免疫细胞标志和功能检测技术课件

第一章第一章 血液标本采集与处理血液标本采集与处理临床免疫学检验技术第十五章第十五章免疫细胞标志和功能检测技术免疫细胞标志和功能检测技术 刘 辉目 录第一节 免疫细胞的分离 第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 第三节 抗原提呈细胞的表面标志 第四节 淋巴细胞的功能检测 第五节 其它免疫细胞功能检测技术 第六节 免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用 第一节第一节 免疫细胞的分离免疫细胞的分离 重点提示外周血单个核细胞分离淋巴细胞的分离T、B细胞和T细胞亚群的分离细胞分选和基本原理细胞分选和基本原理细胞分选和基本原理细胞分选和基本原理不同细胞密度不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同不同细胞密度不同不同细胞密度不同人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为1.076-1.090用用1.0770.001的分层液可将细胞分离的分层液可将细胞分离密度梯度离心密度梯度离心(Ficoll)离心离心细胞表面分化抗原（细胞表面分化抗原（CD抗原）抗原）适用于T、B细胞的分离已知CD抗原细胞亚群的分离未知CD抗原细胞亚群的分离（阴性分选）不同细胞谱系，不同细胞分化阶段，细胞表面不同细胞谱系，不同细胞分化阶段，细胞表面CD抗原不同抗原不同磁珠大小可以选择磁珠大小可以选择免疫磁珠法细胞分选过程免疫磁珠法细胞分选过程荧光激活细胞分离仪分离法荧光激活细胞分离仪分离法第二节第二节 淋巴细胞标志及亚群分类淋巴细胞标志及亚群分类 一、细胞表面标志及亚群 CD3+CD4+CD8-辅助性细胞（help T cell,Th）CD3+CD4-CD8+细胞毒性细胞（cytotoxic T cell,Tc or CTL）CD4+CD25+Foxp3+调节性细胞（regulatory T cell,Tr or Treg）二、B细胞表面标志 CD19、CD20、CD21、CD22和CD23等。以CD5为标志结合CD19或CD20可将B细胞分为B1（CD19+CD5+）和B2(CD19+CD5-)两个亚群。三、NK细胞表面标志 NK细胞表面至少存在CD2、CD16、CD56、CD69、CD94、CD96、CD158a、CD159a、CD161和CD244等多种抗原。目前多以CD3-、CD16+、CD56+作为NK细胞的典型标志。第三节第三节 抗原提呈细胞的表面标志抗原提呈细胞的表面标志 抗原提呈细胞的表面标志 单核-吞噬细胞的典型的表面标志是CD14。人成熟DC的主要特征表面标志为CD1a、CD11c和CD83，但不表达单核-吞噬细胞、T细胞、B细胞和NK细胞的典型的表面标志。第四节第四节 淋巴细胞的功能检测淋巴细胞的功能检测原理原理：淋巴细胞DNA合成分化母细胞刺激物细胞变大细胞浆扩大核染色质疏松核仁明显T T淋巴细胞增殖试验淋巴细胞增殖试验2.淋巴细胞转化的刺激物淋巴细胞转化的刺激物非特异性刺激物：非特异性刺激物：PHA-T细胞ConA-T细胞PWM-T、B细胞LPS-B细胞特异性刺激物：特异性刺激物：异种抗原同种组织抗原 体内试验体内试验特异性抗原皮肤试验PHA皮肤试验第五节第五节 其它免疫细胞功能检测技术其它免疫细胞功能检测技术 吞噬细胞功能吞噬细胞功能趋化 吞噬 胞内杀灭作用一、趋化功能检测一、趋化功能检测滤膜渗透法（Boyden 小室法）二、白细胞吞噬功能的检测二、白细胞吞噬功能的检测100(%)计数的白细胞数吞噬细菌的白细胞数吞噬率白细胞菌液白细胞菌液3737培养培养定时取定量菌液培养定时取定量菌液培养计算菌落数计算菌落数三、杀菌能力的检测中性粒细胞杀菌 耗能 代谢 生成H+四氮唑蓝(淡黄色)甲簪(蓝黑色)原理原理操作操作四、氮四、氮唑蓝唑蓝(NBT)(NBT)还原试验还原试验抗凝血+NBT应用液 温育 推片 瑞士复染五、五、巨噬细胞功能检测巨噬细胞功能检测(一)炭粒廓清试验正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。(二)吞噬功能检测巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。第六节第六节 免疫细胞功能检测的临床应用免疫细胞功能检测的临床应用反映机体免疫功能状态。肿瘤、免疫缺陷病等疾病的诊断和疾病预后监测。组织器官移植后对受者的细胞免疫学功能监测则有利于排斥反应的早期发现，以便及时采取有效措施。本章小结淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜下的形态基本是一样的，因此要对其进行进一步的分类和观察就不能采用形态学的方法，而要依靠对其表面标志的检测。利用细胞表面标志可以实现对各类细胞的计数。免疫细胞功能试验包括体内和体外试验。免疫细胞功能体外试验主要根据免疫细胞的增殖活性、分泌活性和杀伤活性等特性而进行实验设计。本章小结本章小结吞噬细胞功能检测，方法有趋化功能检测、吞噬和杀菌功能测定等。了解方法学基本原理，可举一反三，根据需要选择或设计相应试验。