峰宽法来计算峰面积。在峰高0.15及0.85处分别丈量峰宽度，取其平均值，再与峰高相乘，近似计算峰面积。0.150.8512Ah wwiiiAmf ifififififsiifffif isisississiiimmAAAAwwAmAmfwf wif Nf Nif WS NS ssiisiwAmAmfffssiisiNANANfffssiisiWmAmASSSssiiNiNNANASSSsiNWMMffiMsMSf1 相对校正因子值只与被测物和规范物以及检测器的类型有关，而与操作无关。可自文献中查出援用。假设文献中查不到所需的值也可本人测定。测定相对校正因子最好用色谱纯试剂。假设试样中一切组分均能流出色谱柱，并在检测器上都有呼应信号，都能出现色谱峰，可用此法计算各待测组分的含量。归一化法简便，准确，进样量多少不影响定量的准确性，操作条件的变动对结果的影响也较小，尤其适用多组分的同时测定。但假设试样中有的组分不能出峰，那么不能采用此法。/%100100%iisiismAmCfmA m68.0 2.40 1.88100%87.0 8.1243.4%AfmCAm燕麦敌燕麦敌正十八烷燕麦敌正十八烷试样%100%niiiiiifAfAP%100%mfAmfAPsssiiiif if
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